Name: 폐 감염성 질환에 대한 미생물 신속 현장 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 3 min 22 s
Description: 학습하세요 M-ROSE 워크플로우를 통해 폐 감염성 질환의 신속한 현장 평가 방법을 익히세요. 이 기법은 병원체 식별과 적절한 항생제 사용을 지원하여 임상 의사결정을 개선합니다.

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충칭 과학 연구 기관의 성과 인센티브 및 지도 프로젝트(jxyn-2021-1-15 및 jxyn-2021-2-6)의 재정 지원에 감사드립니다.

임상시험은 Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine 승인 위원회(No. 2022-ky-31)의 승인을 받았습니다. 전형적인 사례는 폐렴 진단을 받은 환자와 관련이 있으며, 환자로부터 정보에 입각한 동의를 얻었습니다.
1. ROSE의 장비 및 재료 요구 사항
<ol><li>장비: 이 프로토콜에 사용된 장비에 대한 재료 표 파일을 참조하십시오. 참고: 전용 세포학 현미경 및 그래픽 이미징 시스템을 반드시 활용해야 합니다(그림 1A).</li>
	<li>재료 준비( 재료 표 참조).<ol><li>멸균 세포 배양 슬라이드(강력한 세포 접착력), 흡수성 종이, 분말이 없는 라텍스 장갑, 일회용 2.5-5mL 주사기 바늘을 준비하고 Diff Quik(DQ) 염색 용액 전체 세트를 취급이 용이하도록 밀봉된 뚜껑이 있는 유리 염색 용기에 넣습니다(그림 1).</li>
	</ol></li>
</ol>2. M-ROSE 워크플로우
<ol><li>세포학적 슬라이드의 준비 참고: 슬라이드를 준비하는 방법에는 여러 가지가 있으며 다음은 일반적으로 사용되는 몇 가지 준비 방법입니다.<ol><li>롤 슬라이드 알림: 이 과정에서 조직 샘플의 손실을 최소화하십시오.<ol><li>2.5-5mL 용량의 일회용 주사 바늘을 사용하여 조직 입자를 추출합니다(그림 2A).</li>
			<li>멸균 세포학 슬라이드에서 염색된 말단(강한 세포 부착을 보이는 말단)의 1/3 부분(강한 세포 부착을 보이는 말단)의 안쪽에서 바깥쪽으로 직경이 약 1cm이고 적당한 두께의 원형 영역을 펼칩니다.</li>
		</ol></li>
		<li>브러쉬 슬라이드 알림: 이 방법은 기존의 세포 브러시, 오염 방지 세포 브러시 또는 초미세 세포 브러시를 사용하여 얻은 검체와 객담 및 점성이 있는 체액과 같은 반액체 검체에 적용할 수 있습니다.<ol><li>칫솔모를 펴서 멸균 세포학적 유리 슬라이드의 원위 3분의 1(슬라이드는 세포 접착력이 강함)에 적용하여 적당한 두께의 약 2cm x 1cm의 직사각형 영역을 얻습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>스프레이 슬라이드<ol><li>강력한 세포 접착력을 가진 멸균 세포학 슬라이드의 염색된 끝 부분의 1/3에 천자 바늘을 배치합니다.</li>
			<li>피어싱 바늘 끝에 공기압을 가하고 안쪽에서 바깥쪽으로 삽입하여 직경 약 1cm의 중간 두께의 원형 영역을 형성합니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>세포학적 슬라이드 염색 참고: 세계보건기구(WHO)는 Diff의 염료5를 사용하여 ROSE 세포학적 슬라이드를 빠르게 염색할 것을 권장합니다. Diff 염료는 재사용 할 수 있지만 여러 번 반복 할 수는 없습니다. 침전물이 있으면 사용 후 걸러내야 합니다. 너무 깊게 염색하면 메탄올 또는 알코올에 의해 적절하게 탈색될 수 있으며 더 이상 염색하지 않는 것이 좋습니다. 염색이 너무 깊거나 너무 얕으면 염색 시간 또는 작동 액체 농도를 조정해야 합니다. pH 값은 염색에 일정한 영향을 미치며 슬라이드는 깨끗하고 산 및 알칼리 오염이 없어야 합니다. Diff A 용액과 Diff B 용액은 모두 휘발성이므로 사용 후에는 밀봉하여 보관해야 합니다.<ol><li>슬라이드를 Diff A 용액에 10-30초 동안 담근 다음(그림 2B) PBS 염료 수조에서 헹구어 과도한 Diff A 용액을 제거하고 남아 있는 완충액을 부드럽게 털어냅니다(그림 2C).</li>
		<li>다음으로, 슬라이드를 Diff B 용액에 20-40초 동안 담급니다(그림 2E).</li>
		<li>마지막으로 물 염색 탱크(그림 2F)에서 슬라이드를 청소하고 슬라이드의 잔류액을 흡수지(그림 2D)로 닦아내고 닦은 다음 염색을 마칩니다. 참고: M-ROZ는 병원성 미생물을 직접 시각화하고 호흡기 검체 품질 평가를 용이하게 하여 감염과 비감염, 감염 및 오염을 구별할 수 있도록 하며, 이는 감염 중증도 및 예후 평가에 지침이 되는 중요성을 갖습니다. 토론 섹션에서는 실험 절차를 포함하지 않으므로 이 측면을 다룰 것입니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

