2023년 11월 17일
여기에서는 대형 식물의 유전적 형질전환에 대한 생체 내 연구를 위한 국소 진공 침투를 위한 첫 번째 프로토콜을 제시합니다. 이 방법론을 사용하여 우리는 처음으로 카카오의 식물의 일시적인 변형에서 Agrobacterium을 매개 하는 것을 달성했습니다.
열대 다년생 종과 원예 나무 작물에서 유전자의 생물학적 기능을 연구하기 위해서는 생체 내 유전 방법이 필요합니다. 그러나 이러한 종의 대부분은 모든 세대에서 변형에 소극적입니다. 본 연구의 범위는 대형 식물에 적용할 수 있는 간단하고 효율적인 유전자 형질전환 방법을 개발하는 것이다.
나는 그것들을 설명 할 것이다. 침투하기 어려운 조직을 가진 식물의 아그로박테리아 매개 유전자 변형은 진공 펌프를 사용한 강제 침투에 의해 가능해졌습니다. 그러나 현재 사용 중인 프로토콜은 대형 플랜트를 진공 챔버에 제출하는 물리적, 경제적 제약으로 인해 소규모 플랜트로 제한됩니다.
일반적으로 실험실 데시케이터인 진공 챔버의 크기는 열대 목본 식물의 경우와 같이 데시케이터에 맞지 않는 식물의 진공 침투를 방지합니다. 우리는 열대 목본 식물의 효율적인 국소 진공 침투를 위한 프로토콜을 개발하여 대형 식물 종의 생체 내 유전자 변형 연구를 가능하게 했습니다. 이 프로토콜을 통해 카카오와 아보카도와 같은 원예 나무 작물에서 Agrobacterium 매개 진공 침투에 대한 식물 크기 제한을 극복할 수 있었습니다.
국소 진공 침투에 의한 부착된 잎의 조직 배양이 필요 없는 아그로박테리아 매개 변형은 값비싼 장비를 추가할 필요 없이 동일한 펌프와 진공 용기를 사용할 수 있기 때문에 이미 진공 침투를 사용하고 있는 실험실에서 빠르고 간단하며 비용 효율적인 방식으로 수행할 수 있습니다.
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본 연구는 새로운 국소 진공 침투 프로토콜을 사용하여 크기가 큰 열대 식물의 유전자 형질전환 시 발생하는 어려움을 해결합니다. 이 방법을 통해 Agrobacterium 매개 침투를 통한 카카오 식물의 성공적인 일시적 형질전환을 달성하였습니다.
국소 진공 강제 아그로인필트레이션(agroinfiltration)은 크고 형질전환이 어려운 식물 종에서 신속하고 비용 효율적인 유전자 조작을 가능하게 하여 식물 생명공학 R&D의 주요 장벽을 극복합니다. 본 프로토콜은 기존의 표준 형질전환 워크플로우로는 접근이 불가능했던 작물의 기능 유전체학 및 형질 검증을 위한 툴킷을 확장합니다. 이를 도입함으로써 고부가가치 다년생 및 목본 종의 표적 검증과 형질 발견을 가속화할 수 있으며, 이는 포트폴리오 다각화와 중개 연구를 지원합니다.
본 프로토콜은 크고 형질전환이 어려운 식물에서 직접적인 유전자 기능 연구를 가능하게 함으로써 초기 발견 단계와 중개 연구를 연결하며, 표적 검증부터 형질 개선에 이르는 워크플로우를 지원합니다.