Name: 기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: 학습하세요 기계적으로 분리한 Stromal Vascular Fraction과 fibrin hydrogel을 결합한 조직 공학 기법으로 만성 상처 치유를 개선하는 방법을. 이 프로토콜은 자가 세포를 활용한 비용 효율적인 재생 의학 솔루션을 제공합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>재생 의학을 위한 Fibrin Hydrogel의 기계적 기질 혈관 분획

<table><tbody><tr><td>12-웰플레이트</td><td>Sarstedt</td><td>83.3921</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>Biochemica</td><td>A1001.0010</td><td></td></tr><tr><td>50 mL-Falcon</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 타월, 2팩</td><td>Halyard</td><td>89701</td><td></td></tr><tr><td>Alamar blue 25 mL</td><td>Invitrogen</td><td>DAL1025</td><td></td></tr><tr><td>Albumin, 소 (BSA)</td><td>VWR</td><td>0332-500G</td><td></td></tr><tr><td>Biotek Cytation 5&nbsp;</td><td>애질런트</td><td></td><td>세포 이미징 멀티모드 마이크로플레이트 리더&nbsp;</td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670-500G</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 장치</td><td>마이크로톰</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM(4,5g/L 포도당, L-글루타민, 피루브산 나트륨</td><td>포함) VWR</td><td>392-0416</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>에피네프린</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4250</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Biowest</td><td>S181H-500</td><td></td></tr><tr><td>피브리노겐 인간 플라즈마 100mg</td><td>시그마-알드리치</td><td>341576-100MG</td><td></td></tr><tr><td>포르말린</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>포르말린 4%</td><td>포마픽</td><td></td>스 1308069 <td></td></tr><tr><td>FSC 22-Einbettmedium, blau</td><td>Biosystems</td><td>3801481S</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린 & Eosin 솔루션</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3136 / HT110132</td><td></td></tr><tr><td>젖산 링거' s 용액 1000mL</td><td>B Braun</td><td>R5410-01</td><td></td></tr><tr><td>Mercedes Cannula 4mm</td><td>MicroAire</td><td>PAL-R404LL</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Bbraun</td><td>570160</td><td></td></tr><tr><td>OCT 임베딩 매트릭스 125mL</td><td>CellPath</td><td>KMA-0100-00A</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>Fisher Scientific</td><td>10342243</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333-100ML</td><td></td></tr><tr><td>페트리쉬 150mm</td><td>Sarstedt</td><td>83.1803</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin-iFluor 488 시약</td><td>Abcam</td><td>ab176753</td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기 20mL Luer</td><td>HENKE-JECT</td><td>5200-000V0</td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기 30mL Luer-Lock</td><td>BD</td><td>10521</td><td></td></tr><tr><td>인간 혈장</td><td>에서 추출한 트롬빈시그마-알드리치</td><td>T6884-100UN</td><td></td></tr><tr><td>트라넥삼산</td><td>오르파 스위스</td><td>6837093</td><td></td></tr><tr><td>튤립필터 1.2</td><td>렌시온 외과</td><td>ATLLLL</td><td></td></tr><tr><td>튤립필터 1.4</td><td>렌시온 외과</td><td>ATLLLL</td><td></td></tr></tbody></table>

기계적으로 분리된 stromal vascular fraction과 fibrin hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

The Combination of Mechanically Isolated Stromal Vascular Fraction and Fibrin Hydrogel: A Processing Protocol

Resazurin 분석 우리는 먼저 mSVF 세포의 시험관 내 세포 생존력을 조사했습니다. 이를 위해 0일, 3일, 7일에 레자주린 세포 생존력 분석을 수행했습니다. 총 4개의 샘플의 0일, 3일, 7일째의 세포 생존율이 그림 1에 나와 있습니다. 0일의 값은 기준선으로 사용되며 100%로 설정되었습니다. 3일째 양성대조군(mSVF)은 78.92%(± 5.33%)로 소폭 감소한 반면, mSVF-피브린 하이드로겔 조합은 96.48%(±1.89%)를 유지했다. 7일째에도 유사한 추세가 관찰되었는데, mSVF는 77.46%(±3.90%)로 측정된 반면, mSVF-피브린 하이드로겔 조합은 109.02%(±8.92%)로 일정하게 유지되었습니다. 쌍을 이루지 않은 t-검정에서 3일째와 7일에 얻은 두 값을 Welch의 보정과 비교한 결과 통계적으로 유의한 차이는 발견되지 않았습니다(p ≥ 0.05).
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기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the ...

the-combination-mechanically-isolated-stromal-vascular-fraction

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 신생아 cardiomyocytes 및 조직 공학을위한 섬유소의 히드로겔 구조의 캡슐에 대한 세포의 준비의 절연을 설명합니다. 우리는 전기 자극 및 세포 생존과 immunohistological 얼룩에 따라 생성되는 활성 강제를 포함하여 문화 시대 이후 조직 공학 m​​yocardium을 분석하는 방법을 설명합니다.