M-ROSE를 이용한 폐 감염 치료 강화

<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+value+of+endoscopic+ultrasound-guided+fine+needle+aspiration+with+rapid+on-site+evaluation+performed+by+endoscopists+in+solid+pancreatic+lesions%3A+A+prospective%2C+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic value of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration with rapid on-site evaluation performed by endoscopists in solid pancreatic lesions: A prospective, randomized controlled trial.</a> J Gastroenterol Hepatol. 37 (10), 1975-1982 (2022).</li>
<li>Bruno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+cost+effectiveness+of+rapid+on+site+examination+%28ROSE%29+in+management+of+patients+with+mediastinal+lymphadenopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficacy and cost effectiveness of rapid on site examination (ROSE) in management of patients with mediastinal lymphadenopathies.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17 (11), 1517-1522 (2013).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+rapid+on-site+evaluation%3A+a+better+method+for+Mucoid+Pseudomonas+Aeruginosa+diagnosis+in+bronchiectasic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Microbiology rapid on-site evaluation: a better method for Mucoid Pseudomonas Aeruginosa diagnosis in bronchiectasic patients.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (5), 1738-1742 (2022).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbiological+rapid+on-site+evaluation+in+respiratory+intensive+care+units%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Application of microbiological rapid on-site evaluation in respiratory intensive care units: a retrospective study.</a> Ann Transl Med. 10 (1), 7(2022).</li>
<li>Yan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+value+of+microbiology+rapid+on-site+evaluation+of+sepsis+caused+by+pulmonary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">The value of microbiology rapid on-site evaluation of sepsis caused by pulmonary infection.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 27 (12), 5862-5868 (2023).</li>
<li>Muri, R., Trippel, M., Borner, U., Weidner, S., Trepp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+rapid+on-site+evaluation+on+the+quality+and+diagnostic+value+of+thyroid+nodule+fine-needle+aspirations%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">The impact of rapid on-site evaluation on the quality and diagnostic value of thyroid nodule fine-needle aspirations.</a> Thyroid. 32 (6), 667-674 (2022).</li>
<li>Wang, Z., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+rapid+on-site+evaluation+in+contemporary+pediatric+interventional+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Practical+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Application of rapid on-site evaluation in contemporary pediatric interventional respiratory diseases.</a> Chinese Journal of Practical Pediatrics. 12, 470-475 (2019).</li>
<li>Shah, P. L., Herth, F. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Progress in interventional pulmonology.</a> Respiration. 95 (5), 287-288 (2018).</li>
<li>Hsia, D., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology.</a> Med Clin North Am. 95 (6), 1095-1114 (2011).</li>
<li>Moore, A. J., Mercer, R. M., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 271-280 (2018).</li>
<li>Majid, A., Fernandez-Bussy, S., Folch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology+and+solitary+pulmonary+nodule%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Bronconeumol%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology and solitary pulmonary nodule.</a> Arch Bronconeumol. 54 (10), 497-498 (2018).</li>
<li>Ali, M. S., Sorathia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palliative+care+and+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Palliative care and interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 57-64 (2018).</li>
<li>Czarnecka, K., Yasufuku, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%3A+focus+on+pulmonary+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology: focus on pulmonary diagnostics.</a> Respirology. 18 (1), 47-60 (2013).</li>
<li>Schacht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration%3A+performance+of+biomedical+scientists+on+rapid+on-site+evaluation+and+preliminary+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: performance of biomedical scientists on rapid on-site evaluation and preliminary diagnosis.</a> Cytopathology. 27 (5), 344-350 (2016).</li>
<li>Pearson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+on-site+evaluation+of+fine-needle+aspiration+by+non-cytopathologists%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+diagnostic+accuracy+studies+for+adequacy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Rapid on-site evaluation of fine-needle aspiration by non-cytopathologists: A systematic review and meta-analysis of diagnostic accuracy studies for adequacy assessment.</a> Acta Cytol. 62 (4), 244-252 (2018).</li>
<li>Arimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiopsy+with+endobronchial+ultrasonography+using+a+guide+sheath+for+peripheral+pulmonary+lesions+and+DNA+analysis+by+next+generation+sequencing+and+rapid+on-site+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Investig%22%5BJournal%5D)">Cryobiopsy with endobronchial ultrasonography using a guide sheath for peripheral pulmonary lesions and DNA analysis by next generation sequencing and rapid on-site evaluation.</a> Respir Investig. 57 (2), 150-156 (2019).</li>
<li>Gianella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+rapid+on-site+cytologic+evaluation+during+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+in+malignant+and+nonmalignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Utility of rapid on-site cytologic evaluation during endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration in malignant and nonmalignant disease.</a> Acta Cytol. 62 (5-6), 380-385 (2018).</li>
<li>Natella, V., Cozzolino, I., Sosa Fernandez, L. V., Vigliar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+nodes+fine+needle+cytology+in+the+diagnosis+of+infectious+diseases%3A+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Infez+Med%22%5BJournal%5D)">Lymph nodes fine needle cytology in the diagnosis of infectious diseases: clinical settings.</a> Infez Med. 20, 12-15 (2012).</li>
<li>Baughman, R. P., Spencer, R. E., Kleykamp, B. O., Rashkin, M. C., Douthit, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventilator+associated+pneumonia%3A+quality+of+nonbronchoscopic+bronchoalveolar+lavage+sample+affects+diagnostic+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Ventilator associated pneumonia: quality of nonbronchoscopic bronchoalveolar lavage sample affects diagnostic yield.</a> Eur Respir J. 16 (6), 1152-1157 (2000).</li>
<li>Petrone, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+cytotechnician+training+influence+the+accuracy+of+EUS-guided+fine-needle+aspiration+of+pancreatic+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Does cytotechnician training influence the accuracy of EUS-guided fine-needle aspiration of pancreatic masses.</a> Dig Liver Dis. 44 (4), 311-314 (2012).</li>
</ol>

