Name: 뇌혈전의 세포 성분을 분석하기 위한 포괄적인 접근법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 학습하세요 뇌혈전의 세포 성분을 분석하는 새로운 방법을. 섬유소 용해 효소를 이용해 섬유소를 분해하고 완전한 세포를 방출하여 정량적·정성적 분석이 가능합니다. 이 방법은 뇌혈전증의 진단과 치료 전략 향상에 기여합니다.

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이 연구는 샤먼시 과학기술국(3502Z20227197)과 푸젠성 과학기술국(No. 2019J01070, No.2021Y0027)의 지원을 받았습니다.

이 연구는 Huaqiao University 의료 윤리 위원회의 기관 지침에 따라 수행되었습니다. 뇌혈전은 푸젠 의과대학 부속 취안저우 제1병원에서 환자의 사전 동의를 얻어 외과적으로 제거해 채취했다.
1. 혈전 전처리
<ol><li>깨끗한 접시에 혈전을 놓고 핀셋으로 생리식염수 5mL를 넣고 접시를 부드럽게 흔든 다음 피펫으로 식염수를 제거합니다. 알림: 헹굼을 세 번 반복합니다.</li>
	<li>가위로 혈전을 더 작은 조각(5mm x 5mm x 5mm 미만)으로 자릅니다. 생리식염수 5mL를 넣고 접시를 부드럽게 흔든 후 피펫으로 식염수를 제거합니다. 알림: 헹굼을 세 번 반복합니다. 헹구는 동안 응고 조각이 흡입되지 않도록 하십시오.</li>
	<li>혈전을 다른 깨끗한 U-플레이트로 옮깁니다. 알림: 프로토콜은 여기에서 일시 중지하고(플레이트를 2-8°C에 보관) 나중에 다시 시작할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 혈전용해
<ol><li>생리식염수로 sFE의 농도를 2000U/mL로 조정하여 sFE 작업 용액을 준비합니다. 알림: sFE는 Tang Lab15의 잘 정립된 프로토콜에 따라 준비되었습니다.</li>
	<li>300μL의 sFE 작업 용액을 전처리된 혈전에 추가합니다.</li>
	<li>첫 번째 성능 저하 라운드를 수행합니다.<ol><li>sFE와 응고의 혼합물을 37°C에서 0.5시간 동안 배양합니다. 참고: 생리식염수로 처리한 블롯은 음성 대조군으로 설정되었습니다. s를 회전하지 마십시오amp셰이커에서.</li>
		<li>샘플을 부드럽게 섞는다. 깨끗한 피펫으로 액체 부분을 다른 깨끗한 튜브로 옮깁니다. 참고: 남은 혈전은 또 다른 분해에 사용되었습니다.</li>
		<li>액체 부분을 200× g 에서 4°C에서 5분 동안 원심분리합니다.</li>
		<li>피펫을 사용하여 상층액을 다른 깨끗한 튜브로 옮겨 회수된 sFE 용액을 얻습니다.</li>
		<li>세포 침전물을 50μL의 생리식염수와 부드럽게 혼합합니다. 참고: 셀 혼합물은 나중에 사용하기 위해 2-8°C에 보관했습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>후속 성능 저하를 수행합니다.<ol><li>회수된 sFE 용액(단계 2.3.4)으로 나머지 응고(단계 2.3.2)를 37°C에서 0.5시간 동안 분해합니다. 참고: 나머지 단계는 첫 번째 성능 저하 라운드와 동일했습니다. 전체 혈전이 분해될 때까지 분해 과정이 완료되었습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>셀 수집을 수행합니다.<ol><li>각 분해 라운드의 세포 혼합물을 수집하여 혈액 세포 샘플을 준비합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 라이트의 염색
<ol><li>세포 도미를 수행합니다.<ol><li>세포를 1 x 106 cells/mL의 밀도로 조정합니다.</li>
		<li>폴리-L 라이신 코팅 유리 슬라이드에 세포 5μL를 추가한 다음 커버 슬립을 사용하여 도포합니다.</li>
		<li>실온에서 액체를 증발시킵니다.</li>
	</ol></li>
	<li>염색을 수행합니다.<ol><li>Wright의 염료 200μL( 재료 표 참조)를 세포 도말에 부드럽게 첨가하고 Wright의 염료 B 600μL를 첨가하여 고르게 혼합합니다.  실온에서 10분 동안 염색합니다.</li>
		<li>깨끗한 물로 염료를 부드럽게 헹굽니다. 알림: 염색된 세포 도말은 나중에 사용할 수 있도록 실온에 보관할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>현미경 이미징을 수행합니다.<ol><li>광학 현미경을 사용하여 염색된 세포를 검사합니다( 재료 표 참조).</li>
	</ol></li>
</ol>4. 정기 혈액 검사
<ol><li>세포를 1 x 106 cells/mL의 밀도로 조정합니다.</li>
	<li>제조업체의 지침에 따라 자가혈액학 분석기를 사용하여 혈소판, 적혈구, 백혈구, 림프구, 호중구, 단핵구, 호산구, 호염기구 및 미성숙 과립구와 같은 세포 구성 요소를 분석합니다( 재료 표 참조).</li>
</ol>

