Name: 다이어트 유발 비만 당뇨병 마우스의 십이지장-제주날 우회 수술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: 학습하세요 십이지장-제주날 우회 수술을 이용하여 비만 당뇨병 마우스의 포도당 대사와 인슐린 저항성을 개선하는 방법을. 이 기술은 대사 질환 연구에 활용됩니다.

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아래에 설명된 모든 프로토콜 단계는 승인 번호 2020112501에 따라 남부 극장 사령부 종합병원 동물 보호 및 사용 위원회의 지침을 따릅니다.
1. 일반적인 수술 전 준비
참고: 6주 된 수컷 C57BL/6 마우스 30마리를 구입했습니다. 마우스는 12시간의 밝음/어두운 주기에 따라 SPF(Specific Pathogen-Free) 실험실에 수용되었습니다. 온도, 22 ± 2 °C; 그리고 습도, 55-65%. 생쥐에게 물을 무료로 제공하고 6주 동안 60% kcal의 지방 식단을 먹이어 비만을 유도했습니다. 당뇨병을 유발하기 위해 40mg/kg의 스트렙토조토신을 복강내 주사하여 5일 동안 투여하였다17. 30 마리의 마우스 중 22 마리의 마우스는 300 mg / dL&gt; 무작위 혈당을 선별하고 DJB (n = 15) 및 가짜 수술 (n = 7) 그룹에 무작위로 할당했습니다. 8마리의 쥐는 표준 이하의 혈당으로 인해 실험에서 제외되었습니다.
<ol><li>수술 전에 8시간 동안 쥐를 단식시킵니다. 수술 2시간 전에 물을 빼내십시오.</li>
	<li>1% 펜토바르비탈 나트륨 용액(6mL/kg)과 부프레노르핀(1mg/kg)을 복강 내로 투여합니다. 집게로 쥐의 발가락이나 꼬리를 만지고 쥐가 뚜렷한 경련이나 떨림을 보이지 않는지 확인하십시오. 적절한 마취 하에 쥐는 산소 보충 없이 자유롭게 숨을 쉴 수 있습니다.</li>
	<li>생쥐를 멸균판의 누운 자세에 놓고 실체현미경 아래에 놓습니다. 눈에 눈 연고를 바릅니다. 전기 담요를 사용하여 절차 내내 쥐를 따뜻하게 유지하십시오. 수술 가운, 멸균 장갑 및 고압멸균 기구를 포함한 멸균 절차를 사용하십시오.</li>
	<li>가짜 대조군 마우스의 경우 유문 아래 1cm의 십이지장과 Treitz 아래 5cm의 제주눔에 각각 두 개의 절개를 한 다음 절개 부위를 봉합합니다.</li>
</ol>2. 십이지장 jejunal bypass: 수술 절차
<ol><li>시포이드의 제모 페이스트를 복부에 바르면 이 부위의 털을 제거합니다. 크림을 닦아내고 피부가 깨끗한지 확인하십시오. 요오드와 알코올 용액을 번갈아 가며 문질러 해당 부위를 세 번 문지릅니다.</li>
	<li>멸균 드레이프로 마우스를 덮고 수술 부위가 노출된 상태로 두고 시포이드에서 복부까지 2cm를 절개합니다.</li>
	<li>복부 견인기를 사용하여 복강을 노출시킵니다. 젖은 면봉으로 복부 지방을 밀어내고 간을 두부 쪽으로 이동시켜 위와 장이 충분히 노출되도록 합니다.</li>
	<li>위와 유문은 간 아래에 있으며 Treitz의 인대는 원위 십이지장에 있습니다. Treitz 인대에서 5cm 원위인 jejunum을 6-0 실크 봉합사로 이중 결찰합니다(그림 1A). 두 결찰의 중간 지점에서 jejunum을 자르고 10-0 실크 봉합사로 jejunal 그루터기를 봉합합니다(그림 1B). 참고: 장간막 혈관을 꼬지 마십시오.</li>
	<li>근위 jejunal 절개 부위를 장을 따라 jejunum까지 5cm 당겨 jejunal-jejunal 문합을 만듭니다. 두 장을 수평으로 정렬한 다음 10-0 실크 봉합사를 사용하여 측면 문합을 만듭니다(그림 1C). 참고: 수술 중에는 수분 손실을 줄이기 위해 장을 식염수로 촉촉하게 유지하십시오. 이렇게 하면 장이 말리는 것을 방지하고 봉합을 더 쉽게 할 수 있습니다.</li>
	<li>장의 양쪽 끝을 고정하고 절개 부위를 동일한 길이로 자릅니다(그림 1D). 후장 벽의 두 번째 층을 전체 두께의 연속 봉합사로 봉합합니다. 알림: 절개 길이는 약 0.5-0.6cm이고 바늘 거리는 ~0.5mm입니다.</li>
	<li>장의 양쪽 끝을 고정하고 장의 전벽을 봉합합니다. 전벽의 첫 번째 층을 간단한 연속 봉합사로 봉합하고 두 번째 층을 수평 내반 봉합사로 봉합합니다(그림 1E-F). 알림: 복강의 감염을 방지하기 위해 면봉으로 장 내용물을 면봉으로 닦습니다.</li>
	<li>유문 아래 1cm 아래의 십이지장으로 원위 jejunal 절개 부위를 당겨 십이지장-jejunal 문합을 만듭니다(그림 1G). 2.6-2.7 단계와 동일한 방법을 사용하여 봉합합니다 (그림 1H-K). 알림: 문합부 누출을 줄이기 위해 문합부 모서리의 봉합사를 확인하십시오.</li>
