Name: H형 고혈압을 가진 쥐에서 Huotan Jiedu Tongluo 달인의 항고혈압 효과 및 메커니즘 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: 배우세요 H형 고혈압 쥐 모델에서 Huotan Jiedu Tongluo 달인의 항고혈압 효과와 ER 스트레스 유도 세포사멸 억제 기전을 통해 전통 의학의 새로운 치료 가능성을 탐색하는 방법입니다.

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이 연구는 길림성 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of Gillin Province)의 지원을 받았다. YDZJ202301ZYTS189).

H형 고혈압 쥐에서 Huotan Jiedu Tongluo의 항고혈압 효과

<ol><li>Noone, C., Dwyer, C. P., Murphy, J., Newell, J., Molloy, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effectiveness+of+physical+activity+interventions+and+antihypertensive+pharmacological+interventions+in+reducing+blood+pressure+in+people+with+hypertension%3A+Protocol+for+a+systematic+review+and+network+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Comparative effectiveness of physical activity interventions and antihypertensive pharmacological interventions in reducing blood pressure in people with hypertension: Protocol for a systematic review and network meta-analysis.</a> Syst Rev. 7 (1), 128(2018).</li>
<li>Huang, K., Zhang, Z., Huang, S., Jia, Y., Zhang, M., Yun, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+retinal+vessel+abnormalities+and+h-type+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurol%22%5BJournal%5D)">The association between retinal vessel abnormalities and h-type hypertension.</a> BMC Neurol. 21 (1), 6(2021).</li>
<li>Tan, Y., Nie, F., Wu, G., Guo, F., Wang, Y., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+h-type+hypertension+on+intraplaque+neovascularization+assessed+by+contrast-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22J+Atheroscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Impact of h-type hypertension on intraplaque neovascularization assessed by contrast-enhanced ultrasound.</a> J Atheroscler Thromb. 29 (4), 492-501 (2022).</li>
<li>Towfighi, A., Markovic, D., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pronounced+association+of+elevated+serum+homocysteine+with+stroke+in+subgroups+of+individuals%3A+A+nationwide+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pronounced association of elevated serum homocysteine with stroke in subgroups of individuals: A nationwide study.</a> J Neurol Sci. 298 (1-2), 153-157 (2010).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+homocysteine+and+blood+pressure+related+to+poor+outcome+of+acute+ischemia+stroke+in+Chinese+population%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High homocysteine and blood pressure related to poor outcome of acute ischemia stroke in Chinese population.</a> Plos One. 9 (9), e107498(2014).</li>
<li>Hao, P., Jiang, F., Cheng, J., Ma, L., Zhang, Y., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+Chinese+medicine+for+cardiovascular+disease%3A+Evidence+and+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Traditional Chinese medicine for cardiovascular disease: Evidence and potential mechanisms.</a> J Am Coll Cardiol. 69 (24), 2952-2966 (2017).</li>
<li>Tian, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huotan+Jiedu+Tongluo+decoction+inhibits+balloon-injury-induced+carotid+artery+intimal+hyperplasia+in+the+rat+through+the+perk-eif2%CE%B1-atf4+pathway+and+autophagy+mediation%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Huotan Jiedu Tongluo decoction inhibits balloon-injury-induced carotid artery intimal hyperplasia in the rat through the perk-eif2α-atf4 pathway and autophagy mediation.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5536237(2021).</li>
<li>Simko, F., Pechanova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+melatonin+and+chronotherapy+among+the+new+trends+in+hypertension+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pineal+Res%22%5BJournal%5D)">Potential roles of melatonin and chronotherapy among the new trends in hypertension treatment.</a> J Pineal Res. 47 (2), 127-133 (2009).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H-type+hypertension+is+a+risk+factor+for+cerebral+small-vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">H-type hypertension is a risk factor for cerebral small-vessel disease.</a> BioMed Res Int. 2020, 6498903(2020).</li>
<li>Rodrigo, R., Passalacqua, W., Araya, J., Orellana, M., Rivera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homocysteine+and+essential+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Homocysteine and essential hypertension.</a> J Clin Pharmacol. 43 (12), 1299-1306 (2003).</li>
<li>Lehmann, M., Gottfries, C. G., Regland, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cognitive+impairment+in+the+elderly%3A+Homocysteine+is+an+early+marker%5BTitle%5D)+AND+%22Dement+Geriatr+Cogn%22%5BJournal%5D)">Identification of cognitive impairment in the elderly: Homocysteine is an early marker.</a> Dement Geriatr Cogn. 10 (1), 12-20 (1999).</li>
<li>dos Santos, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+folic+acid+deficiency+is+a+major+determinant+of+hyperhomocysteinemia+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Brain+Dis%22%5BJournal%5D)">Evidence that folic acid deficiency is a major determinant of hyperhomocysteinemia in Parkinson's disease.</a> Metab Brain Dis. 24 (2), 257-269 (2009).</li>
<li>Zhao, W., Gao, F., Lv, L., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+hypertension+and+homocysteine+increases+the+risk+of+mortality+among+middle-aged+and+older+population+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">The interaction of hypertension and homocysteine increases the risk of mortality among middle-aged and older population in the United States.</a> J Hypertens. 40 (2), 254-263 (2022).</li>
