Name: 생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: Beyond Flexor Digitorum Brevis (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-01T12:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: 학습하세요 생쥐 6개 뒷다리 근육에서 효소 해리로 짧고 중간 및 긴 골격근 섬유를 분리하는 방법을. 이 기술은 흥분-수축 결합 메커니즘 연구에 필수적인 생리학 실험에 적합합니다.

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저자들은 동물과 사진에 도움을 준 UdeA의 Robinson Ramírez 교수와 기술 지원을 해준 Carolina Palacios에게 감사를 표합니다. Kaika의 Johan Pineda는 컬러 및 형광 카메라를 설치하는 데 도움을 주었습니다. 퀸즐랜드 대학교(University of Queensland)의 슈위안 응오(Shyuan Ngo)가 친절하게 원고를 교정해 주었습니다. 이 연구는 CODI-UdeA(2021년 2월 22일부터 2020-34909, 2022년 3월 31일부터 2021-40170, SIU) 및 콜롬비아 메데인에 있는 Planning Office-UdeA(E01708-K 및 ES03180101)의 자금 지원을 받았습니다. 자금 제공자는 데이터 수집 및 분석, 원고 작성 또는 제출에 참여하지 않았습니다.

다양한 길이의 마우스 근육 섬유의 효소 분리 및 특성화

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

성숙한 골격근 생물학을 연구하는 데 사용할 수 있는 모델을 보완하기 위해 여기서는 단섬유, 중섬유, 장섬유를 가진 다양한 쥐 근육의 성공적인 효소 해리를 보여줍니다. 이 섬유는 골격근에서 Ca2+ 과도 현상의 MT-II 동역학의 일반화 가능성을 입증할 수 있습니다. 또한, 온전한 전체 근육의 섬유 유형을 분류했습니다. FDB가 생리학적 실험에 가장 많이 사용되는 근육이라는 점을 감안할 때, 해리 후 세포 현탁액에 존재하는 섬유의 유형을 평가했습니다.
근육 생물학 연구를 위한 짧고, 중간적이고, 긴 온전한 섬유의 배터리 해부 기술, 효소 처리 기간, 사용된 효소 유형 및 분쇄 절차는 온전한 효소 해리 섬유를 얻기 위한 프로토콜 내에서 중요한 단계입니다. 불필요한 스트레칭을 피하면서 저산소증 상태를 줄이는 시간을 줄이기 위해 가능한 한 빨리 절개를 해야 합니다. 후자의 점은 특히 가자미-가자미 복합체를 끌어올려 제거해서는 안 되...