	<li>마이크로 집게로 장을 결찰하고 마이크로 가위로 장을 자릅니다. 십이지장-제주날 문합체의 말단 끝에서 2mm 떨어진 6-0 실크 봉합사로 십이지장을 이중 결찰합니다. 마이크로 가위로 중간 지점을 자르고 10-0 실크 봉합사로 그루터기를 봉합합니다(그림 1L). 참고: 위십이지장 혈관은 췌장 머리에 수직으로 분기되고 유문에 인접해 있어 횡면의 혈관을 주의 깊게 탐색해야 합니다. 총담관과 십이지장이 합류하는 지점에 위치하여 췌장이나 총담관을 손상시키지 않도록 주의했습니다.</li>
	<li>30°C 식염수로 복강을 헹굽니다. 장을 복강으로 되돌려 놓습니다. 6-0 실크로 근육과 피부를 따로 봉합합니다. 그런 다음 iodophor로 피부를 소독하십시오.</li>
	<li>수술 후에는 탈수를 방지하기 위해 30°C의 식염수(30mL/kg)를 뒤쪽에 피하로 주입합니다. 감염을 예방하기 위해 페니실린(10mg/kg)을 근육 주사합니다.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig01.jpg"> 그림 1: 십이지장-제정 우회 절차. (A) Treitz 인대에서 5cm 떨어진 jejunum의 위치. (B) 6-0 실크로 jejunum을 이중으로 결찰하고 합자의 중앙을 자릅니다. (C) Jejunal-jejunal 문합술. (D) 0.5-0.6cm를 절개하고 후벽을 봉합합니다. (E-F) 완전한 Jejunal-jejunal 문합. (G) 유문에서 1cm 아래 십이지장까지 원위 jejunal을 당깁니다. (H) 십이지장-제정골 문합. (I) 0.5-0.6cm 절개로 십이지장-제정골 문합을 절단하고 간단한 연속 봉합사로 후벽을 봉합합니다. (제이케이) 완전한 십이지장-제정골 문합술. (L) 원위부에서 십이지장-제주날 문합까지 2mm에서 십이지장을 6-0 실크로 이중 결찰하고 인자의 중앙을 절단합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
3. 일반적인 수술 후 관리
<ol><li>수술 후에는 저체온증을 방지하기 위해 생쥐를 전기 담요 위에 올려 놓습니다. 쥐가 완전히 깨어날 때까지 자유롭게 기어 다니다가 케이지로 돌아가도록 하십시오.</li>
	<li>수술 후 날에는 음식과 물을 제한하고 생쥐 뒤쪽에 식염수 2mL를 피하로 주사합니다. 수술 후 첫 날에는 10% 포도당 10mL와 기능성 음료(1:1 비율)를 음식 없이 투여하고 식염수 1mL를 피하로 주사합니다.</li>
	<li>수술 후 두 번째 및 세 번째 날에는 10% 포도당 20mL와 기능성 음료를 혼합하여 쥐에게 먹입니다. 4일째 되는 날에는 생쥐에게 순수한 물과 고지방 식단을 먹이십시오. 과도기 수유는 수술 후 회복 상태에 따라 용액, 반액체 또는 고체 음식의 순서로 수행해야 합니다.</li>
	<li>수술 후 진통제: 1일째부터 3일까지 12시간마다 부프레노르핀(0.1mg/kg)을 주사한 후 5일째까지 하루에 한 번 주사합니다.</li>
	<li>수술 후 쥐의 섭식 상태, 활동, 대변 및 상처 치유를 관찰하십시오.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig02.jpg"> 그림 2: DJB 수술 다이어그램. (A) 십이지장-정장 문합술. (B) Jejunal-jejunal 문합. (C) 담췌장사지. (D) 소화사지. (E) 일반 사지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig03.jpg"> 그림 3: DJB 수술의 해부학. (A) 십이지장-제주날 문합. (B) Jejunal-jejunal 문합. (C) 담췌장사지. (D) 소화사지. (E) 일반 사지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
4. 수술 후 대사 매개변수 평가
<ol><li>체중 측정<ol><li>측정하기 전에 8시간 동안 마우스를 빠르게 만듭니다. 8주 동안 매주 수술 전후 월요일에 쥐의 무게를 잰다.</li>
	</ol></li>
	<li>음식 섭취량 측정<ol><li>각 케이지에 한 마리의 쥐를 수용합니다. 24시간 전후에 각 케이지에 있는 고형 식품의 양을 측정합니다. 두 값의 차이는 일일 음식 섭취량을 나타냅니다.</li>
	</ol></li>
	<li>무작위 혈당 측정<ol><li>측정하는 매주 월요일 오전 8:00에 쥐 꼬리 끝에서 혈액 한 방울을 채취하여 혈당계에 삽입된 포도당 스트립에 적용합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>경구 포도당 내성 검사<ol><li>DJB 수술 8주 후, 경구 포도당 내성 테스트 전에 8시간 동안 마우스를 단식시킵니다. 쥐 꼬리 끝에서 혈액 한 방울을 채취하여 혈당계에 삽입된 포도당 스트립에 놓습니다. 20% D-포도당(2g/kg)을 경구 투여합니다. 혈당 측정 후 0, 15, 30, 60, 90, 120, 150 및 180 분에서 혈당 수치를 측정합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