저자는 이해 상충이 없다고 보고합니다.

중재적 호흡기학은 현대 호흡기 질환의 중요한 분야입니다. 특히, 폐 질환의 진단에 널리 사용되어 왔다 8,9. 최근 몇 년 동안 폐 악성 종양의 유병률 증가, 하기도 내에서 발생하는 약물 내성 병원체 감염 증가, 당혹스럽고 심각한 호흡기 질환의 진단 요청에 대한 요구로 인해 진단 중재적 호흡기학이 번창하고 있습니다10,11,12. 중재적 진단 효율성은 초점 영역의 크기와 해부학적 위치, 합병증 발생률 및 생검 부위 수, 기저 질환과 같은 요인에 따라 달라지며, 이는 수많은 첨단 기술 및 시설의 임상적 사용을 촉진합니다13. ROSE는 주목할만한 주목을 받았으며 중재적 호흡기학 진단을 위한 "실시간 동반 기법"으로 빠르게 부상했습니다.
ROSE는 천자, 생검 및 칫솔질과 같은 절차 중 신속한 평가, 예비 진단 및 표본 만족도의 우선 순위 지정을 위해 설계되었습니다. 후속 기술 발전 14,15,16,17을 안내하기 위한 피드백을 제공합니다. ROSE의 한 분야인 M-ROSE는 주로 조직 세포 악성종양을 평가하기보다는 미생물 배경을 평가하는 데 중점을 둡니다5. M-ROSE 방법은 진단 도구라기보다는 신속한 평가 기법이므로 진단 효능이 과장되어서는 안 됩니다. 임상적 응용은 주로 특정 병원성 미생물의 육안 식별, 감염과 오염의 구별, 감염과 비감염의 구별7을 포함한다.
빠른 염색 후 조직의 세포핵은 자줏빛을 띤 붉은 색조를 나타냈고 세포질은 푸르스름한 자주색을 나타냈습니다. 박테리아와 곰팡이가 파란색으로 나타나 조직 세포와 병원균 사이에 뚜렷한 대비를 나타냈다7. M-ROE는 박테리아와 곰팡이를 식별하는 데 일정 수준의 능력을 보여줄 수 있습니다. 특히, Aspergillus, cryptococcus, Pneumocystis jiroveci 및 기타 곰팡이 3,18에 대해 높은 양성 비율을 나타냅니다. 그러나 부피와 직경이 작은 병원체나 세포 내 병원체를 인식하는 데는 한계가 있습니다. 모든 질병의 진단은 병원성 미생물의 현미경적 식별에만 전적으로 의존하기보다는 환자의 기본 상태, 임상 증상, 영상 검사 및 기타 요인을 포괄하는 포괄적인 평가에 근거해야 한다는 점을 강조하는 것이 중요합니다.
M-ROE는 또한 폐포 세척액 샘플의 품질 평가와 같은 감염 및 오염 식별에 이점을 제공합니다. 여건이 허락하는 부서에서는 원심분리 및 염색을 통해 세척액의 병상 평가를 수행할 수 있습니다. 폐포 세척액의 적격 샘플은 저출력 현미경 검사에서 모든 세포(적혈구 제외) 중 편평 세포의 비율이 1% 미만, 원주형 상피 세포가 5% 미만, 적혈구가 10% 미만(외상 또는 출혈과 관련된 요인 제외)임을 보여줍니다19. 세포학 배경에 대한 현미경 검사는 시기 적절한 평가를 내리는 데 도움이 될 것입니다.