대뇌 혈전 세포 구성 요소를 연구하기 위한 섬유소 용해 효소 기반 방법

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

sFE는 피브린을 직접적이고 효과적으로 분해할 수 있는 섬유소 용해제입니다12,16. 여기서 sFE를 사용하여 대뇌 혈전의 가교 피브린을 분해하고, 혈전 내에 밀폐된 세포를 방출하고, 혈전의 세포 성분을 정성적, 정량적으로 분석했습니다. 현미경 검사 데이터와 정기 혈액 검사는 밀폐된 세포가 혈전에서 방출되었음을 나타냈습니다. 또한, 방출된 세포의 세포 유형 및 구조는 sFE 처리 후 크게 영향을 받지 않았습니다. 따라서 대뇌 혈전의 세포 성분을 분석하기 위한 독특하고 간단하며 효과적인 방법이 처음으로 만들어졌습니다.
방출된 세포는 혈전 내만큼 안정적이지 않기 때문에 온도, sFE 선량, 회전 속도 및 분해 시간과 같은 방출된 세포의 파괴 비율을 줄이기 위해 분해 조건을 최적화해야 합니다. Wright의 염색 결과는 10시간 열화의 배경이 5시간의 배경보다 더 흐릿하다는 것을 ...

뇌혈관질환은 인간의 건강을 위협할 수 있는 3대 질환 중 하나로, 그 중 허혈성 뇌혈관질환이 80% 이상을 차지합니다. 뇌혈전증과 뇌정맥혈전증은 오늘날 가장 우려되는 허혈성 뇌혈관 질환으로, 주로 뇌혈전으로 인해 발생한다 1,2. 치료가 제대로 이루어지지 않으면 장애율과 사망률이 높고 퇴원 후 재발률이 높다3.
최근에는 뇌혈전의 세포 성분이 뇌혈전증의 진단, 치료 및 예후와 밀접한 상관관계가 있다는 연구 결과가 점점 더 많이 나오고 있다 4,5,6. 따라서 혈전 구성, 특히 세포 구성 요소에 대한 데이터의 가용성은 임상 진단 및 치료에 중요합니다. 안타깝게도, 현재 사용 가능한 방법으로는 혈전 성분을 정량적, 정성적으로 종합적으로 분석할 수 없습니다. 예를 들어, Martius Scarlett Blue 기반 in-situ 염색은 혈전7의 특정 절편의 적혈구/백혈구만 연구할 수 있습니다. 면역조직화학(IHC) 기반 in-situ 염색은 항체를 사용하여 혈전의 특정 절편의 제한된 혈액 성분만 연구할 수 있다8. 현미경적 이미지 기반 방법은 응고(9)의 특정 구조에만 관련된다. 더욱이 이러한 모든 방법은 힘들고 시간이 많이 걸립니다10. 현재까지 대뇌혈전세포 성분을 정량적, 정성적으로 연구하는 절차는 보고되지 않았다. 가교된 피브린이 혈전의 혈액 세포를 단단히 감싸는 것은 널리 알려져있다 11. 결과적으로, 가교된 피브린의 특이적 분해와 온전한 세포의 방출은 세포 성분의 정확한 분석에 매우 중요합니다.
이전 연구에서는 피브린을 특이적이고 빠르게 분해할 수 있는 Sipunculus nudus(sFE)에서 섬유소 용해 효소를 분리했습니다12. 본 연구에서는 sFE의 독특한 활성에 기초하여 뇌혈전의 세포 성분을 분석하는 방법을 제안하였다. 이 프로토콜은 sFE를 사용하여 먼저 혈전의 피브린을 분해한 다음 Wright의 염색 및 정기 혈액 검사13,14로 세포 성분을 분석했습니다. 이 방법에 따르면 뇌혈전의 세포 성분을 정량적, 정성적으로 연구할 수 있다. 이 간단하고 효과적인 프로토콜은 다른 혈전의 세포 성분 분석에 적용될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>응집 반응판</td><td></td><td>ROTEST RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>자동 혈액학 분석기</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>자동 수직 압력 스팀 살균기&nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브 (1.5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>클린 벤치</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>항온 인큐베이터</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>문화 