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<li>Barataud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+role+of+dietary+protein+sensing+in+the+metabolic+benefits+of+duodenal-jejunal+bypass+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Absence of role of dietary protein sensing in the metabolic benefits of duodenal-jejunal bypass in the mouse.</a> Sci Rep. 7, 44856(2017).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>복부 견인</td>기 <td>F.S.T</td><td>17000-03</td><td>Colibri 견인기 -3cm, 견인 범위 1.5cm/3cm 길이</td></tr><tr><td>1% 나트륨 펜토바르비탈 용액</td><td>광저우 화학 시약 공장</td><td>/</td><td>&nbsp; 500mg의 펜토바르비탈 나트륨 분말을 생리식염수 50ml에 용해시켜 1% 펜토바르비탈 나트륨 용액을 얻었다.</td></tr><tr><td>주입용 벤질페니실린 나트륨</td><td>North China Pharmaceutical Company Ltd.</td><td>F2062121</td><td>페니실린</td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>광저우 화학 시약 공장</td><td>/</td><td>진통제</td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>/</td><td>진통제</td></tr><tr><td>구연산-구연산나트륨 완충액</td><td>LEAGENE</td><td>R00522</td><td>완충</td></tr>액 <tr><td>면봉</td><td>HaoZheng Medical</td><td>60220610</td><td>면봉</td></tr><tr><td>탈모 페이스트</td><td>Veet</td><td>AAPR-S222</td><td>제모 크림</td></tr><tr><td>귀표</td><td>ZEYA</td><td>SUS304</td><td>귀 표시</td></tr><tr><td>전기 담요</td><td>ZOSEN</td><td>ZS-CWDRT</td><td>열 패드</td></tr><tr><td>전자 저울</td><td>WETTLER TOLEDO</td><td>20060902-6</td><td>체중 측정</td></tr><tr><td>경장 영양 분말</td><td>Abbott Laboratories</td> <td>/</td> <td>영양 분말</td></tr><tr><td>눈 연고</td><td>Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>/</td><td>Protect the eyes</td></tr><tr><td>혈당을 평가하는 혈당계</td><td>Roche</td><td>6993788001</td><td></td></tr><tr><td>Graphpad Prism 버전 9.4.1</td><td>GraphPad 소프트웨어</td><td>버전 9.4.1</td><td>통계 분석용 소프트웨어</td></tr><tr><td>고지방 다이어트(고지방[60FDC] 정제 설치류 다이어트)</td><td>Dyets</td><td></td><td>112252 60kcal% 고지방 다이어트</td></tr><tr><td>마이크로 집게</td><td>Jinzhong Medical</td><td>18-1140</td><td>마이크로 집게</td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>Jinzhong Medical</td><td>EMT-160-Z</td><td>바늘 홀더</td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>Jinzhong Medical</td><td>YBC010</td><td>마이크로 가위</td></tr><tr><td>현미경 카메라</td><td>LAPSUN</td><td>E 2000</td><td>비디오</td></tr><tr><td>안과 가위</td><td>Jinzhong Medical</td><td>Y00030</td><td>수술 용 가위</td></tr><tr><td>펜토바르비탈</td><td>광저우 화학 시약 공장</td><td>/</td><td>마취성</td></tr><tr><td>염화나트륨 주입</td><td>Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>B21L0301</td><td>NaCl 0.9%</td></tr> <tr><td>실체 현미경</td><td>ZEISS</td><td>Stemi 305</td><td>양안 실체 현미경</td></tr><tr><td>Streptozotocin</td><td>Sigma</td><td>S110910-1g</td><td>STZ</td></tr><tr><td>봉합 라인</td><td>LINGQIAO SUTURE</td><td>ZS-LQPMRZ5/ 0</td><td>프롤렌 6/0, 프롤렌 10/0</td></tr><tr><td>조직 집게</td><td>Jinzhong Medical</td><td>H1701</td><td>수술 겸</td></tr></tbody></table>자