또한, M-ROE는 감염된 병변과 감염되지 않은 병변을 구별하는 데 도움이 될 수 있다5. 감염된 병변에서는 염증 세포에 의한 호중구, 대식세포 및 림프구의 침투가 종종 발생하며, 때때로 호중구 식균증이 관찰됩니다. 반대로, 감염되지 않은 병변은 일반적으로 염증성 세포 침윤이 없습니다.
여기에 제시된 프로토콜은 M-ROSE의 작동 과정을 보여줍니다. 미생물학적 배경의 해석을 통해 예비 진단을 내리거나 감별 진단을 좁힐 수 있습니다. 본 연구 결과에서 알 수 있듯이, PCP의 진단은 Pneumocystis jiroveci의 확증된 증거를 필요로 하며, 이는 증상이 있는 고위험 환자에서도 임상 증상 및 영상에 근거해서는 안 됩니다. ascus와 trophic 형태의 현미경 식별은 가장 직관적인 증거입니다. 진단 효율성은 주로 표본의 염색 방법에 따라 결정됩니다. 역사적으로 Wright's-Giemsa, 헥사민 실버 및 톨루이딘 블루와 같은 기존 염색은 PCP에 사용할 수 있지만 시간이 많이 걸리고 민감도가 낮습니다. 이 경우, PCP의 즉각적인 진단은 ROSE를 사용하여 환자가 ICU로 이송된 첫날에 확인되었습니다. Diff-quick은 명확한 구조, 선명한 대비, 쉬운 진통제를 특징으로 하는 폐렴을 식별하는 데 이점을 보여주었습니다(그림 5A).
민족 의학의 응용에 있어서도 ROSE는 중요한 가치를 지닙니다. 예를 들어, 화농성 질환에서 임상의는 미생물학적 배경 내에서 주로 호중구가 우세한 다양한 범위의 염증 세포를 식별할 수 있다5. 결과적으로, 열 제거 및 해독 특성이 있는 약물을 이러한 상태에 대한 잠재적 치료법으로 선택할 수 있으며, 특히 인동덩굴, 민들레, 패트리니아 등이 있습니다.
ROSE는 중재적 호흡기내과에서 선택할 필요가 없는 추가 프로그램이기 때문에 ROSE를 수행하는 것은 인건비와 경제적 비용을 증가시킬 수밖에 없습니다. ROSE를 정기적으로 사용해야 한다는 것은 논쟁의 여지가 있습니다. 경제적 이점 측면에서 시간과 인건비는 우리가 우려하는 것입니다. 추가 인력이 가장 많이 필요한 것은 평가자입니다. ROSE 평가는 세포 공학자, 병리학자 또는 임상의가 수행할 수 있습니다. 세포공학자는 ROSE 시술에 가장 적합한 인력입니다. 그러나 임상실습에서는 임상의가 그 역할을 대체하지만, 일정한 교육이 필요할 수 있다15. 선행 연구에 따르면 교육 프로그램은 임상의가 수행하는 적절성 평가의 정확도를 높이고 교란 변수를 제거하는 데 도움이 될 수 있다20. 또한, M-ROSE는 형태학적 진단 기법으로서 결과보고서에 주관적 요소가 포함되어 있습니다. 임상의는 추가 임상 정보를 기반으로 종합적인 평가를 해야 합니다.
적절한 시설과 훈련된 전문가를 갖춘 병원은 까다로운 호흡기 중증 질환의 조기 평가를 용이하게 하고 임상 치료를 효과적으로 안내할 수 있으므로 호흡기 부서 또는 ICU에서 ROSE 절차를 구현하는 것을 고려할 것을 권장합니다.