접시 (100 mm)</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>DHG 시리즈 가열 및 건조 오븐&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>전자 분석 저울</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>필터 멤브레인 (0.22 &마이크로; m)</td><td>Millex GP</td><td>SLGP033NK</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 냉장 원심분리기&nbsp;</td><td>Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Reference</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 (1 mL)</td> <td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 (200 &micro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>피펫터(1mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>피펫(200 &마이크로; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>메스</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>소형 와류 발진기</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>핀셋</td><td>Hystic</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>Wright 염색 용액</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

뇌혈전의 세포 성분을 분석하기 위한 포괄적인 접근법

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

뇌동맥이나 정맥에 혈전이 생기는 뇌혈전증은 뇌경색의 가장 흔한 유형이다. 뇌혈전의 세포 성분에 대한 연구는 진단, 치료 및 예후에 중요합니다. 그러나 혈전의 세포 성분을 연구하는 현재의 접근 방식은 주로 in situ 염색을 기반으로 하며, 이는 세포가 혈전으로 단단히 싸여 있기 때문에 세포 성분에 대한 포괄적인 연구에는 적합하지 않습니다. 이전 연구에서는 Sipunculus nudus에서 섬유소 용해 효소(sFE)를 성공적으로 분리했는데, 이는 가교 결합된 피브린을 직접 분해하여 세포 성분을 방출할 수 있습니다. 이 연구는 뇌혈전의 세포 성분을 연구하기 위해 sFE를 기반으로 하는 포괄적인 방법을 확립했습니다. 이 프로토콜에는 혈전 용해, 세포 방출, 세포 염색 및 정기 혈액 검사가 포함됩니다. 이 방법에 따르면 세포 구성 요소를 정량적 및 정성적으로 연구할 수 있습니다. 이 방법을 사용한 실험의 대표적인 결과를 나타낸다.

분해 과정의 초기 단계에서 혈전은 적색 조밀 구조를 가지고 있으며 작업 용액은 무색이라는 것이 밝혀졌습니다. 30분 동안 배양한 후, 작업 용액은 밝은 빨간색으로 변했으며, 이는 교차된 혈액 세포가 작업 용액으로 방출되었음을 나타냅니다. 배양 시간을 5시간으로 늘리면 대부분의 혈전이 용해되었고, 작업 용액은 연한 붉은색이 되었습니다. 반대로, 10시간 배양 후에도 생리식염수군(NC)에는 큰 변화가 없었습니다(그림 1). 이러한 결과는 혈전으로 둘러싸인 혈액 세포가 이 프로토콜에 의해 성공적으로 방출되었음을 보여주었습니다.
Wright의 염색 후 세포 성분을 광학 현미경으로 명확하게 검사했습니다(그림 2A). 방출된 혈액 세포 중에는 표면이 약간 오목하고 원반 모양인 성숙한 적혈구가 많이 관찰될 수 있었습니다. 유리 슬라이드에서 불규칙한 모양의 작은 자주색-적색 입자가 다량 ...

