Name: 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)의 글리코겐 축적 및 장 무결성을 시각화하기 위한 저비용 염료 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-23T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: 배우세요 Caenorhabditis elegans를 이용한 저비용 염료 기반 글리코겐 축적 및 장 무결성 분석법. 요오드 염색과 푸른 염료를 활용하여 대사 과정과 노화를 시각적으로 관찰하는 생물학 교육용 실험 기법입니다.

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참고 : 대장균 OP50 (E. coli OP50) 박테리아 및 Bristol N2 야생형 균주는 CGC, University of Minnesota, USA 또는 C. elegans 실험실의 기증을 통해 얻을 수 있습니다. 연구자의 안전을 위해 개인 보호 장비를 사용하는 것이 필수적입니다. 차아염소산염 및 수산화나트륨과 같은 시약의 농도는 낮지만 이러한 화학 물질과 관련된 잠재적 위험을 최소화하기 위해 원고에서 강조한 대로 권장되는 PPE를 착용하는 것이 중요합니다.
1. 글리코겐 함량
<ol><li>테스트 플레이트 준비<ol><li>웜 균주당 6개의 60mm x 15mm NGM 한천 플레이트20개( 보충 표 1에 설명된 대로 선충 성장 매체 한천, NGM 10mL)를 준비하고 실온에서 1일 동안 건조시킵니다. 오염을 방지하기 위해 플레이트를 닫아 두십시오.</li>
		<li>플레이트당 200μL의 E. coli OP50 액체 배양액(광학 밀도 = 0.600, 대략 600nm의 파장에서)을 추가하여 플로우 후드에 균주당 총 4개의 60mm x 15mm NGM 플레이트를 접종합니다. 닫힌 플레이트를 사용하기 37일 전에 1일 동안 C에서 배양합니다. 알림: 6개의 플레이트를 준비하되(1.1단계) 4개에만 대장균 OP50 박테리아를 접종합니다. 웜을 굶주린 상태에 놓을 때 나중에 사용할 수 있도록 나머지 두 플레이트를 4°C에서 예약하십시오. 이 분석은 중복으로 수행될 수 있습니다.</li>
		<li>테스트 당일에는 이전에 E. coli OP50 박테리아로 파종된 균주당 2개(6mm x 15mm) NGM 한천 플레이트에 0.025M D-Glucose 200μL를 추가합니다. 플레이트를 플로우 후드의 실온에서 건조시키십시오. 참고: E. coli OP50 박테리아가 파종된 NGM 한천 플레이트는 플로우 후드를 사용하는 대신 알코올 램프 근처에서 건조할 수도 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>동기화<ol><li>동기화하기 약 3일 전에 예쁜꼬마선충 Bristol N2(야생형)가 있는 유지 보수 NGM 한천에서 다양한 단계(청크당 약 500마리의 웜)에서 3-4개의 덩어리(3cm x 3cm)를 이전에 E. coli OP50 박테리아로 파종한 새 플레이트(150mm x 90mm)로 옮깁니다.</li>
		<li>웜이 있는 새 플레이트를 20°C의 통제된 환경에 놓고 습도 &gt;95% 3일 동안 유지합니다(72시간은 대부분의 웜이 중력 성인 단계에 도달할 수 있도록 허용). 참고: 사용 중인 예쁜꼬마선충 균주에 따라 성장 온도를 조정해야 할 수도 있습니다.</li>
		<li>파스퇴르 피펫을 사용하여 증류 된 H2O로 준비된 플레이트에서 웜을 수집하고 50mL 원심 분리 튜브로 옮깁니다.</li>
		<li>중력에 의해 웜이 침전될 때까지 기다린 다음(약 15분) 상층액을 제거합니다. 이 과정을 3번 반복하여 박테리아를 제거합니다. 마지막 세척 후 부피를 5mL로 줄입니다.</li>
		<li>표백액 10mL( 보충 표 1)를 넣고 약 6분 동안 손을 사용하여 세게 흔듭니다.</li>
		<li>쉐이킹이 완료된 직후 M9 완충액으로 튜브를 50mL 용량까지 채웁니다.</li>
		<li>1400 x g 에서 3분 동안 원심분리하고 상층액을 최대 5mL까지 제거한 다음 45mL의 M9 완충액을 다시 추가합니다. 이 과정을 4번 반복합니다.</li>
		<li>마지막 세척 후 부피를 15mL로 줄이고 약 14시간 동안 제어된 온도(20°C) 및 습도(&gt;95%)에서 유지합니다. 참고: 동기화 과정은 산란을 통해 난자를 얻는 것으로 대체할 수 있습니다: 약 20마리의 성체 임신 웜을 200μL의 E. coli OP50으로 미리 파종한 NGM 플레이트(6mm x 15mm)에 옮깁니다. 벌레가 1일 동안 알을 낳도록 합니다. 그런 다음 임신 한 벌레를 제거하고 알이 부화 할 때까지 기다립니다.</li>