<li>Woo, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperhomocyst%28e%29inemia+is+a+risk+factor+for+arterial+endothelial+dysfunction+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Hyperhomocyst(e)inemia is a risk factor for arterial endothelial dysfunction in humans.</a> Circulation. 96 (8), 2542-2544 (1997).</li>
<li>Lu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intervention+of+enalapril+maleate+and+folic+acid+tablet+on+the+expressions+of+the+grp78+and+chop+and+vascular+remodeling+in+the+vascular+smooth+muscle+cells+of+h-hypertensive+rats+with+homocysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmaco%22%5BJournal%5D)">The intervention of enalapril maleate and folic acid tablet on the expressions of the grp78 and chop and vascular remodeling in the vascular smooth muscle cells of h-hypertensive rats with homocysteine.</a> Eur Rev Med Pharmaco. 22 (7), 2160-2168 (2018).</li>
<li>López-García, P., Moreira, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+forces+for+the+origin+of+the+eukaryotic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Selective forces for the origin of the eukaryotic nucleus.</a> BioEssays. 28 (5), 525-533 (2006).</li>
<li>Minamino, T., Komuro, I., Kitakaze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+as+a+therapeutic+target+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress as a therapeutic target in cardiovascular disease.</a> Circ Res. 107 (9), 1071-1082 (2010).</li>
<li>Chen, X., Cubillos-Ruiz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+signals+in+the+tumour+and+its+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress signals in the tumour and its microenvironment.</a> Nat Rev Cancer. 21 (2), 71-88 (2021).</li>
<li>Ji, C., Kaplowitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperhomocysteinemia%2C+endoplasmic+reticulum+stress%2C+and+alcoholic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroentero%22%5BJournal%5D)">Hyperhomocysteinemia, endoplasmic reticulum stress, and alcoholic liver injury.</a> World J Gastroentero. 10 (12), 1699-1708 (2004).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homocysteine+induces+programmed+cell+death+in+human+vascular+endothelial+cells+through+activation+of+the+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Homocysteine induces programmed cell death in human vascular endothelial cells through activation of the unfolded protein response.</a> J Biol Chem. 276 (38), 35867-35874 (2001).</li>
<li>Cunard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress%2C+a+driver+or+an+innocent+bystander+in+endothelial+dysfunction+associated+with+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Cur+Hypertens+Rep%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress, a driver or an innocent bystander in endothelial dysfunction associated with hypertension.</a> Cur Hypertens Rep. 19 (8), 64(2017).</li>
<li>Casas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GRP78+at+the+centre+of+the+stage+in+cancer+and+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GRP78 at the centre of the stage in cancer and neuroprotection.</a> Front Neurosci. 11, 177(2017).</li>
<li>Urano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+of+stress+in+the+ER+to+activation+of+JNK+protein+kinases+by+transmembrane+protein+kinase+ire1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Coupling of stress in the ER to activation of JNK protein kinases by transmembrane protein kinase ire1.</a> Science. 287 (5453), 664-666 (2000).</li>
<li>Borghi, A., Verstrepen, L., Beyaert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRAF2+multitasking+in+tnf+receptor-induced+signaling+to+nf-%CE%BAb%2C+map+kinases+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">TRAF2 multitasking in tnf receptor-induced signaling to nf-κb, map kinases and cell death.</a> Biochem Pharmacol. 116, 1-10 (2016).</li>
<li>Wen, X. -R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butylphthalide+suppresses+neuronal+cells+apoptosis+and+inhibits+JNK-caspase3+signaling+pathway+after+brain+ischemia+%2Freperfusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Butylphthalide suppresses neuronal cells apoptosis and inhibits JNK-caspase3 signaling pathway after brain ischemia /reperfusion in rats.</a> Cell Mol Neurobiol. 36 (7), 1087-1095 (2016).</li>
<li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine-threonine+protein+kinase+activation+may+be+an+effective+target+for+reducing+neuronal+apoptosis+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Serine-threonine protein kinase activation may be an effective target for reducing neuronal apoptosis after spinal cord injury.</a> Neural Regen Res. 10 (11), 1830-1835 (2015).</li>
<li>Xu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+and+propofol+combination+therapy+inhibits+endoplasmic+reticulum+stress+and+remarkably+attenuates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+and+ogd+injury+in+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Estrogen and propofol combination therapy inhibits endoplasmic reticulum stress and remarkably attenuates cerebral ischemia-reperfusion injury and ogd injury in hippocampus.</a> Biomed Pharmacother. 108, 1596-1606 (2018).</li>
</ol>

우리는 연구가 잠재적인 이해 상충으로 해석될 수 있는 상업적 또는 재정적 관계가 없는 상태에서 수행되었음을 선언합니다.

