Name: 식물에서 전형적인 Triazole 살충제의 대사 산물의 세포 독성 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-22T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: 학습하세요 식물 배양물에서 생성된 트리아졸 살충제 대사 산물의 세포 독성을 인간 세포주를 이용한 독성학적 검사로 평가하는 통합 평가 방법. 이 프로토콜은 환경 독성 연구에 새로운 접근법을 제공합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>식물에서 Triazole 살충제의 통합 대사 산물 세포 독성 추정

<ol><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake+of+halogenated+organic+compounds+%28HOCs%29+into+peanut+and+corn+during+the+whole+life+cycle+grown+in+an+agricultural+field%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Uptake of halogenated organic compounds (HOCs) into peanut and corn during the whole life cycle grown in an agricultural field.</a> Environ Pollut. 263, 114400(2020).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+metals+in+e-waste+lead+to+serious+health+risk+through+consumption+of+rice+growing+near+an+abandoned+e-waste+recycling+site%3A+Comparisons+with+PBDEs+and+AHFRs%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Trace metals in e-waste lead to serious health risk through consumption of rice growing near an abandoned e-waste recycling site: Comparisons with PBDEs and AHFRs.</a> Environ Pollut. 247, 46-54 (2019).</li>
<li>Liu, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrabromobisphenol-A%2FS+and+nine+novel+analogs+in+biological+samples+from+the+Chinese+Bohai+Sea%3A+Implications+for+trophic+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Tetrabromobisphenol-A/S and nine novel analogs in biological samples from the Chinese Bohai Sea: Implications for trophic transfer.</a> Environ Sci Technol. 50 (8), 4203-4211 (2016).</li>
<li>Awasthi, A. K., Zeng, X., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+pollution+of+electronic+waste+recycling+in+India%3A+A+critical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Environmental pollution of electronic waste recycling in India: A critical review.</a> Environ Pollut. 211, 259-270 (2016).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+accumulation+and+transformation+of+brominated+and+organophosphate+flame+retardants%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Plant accumulation and transformation of brominated and organophosphate flame retardants: A review.</a> Environ Pollut. 288, 117742(2021).</li>
<li>Sandermann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+plant+metabolism+of+xenobiotics%3A+the+%27green+liver%27+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogenetics%22%5BJournal%5D)">Higher plant metabolism of xenobiotics: the 'green liver' concept.</a> Pharmacogenetics. 4, 225-241 (1994).</li>
<li>Zhang, J. J., Yang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+and+detoxification+of+pesticides+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Metabolism and detoxification of pesticides in plants.</a> Sci Total Environ. 790, 148034(2021).</li>
<li>Debenest, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecotoxicity+of+a+brominated+flame+retardant+%28tetrabromobisphenol+A%29+and+its+derivatives+to+aquatic+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Phys+C%22%5BJournal%5D)">Ecotoxicity of a brominated flame retardant (tetrabromobisphenol A) and its derivatives to aquatic organisms.</a> Comp Biochem Phys C. 152 (4), 407-412 (2010).</li>
<li>McCormick, J. M., Van Es, T., Cooper, K. R., White, L. A., Haggblom, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbially+mediated+O-methylation+of+bisphenol+A+results+in+metabolites+with+increased+toxicity+to+the+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Microbially mediated O-methylation of bisphenol A results in metabolites with increased toxicity to the developing zebrafish (Danio rerio) embryo.</a> Environ Sci Technol. 45 (15), 6567-6574 (2011).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+metabolic+pathways+of+2%2C4%2C6-tribromophenol+in+rice+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants.</a> Environ Sci Technol. 53 (13), 7473-7482 (2019).</li>
<li>Hou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylation+of+tetrabromobisphenol+A+in+pumpkin%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Glycosylation of tetrabromobisphenol A in pumpkin.</a> Environ Sci Technol. 53 (15), 8805-8812 (2019).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidating+the+metabolism+of+2%2C4-Dibromophenol+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Elucidating the metabolism of 2,4-Dibromophenol in plants.</a> J Vis Exp. (192), e65089(2023).</li>
<li>Zucco, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Inter-laboratory+study+to+evaluate+the+effects+of+medium+composition+on+the+differentiation+and+barrier+function+of+Caco-2+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Atla-Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">An Inter-laboratory study to evaluate the effects of medium composition on the differentiation and barrier function of Caco-2 cell lines.</a> Atla-Altern Lab Anim. 33, 603-618 (2005).</li>