본 연구는 혈전 용해, 세포 염색 및 정기 혈액 검사를 통한 뇌혈전의 세포 성분 분석을 위한 빠르고 효과적인 방법을 설명합니다.

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

우리의 연구는 주로 뇌혈전증에 초점을 맞추고 있습니다. 많은 연구에서 뇌혈전 세포 성분이 뇌혈전증의 진단, 치료 및 예후와 상관관계가 있음을 보여주었습니다. 이 연구에서는 뇌혈전의 세포 성분을 분석하기 위한 새로운 방법을 확립했습니다.뇌 혈전의 세포 성분을 분석하는 데 있어 이 과제는 혈전에서 전체 샤프트를 방출하는 것입니다. 혈전이 혈전 속의 혈액 세포인 섬유질 발진을 누출했기 때문이다. 혈전의 세포 성분을 시작하는 표적 접근법은 세포 성분의 포괄적인 시작에 적합하지 않은 C2 스탠딩에서 가장 잘 수행됩니다.반대로, 우리의 방법은 대뇌 경사 세포 구성 요소의 양적 및 질적 계몽을 모두 가능하게 합니다. 우리의 방법은 섬유소 용해 효소를 사용하여 혈전의 섬유화를 지연시켜 온전한 세포를 방출합니다. 세포 성분 분석에서 얻은 데이터는 분자 수준에서 뇌 혈전증의 메커니즘 연구를 용이하게 할 것입니다.우리 팀은 섬유소 용해 및 응고 시스템 연구에 계속 집중할 것입니다.

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

출처: Kim, D., et. al. 대뇌 혈전색증을 직접 시각화하기 위해 근적외선 형광 이미징과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 결합했습니다. J. Vis. Exp. (2016)이 비디오는 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(micro-CT) 이미징을 사용하여 마우스의 뇌 혈전을 시각화하는 방법을 보여줍니다. 대뇌 혈전 마우스 모델에는 조영제 역할을 하는 피브린 표적 금 나노 입자가 주입됩니다. 마우스를 마이크로 CT 기계의 침대에 놓고 여러 각도에서 이미지를 획득합니다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 이미지를 재구성하고 처리합니다.

Visualization of a Cerebral Thrombus in a Mouse Using Micro-Computed Tomography Imaging(마이크로 컴퓨터 단층 촬영 이미징을 사용한 마우스의 대뇌 혈전 시각화)

이 원고에서는 질병 상태로 인한 정상 및 비정상 혈전 구조 간의 형태학적 차이를 조사하기 위해 혈액 준비, 컨포칼 현미경 검사 및 용해 속도 분석을 포함한 실험 기술을 제시합니다.

정상과 병에 걸린 미국에서 혈병 구조를 조사하기위한 실험 및 이미징 기술

다음 스트로크 뇌 골수 세포 특성화 광학 분별 법을 이용하여 수행 Stereology를, 뇌의 유세포 분석에 의해 현탁액 백혈구 수있다. 둘 허혈성 뇌에서 발견되는 주된 서브 세트 골수 세포 표현형의 정확한 구별을 수행하는 유용한 기술이다.

일시적 또는 영구적 인 뇌허혈 모델에서 백혈구 부분 집단의 Stereological 및 유동 세포 계측법 특성

이 프로토콜은 대뇌 thromboemboli을 시각화 결합 된 근적외선 형광 (NIRF) 이미징 및 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (microCT)의 응용 프로그램을 설명합니다. 이 기술은 혈전 부담과 진화의 정량화 할 수 있습니다. microCT 기술은 금 나노 입자를 사용하여 살아있는 동물 내부 혈전 가시화하면서 NIRF 이미징 기술은 형광 절제 뇌 혈전 표지 가시화.