고혈압은 성인 인구의 1/3에 영향을 미치는 가장 흔한 심혈관 질환 중 하나이며 뇌졸중, 관상 동맥 심장 질환, 심부 및 신부전의 위험을 증가시킵니다8. H형 고혈압은 원발성 고혈압과 호모시스테인 수치 증가가 동시에 발생하는 특수한 유형의 고혈압으로, 수년 동안 많은 관심을 받아왔다9. 최근에는 항고혈압제와 병용한 경구용 EM의 사용으로 혈압 조절 및 혈중 Hcy 수치 저하 측면에서 효과가 향상되는 것으로 나타났지만, 여전히 많은 금기 사항, 부작용, 약물 내성 및 두통, 현기증, 피로, 기침, 저혈압 등의 단점이 있습니다. 한의학은 H형 고혈압 치료에 있어 개인 맞춤형 접근법을 통해 근본적인 원인을 해결하고, 부작용이 적은 보완 효과를 제공하여 고혈압을 장기적으로 효과적으로 관리할 수 있는 이점을 제공합니다. 이 연구에서 우리는 한의학 제식 HTJDTLD가 메티오닌에 의한 H형 고혈압에 명백한 항고혈압 효과가 있음을 발견했습니다. 더 중요한 것은 HTJDTLD가 Hcy 상승과 관련된 고혈압에 대해 최초로 승인된 치료제인 EM의 항고혈압 효능을 크게 향상시켰다는 것입니다. 그러나 EM의 투여는 때때로 일부 부작용을 일으킵니다. 
메티오닌의 대사 과정에서 형성되는 황 함유 아미노산인 Hcy의 수치는 고혈압10, 알츠하이머병, 치매11, 파킨슨병12을 포함한 심혈관 및 신경퇴행성 질환에서 증가한다. 이전 연구에서도 고혈압과 호모시스테인 사이의 상호작용이 중년 및 노년층의 사망 위험에 영향을 미친다고 밝혔다13. Woo et al.14 은 Hcy 수치 증가가 내피 기능 장애를 일으키고 엘라스틴 섬유를 파괴하고 콜라겐 생성을 증가시키는 결과인 동맥 경직과 관련이 있다고 보고했습니다. 이 연구에서 우리는 메티오닌 치료군에서 혈장 내 Hcy 수치가 유의하게 증가했으며, 이는 혈압 상승 및 상당한 동맥 병리학적 변화와 결합되었음을 발견했습니다. 그러나 HTJDTLD 치료는 혈압을 현저히 낮추고 동맥 병리학적 손상을 완화하며 Hcy 수치를 감소시켰습니다. 에날라프릴과 엽산을 모두 함유한 새로운 화합물 제제인 EM은 Hcy15 상승과 관련된 고혈압에 대해 최초로 승인된 치료제로 사용되었습니다. HTJDTLD가 Hcy 수치의 감소와 병리학적 변화의 완화로 나타난 바와 같이 항고혈압 효과를 향상시켰다는 점은 주목할 가치가 있습니다.
소포체(endoplasmic reticulum, ER)는 분비된 단백질과 막관통 단백질의 합성, 접힘 및 변형을 위한 중심 세포기관이다16. 정상적인 ER 기능의 교란은 ER 스트레스로 이어질 수 있으며, 이는 많은 질병과 관련이 있으며 최근에는 고혈압과 관련이 있습니다17,18. 더욱이, 이전 보고에 의하면 Hcy는 이황화물 결합 형성을 방해하고 내피 생존력과 혈관 이완을 감소시킴으로써 ER 스트레스를 활성화할 수 있다19. Hcy에 의한 응급실 스트레스는 또한 내피 세포 사멸을 유발할 수 있습니다20,21. 그러나 HTJDTLD가 ER 스트레스를 조절하여 항고혈압 효과를 발휘하는지 여부는 연구되지 않았습니다. 따라서 ER 스트레스 유발 세포사멸 경로를 통해 HTJDTLD의 항고혈압 효과를 탐색했습니다. Bip라고도 하는 GPR78은 주요 샤프롱이며 ER 스트레스22 후에 활성화됩니다. 종양 괴사 인자 수용체 관련 인자 2(TRAF2)는 또한 ER스트레스 23과 같은 내재적 신호에 대한 세포 반응과 관련이 있는 것으로 입증되었습니다. TRAF2는 신호 전달 캐스케이드를 시작하여 세포 및 상황 의존적 방식으로 c-Jun N-말단 키나아제(JNK)의 활성화를 유도합니다24. 세포사멸의 중요한 실행인자인 Caspase-3는 세포사멸 과정에서 중추적인 역할을 하며 다양한 유형의 포유류 세포에서 다양한 경로를 통해 활성화될 수 있습니다25. 세포사멸의 중요한 실행인자인 Caspase-3는 세포사멸 과정에서 중추적인 역할을 하며 다양한 포유류 세포 유형에 걸쳐 다양한 경로를 통해 활성화될 수 있습니다26. 카스파제-3는 응급실 스트레스 매개 세포자멸사(ER stress-mediated apoptosis)에 관여하며, 상이한 세포사멸 캐스케이드(apoptotic cascades)의 궁극적인 공통 구성원역할을 한다 27. 본 연구에서는 qRT-PCR과 웨스턴 블로팅에 의해 GPR78, TRAF2, JNK, caspase 3의 유전자 및 단백질 발현을 검출하였다. 그 결과, 메티오닌 처리는 GPR78, TRAF2, JNK, 카스파제3의 유전자 및 단백질 발현을 유의하게 증가시켰으며, HTJDTLD는 이러한 유전자 및 단백질 발현을 유의하게 억제하는 것으로 나타났다. 그러나 이 두 가지 방법만 사용하는 데에는 여전히 몇 가지 제한 사항이 있습니다. ERS 관련 신호 경로의 억제제를 사용하고 유세포 분석으로 세포 사멸을 검출함으로써 HTJDTLD의 작용 기전을 평가하는 것이 이상적일 수 있습니다. 우리는 향후 연구에서 실험 프로토콜을 지속적으로 개선할 것입니다.
그 결과, HTJDTLD는 메티오닌에 의한 H형 고혈압이 있는 쥐에서 항고혈압 효과가 있는 것으로 나타났다. 근본적인 메커니즘은 ER 스트레스 활성화에 의한 세포 사멸을 억제하는 것을 포함할 수 있습니다. 메티오닌 유발 고혈압이 있는 쥐에서 항고혈압 효과와 잠재적 기전을 감안할 때 HTJDTLD는 고혈압 치료의 미래 치료 응용 분야에 대한 큰 가능성을 가지고 있습니다.