ROSE(Rapid On-Site Evaluation) 기법은 폐 질환 시술 분야에서 사용되는 매우 효율적인 방법입니다. 실시간 샘플링 및 진단 개입이 가능하여 즉각적인 세포학적 분석을 용이하게 합니다1. 이 혁신적인 접근 방식에는 조직 표본의 일부를 슬라이드에 인쇄하면서 무결성을 유지하는 것이 포함됩니다. ROSE의 주요 장점 중 하나는 전문 현미경 기술을 통해 임상 정보를 신속하게 해석할 수 있다는 것입니다. 여기에는 세포 형태 분석, 분류, 정량화, 구성 비율 결정, 배열 평가, 상관 관계 분석, 배경 평가 및 이물질 식별이 포함됩니다. 이 모든 데이터를 환자의 임상 정보와 통합함으로써 ROSE는 샘플링 적절성을 평가하고 실시간 중재적 절차 및 기법을 안내하는 데 중추적인 역할을 합니다2.
ROSE technology의 자회사인 M-ROSE 기술은 양성 세포와 악성 세포를 구별하기보다는 표적 병변의 미생물학적 배경을 획득하는 데 주로 중점을 둡니다 3,4. 한편, M-ROSE는 아스페르길루스(Aspergillus), 크립토코커스(Cryptococcus), 폐렴구균(Pneumocystis) 및 칸디다5(Candida 5)와 같은 병원체를 현미경으로 식별할 수 있습니다. 다른 한편으로는, 호흡기 검체의 질을 평가하고, 감염성 질환과 비감염성 질환을 구별하고, 감염과 오염을 구별하고, 감염 중증도 및 예후를 평가하는 데 중요한 지침을 제공한다 6,7. 예를 들어, 호흡기 검체 내에서 침투하는 염증 세포와 함께 동일한 형태를 보이는 박테리아가 공존하는 것은 감염을 나타냅니다. 반대로, 상피 세포를 동반하는 여러 형태학적으로 다양한 박테리아의 존재는 오염을 암시합니다. 임상 정보를 종합적으로 분석하고 결과를 예측할 수 있는 능력은 M-ROZ를 폐 질환 시술에서 매우 유용한 도구로 만듭니다.
결론적으로, ROSE는 폐 질환 진단의 효율성과 정밀도를 크게 향상시키는 중요한 세포학적 운반체 역할을 합니다. 다각적인 기능은 실시간 샘플링 및 진단 중재 기술을 통해 적시에 개입하고 정확한 진단을 용이하게 함으로써 환자 결과 개선에 기여합니다. 그러나 이러한 발전은 적격한 샘플을 얻는 데 달려 있다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 여기에서는 슬라이드 준비, 염색 기술 및 해석 지침을 포괄하는 표준화된 M-ROSE 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 임상의가 정확한 평가 및 치료 계획을 수립하는 동시에 표적 검체의 후속 처리에 대한 의사 결정을 용이하게 하는 데 매우 유용한 참고 자료 역할을 합니다.