<li>Eisenbrand, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+in+vitro+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Methods of in vitro toxicology.</a> Food Chem Toxicol. 40, 193-236 (2002).</li>
<li>Sambuy, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caco-2+cell+line+as+a+model+of+the+intestinal+barrier%3A+influence+of+cell+and+culture-related+factors+on+Caco-2+cell+functional+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The Caco-2 cell line as a model of the intestinal barrier: influence of cell and culture-related factors on Caco-2 cell functional characteristics.</a> Cell Biol Toxicol. 21, 1-26 (2005).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+translocation%2C+and+subcellular+distribution+of+three+triazole+pesticides+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Pollut+Res%22%5BJournal%5D)">Uptake, translocation, and subcellular distribution of three triazole pesticides in rice.</a> Environ Sci Pollut Res. 29 (17), 25581-25590 (2022).</li>
<li>Satapute, P., Kamble, M. V., Adhikari, S. S., Jogaiah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+triazole+pesticides+on+tillage+soil+microbial+populations+and+metabolic+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Influence of triazole pesticides on tillage soil microbial populations and metabolic changes.</a> Sci Total Environ. 651, 2334-2344 (2019).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+possible+but+unrecognized+risk+of+acceptable+daily+intake+dose+triazole+pesticides+exposure-bile+acid+disturbance+induced+pharmacokinetic+changes+of+oral+medication%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">A possible but unrecognized risk of acceptable daily intake dose triazole pesticides exposure-bile acid disturbance induced pharmacokinetic changes of oral medication.</a> Chemosphere. 322, 138209(2023).</li>
<li>Louis, K. S., Siegel, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+viability+analysis+using+trypan+blue%3A+manual+and+automated+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods.</a> Methods Mol Biol. 740, 7-12 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,4-디클로로페녹시아세트산</td><td>WAKO</td><td>1 mg/L</td><td></td></tr><tr><td>20% H2O2</td><td>Sinopharm 화학 시약 Co., Ltd.</td><td>10011218-500ML</td><td></td></tr><tr><td>6-벤질아미노퓨린</td><td>WAKO</td><td>0.5 mg/L</td><td></td></tr><tr><td>75% 에탄올</td><td>Sinopharm 화학 시약 Co., Ltd.</td><td>1269101-500 mL</td><td></td></tr><tr><td>96웰 플레이트</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인공 기후 인큐베이터</td><td>Ningbo DongNan Lab Equipment Co., Ltd</td><td>RDN-1000A-4</td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td>STIK</td><td>MJ 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>Caco-2 cells</td><td>Nuoyang Biotechnology Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CCK8 시약</td><td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, China</td><td>G021-1-3</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>Labtrip</td><td>HWJ-3-160</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Diniconazole, 98.7%</td><td>J& K Scientific</td><td>83657-24-3</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 변형 독수리 매체</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>11965-500 mL</td><td></td></tr><tr><td>전자 저울</td><td>Shanghai Precision Instrument Co., Ltd</td><td>FA1004B</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Cellmax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>형광 분광 광도계</td><td>Tecan</td><td>Infinite M200</td><td></td></tr><tr><td>Flusilazole, 98.5%</td><td>J& 케이 사이언티픽</td><td>85509-19-9&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>동결 건조기</td><td>SCIENTZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>고처리량 티슈 그라인더</td><td>SCIENTZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경</td><td>Leica Biosystems</td><td>DMi1</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q 시스템</td><td>Millipore</td><td>MS1922801-4L</td><td></td></tr><tr><td>Murashige & Skoog 매체</td><td>HOPEBIO</td><td>HB8469-7</td><td></td></tr><tr><td>질소 분사 농축기</td><td>AOSHENG</td><td>MD200-2</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>P1022-500 mL</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신 액체</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>P1400-100 mL</td><td></td></tr><tr><td>프로피코나졸, 100%</td><td>J& 케이 사이언티픽</td><td>60207-90-1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>연구 플러스</td><td>Eppendorf</td><td>10-1000 &mu; L</td> 새끼 손가락 당근 (Daucus carota var. sativus)의 씨앗<td></td></tr><tr><td></td><td>Shouguang Seed Industry Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>쉐이킹 인큐베이터</td><td>상하이 bluepard 악기 Co., Ltd.</td><td>THZ-98AB</td><td></td></tr><tr><td>테부코나졸, 100%</td><td>J& K Scientific</td><td>107534-96-3</td><td></td></tr><tr><td>트립신-EDTA 솔루션</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>T1300-100 mL</td><td></td></tr><tr><td>초음파 기계</td><td>ZKI</td><td>UC-6</td><td></td></tr><tr><td>UV 살균 슈퍼 클린 벤치</td><td>AIRTECH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex 기기</td><td>Wuxi Laipu Instrument Equipment Co., Ltd</td><td>BV-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