포유류의 성숙한 골격근은 다기능 조직입니다. 그것은 신진 대사를 심하게 조절하고 열 생산의 주요 원천이며 동적 특성은 호흡, 신체 부분의 움직임 또는 한 지점에서 다른 지점으로의 변위에 중요한 역할을 부여합니다 1,2,3. 골격근은 또한 근육병증, 이영양증 또는 근감소증과 같은 유전 및 만성 질환뿐만 아니라 심장 대사 질환과 같은 많은 비근육 만성 질환을 포함한 많은 질병의 병태생리학과 관련이 있습니다 3,4,5,6,7,8.
건강과 질병의 맥락에서 성숙한 골격근의 구조적 및 기능적 특성에 대한 생체 외 연구는 주로 전체 근육과 분리 섬유의 두 가지 실험 모델을 통해 가능했습니다. 20세기에 연구자들은 다양한 작은 종의 온전한 장신근(EDL), 가자미근, 전경골 및 비복근 전체의 특성을 중추적인 모델로 활용하여 운동 단위, 섬유 유형, 수축 및 이완의 힘 및 운동과 같은 동적 특성에 대해 학습했습니다 9,10,11,12,13,14,15,16. 그러나 보다 정교한 세포 생물학 연구의 출현으로 이 분야는 단일 근육 섬유 연구로 이동했습니다. 선구적인 연구는 후속 특성 분석을 위한 효소 해리를 통해 쥐의 온전한 굴곡근 디지토룸 브레비스(FDB) 섬유를 분리할 수 있게 했습니다 17,18,19. FDB 섬유는 수동 해부에 의해서도 얻어질 수 있지만(20), 쥐 근육의 효소 해리의 용이성과 높은 처리량은 다양한 실험적 접근법에 대한 적합성 외에도 후자의 모델을 지난20년 동안 널리 사용하게 만들었다.
짧은 FDB 섬유는 전기 생리학 및 기타 생물 물리학 연구, 생화학, 대사 및 약리학 분석, 전자 및 형광 현미경 실험, 세포 생물학 접근법을 위한 형질 주입 또는 근육 형성 연구 5,21,22,23,24,25,26,27,28 에서 줄기 세포의 공급원으로 적합합니다. 29,30,31,32입니다. 그러나 근육 실험에서 FDB 섬유만 사용하면 섬유 유형을 다루는 연구 범위가 좁아지고 일부 방법론적 기술이나 한 동물로부터 더 많은 정보를 얻는 데 사용할 수 있는 생물학적 물질의 양이 제한됩니다. 이러한 한계는 세포 생리학적 현상과 다른 온전한 근육(예: EDL, 가자미, 페로네이)에서 수행된 이전의 생화학 및 역학 연구와의 명확한 상관관계를 방해합니다.
이러한 한계를 극복한 일부 그룹은 더 긴 EDL 및 가자미근 24,33,34,35,36,37,38,39,40을 해리하는 데 성공하여 다른 관련 근육으로 방법을 더욱 확장할 수 있는 문을 열었습니다. 그러나 EDL 및 가자미 섬유의 사용은 여전히 드물며, 이는 온전한 섬유로 얻기 위한 방법론적 세부 사항이 부족하기 때문일 수 있습니다. 여기에서는 6개의 근육에서 길이와 유형이 다른 섬유를 분리하는 방법을 자세히 설명합니다: 그 중 3개는 이미 설명한 근육(FDB, EDL 및 가자미)이고 그 중 3개는 처음으로 성공적으로 해리되었습니다(extensor hallucis longus [EHL], peroneus longus [PL] 및 peroneus digiti quarti [PDQA]). 본 연구의 결과는 효소로 해리된 섬유의 모델이 광범위한 연구 및 이전에 발표된 데이터와의 향후 상관 관계에 적합하다는 것을 확인시켜 성숙한 골격근 연구를 위한 모델의 가용성을 높입니다.