다이어트 유발 비만 당뇨병 마우스의 십이지장-제주날 우회 수술

Duodenal-Jejunal Bypass Surgery in Diet-Induced Obese Diabetic Mice

일반 조건 DJB 시술의 평균 수술 시간은 84.5분± 2.6분이었다. 15마리의 생쥐가 DJB 수술을 받았고, 9마리의 생쥐가 생존했다. 표 1에서 보는 바와 같이 대부분의 사망은 수술 중 또는 수술 후 7일 이내에 발생했다. 수술 후 사망 원인은 수술 후 1일째 출혈(n=2), 수술 후 4일째 문합 누출(n=1), 수술 후 7일째 문합 폐색(n=2), 수술 3주 후 원인 불명(n=1)이었다.
이 실험에 앞서 8주 동안 수술을 단순화하기 위한 사전 실험으로 매주 10마리의 마우스를 대상으로 DJB 수술을 시행했습니다. 그림 4에서 볼 수 있듯이 사전 실험 동안 쥐의 주간 생존율 추세를 얻었습니다. 생존율이 점진적으로 개선되는 것을 관찰했는데, 이는 DJB 기술을 습득하기 위해 집중적인 수술 훈련이 필요하다는 것을 나타냅니다.
<p class="jove_...

The prevalence of obesity and type 2 diabetes is a serious global health concern. Obesity is a major pathogenic factor in type 2 diabetes, cardiovascular ...

duodenal-jejunal-bypass-surgery-in-diet-induced-obese-diabetic-mice

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

위장 연결 쥐 모델을 이용하여 많은 연구가 최근 Roux-EN-Y 위장 작업의 기본 생리 메커니즘을 밝히기 위해 실시되었습니다. 이 문서는 입증이 실험 도구의 장점과 한계를 이해하기 위해 우리의 출판 위장 바이패스 쥐 모델의 기술적 및 실험적 세부 사항을 논의하는 것을 목표로하고있다.