<table><tbody><tr><td>세포학 현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td>CX43</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik (DQ) 염색 솔루션</td><td>Besso Biotechnology Co. LTD</td><td>G1541</td><td></td></tr><tr><td>일회용 2.5-5 mL 주사기 바늘</td><td>Shandong Zhu Pharmaceutical Group</td><td>20183150304</td><td></td></tr><tr><td>Powder-free 라텍스 장갑</td><td>Henan Yadu Industrial Co., LTD</td><td>20182140728</td><td></td></tr><tr><td>멸균 세포 문화 슬라이드</td><td>지난 Preret 산업 무역 Co., LTD</td><td>7101</td><td></td></tr></tbody></table>

폐 감염성 질환에 대한 미생물 신속 현장 평가

Microbiological Rapid On-Site Evaluation for Pulmonary Infectious Diseases

원인 불명의 폐 감염을 보이는 환자에게는 경험적 항감염 요법의 신속한 시작이 매우 중요합니다. 영상 획득은 임상에서 비교적 간단하지만 특이성이 부족하여 질병의 기저 원인을 정확하게 식별하기 위해 객담 배양, 기관지 폐포 세척액 배양 또는 유전자 염기서열 분석과 같은 시간이 많이 소요되는 추가 검사가 필요한 경우가 많습니다. 더욱이, 경험적 항감염 치료의 제한된 효능은 항생제 오용에 기여할 수 있습니다. 최근 ROSE(Rapid On-Site Evaluation) 슬라이드에서 미생물 배경 해석이 발전함에 따라 임상의는 기관지 내시경(예: 폐포 세척, 점막 칫솔질, 조직 클램프)을 통해 신속하게 샘플을 얻을 수 있게 되어 필수 미생물 배경 정보를 제공하는 병상 염색 및 해석을 용이하게 할 수 있습니다. 결과적으로, 이는 표적 항감염 치료 및 개별화된 약물 치료 계획을 개발하기 위한 기반을 마련합니다. 어떤 병원체가 실시간으로 감염을 일으키는지 더 잘 이해하면 의사는 항생제 내성을 유발하는 불필요한 광범위 항생제를 피할 수 있습니다. 호흡기내과 또는 중환자실 내에서 신속하고 표준화된 M-ROSE 워크플로우를 구축하면 의사가 환자를 위한 정확한 치료 전략을 수립하는 데 큰 도움이 될 것이며, 이는 임상적으로 중요한 의미를 지닙니다.

전형적인 사례로, 63세 남성이 기침, 발열, 가슴 통증으로 병원에 내원했습니다. 환자는 이전에 단백뇨와 부종을 특징으로 하는 신증후군으로 진단받고 장기간 프레드니손과 타크로리무스로 치료를 받았습니다. 초기 실험실 결과는 백혈구 수가 10.49 x 109/L, 호중구 수가 8.87 x 109/L, 전혈 C 반응성 단백질 및 (1-3)-β-D-글루칸 농도가 155.81mg/L 및 249.7pg/mL임을 보여주었습니다. 흉부 컴퓨터 단층 촬영(CT) 스캔은 확산, 양측 및 중앙 위치에서 지상 유리 혼탁을 보여주었습니다(그림 3A). 세포라존 타조박탐을 사용한 초기 항감염 치료는 효과가 없었고, 운동 후 심장 피로, 숨가쁨, 호흡 곤란으로 증상이 악화되었습니다. 반복적인 CT 촬영에서도 유의미한 개선이 나타나지 않았습니다(그림 3B). 이후 환자는 중환자실(ICU)로 옮겨져 기계 환기를 받고 기관지 내시경 검사를 받았다. 초점 샘플링은 가상 항법의 안내에 따라 액세스되었으며 3개의 겸자 생검 샘플을 수집했습니다(그림 4). ROE는 조직의 즉각적인 현미경 평가에 사용할 수 있었고 Pneumocystis jiroveci의 진단이 확인되었습니다(그림 5A). 환자는 즉시 설파메톡사졸(1.92g, q6h)로 항진균 치료를 받았다. 후속 염색(그림 5B-E)에서 이 진단을 확인했습니다. 그러나 반복적인 CT 촬영에서는 여전히 유의미한 개선이 나타나지 않았습니다(그림 3C). 환자는 진균 감염을 위해 카보펑진(첫날 70mg, 이후 매일 50mg), 메틸프레드니솔론(하루 80mg), 면역글로불린(매일 10g)을 투여받았다. 증상은 빠르게 완화되었고, 환자는 후속 치료를 계속했다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig01.jpg"> 그림 1: 장비 및 재료. (A) 세포 현미경 및 그래픽 이미징 시스템. (B) Diff Quik(DQ) 염색 용액 A. (C) Diff Quik(DQ) 염색 용액 B. (D) 가루가 없는 라텍스 장갑. (E) 멸균 세포 배양 슬라이드. (F) 일회용 2.5-5mL 주사기 바늘. (G) 흡수성 종이. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig02.jpg"> 그림 2: M-ROSE 워크플로우. (A) 슬라이드 인쇄 (B) 슬라이드를 Diff A 용액에 10-30초 동안 담그십시오. (C) PBS 염료 수조에서 슬라이드를 헹구어 과도한 Diff A 용액을 제거합니다. (D) 흡수지로 슬라이드에 남아 있는 액체를 닦아내고 닦아내십시오. (E) 슬라이드를 Diff B 용액에 20-40초 동안 담그고 (F) 물 염색 탱크의 슬라이드를 청소합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig03.jpg"> 그림 3: 흉부 CT 이미지. (A) 입학 시. (B) 중환자실로 이송된 날. (C) sulfamethoxazole 처리 후이 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig03large.jpg" target="_blank">그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig04.jpg"> 그림 4: VBN에 의한 우측 폐 하엽의 후방 기저부 국소화. (A) 우측 주요 기관지. (B) 오른쪽 중간 기관지. (C) 우측 폐의 하엽 기관지의 후방 기저부 분절. (D) VBN의 3D 맵. (E) 흉부 CT의 관상 지도. (F) 흉부 CT의 축 방향 지도 (G) 흉부 CT의 시상 지도 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig05.jpg"> 그림 5: 다양한 염색 방법에서 폐렴의 모습을 기록한 그림. (A) 장미 100 x 10; 흰색 화살표: 아스코스 포자를 포함하는 낭종. (B) 헤마톡실린 및 에오신(HE), 60 x 10. (C) 알시안 블루, 60 x 10. (D) GIEMSA, 40 x 10. (E) 헥사겐 실버, 20 x 10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 프로토콜은 슬라이드 제작, 염색 및 해석의 3단계를 포함한 빠르고 표준화된 미생물학 신속 현장 평가(M-ROSE) 워크플로우를 보여줍니다. 이 프로토콜은 의사가 신속한 임상 결정을 내리는 데 도움이 됩니다.