	</ol></li>
	<li>웜의 준비<ol><li>자동 피펫을 사용하여 동기화된 웜 10μL(단계 1.2.8)를 현미경 슬라이드에 추가하고 웜의 수를 계산합니다. 500-1000 worms/μL를 얻기 위해 얼마나 많은 부피를 피펫팅해야 하는지 계산하십시오.</li>
		<li>500-1000 L1 동기화 웜 (단계 1.2.8)을 E. coli OP50 박테리아를 먹이 공급원으로 파종 한 NGM 한천 플레이트 (150mm x 90mm, 보충 표 1)로 20 ° C에서 유충 4 단계 (L4)에 도달 할 때까지 옮깁니다. 알림: 웜은 자동 피펫을 사용하여 이송할 수 있습니다. 자동 피펫을 사용할 수 없는 경우 유리 파스퇴르 피펫을 사용하고 마이크로튜브 라벨 또는 유리 눈금 피펫을 사용하여 부피를 제어할 수 있습니다.</li>
		<li>동기화20의 48시간 후: 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 M9 완충액(보충 표 1)으로 플레이트에서 L4 유충을 수집하고 깨끗한 원추형 튜브 50mL에 넣고 신선한 M9 완충액으로 3배 세척하거나 남아 있는 모든 대장균 OP50 박테리아가 완전히 제거될 때까지(실온에서) 세척을 반복합니다. 알림: 일부 벌레는 절차 중에 굶주림을 경험할 수 있으므로 세척 단계가 중요합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>어세이 실행<ol><li>이전에 준비한 새로운 NGM 한천 플레이트(60mm x 15mm) 각각(1.1.2 및 1.1.3)에서 500-1000 L4 웜(1.3.1 단계)을 옮깁니다. 시험일까지 20°C에서 48시간 동안 보관하십시오. 이 일정은 다음과 같이 3개의 실험 그룹이 중복됩니다(그림 1). A-(굶주림): 웜은 E. coli OP50 박테리아가 없는 일반 NGM 한천 플레이트에서 자랍니다. B-(일반): 웜은 E. coli OP50 박테리아로 파종된 일반 NGM 한천 플레이트에서 자랍니다. C-(고포도당): 웜은 E. coli OP50 박테리아로 파종되고 0.025M D-포도당을 포함하는 NGM 한천 플레이트에서 자랍니다.</li>
		<li>시험 당일(48시간 후): 웜을 수집하고 M9 버퍼에서 세 번 간단히 세척합니다(1.2.2 및 1.2.3단계). 참고: 여기에서 D-포도당을 첨가하여 NGM 한천 플레이트를 준비하고 (1.3 단계) 웜을 추가할 때까지 따로 보관합니다.<ol><li>요오드 염색: 새로운 M9 완충액을 사용하여 5%(v/v) Lugol의 요오드 용액(요오드/요오드화칼륨 용액)을 준비합니다. 알림: Lugol의 요오드 용액은 현지 시약 공급업체나 약국에서 얻을 수 있으므로 초기 농도는 다를 수 있습니다. 필요한 경우 계산하여 5%(v/v) 솔루션을 얻습니다.</li>
		</ol></li>
		<li>각 그룹에서 약 100μL의 세척된 웜(단계 4.2)을 희석된 Lugol 용액(5% v/v)이 포함된 1.5mL 마이크로튜브로 옮깁니다. 자동 피펫을 1:5 비율로 사용하여 100μL의 웜을 400μL의 Lugol 용액에 옮긴 다음 믹서에서 5분 동안 부드럽게 교반합니다. 알림: 믹서를 사용할 수 없는 경우 마이크로튜브를 손으로 조심스럽게 흔들 수 있습니다.</li>
		<li>이 5분 직후 1.5mL 마이크로튜브(웜 + Lugol 용액)를 1400 x g 에서 3분 동안 원심분리합니다. 참고: 이 분석이 L4 단계 이상의 웜에 대해 수행되면 원심분리기를 사용하는 대신 중력 침강을 달성할 수 있습니다. 모든 웜이 마이크로튜브 바닥에 가라앉을 때까지 벤치탑의 랙에 마이크로튜브를 열어 둡니다.</li>
		<li>상층액을 제거하고 1.0mL의 새 M9 완충액으로 웜을 세척합니다. 용액에서 남아 있는 모든 요오드가 제거될 때까지 세척을 반복합니다(최소 3회).</li>
		<li>마지막 세척 단계 후 약 100μL의 잔류물을 제외한 상층액을 제거합니다. 이를 사용하여 웜을 부드럽게 재현탁시키고 현미경 분석을 수행합니다.</li>