심장마비, 뇌졸중, 신부전의 주요 위험 요인인 고혈압은 전 세계 10억 명의 사람들에게 영향을 미치는 중요한 공중 보건 문제가 되었습니다1. 호모시스테인(Hcy)은 티올기 함유 아미노산으로 메티오닌 대사의 중요한 대사 중개자입니다. 혈장 Hcy 수치가 상승된 고혈압은 H형 고혈압으로 정의되며, 이는 뇌졸중 2,3과 같은 심뇌혈관 질환의 발생 및 재발에 대한 중요한 위험 요인이 될 수 있습니다. 최근 연구에 따르면 H형 고혈압의 동반 거주는 심혈관 및 뇌혈관 질환의 부작용을 악화시킬 수 있다고 보고되었다4. 특히 중국에서 H형 고혈압 환자의 75%가 원발성 고혈압을 앓고 있으며, 이는 삶의 질에 심각한 영향을 미친다5. 현재 H형 고혈압의 치료는 주로 서양 의학을 포함하고 있습니다. 그러나 특정 부작용과 순응도 저하를 유발할 수 있으며 더 이상 H형 고혈압의 종합적인 관리에 대한 요구를 충족시킬 수 없습니다.
중국 전통 의학(TCM)은 중국에서 2,000년 이상의 역사를 가진 독특한 자원입니다. 서양 의학에서 고혈압 조절에 대한 충족되지 않은 요구로 인해 임상의들은 H형 고혈압의 예방 및 치료에서 한의학의 잠재적 역할을 고려하기 시작했다6. Huotan Jiedu Tongluo Decoction (HTJDTLD)은 Yue Deng 교수가 광범위한 임상 전문 지식을 바탕으로 공식화한 중국 전통 의학 공식입니다7. 20년 이상의 임상 적용 과정에서 HTJDTLD는 심혈관 및 뇌혈관 질환 치료에서 놀라운 효과를 입증했습니다1. 그러나 HTJDTLD가 H형 고혈압에 치료 효과가 있는지는 보고되지 않았습니다. 따라서 H형 고혈압 환자에서 HTJDTLD의 항고혈압 효과와 특정 기전을 탐색하고 H형 고혈압 치료를 위한 잠재적 치료 약물을 식별하는 것을 목표로 했습니다.