쥐에서 Roux-EN-Y 위장 바이패스 수술

이 비디오는 비만 수술 - Roux-en-Y 절차에 대해 설명합니다. 이것은 장의 중간 부분인 제주눔(jejunum)을 잘라 두 개의 장 팔다리를 생성하는 것을 포함한다. 담도사지(biliary limb)는 기존 장 루프에 부착되고 소화 사지(alimentary limb)는 위에 부착되어 위 우회를 만듭니다. 여기에 생성된 위 우회로는 영양소 흡수를 줄이고 체중을 효율적으로 줄이는 데 도움이 됩니다.

Roux-en-Y 위 우회 시술: 쥐 모델에서 위 절제술을 위한 비만 수술 절차

비만 수술은 체중을 줄이고 병적 비만과 자주 관련된 치명적인 대사 합병증(당뇨병, 비만, 이상지질혈증)을 줄이는 가장 효율적인 방법입니다. 비만 수술의 마우스 모델은 당뇨병, 고혈압 및 이상지질혈증에 대한 이러한 수술의 유익한 효과 뒤에 있는 분자 메커니즘을 해독하기 위한 고유한 자산입니다.

소매 절제술의 기술 및 쥐에서 Roux-EN-Y 위장 바이 패스를 수정

이 프로토콜은 murine islet isolation과 decellularized scaffold상의 seeding을 증명합니다. Scaffold-supported 랑게질을 streptozotocin (STZ) 유도 당뇨병 생쥐의 부고환 지방 패드에 이식 하였다. 아일 레트는 이식 부위에서 생존하고 고혈당 상태를 역전시켰다.

당뇨병 쥐의 부고환 지방 세포에 이식 된 지지체 지지대 지지대

다음에서는 쥐에 수직 소매 위절제술의 성능을 설명합니다. 복 부의 약 70%의 제거를 포함 하는 체중 감소 수술의 유형입니다.

수직 소매 위절제술의 Murine 모델

이 프로토콜은 쥐에 한 문 합 위 우회 (OAGB)의 성능입니다. 연산자는 길고 관 붙인 위 주머니 뒤에 손으로 수 놓은 문 합을 수행 합니다. 이 모델에 대 한 연산자 재현 biliopancreatic 인간;에 일반적인 다리 사이 동일한 비율 따라서, biliopancreatic 사지 35 cm를 측정 한다.

쥐에서 한 문 합 위 우회 (OAGB)

당뇨병과 비만의 보급은 전 세계적으로 지속적으로 증가하고 있습니다. 당뇨병, 비만 및 그들의 관련된 사망 및 공동 병위 사이 기계장치는 추가 조사될 필요가 있습니다. 여기서, 우리는 비만 수술의 단순한 전임상 모델로 동물에 있는 소매 위절제술 (SG)를 위한 프로토콜을 제시합니다.

외과 클립을 사용하여 마우스에 소매 위절제술

Roux-en-Y 위 우회 (RYGB)는 비만과 당뇨병을 치료하기 위해 수행됩니다. 그러나, RYGB의 효능의 기본 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다, 연구는 동물 모델에서 높은 사망률로 이어지는 기술적 인 어려움에 의해 제한됩니다. 이 문서에서는 성공률이 높은 쥐에서 RYGB를 수행하는 방법에 대한 지침을 제공합니다.

선형 스테이플러를 사용하여 쥐의 Roux-en-Y 위 우회에 대한 프로토콜

단일 문합 십이지장-회장 우회술(SADI-S)은 중요한 대사 효과가 있는 새로운 비만 절차입니다. 이 기사에서는 마우스에서 SADI-S의 신뢰할 수 있고 재현 가능한 모델을 제시합니다.

생쥐의 단일 문합 십이지장-회장 우회술(Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice)

비 침습적으로 위 비우는의 결정...

를 사용하여 비 비만 당뇨병 마우스의 위 비우는의 평가 [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoic 산성 호흡 시험

학습하세요 십이지장-제주날 우회 수술을 이용하여 비만 당뇨병 마우스의 포도당 대사와 인슐린 저항성을 개선하는 방법을. 이 기술은 대사 질환 연구에 활용됩니다.

다이어트 유발 비만 당뇨병 마우스의 십이지장-제주날 우회 수술

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