<table><tbody><tr><td>시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Absolute 에탄올</td><td>Sigma Aldrich</td><td>32221</td><td></td></tr><tr><td>아세톤</td><td>Merck</td><td>179124</td><td></td></tr><tr><td>아크릴아미드</td><td>Gibco BRL</td><td>15512-015</td><td></td></tr><tr><td>과황산암모늄</td><td>Panreac</td><td>141138.1610</td><td></td></tr><tr><td>항미오신 I 항체</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M4276</td><td>1차 항체</td></tr><tr><td>항미오신 II 항체</td><td>시그마 알드리치</td><td>M8421</td><td>1차 항체</td></tr><tr><td>항미오신 IIA 항체</td><td>미국형 배양 컬렉션</td><td>SC-71</td><td>1차 항체. HB-277 하이브리도마에서 파생</td></tr><tr><td>안티 미오신 IIB 항체</td><td>개발 연구 하이브리도마 은행</td><td>BF-F3-c&nbsp;</td><td>1차 항체</td></tr><tr><td>비스-아크릴아미드</td><td>AMRESCO</td><td>0172</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Thermo Scientific</td><td>B14</td><td></td></tr><tr><td>Bradford 시약</td><td>Merck</td><td>1.10306.0500</td><td></td></tr><tr><td>브로모페놀 블루</td><td>Carlo Erba</td><td>428658</td><td></td></tr><tr><td>탄산칼슘</td><td>Merck</td><td>102066</td><td></td></tr><tr><td>이염화칼슘(CaCl2)</td><td>Merck</td><td>2389</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>시그마 알드리치</td><td>319988</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소 유형 2</td><td>Worthington</td><td>CLS-2/LS004176</td><td></td></tr><tr><td>Consul-Mount</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990440</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie 브릴리언트 블루 R 250&nbsp;</td><td>Merck</td><td>112553</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>AMRESCO</td><td>0281</td><td></td></tr><tr><td>Edetic acid (EDTA</td><td>AMRESCO</td><td>0322</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E4009</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Panreac&nbsp;</td><td></td><td></td>1423291211</tr><tr><td>글리신</td><td>Panreac</td><td>151340.1067</td><td></td></tr><tr><td>염소 혈청</td><td>시그마 Aldrich</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Thermo Scientific</td><td>6765015</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>AMRESCO</td><td>0511</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33258</td><td>시그마 Aldrich</td><td>861405</td><td></td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>AMRESCO</td><td>M136</td><td></td></tr><tr><td>이소펜탄</td><td>시그마 Aldrich</td><td>M32631</td><td></td></tr><tr><td>라미닌</td><td>시그마 Aldrich</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>Mag-Fluo-4, AM</td><td>Invitrogen</td><td>M14206</td><td>DMSO에서만 준비됩니다. 플루론산은 필요하지 않으며 섬유 변질을 방지하기 위해 사용해서는 안 됩니다.</td></tr><tr><td>Mercaptoethanol</td><td>Applichem</td><td>A11080100</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Protokimica MP10043</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mice</td><td>Multiple</td><td></td><td>이 원고에는 C57BL/6 마우스만 사용했습니다. 그러나 일부 예비 결과는 프로토콜이 동일한 연령과 체중의 스위스 웹스터 마우스에 잘 작동하는 것으로 나타났습니다.</td></tr><tr><td>Mowiol 4-88</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81381</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-테트라메틸에탄-1,2-디아민(TEMED)</td><td>Promega</td><td>V3161</td><td></td></tr><tr><td>N-벤질-p-톨루엔 설폰아미드(BTS)</td><td>Tocris</td><td>1870</td><td></td></tr><tr><td>최적 절단 화합물(OCT)</td><td>Thermo Scientific</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>2차 항체</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11001</td><td>염소 항-마우스 IgG (H+L) 교차 흡착된 2차 항체, Alexa Fluor 488</td></tr><tr><td>소듐 도데실 설페이트</td><td>Panreac&nbsp;</td><td></td><td></td>1323631209</tr><tr><td>트리스 0.5 M, pH 6.8&nbsp;</td><td>AMRESCO</td><td>J832</td><td></td></tr><tr><td>Tris(Hydroxymethyl)aminomethane</td><td>AMRESCO</td><td>M151</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>AMRESCO</td><td>M143</td><td></td></tr><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissection chamber</td><td>맞춤형</td><td></td><td></td></tr><tr><td>충전 슬라이드</td><td>Erie Scientific</td><td>5951PLUS</td><td></td></tr><tr><td>실험용 목욕 챔버</td><td>Warner Instruments</td><td>RC-27NE2</td><td>필드 자극 기능이 있는 좁은 목욕 챔버, 가열된 플랫폼에 앙상블 PH-6</td></tr><tr><td>미세 집게</td><td>세계 정밀 기기</td><td>500338, 500230</td><td></td></tr><tr><td>미세 가위</td><td>세계 정밀 기기</td><td>Vannas 가위 501778</td><td></td></tr><tr><td>유리 파스퇴르 피펫</td><td>여러</td><td></td><td>불 광택 팁</td></tr><tr><td>뚜껑이 있는 유리병</td>, <td>여러 개</td><td></td>, <td>2-3mL volumen,</td></tr><tr><td>작동 가위</td>, <td>World Precision Instruments</td><td>501223-G</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td>, <td>Thermo Scientific</td><td>SL 8R</td><td></td></tr>, <tr><td>컨포칼 현미경</td><td>Olympus</td><td>FV1000</td><td></td></tr>, <tr><td>저온 유지 장치,</td><td>Leica</td><td>CM1850</td><td></td></tr><tr>Stemi 508 입체경에 결합된 <td>디지털 카메라</td><td>Zeiss</td><td>Erc 5s 및 Axio</td><td>305 Axio 305는 해부 중 사진을 촬영하는 데 사용되었으며, Axio Observer A1 현미경에 결합된 Erc 5s 또는 Axio 208은 분리된 섬유 및 면역형광 분석의 이미지를 촬영하는 데 사용되었습니다</td></tr>. <tr><td>Digitizer</td><td>Molecular Devices</td><td>1550A Digidata</td><td></td></tr><tr><td>전기영동 챔버</td><td>Bio Rad</td><td>형광에 결합된 Mini-Protean IV</td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경</td><td>Zeiss</td><td>Axio Observer A1</td><td>형광을 위한 적절한 광원, 필터 및 대물렌즈에 결합된</td></tr><tr><td>광전자 증배관</td><td>Horiba</td><td>R928 튜브, Hamamatsu, D104 광도계, Horiba</td><td>형광 현미경의 측면 포트에 결합</td></tr><tr><td></td><td>Stereoscope Zeiss</td><td>Stemi 508</td><td></td></tr><tr><td>자극기&nbsp;</td><td>잔디 악기&nbsp;</td><td>S6</td><td></td></tr><tr><td>수조&nbsp;</td><td>Memmert</td><td>WNE-22</td><td></td></tr><tr><td>Xilol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>808691</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>전기 영동 분석을위한 무료 소프트웨어</td><td>켄터키 대학교</td><td>GelBandFitter v1.7</td><td></td></tr><tr><td>http://www.gelbandfitter.org 이미지 분석 및 형태 측정을위한 무료 소프트웨어</td><td>국립 보건원</td><td>ImageJ v1.54</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td></tr><tr><td>Ca2+ 신호 수집 및 분석을 위한 라이선스 소프트웨어</td><td>Molecular Devices</td><td>pCLAMP v10.05</td><td>https://www.moleculardevices.com</td></tr><tr><td>통계 분석 및 그래프 작성을 위한 라이선스 소프트웨어</td><td></td><td>OriginLab OriginPro 2019</td><td>https://www.originlab.com/</td></tr></tbody></table>