직접 대뇌 Thromboemboli 시각화를위한 결합 된 근적외선 형광 이미징 및 마이크로 계산 된 단층 촬영

이 기사의 목적은 마이크로 계산 된 단층 촬영 및 전체 선박 세그먼트에 대뇌 vasospasm을 계량 하는 데 사용할 수 있는 볼륨의 결정 후 마우스에서 뇌혈관 나무의 3 차원 재구성을 허용 하는 방법을 제시 하는 것입니다. 거미 막 밑 출혈의 murine 모델입니다.

거미 막 밑 출혈의 Murine 모델에 대뇌 Vasospasm의 정량화에 대 한 체적 메서드

우리는 환자 유래 내피와 전혈 상호 작용을 조사하기 위하여 체외 혈관 질병 모형을 제시합니다. 이 시스템은 다양한 상황에서 1 차적인 내피 세포의 혈전 생성 특성의 연구를 허용합니다. 이 방법은 응고의 상이한 단계 도중 시혈전증 및 항응고 요법에서 평가하기위하여 특히 적합합니다.

시험관 에서 미세 유체 질환 모델 전체 혈액 내피 상호 작용 및 혈전 역학을 실시간으로 연구

이 프로토콜은 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하고 부분 최소 제곱 회귀를 사용하는 다변량 시스템 분석의 일부로 이러한 데이터를 통합하는 방법을 제시합니다.

외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응의 시스템 분석

피브린은 혈전증과 혈전증 중 응고 형성에 책임이 있습니다. 탁도 검사 및 혈전(TEG)은 응고의 보완적인 평가를 제공하는 시너지 도구로 활용할 수 있다. 이 두 가지 기술은 응고 조건이 피브린 응고 형성에 미치는 영향에 대한 더 많은 통찰력을 줄 수 있습니다.

보완 응고 특성화를 위한 탁도 및 혈전 성형술 활용

기존의 광혈전제 뇌졸중(PTS) 모델은 주로 조직 플라스미노겐 활성제(tPA) 용해 치료에 대한 내성이 높은 고밀도 혈소판 응집체를 유도합니다. 여기서 변형된 쥐 PTS 모델은 광활성화를 위해 트롬빈과 감광성 염료를 함께 주입하여 도입됩니다. 트롬빈 강화 PTS 모델은 혼합 혈소판:피브린 응고를 생성하며 tPA 혈전용해에 매우 민감합니다.

피브린이 풍부하고 tPA에 민감한 광혈전 뇌졸중 모델

여기에서는 일차 인간 뇌 미세 혈관 내피 세포, 성상 세포 및 혈관 주위 세포를 기반으로 혈액 뇌 장벽의 삼중 세포 배양 모델을 구축하는 방법을 설명합니다. 이 다세포 모델은 시험관 내 허혈성 뇌졸중 중 신경 혈관 단위 기능 장애의 연구 또는 약물 후보의 스크리닝에 적합합니다.

시험관 내 허혈성 뇌졸중 연구를 위한 인간 혈액-뇌 장벽의 삼중 일차 세포 배양 모델

이 연구는 전단 응력을 이용해 혈전 형성을 유도하고, 여러 차원의 판독을 통해 혈전을 특성화하는 마이크로유체 분석법을 설명합니다. 이 검사법은 혈액 샘플의 혈전형성 경향을 측정할 수 있어 질병 진단, 신약 개발, 혈전증과 관련된 기전적 연구에도 유용합니다.

혈전 프로파일링 분석법: 생체역학적 혈전 생성을 포괄적으로 특성화하기 위한 마이크로플루이딕스 기반 플랫폼

학습하세요 뇌혈전의 세포 성분을 분석하는 새로운 방법을. 섬유소 용해 효소를 이용해 섬유소를 분해하고 완전한 세포를 방출하여 정량적·정성적 분석이 가능합니다. 이 방법은 뇌혈전증의 진단과 치료 전략 향상에 기여합니다.

뇌혈전의 세포 성분을 분석하기 위한 포괄적인 접근법

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