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단백질체학 및 인산염체학 분석을 위한 생체 유체에서 세포외 소포체의 화학적 친화성 기반 분리
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JoVE Journal Biochemistry
Chemical Affinity-Based Isolation of Extracellular Vesicles from Biofluids for Proteomics and Phosphoproteomics Analysis

단백질체학 및 인산염체학 분석을 위한 생체 유체에서 세포외 소포체의 화학적 친화성 기반 분리

Full Text
3,636 Views
09:28 min
October 27, 2023

DOI: 10.3791/65844-v

Yi-Kai Liu1, Zhuojun Luo1, Anton Iliuk1,2, Weiguo Andy Tao1,2,3,4

1Department of Biochemistry,Purdue University, 2Tymora Analytical Operations, 3Department of Chemistry,Purdue University, 4Purdue Institute for Cancer Research,Purdue University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

본 프로토콜은 기능성 자성 비드를 이용한 요로 세포외 소포체의 효율적인 분리를 위한 상세한 설명을 제공한다. 또한 웨스턴 블로팅(western blotting), 단백질체학(proteomics) 및 포스포프로테오믹스(phosphoproteomics)를 포함한 후속 분석도 포함됩니다.

우리는 세포외 소포체 기반 바이오마커 발견을 위해 노력하고 있습니다. 한 가지 중요한 단계는 효율적이고 선택적으로 격리하는 것입니다. 마그네틱 비드 기반 분리를 기반으로 하는 EVtrap은 높은 처리량, 사용하기 쉬우며 특히 임상 응용 분야에 쉽게 사용할 수 있도록 하여 실제로 도움이 될 수 있습니다.

우리는 유방암, 신장암 및 파킨슨병과 같은 다양한 질병에 대한 단백질 및 인단백질 바이오마커의 발견을 위해 이 프로토콜을 사용해 왔습니다. 이 바이오마커는 생체액에서 파생됩니다. EV는 잠재적으로 액체 생검에 사용될 수 있으며, 이는 임상 진단 및 치료를 더욱 개선할 수 있습니다.

현재 세포외 소포체 분리에 가장 일반적으로 사용되는 접근법은 초원심분리 및 침전이지만, 이러한 방법은 오염 물질의 동시 분리와 낮은 효율로 제한됩니다. 따라서 당사의 EVtrap 분석법은 EV를 분리하는 보다 효과적인 방법을 제공하여 보다 재현성 있고 민감한 방법을 가능하게 하고 다운스트림 분석에도 도움이 됩니다. 우리는 두 가지를 위해 노력하고 있습니다.

첫째, EV 격리 및 다운스트림 분석, 특히 대량 백업 기반 분석을 위한 방법과 프로토콜을 지속적으로 개발하고 있습니다. 두 번째는 EVtrap의 장점 때문에 임상 분야에서 다양한 응용 분야를 모색하고 있다는 것입니다.

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화학적 친화성 기반 분리 세포외 소포체 생체유체 단백질체학 분석 인산화체학 분석 액체 생검 전사 후 변형 인산화 세포 기능 질병 발병 질병 진행 분리 방법 자성 비드 인간 소변 다운스트림 분석 회수율 소변 EV 민감한 프로필 단백질체 포스포프로테옴 기술적 고려 사항

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