심장 조직 공학을위한 섬유소 히드로겔에 Cardiomyocytes의 캡슐

이 작품은 세부 3D 섬유소의 준비 culturing 및 plutipotent 줄기 세포를 구별을 위해 공사장 공중 발판. 이러한 공사장 공중 발판이 아니라 약물 전달 시스템을 포함하도록 수정으로 줄기 세포의 행동에 대한 다양한 생물 학적 화합물의 효과를 차단하는 데 사용할 수 있습니다.

3D 섬유소의 준비는 줄기 세포 배양 용도 공사장 공중 발판

이 프로토콜은 자신의 주변의 세포외 기질에서 발표가 되려면 여러 phenotypes로 차별화에 시달릴 수도 줄기 세포의 고유 기능을 활용에 초점을 맞추고 있습니다. 이 방법 원고는 동시에 지방 파생 줄기 세포를 공동으로 차별화하는 데, PEG-섬유소와 콜라겐으로 구성되어 bilayered 히드로겔을 활용 모델, 우리의 설명 및 특성을...

ASC의 분화를 제어하는​​ Bilayered 히드로겔 꾸민

시간 경과 현미경 검사법과 이미지 처리 기술은 48시간 동안 환경적으로 통제된 생물 반응기에서 섬유아세포 매개 젤 다짐 및 피브린 섬유 재정렬을 관찰하고 분석하는 데 사용되었습니다.

섬유아세포 매개 피브린 겔 다짐 관찰 및 정량화

이 모델 시스템은 비파괴 방식으로 내생 콜라겐 (재) 조직 리얼 타임으로 공부하는 데 사용할 수있는 근섬유 채워진 섬유소 젤에서 시작됩니다. 모델 시스템은 서로 다른 세포 소스, 중간 첨가제와 함께 사용할 수있는, 매우 조정할 수 있으며, 특정 요구에 쉽게 적용 할 수 있습니다.

엔지니어링 섬유소 기반 조직의 면역 조직 및 제약 조건의 적용에서 생성하고 세포와 콜라겐 (재) 조직을 유도하는 스트레인

복잡한 조직의 고도로 조직화된 구조를 만들려면 여러 재료 및 세포 유형을 통합된 복합체로 조립해야 합니다.  이 조합 설계는 강력한 섬유질 기질 염기를 포함하는 두 가지 별개의 생물학적으로 파생된 물질과 새로운 혈관 형성을 향상시키기 위한 내피 세포와 장기 특이적 층상 세포 시트를 통합합니다.

조직 공학 : 계층화 된 세포 시트의 전달을위한 다세포 3D 비계 건설

프로토콜에는 회전 타원 체에 perfusable 혈관 네트워크를 설계 하는 방법을 설명 합니다. 회전 타원 체의 주변 microenvironment 신생 유도 microchannels 미세 장치에는 회전 타원 체 연결을 고안 이다. 메서드를 사용 하면 3 차원 문화에 오랫동안 기다려온 기술 회전 타원 체의 관류를 수 있습니다.

미세 소자에서 조직 모델 perfusable 혈관 네트워크

제시된 방법은 실리콘 고무에 내장된 3D 소프트 하이드로겔의 단종 스트레칭을 포함하면서 살아있는 공초점 현미경 검사를 허용합니다. 섬유 정렬뿐만 아니라 외부 및 내부 하이드로겔 균주의 특성화가 입증된다. 개발된 장치 및 프로토콜은 다양한 변형 정권에 대한 세포의 반응을 평가할 수 있다.

라이브 현미경 이미징 에서 3D 하이드로겔의 제어 변형

여기서는 마이크로머신 마이크로유체 플랫폼을 사용하여 3차원 단순화 및 미분화 피부 모델을 생성하는 프로토콜을 제시합니다. 병렬 흐름 접근법은 주사기 펌프에 의해 제어되는 상피 세포의 파종을 위해 진피 구획의 시상 증착을 허용합니다.

마이크로머신 마이크로유체 플랫폼의 간소화된 3차원 스킨 온-어칩 모델 생성

토끼의 각막 기질 상처 수리를 위한 현장 블루라이트-가교 젤라틴-리보플라빈 하이드로겔의 제조, 농축 및 적용을 위한 재현 가능한 프로토콜이 제시되었으며, 수술 처리, 부분 족근경 및 수술 후 관리를 위한 절차적 단계를 포함합니다.

토끼의 각막 상처 수리를 위한 강화 광가교 젤라틴-리보플라빈 하이드로겔의 제작 및 외과적 적용

학습하세요 기계적으로 분리한 Stromal Vascular Fraction과 fibrin hydrogel을 결합한 조직 공학 기법으로 만성 상처 치유를 개선하는 방법을. 이 프로토콜은 자가 세포를 활용한 비용 효율적인 재생 의학 솔루션을 제공합니다.

기계적으로 분리된 Stromal Vascular Fraction과 Fibrin Hydrogel의 조합: 처리 프로토콜

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