		<li>약 50μL의 재현탁 웜 용액을 현미경 슬라이드에 옮기고 커버 슬립으로 덮습니다. 실체현미경(1.5x)을 사용하여 명시야 이미지를 관찰합니다. 참고: 실체현미경을 사용할 수 없는 경우 일반 현미경을 사용할 수 있으며 어댑터를 사용하여 휴대폰 카메라(3.4x)로 이미지를 캡처할 수 있습니다. 빛/밝기/노출로 인한 오류를 방지하려면 모든 사진에 대해 모든 휴대폰 카메라 설정을 일관되게 유지하는 것이 중요합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>데이터 검사<ol><li>정량적 데이터: 벌레의 요오드 염색을 기반으로 글리코겐 함량을 계산합니다.<ol><li>그룹당 최소 10개의 웜이 포함된 실체현미경의 이미지를 추가 처리를 위해 .jpeg 파일로 저장합니다. 이를 위해 무료 ImageJ 소프트웨어를 다운로드하십시오. 자세한 내용은 보충 파일 1, 보충 그림 1, 보충 그림 2에 나와 있습니다.</li>
			<li>ImageJ 소프트웨어(https://imagej.nih.gov/ij/download.html 에서 무료로 다운로드할 수 있음)를 사용하여 .jpeg 이미지를 엽니다. Segmented line(분할된 선 )을 클릭하고 웜의 윤곽을 그립니다(한 번에 하나의 웜). Analyze( 분석)를 클릭한 다음 Measure(측정 )를 선택하여 염색 정량화를 얻습니다. 데이터는 테이블에 평균으로 표시됩니다. 평균은 웜 영역당 염색 밀도에서 계산된 데이터를 나타냅니다.</li>
		</ol></li>
		<li>정성적 데이터: 각 그룹의 실체현미경에서 이미지를 얻고 웜의 염색을 시각적으로 비교합니다. 필요한 경우 염색을 분석하기 위해 점수 시스템을 만듭니다 : 0 무색; 1 가볍게 얼룩진; 2개는 얼룩이 있고 3개는 심하게 얼룩져 있습니다. 실체현미경을 사용하여 핸드 카운터로 그룹(최소)당 약 10개의 웜을 수동으로 계산합니다.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66084/66084fig01.jpg"> 그림 1: 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 전체 글리코겐 함량 분석 개략도. 글리코겐 함량 분석을 수행하기 위해 여기에서 수행된 실험의 개략도. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/66084fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
2. 장 투과성 평가
<ol><li>웜의 준비<ol><li>동기화 후 약 14시간 후(단계 1.2.8), 첫 번째 유충 단계(L1)에서 500-1000개의 웜(단계 1.3.1 및 NOTE)을 미리 준비된 각각의 새로운 NGM 한천 플레이트(60mm x 15mm)로 옮기고 테스트 당일까지 20°C에서 유지합니다. 이 일정은 다음과 같이 두 개의 실험 그룹으로 이어집니다(그림 2). A-(젊은): 벌레는 유충 4단계(L4)까지 박테리아 E. coli OP50으로 파종된 NGM 한천 플레이트에서 자랍니다. B- (오래된) : 벌레는 성충 7일까지 E. coli OP50 박테리아로 파종 된 NGM 한천 플레이트에서 자랍니다. 참고: 성충7일째 까지 유지된 기생충은 매일 M9 완충액으로 세척하고 식품 대체 및 자손 제거를 위해 이전에 파종된 200μL의 E. coli OP50 박테리아가 있는 새로운 NGM 한천 플레이트(60mm x 15mm)로 옮겨야 합니다. 더 어린 벌레는 디캔테이션 중에 뜨고 상층액을 제거하여 분리할 수 있습니다. 스머프 웜의 비율은 나이가 들면서 증가합니다. 그러나 장 투과성 평가는 연구 목적에 따라 모든 단계와 연령에서 수행할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>어세이 실행<ol><li>테스트 당일에는 M9 완충액(보충 표 1)을 사용하여 L4 웜(2.1.1단계 2일 후)과 7일째(현재 9일째)에 성충을 수집하고 라벨이 부착된 1.5mL 마이크로튜브로 옮깁니다.</li>
		<li>1400 x g 에서 3분 동안 원심분리하고 상층액을 제거하고 M9 1.0mL를 넣고 부드럽게 섞습니다. 이 과정을 3번 반복하여 박테리아를 제거합니다. 마지막 세척 후 부피를 500μL로 줄입니다.</li>
		<li>자동 피펫을 사용하여 웜 침전물 10μL를 현미경 슬라이드에 추가하고 웜의 수를 세습니다. 100 worms/μL를 얻기 위해 피펫팅할 부피를 계산합니다.</li>
		<li>스머프 염색: 증류수를 사용하여 25% Erioglaucine disodium salt(보충 표 1) 용액을 준비합니다. 필요한 경우 더 나은 용해를 위해 와류를 사용하십시오.</li>