<table><tbody><tr><td>1st Strand cDNA 합성 SuperMix for qPCR</td><td>Yeasen, 중국</td><td>11149ES</td><td>cDNA 합성 키트&nbsp;</td></tr><tr><td>안티 베타 액틴 항체</td><td>Bioss, 중국</td><td>bs-0061R</td><td></td></tr><tr><td>안티 카스파제 -3 항체</td><td>Bioss, 중국</td><td>bs-0081R</td><td></td></tr><tr><td>안티 GPR78 항체</td><td>Abcam, 미국</td><td>ab108513</td><td></td></tr><tr><td>안티 JNK 항체</td><td>Abcam, 미국</td><td>ab76572</td><td></td></tr><tr><td>안티 p-JNK 항체</td><td>Bioss, 중국</td><td>bsm-52462R</td><td></td></tr><tr><td>안티 토끼 IgG 항체</td><td>Bioss, 중국</td><td>bs-0295G-HRP</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TRAF2 항체</td><td>Bioss, 중국</td><td>bs-22372R</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad CFX96 터치 시스템&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>CFX96</td><td>real-time PCR 검출 시스템&nbsp;</td></tr><tr><td>ECL 웨스턴 블롯 기판</td><td>Merck, MA, USA</td><td>WBULP-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Enalapril 말레 산염 엽산 정제</td><td>Yangzijiang Pharmaceutical Company, 중국</td><td>20040991</td><td></td></tr><tr><td>FastStart SYBR Green Master</td><td>Sigma</td><td>FSSGMMRO</td><td></td></tr><tr><td>Fructus Trichosanthis</td><td>중국 장춘 전통 의학 대학의 첫 번째 제휴 병원</td><td>카탈로그 번호</td> <td>없음</td></tr><tr><td>Hirudo</td><td>중국 장춘 전통 의학 대학의 첫 번째 제휴 병원 카탈로그</td><td>번호</td><td></td></tr><tr><td>없음 지능형 비침습적 혈압계&nbsp;</td><td>Beijing Softron Biotechnology Company</td><td>BP-2010A</td><td></td></tr><tr><td>Lonicerae Japonicae Flos</td><td>중국 장춘 중의대학교 제1부속병원</td><td>카탈로그 번호</td><td></td></tr><tr><td>없음 메티오닌</td><td>시그마, 미국</td><td>M9500</td><td></td></tr><tr><td>Radix Angelicae Sinensis</td><td>중국 장춘 중의대학교 제1부속병원</td><td>카탈로그 번호 없음</td><td></td></tr><tr><td>Radix et Rhizoma Glycyrrhizae</td><td>중국 장춘 전통 의학 대학의 첫 번째 부속 병원</td><td>카탈로그 번호</td><td></td>없음</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Nardostachyos</td><td>중국 장춘 전통 의학 대학의 첫 번째 제휴 병원</td><td>카탈로그 번호</td><td></td>없음</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Rhodiolae Crenulatae</td><td>중국 Changchun University of Traditional Chinese Medicine의 첫 번째 제휴 병원</td><td>카탈로그 번호</td><td></td>없음</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae</td><td>중국 Changchun University of Traditional Chinese Medicine의 첫 번째 제휴 병원</td><td>카탈로그 번호</td><td></td>없음</tr><tr><td>Radix Scrophulariae</td><td>중국 Changchun University of Traditional Chinese Medicine의 첫 번째 제휴 병원</td><td>카탈로그 번호 없음</td><td></td></tr><tr><td>Rat Hcy ELISA Kits</td><td>Shanghai Meimian Industrial Company, 중국</td><td>MM-0293R2</td><td></td></tr><tr><td>RIPA 버퍼</td><td>Shanghai Beyotime Biotechnology company</td><td>P0013B</td><td></td></tr></tbody></table>

h형 고혈압을 가진 쥐에서 huotan jiedu tongluo 달인의 항고혈압 효과 및 메커니즘

The Antihypertensive Effects and Mechanisms of Huotan Jiedu Tongluo Decoction in Rats with H-Type Hypertension

혈장 호모시스테인(Hcy) 수치 상승을 특징으로 하는 특정 형태의 고혈압인 H형 고혈압은 전 세계적으로 주요 공중 보건 문제가 되었습니다. 이 연구는 혈관 협착증 치료에 일반적으로 사용되는 매우 효과적인 중국 전통 의학 공식인 Huotan Jiedu Tongluo 달인(HTJDTLD)의 저혈압 효과와 기저 기전을 조사했습니다. 쥐에서 H형 고혈압을 유발하기 위해 메티오닌을 사용하였고, HTJDTLD를 위내로 투여하였다. 그런 다음, 쥐의 꼬리 동맥의 수축기 및 이완기 혈압을 비침습적 쥐 꼬리 압력계로 측정했습니다. 대동맥의 조직학적 평가는 hematoxylin-eosin(HE) 염색에 의해 수행되었습니다. 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA)을 사용하여 Hcy 수준을 측정하고, 정량적 역전사 효소 중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR) 및 웨스턴 블로팅을 사용하여 포도당 조절 단백질 78(GRP78), 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 관련 인자 2(TRAF2), c-Jun N-말단 키나아제(JNK) 및 카스파제-3의 mRNA 및 단백질 수준을 측정했습니다. 그 결과, HTJDTLD는 메티오닌 치료 후 혈압을 유의하게 낮추고, 조직병리학적 병변을 완화하며, Hcy 수치를 감소시키는 것으로 나타났습니다. 또한, HTJDTLD는 주로 소포체(ER) 스트레스 유발 세포사멸 경로에 관여하는 GRP78, JNK, TRAF2 및 caspase 3의 유전자 및 단백질 발현을 유의하게 억제했습니다. 전반적으로, 결과는 HTJDTLD가 H형 고혈압이 있는 쥐에서 효과적인 항고혈압 효과를 나타냈으며, ER 스트레스 유발 세포자멸사 경로 활성화 억제와 관련된 항고혈압 기전을 밝혔다.