The prompt initiation of empirical anti-infective therapy is crucial in patients presenting with unexplained pulmonary infection. Although imaging ...

우리의 목적은 폐 감염 환자를 위한 정확한 치료 전략을 수립하기 위해 의사를 지원하기 위해 실시간 신속 평가 방법인 M-ROSE를 도입하는 것입니다. 신속한 세포 염색 기술과 고해상도 현미경 이미징 시스템은 현재 이 분야의 연구를 발전시키는 데 사용되고 있습니다. M-ROSE에 대한 임상시험 건수는 상대적으로 제한적입니다.가장 큰 과제는 M-ROSE 결과를 해석하는 것인데, 이는 병원체를 육안으로 식별하고 감염과 오염을 구별하기 어렵기 때문에 인력과 훈련된 인력이 필요합니다. 실시간으로 감염을 일으키는 병원체에 대한 더 나은 이해를 통해 의사는 항생제 내성을 유발하고 폐 감염 치료제로 사용되는 불필요한 광범위 항생제를 피할 수 있습니다. M-ROSE는 실시간이며 매우 효율적입니다.M-ROSE는 아스페르길루스(aspergillus), 크립토코커스(cryptococcus), 수많은, 칸디다(candida)와 같은 병원체를 현미경으로 식별할 수 있습니다. 이는 호흡기 기본 품질을 측정하고, 감염과 비감염성 질환을 구별하고, 감염과 오염을 구별하고, 감염, 중증도 및 예후를 평가하는 데 중요한 지침을 제공합니다.

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연구

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Medicine

의학

Xpert MTB / 리프 테스트의 동시 검출을위한 샘플 정화, 핸즈프리 작동, 온보드 샘플 처리 및 매우 민감한 헤미 중첩 된 PCR을...

Xpert MTB / 리프 시험과 폐 결핵 진단

출처: 페린밤, K., 시리아폰, A. 아메바를 이용한 신속 영상 기반 박테리아 병원성 분석. J. Vis. 경험 (2018)이 영상은 아메바를 표면에 부착된 박테리아나 플랑크톤성 박테리아와 함께 배양하고, 칼세인-아세톡메틸 에스터(칼세인-AM) 아가로스 패드를 적용하며, 형광 영상을 이용해 숙주 세포 손상을 감지하는 빠른 이미지 기반 탐지 방법을 시연합니다.