식물에서 전형적인 triazole 살충제의 대사 산물의 세포 독성 평가

Assessing Cytotoxicity of Metabolites of Typical Triazole Pesticides in Plants

그림 1 은 당근 캘러스에서 살충제 대사 산물의 생성, 추출 및 세포 독성 평가를 위해 제안된 방법의 개략도를 나타냅니다. 그림 2에서 테스트된 살충제의 흡수 및 대사 역학 곡선을 보면 배양 배지의 살충제 농도가 기하급수적으로 감소한 반면 당근 굳은살이의 농도는 증가하기 시작하여 4시간 또는 8시간에 최고조에 달한 후 점진적으로 감소했음을 알 수 있습니다. 이러한 결과는 살충제가 당근 캘러스에 의해 빠르게 흡수되고 변형될 수 있음을 시사합니다. 굳은살 배양 시스템에서 살충제의 시간적 회수는 그림 3에 나와 있습니다. 72시간의 배양 후 살충제의 8.3%-11.0%만이 남았는데, 이는 대부분의 살충제가 대사 산물로 변형되었음을 나타냅니다.
테스트된 살충제의 흡수 및 대사 역학(그림 2<...

식물에서 전형적인 Triazole 살충제의 대사 산물의 세포 독성 평가

Various organic pollutants have been released into the environment because of anthropogenic activities. These pollutants can be taken up by crop plants, ...

assessing-cytotoxicity-metabolites-typical-triazole-pesticides

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연구

JoVE Journal

Environment

환경

이 원고는 쌍떡잎 잡초에서 절제된 잎으로 제초제 대사율을 효과적으로 정량화하여 변동성을 줄이고 전체 식물 분석에서 일반적으로 관찰되는 제초제 흡수 또는 전좌의 가능한 교란 효과를 제거하는 방법을 설명합니다.

절제 잎 분석과 쌍자엽 잡초의 제초제 대사의 요금을 측정

프로토콜 개발 larvicides, adulticides 및 endectocides의 새로운 클래스에 대 한 미 숙 하 고 성인 모기에 화학 물질의 독성 평가 대 한 설명 합니다. 프로토콜의 단일-지점 복용량 및 복용량 응답 분석 결과 접촉에 독성을 결정 하기 위해 또는 섭취를 통해 후속 평가에서 여러 화학의 높은 처리량 테스트...