표 4 및 표 5에서 보는 바와 같이, 수축기 혈압(SBP)과 이완기 혈압(DBP)은 1주에서 4주 사이에 CON 그룹보다 MET 그룹에서 유의하게 높았다. HTJDTLD 처리 후, 쥐의 SBP와 DBP는 MET 그룹보다 유의하게 낮았다. 특히, HTJDTLD와 EM을 병용하면 HTJDTLD 단독 치료보다 강력한 항고혈압 효과가 나타났다.
HE 염색 및 Masson의 삼색 염색에 따르면, 대동맥 혈관 벽의 자궁 내막은 불완전하고 매끄럽지 않으며 매체가 상당히 두꺼워졌습니다. 평활근 세포의 증식과 비대가 있었고, 배열층의 수가 증가했으며, CON 그룹에 비해 MET 그룹의 섬유가 무질서했습니다. 그러나, 혈관 자궁내막이 더 완전하고 원활하게 회복되었고, 매체 비후화가 현저히 감소했으며, MET + HTJDTLD + EM, MET + EM 및 MET + HTJDTLD 그룹에서 내내 손상이 유의하게 완화되었습니다(그림 1 및 그림 2). 또한, 메티오닌 투여군의 Hcy 농도는 대조군보다 2배 높았다. 그러나 MET + HTJDTLD + EM, MET + EM 및 MET + HTJDTLD 그룹의 Hcy 농도는 MET 그룹보다 유의하게 낮았습니다. 특히 가장 두드러진 감소는 MET + HTJDTLD + EM 그룹에서 발견되었는데, 이는 MET 그룹보다 약 1배 낮았습니다(그림 3). mRNA 및 단백질 발현 결과는 메티오닌 처리 후 GPR78, TRAF2, JNK, p-JNK 및 caspase-3의 발현이 분명히 상향 조절되었음을 보여주었습니다. 그러나 HTJDTLD, EM 및 HTJDTLD와 EM의 조합은 GPR78, TRAF2, JNK 및 caspase-3의 상향 조절을 크게 억제했습니다. 특히, HTJDTLD와 EM의 조합 적용이 가장 유의미한 효과를 보였습니다(그림 4 및 그림 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig01.jpg"> 그림 1: HE 염색. (A) CON 그룹, (B) MET 그룹, (C) MET + HTJDTLD + EM 그룹, (D) MET + EM 그룹 및 (E) MET + HTJDTLD 그룹의 흉부 대동맥 조직 조직학적 변화. 핵은 파란색으로 염색되는 반면, 세포질과 세포외 기질은 다양한 정도의 분홍색 염색을 보입니다(100×). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig02.jpg"> 그림 2: 마손 염색. (A) CON 그룹, (B) MET군, (C) MET + HTJDTLD + EM 그룹, (D) MET + EM 그룹 및 (E) MET + HTJDTLD 그룹. 침착 및 섬유증에 대한 HTJDTLD의 효과를 평가하기 위해 각 그룹의 대동맥 혈관에 대한 Masson 염색을 수행했습니다(100x). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig03v2.jpg"> 그림 3: Hcy의 수준. 각 그룹의 혈청 Hcy 농도는 ELISA에 의해 검출되었습니다. 데이터는 평균 ± SD로 제시되었습니다(n=6, SD는 다음과 같습니다: CON: 236.5 nmol/L, MET: 185 nmol/L, MET + HTJDTLD + EM: 126.8 nmol/L, MET + EM: 124 nmol/L, MET + HTJDTLD: 325 nmol/L). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig04.jpg"> 그림 4: GRP78, TRAF2, JNK 및 caspase-3의 mRNA 발현. MET, MET + EM + HTJDTLD 및 MET + EM으로 처리 한 후 qRT-PCR에 의해 ERS 관련 유전자의 발현을 검출하였다. 데이터는 평균 ± SD로 제시되었다(n = 6, SD: GRP78 [CON: 0.12, MET: 0.13, MET + HTJDTLD + EM: 0.11, MET + EM: 0.17, MET + HTJDTLD: 0.12]; TRAF2 [CON : 0.09, MET : 0.09, MET + HTJDTLD + EM : 0.07, MET + EM : 0.11, MET + HTJDTLD : 0.13]; JNK [CON : 0.99, MET : 0.01, MET + HTJDTLD + EM : 0.03, MET + EM : 0.06, MET + HTJDTLD : 0.07; caspase-8 [CON : 0.06, MET : 0.10, MET + HTJDTLD + EM : 0.01, MET + EM : 0.13, MET + HTJDTLD : 0.03). *는 CON 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타내고, #는 MET 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타내고, Δ는 MET + HTJDTLD 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타내고, ∇ MET + EM 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타냅니다. P &lt; 0.01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig05.jpg"> 그림 5: GRP78, TRAF2, JNK, p-JNK 및 Caspase-3의 단백질 발현. (A) 단백질 샘플은 GRP78, TRAF2, JNK, p-JNK 및 Caspase-3 항체로 웨스턴 블로팅으로 분석되었습니다. GAPDH를 대조군으로 사용하였다. (B) GRP78, RAF2, JNK, p-JNK 및 Caspase-3 단백질의 정량화는 밀도 측정법에 의해 측정되었으며 GAPDH로 정규화되었습니다. 데이터는 평균 ± SD(n = 6)로 표시되었습니다. * 이는 CON 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타냄(p &lt; 0.01). #는 MET 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타내고, Δ는 MET + HTJDTLD 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타내며, ∇는 MET + EM 그룹과 비교하여 유의한 차이를 나타낸다. P &lt; 0.01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>역전사 반응</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>구성 요소</td>
			<td>부피 (mL)</td>
		</tr><tr><td>총 RNA</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td>gDNA 소화기 믹스</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td>SuperMix 플러스</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>RNase-free 물</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td colspan="2">반응 프로그램은 다음과 같았다 : 25 °C, 5 분; 55°C, 15분; 85°C, 5분</td>
		</tr><tr><td>RT-PCR (영문)</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>구성 요소</td>
			<td>부피 (mL)</td>