표면에서 유도된 박테리아 병원성 스크리닝을 위한 신속한 영상 기반 분석

식물 병원 체 현장, 특히 토양을 매개로 병원 균의 신속 하 고 정확한 검색은 추가 inoculum 생산 및 공장 분야에서 질병의 확산을 방지 하기 위해 중요 합니다. 여기 휴대용 실시간 PCR 탐지 시스템을 사용 하 여 개발 메서드 필드 조건에서 현장 진단이 있습니다.

휴대용 실시간 PCR 시스템을 사용 하 여 토양 품 어진 Phytopathogens의 현장 분자 검출

신속 하 게 구축, 오프-그리드 실험실 설계 되었고 원격, 리소스 제한 전역 설정에 대 한 내장. 기능 및 물류 개선, 확장, 다기능 실험실 모듈의 중요 한 측면을 탐구 된다. 기본적인 실험실 작업에 대 한 점검 및 호흡기 바이러스 진단 테스트에 대 한 프로토콜 개발 이며 제시.

원격 실험실 관리: 호흡기 바이러스 진단

이 프로토콜은D2O대사의 단일 세포 자극 라만 산란 이미징에 의해 2.5시간 이내에 신속한 항균 감수성 테스트(AST) 분석을 제공합니다. 이 방법은 소변 또는 전혈 환경의 박테리아에 적용되며, 이는 클리닉에서 신속한 단일 세포 표현형 AST를 변형시킵니다.

단일 박테리아에 혼입된 중수소의 자극된 라만 산란 이미징에 의한 신속한 항균 감수성 테스트

이 프로토콜은 클린룸 환경에서 미생물 바이오버든을 최소화하기 위한 모범 사례를 요약하고 환경 모니터링, 공정 모니터링 및 제품 멸균 테스트와 같은 전략을 포함합니다. 이는 현재 우수 조직 관행 표준 및 현재 우수 제조 관행 표준을 충족하는 데 필요한 제조 및 테스트 시설과 관련이 있습니다.

클린룸 환경 및 세포 치료를 위한 미생물 제어 및 모니터링 전략

EUCAST는 자동 혈액 배양을 위한 직접 항균제 감수성 검사(AST) 프로토콜을 개발했습니다. 그러나 질량 분석 기반 미생물 식별에 대한 의존성은 자동화된 미생물 식별 시스템에서 직접 접종 준비 프로토콜을 사용하여 제거할 수 있습니다. 이 접근 방식은 검체 채취 후 24시간 이내에 AST 보고서를 제공할 수 있습니다.

질량 분석법 없이 EUCAST RAST 방법을 용이하게 하기 위해 자동 미생물 식별 시스템을 사용한 직접 미생물 식별

다양한 박테리아 병원체는 호흡기 감염을 일으킬 수 있으며 정확하게 감지하고 신속하게 치료하지 않으면 심각한 건강 문제를 초래할 수 있습니다. 루프 매개 등온 증폭을 통해 이러한 병원체를 빠르고 정확하게 검출하면 임상 환경에서 호흡기 감염을 효과적으로 관리하고 제어할 수 있습니다.

Microfluidic-Chip-based Loop-Mediated Isothermal Amplification을 통해 하기도 감염을 일으키는 세균성 병원체의 신속한 검출

우리는 높은 처리량 방식으로, 여러 세포 프로세스와 구조를 시각화하고 수치 높은 콘텐츠를 이미지로 자동 셀 culturing를 결합 방법을 설명합니다. 이러한 방법은 genomes의 추가 기능 주석의 도움뿐만 아니라 질병 유전자 네트워크 및 잠재적 약물 표적을 식별할 수 있습니다.

Neurodegenerative 질병 높은 콘텐츠 심사

목화쥐는 매우 흥분하고 도망가거나 싸우는 반응이 강합니다. 동물의 스트레스를 줄이기 위해 최적화된 취급 방법이 설명되어 목화쥐가 전임상 모델로 더 쉽게 접근할 수 있도록 합니다.

종양 살상 바이러스의 전 임상 평가에 대한 연구에면 쥐의 취급

학습하세요 M-ROSE 워크플로우를 통해 폐 감염성 질환의 신속한 현장 평가 방법을 익히세요. 이 기법은 병원체 식별과 적절한 항생제 사용을 지원하여 임상 의사결정을 개선합니다.

폐 감염성 질환에 대한 미생물 신속 현장 평가

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