모기에 소설 Insecticidal 화학 물질의 독성을 테스트 하기 위한 프로토콜

이 연구는 살충제 와 같은 전체 식물에 의해 채택될 수 있는 외부 화합물의 대사를 연구하는데 사용될 수 있는 차(동백나무)에서 유래된 세포 현탁액 배양을 확립하기 위한 프로토콜을 제시한다.

차에서 파생된 새로 설립된 세포 현탁액 배양에서 6개의 전신 살충제의 물질대사에 관한 연구(동백나무시넨시스 L.) 잎

배양 된 세포에 화합물 세트의 잠재적 인 세포 독성을 평가하는 것이 종종 필요합니다. 여기서, 우리는 96 웰 형식으로 독성 화합물을 안정적으로 선별하는 전략을 설명합니다.

낮은 중간 처리량에서 배양 포유류 세포에서 세포 성장 및 생존에 영향을 미치는 화합물을 식별하는 전략

이 프로토콜은 세포 생존 가능성을 효율적으로 결정하기 위한 신속하고 높은 처리량, 신뢰할 수 있고 저렴하며 편견없는 분석서를 설명합니다. 이 분석은 세포의 미토콘드리아가 손상되어 다른 분석과 방해가 되는 경우에 특히 유용합니다. 분석은 두 개의 핵 염료로 염색 된 세포의 자동 계수를 사용합니다 - Hoechst 33342 및 프로피듐 요오드.

미토칸 세포 독성의 정확한 측정을 위한 자동화된 차동 핵 염색 분석

여기에서는 이전에 합성 된 스피로 사이클릭 옥심을 테스트하기 위해 3- (4', 5'- 디메틸 티아 졸 -2'- 일) -2,5- 디 페닐 테트라 졸륨 브로마이드 (MTT)를 사용하는 생물학적 분석에 대해 설명합니다.

기능화된 스피로사이클릭 헤테로사이클 합성 및 세포독성 분석

이 프로토콜은 96웰 플레이트에서 제브라피쉬 배아(ZEM2S) 및 간(ZFL) 세포주의 세포독성 평가에 적합한 일반적으로 사용되는 세포독성 분석(Alamar Blue[AB], CFDA-AM, Neutral Red 및 MTT 분석)을 제시합니다.

Zebrafish 세포주를 이용한 세포독성 분석

본 프로토콜은 식물에서 2,4-디브로모페놀 대사산물을 식별하기 위한 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다.

식물에서 2,4-dibromophenol의 대사 해명

티오펜설폰아미드 화합물은 Vibrio quorum sensing regulator LuxR/HapR의 강력하고 특이적인 억제제로서 생체 내 활성을 차단하여 독성, 운동성 및 생물막에 대한 유전자의 전사를 방지합니다. 이 프로토콜은 이러한 화합물을 합성하고, 실리코로 모델링하고, LuxR/HapR에 대한 활성을 위해 생체 내에서 분석하는 방법을 자세히 설명합니다.

Vibrio Quorum Sensing Inhibitors의 합성 및 분석

이 프로토콜은 박테리아 활성 모델링과 조합적 상호작용 분석법을 사용하여 식물화학물질이 전통적 살균제의 살균 효과를 어떻게 증진할 수 있는지 체계적으로 평가하는 틀을 제공하며, 이는 미생물 방제를 개선하고 전체 살균제 사용을 줄이는 시너지 혼합물을 식별하는 것을 목표로 합니다.

시험관 내 식물유래 분자가 기존 살생물에 미치는 증강 효과 평가

학습하세요 식물 배양물에서 생성된 트리아졸 살충제 대사 산물의 세포 독성을 인간 세포주를 이용한 독성학적 검사로 평가하는 통합 평가 방법. 이 프로토콜은 환경 독성 연구에 새로운 접근법을 제공합니다.

식물에서 전형적인 Triazole 살충제의 대사 산물의 세포 독성 평가

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