		</tr><tr><td>템플렛</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td>포워드 프라이머 (10μM)</td>
			<td>0.4</td>
		</tr><tr><td>리버스 프라이머 (10μM)</td>
			<td>0.4</td>
		</tr><tr><td>녹색 qPCR 믹스</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td>뉴클레아제가 없는 물</td>
			<td>7.2</td>
		</tr><tr><td colspan="2">반응 프로그램은 다음과 같았다 : 사전 변성 95 ° C, 5 분; 변성 95 °C, 10 s; 어닐링/확장 60°C, 45초, 총 40사이클.</td>
		</tr></tbody></table>표 1: 역전사 반응 부피.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>프라이머 이름</td>
			<td>시퀀스 (5' - 3')</td>
		</tr><tr><td>GPR78-F 시리즈</td>
			<td>CGTCGTATGTGGCCTTCACT</td>
		</tr><tr><td>GPR78-R (영어)</td>
			<td>ATTCCAAGTGCGTCCGATGA</td>
		</tr><tr><td>트라프2-F</td>
			<td>가아그가그캣트cc타가크</td>
		</tr><tr><td>트라프2-R</td>
			<td>가아그가그캣트cc타가크</td>
		</tr><tr><td>제이엔케이-F</td>
			<td>GTCAGAATCCGAACGAGA</td>
		</tr><tr><td>제이엔케이-R</td>
			<td>GTCTACGCAGGCAATCG</td>
		</tr><tr><td>카스파제-3-F</td>
			<td>GCGGTATTGAGAGACAGTGGAAC</td>
		</tr><tr><td>카스파제-3-R</td>
			<td>GCGGTAGAGTAAGCATACAGGAAGTC</td>
		</tr></tbody></table>표 2: 프라이머 목록.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>10% 분리 겔, 5mL 시스템:</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>구성 요소</td>
			<td>부피 (mL)</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>1.9</td>
		</tr><tr><td>아크릴아마이드 30%</td>
			<td>1.7</td>
		</tr><tr><td>1.5 mol / L 트리스 -HCL (pH 8.8)</td>
			<td>1.3</td>
		</tr><tr><td>10% SDS</td>
			<td>0.05</td>
		</tr><tr><td>10% 과황산암모늄</td>
			<td>0.05</td>
		</tr><tr><td>테메드</td>
			<td>0.002</td>
		</tr><tr><td>5% 농축 겔, 3mL 시스템:</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>구성 요소</td>
			<td>부피 (mL)</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>2.1</td>
		</tr><tr><td>아크릴아마이드 30%</td>
			<td>0.5</td>
		</tr><tr><td>1.0 mol / L 트리스 -HCL (pH 6.8)</td>
			<td>0.38</td>
		</tr><tr><td>10% SDS</td>
			<td>0.03</td>
		</tr><tr><td>10% 과황산암모늄</td>
			<td>0.03</td>
		</tr><tr><td>테메드</td>
			<td>0.003</td>
		</tr></tbody></table>표 3: 분리 및 농축 겔의 조성.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>그룹</td>
			<td>1주일</td>
			<td>2 주</td>
			<td>3 주</td>
			<td>4 주</td>
		</tr><tr><td>전과자</td>
			<td>163.4 ± 6</td>
			<td>150.1 ± 7.0</td>
			<td>134.2 ± 9.9</td>
			<td>158.8 ± 10.2</td>
		</tr><tr><td>만난</td>
			<td>192.1 ± 9.5##</td>
			<td>166.7 ± 12.8#</td>
			<td>177.3 ± 19.7##</td>
			<td>187 ± 23.6##</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD+EM</td>
			<td>165.4 ± 9.2##</td>
			<td>148.9 ± 11.1*</td>
			<td>134.5 ± 12.3**</td>
			<td>159.2 ± 19.6**</td>
		</tr><tr><td>메트+EM</td>
			<td>173 ± 9.1##</td>
			<td>149.9 ± 18.7*</td>
			<td>145 ± 12.5**</td>
			<td>162.4 ± 19.1**</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD</td>
			<td>176.7 ± 8.4##</td>
			<td>154.9 ± 22.8</td>
			<td>168.3 ± 10.2</td>
			<td>172.2 ± 17.4</td>
		</tr></tbody></table>표 4: 수축기 혈압의 변화. 대조군 대비 #p &lt; 0.05 및 ##p &lt; 0.01, *p &lt;0.05 및 **p &lt; 0.01 대 MET 그룹.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>그룹</td>
			<td>1주일</td>
			<td>2 주</td>
			<td>3 주</td>
			<td>4 주</td>
		</tr><tr><td>전과자</td>
			<td>138.4 ± 13.8</td>
			<td>121.2 ± 12.5</td>
			<td>107 ± 19.7</td>
			<td>131.1 ± 16.3</td>
		</tr><tr><td>만난</td>
			<td>147.9 ± 7.7#</td>
			<td>131 ± 11.9</td>
			<td>143.7 ± 19.6##</td>
			<td>146 ± 21.4##</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD+EM</td>
			<td>139.4 ± 10</td>
			<td>123.1 ± 18.5</td>
			<td>117.1 ± 9.6**</td>
			<td>129.2 ± 18.6**</td>
		</tr><tr><td>메트+EM</td>
			<td>140.9 ± 13.4</td>
			<td>119.6 ± 7.8</td>
			<td>123.6 ± 10.8**</td>
			<td>128 ± 25.2**</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD</td>
			<td>140.4 ± 11.3</td>
			<td>129.5 ± 11.1</td>
			<td>138.3 ± 15.1</td>
			<td>132.8 ± 16</td>
		</tr></tbody></table>표 5: 이완기 혈압의 변화.대조군 대비 #p &lt; 0.05 및 ##p &lt; 0.01, **p &lt; 0.01 대 MET 그룹.