생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: beyond flexor digitorum brevis

Intact Short, Intermediate, and Long Skeletal Muscle Fibers Obtained by Enzymatic Dissociation of Six Hindlimb Muscles of Mice: Beyond Flexor Digitorum Brevis

쥐 근육의 효소 해리에 의해 얻어진 골격근 섬유는 생리학적 실험에 유용한 모델이다. 그러나 대부분의 논문은 굴곡근 골곡근(FDB)의 단섬유를 다루고 있는데, 이는 섬유종을 다루는 결과의 범위를 제한하고, 이용 가능한 생물학적 물질의 양을 제한하며, 세포 생리학적 현상과 다른 근육에서 얻은 이전의 생화학적 및 역학적 지식 사이의 명확한 연결을 방해합니다.
이 논문은 서로 다른 섬유 유형 프로파일과 길이를 가진 6개의 근육에서 온전한 섬유를 얻는 방법을 설명합니다. C57BL/6 성체 마우스를 사용하여 근육 해부 및 섬유 분리 프로토콜을 보여주고 Ca2+ 과도 연구 및 형태학적 특성 분석에 대한 섬유의 적합성을 입증합니다. 근육의 섬유 유형 구성도 제시됩니다. 해리되면 모든 근육이 온전하게 되어 24시간 이상 활발하게 수축하는 살아있는 섬유가 됩니다. FDB는 짧은(<1mm), 비골 사중사(PDQA) 및 장비골(PL)은 중간(1-3mm)을 제공하는 반면, 장신근(EDL), 장신근(EHL) 및 가자미근은 긴(3-6mm) 섬유를 방출합니다.
고속 염료 Mag-Fluo-4로 기록했을 때 PDQA, PL 및 EHL 섬유의 Ca2+ 과도 현상은 IIX 및 IIB 섬유에 해당하는 것으로 알려진 형태 유형 II(MT-II)를 연상시키는 빠르고 좁은 동역학을 보여주었습니다. 이것은 이 근육이 FDB(~80%) 및 가자미(~65%)에 비해 90% 이상의 유형 II 섬유를 가지고 있다는 사실과 일치합니다. FDB를 넘어 우리는 처음으로 1mm에서 6mm 사이의 길이 범위에 걸쳐 있는 섬유를 렌더링하는 여러 근육의 해리를 시연합니다. 이러한 섬유는 생존 가능하며 빠른 Ca2+ 과도 현상을 제공하므로 MT-II는 근육 공급원에 관계없이 IIX 및 IIB 고속 섬유로 일반화될 수 있습니다. 이러한 결과는 성숙한 골격근 연구를 위한 모델의 가용성을 높입니다.

경련 중 Sarcoplasmic Ca2+ 농도 해리된 섬유 세트에서 생리학적 실험의 타당성을 입증하고 여기-수축 결합(ECC) 및 섬유 유형에 대한 이전 결과를 확장하기 위해 모든 근육의 섬유에서 Ca2+ 과도 현상을 획득했습니다. 먼저, FDB(n=5) 및 EDL(n=7)은 형태형 II(MT-II)로 알려진Ca2+ 동역학을 나타냈다. 이들은 RT가 ~ 1ms 동안 지속되는 빠르고 뾰족한 신호입니다. 붕괴 단계는 첫 번째 성분 (A1)이 전체 진폭의 30 %보다 큰 이중 지수 함수를 장착 할 수 있으며 피크 [Ca2 +]는 15에서 30 μM사이입니다 33,47 (그림 3B). 이...

우리는 성인 마우스의 6개 근육에서 다양한 길이와 유형의 효소로 해리된 섬유를 얻기 위한 프로토콜을 설명합니다: 그 중 3개는 이미 설명되었고(flexor digitorum brevis, extensor digitorum longus, soleus) 그 중 3개는 처음으로 성공적으로 해리되었습니다(extensor hallucis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: Beyond Flexor Digitorum Brevis

Skeletal muscle fibers obtained by enzymatic dissociation of mouse muscles are a useful model for physiological experiments. However, most papers deal ...

이 연구에서는 생쥐의 6개 뒷다리 근육에서 다양한 길이와 유형의 섬유를 분리하는 방법을 설명합니다. 또한 여기-수축 결합 메커니즘 연구를 다루는 생리학적 실험에 대한 섬유의 적합성을 테스트했습니다. 수년 동안 긴 근섬유를 얻는 것은 어려운 일이었기 때문에 이 분야의 많은 연구의 범위가 제한되었습니다.이제 우리는 최대 6mm 길이의 마우스 굴곡근, 신근 및 에버터를 사용하여 희박한 섬유를 얻을 수 있음을 보여줍니다. 예를 들어, 6개의 서로 다른 근육에서 섬유를 얻음으로써 형태학 유형 II로 알려진 칼슘 일시적 동역학이 근육 공급원의 위치나 기능에 관계없이 유형 IIB 및 IIX로 일반화될 수 있음을 보여줄 수 있었습니다. 우리는 효소로 분리된 섬유 모델이 생화학, 생리학, 생물물리학, 세포 생물학 및 분자 생물학 범위 내에서 기계론적 질문에 답할 수 있는 다양한 유형의 기술을 사용하여 다양한 실험적 접근 방식에 적합하다고 믿습니다.

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절연 골격근의 묘 - 기계 분석

우리는 직접의 근육 힘, 근육 힘, 수축성 속도론 및 절연 골격 근육의 fatigability를 측정하는 방법을...

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

이 비디오는 수확된 쥐 EDL(Extensor Digitorum Longus) 근육에서 단일 근섬유를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 근섬유는 근섬유와 관련된 근육 줄기세포 활성을 연구하기 위해 배양할 수 있습니다.