여기에서는 H형 고혈압을 유도하기 위한 프로토콜을 제시하고 위내 투여 Huotan Jiedu Tongluo 달인(HTJDTLD)의 항고혈압 효과를 평가합니다. H형 고혈압이 있는 쥐에서 HTJDTLD는 효과적인 항고혈압 효과를 보였는데, 이는 소포체(ER) 스트레스 유발 세포자멸사 경로 활성화 억제와 관련이 있을 수 있습니다.

H형 고혈압을 가진 쥐에서 Huotan Jiedu Tongluo 달인의 항고혈압 효과 및 메커니즘

H-type hypertension, which is a specific form of hypertension characterized by elevated plasma homocysteine (Hcy) levels, has become a major public health ...

H형 고혈압은 인간의 중요한 공중 보건 과제가 되었습니다. 주로 서양 의학 치료에 의존하는데, 이는 슬픈 결과를 초래할 수 있습니다. 본 연구는 H형 고혈압이 있는 쥐를 대상으로 한의학 제제인 Huotan Jiedu Tongluo 달인의 항고혈압 효과와 기전을 조사한다.우리의 연구는 Huotan Jiedu Tongluo 달인이 H 형 고혈압을 가진 쥐에서 항 고혈압 효과가 있음을 나타 냈습니다. 근본적인 메커니즘은 환자에게 효과적인 치료 옵션을 제공하는 ER 스트레스 활성화 유발 세포 사멸을 억제하는 것을 포함할 수 있습니다. 향후 H형 고혈압에 대한 조기진단과 예후를 위한 잠재적 바이오마커를 폭발적으로 발굴하고 새로운 치료약을 개발해 나갈 것입니다.

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