근섬유 분리: 수확된 쥐 EDL(Extensor Digitorum Longus) 근육에서 단일 근섬유를 얻는 기술

우리는 그대로 마우스 골격 근육을 사용하여 작은 각도 X 선 회절 실험을 수행하기위한 상세한 프로토콜을 제시한다. 인간 질병에 대한 형질전환 마우스 모델의 광범위한 가용성으로,이 실험 플랫폼은 유전 근육 질환의 구조적 기초를 해명하기위한 유용한 테스트 베드를 형성 할 수...

근육 질환의 구조적 기초를 연구하기위한 도구로 그대로 뮤린 골격 근육의 X 선 회절

여기서, 우리는 동종구균 돌연변이 라민 Δ8-11 마우스 모델, 에머리-드레이퍼스 근 위축증(EDMD)에 대한 매우 가혹한 모델으로부터 초기 산후 발달 단계에서 단일 근육 섬유를 효율적으로 획득하는 방법을 제안한다.

초기 산후 발달에 있는 에머리 드레이푸스 근 이영양증의 Murine 모형에서 단 근섬유 격리 및 문화

여기에서는 마우스 골격근으로부터의 미토콘드리아를 분리하는 상세한 방법과 마이크로플레이트 기반 호흡 측정법을 사용하여 산소 소모율(OCR)에 의한 호흡의 후속 분석을 설명한다. 이 파이프 라인은 미토콘드리아 대사에 대한 여러 환경 또는 유전 적 개입의 효과를 연구하는 데 적용될 수 있습니다.

호흡 측정을 위한 마우스 골격근으로부터 미토콘드리아의 분리

골격근 기능은 전통적으로 힘들고 처리량이 적은 접근법을 사용하여 분리된 근육 섬유의 수축성을 정량화하여 평가할 수 있습니다. 여기에서는 하이드로겔에 내장된 근육 섬유의 수축성을 정량화하기 위한 광학 기반의 고처리량 방법을 설명합니다. 이 접근법은 약물 스크리닝 및 치료제 개발에 적용됩니다.

광학 기반 시스템을 사용한 하이드로겔 내장 온전한 마우스 근육 섬유의 고처리량 수축 측정

이 프로토콜은 기계적 분리, 효소 해리, 여과 및 차등 초원심분리를 통해 설치류 근육 조직에서 골격근 간질성 세포외 소포체(SkM-EV)를 분리하고 정제하는 것을 목표로 합니다. 일관성과 신뢰성을 보여줍니다. 분리된 SkM-EV는 근육 항상성 및 질병에 대한 통찰력을 제공하며, 진단 바이오마커 또는 치료 수단으로 응용될 수 있습니다.

골격근 간질성 세포외 소포체의 효소 분리

이 프로토콜은 조직 해리, 순차적 여과, 사전 플레이트 및 정의된 배양 조건을 통해 성체 및 신생아 마우스 골격근에서 1차 근모세포를 분리하고 농축하는 표준화된 방법을 제공하여, 위성 세포 유래 근아세포 배양을 하위 실험 응용으로 구축하고 유지할 수 있게 합니다.

시험관 내 근형성 연구를 위한 골격근 위성 세포 분리

이 프로토콜은 산화성 가자형상근에서 온전한 단일 근섬유를 분리하고, 이 섬유에서 유래한 고정제된 근모아 배양을 구축하는 과정을 설명합니다. 최적화된 절차는 마우스당 약 300–500개의 온전한 근섬유를 신뢰성 있게 얻어 하위 분자 및 세포 분석을 가능하게 합니다.

산화성 근섬유 거동 평가를 위한 단일 섬유 분리 분석

학습하세요 생쥐 6개 뒷다리 근육에서 효소 해리로 짧고 중간 및 긴 골격근 섬유를 분리하는 방법을. 이 기술은 흥분-수축 결합 메커니즘 연구에 필수적인 생리학 실험에 적합합니다.

생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: Beyond Flexor Digitorum Brevis

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