		<li>이전에 확인된 새로운 마이크로튜브에 자동 피펫을 사용하여 웜 100개, 25% Erioglaucine 디소듐 염 용액 100μL, E . coli OP50 200μL를 추가하고 M9 완충액을 포함하여 최종 부피 500μL를 만듭니다. 참고: Erioglaucine disodium, E. coli 및 웜의 수는 고정되어 있습니다. M9 버퍼의 부피는 가변적이며 최종 부피를 500μL로 가져오는 데 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>실온에서 빛으로부터 보호되는 믹서에서 교반하면서 3시간 동안 배양합니다. 알림: 믹서를 사용할 수 없는 경우 15분마다 마이크로튜브를 손으로 조심스럽게 흔듭니다.</li>
		<li>3시간 후 1.5mL 마이크로튜브를 1400 x g 에서 3분 동안 원심분리합니다. 1.0mL의 상층액을 제거하고 1.0mL의 M9 완충액으로 웜을 세척합니다.</li>
		<li>남아 있는 Erioglaucine disodium salt 용액이 용액에서 제거될 때까지 세척을 반복합니다. 마지막 세척 단계 후 약 250μL의 잔류물을 제외한 상층액을 제거합니다. 이를 사용하여 웜을 조심스럽게 재현탁하고 현미경 분석을 위해 처리합니다.</li>
		<li>약 50개의 재현탁 웜 용액을 현미경 슬라이드로 옮기고 커버 슬립으로 덮습니다. 현미경 슬라이드를 -20°C의 냉장고에서 10분 동안 배양하여 벌레를 마비시킵니다. 참고: 웜을 마비시키는 또 다른 대안은 10μL의 레바미솔 염산염 용액(10mM; 보충표 1) 그리고 커버 슬립으로 덮으십시오.</li>
		<li>실체현미경(1.5x)의 명시야를 사용하여 총 벌레 수와 완전히 염색된 벌레의 수를 관찰하고 계산합니다. 어댑터와 연결된 휴대폰 카메라(3.4x)에서 이미지를 얻을 수 있습니다. 빛/밝기/노출로 인한 오류를 방지하려면 모든 사진에 대해 모든 휴대폰 카메라 설정을 일관되게 유지하는 것이 중요합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>데이터 검사<ol><li>정성적 데이터: 각 그룹(성충 L4 및 7일 째)의 실체현미경에서 이미지를 얻고 벌레의 염색을 육안으로 비교합니다.</li>
		<li>실체현미경을 사용하여 웜의 총 수와 스머프 웜(파란색 웜)의 수를 계산합니다.</li>
		<li>어린 웜(L4, 대조군)과 늙은 웜(성충 7일 째)을 비교하여 결과를 스머프 웜의 백분율로 표현합니다. ᅡ x x = 100 (%) x b X = 100 x B / A 어디서, A = 총 웜 수 B = 스머프 웜의 수</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66084/66084fig02.jpg"> 그림 2: 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 전체 장 투과성 분석 개략도. (A) 예쁜꼬마선충 준비. (B) Erioglaucine disodium salt로 염색. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/66084fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<meta charset="utf8"></head><body>예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)의 대사 및 노화 패턴 평가

<ol><li>Thorp, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ChatGPT+is+fun%2C+but+not+an+author%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">ChatGPT is fun, but not an author.</a> Science. 379 (6630), 313(2023).</li>
<li>Lemons, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inquiry-based+approach+to+study+the+synapse%3A+Student-driven+experiments+using+C%5BTitle%5D)+AND+%22elegans.+J+Undergrad+Neurosci+Educ%22%5BJournal%5D)">An inquiry-based approach to study the synapse: Student-driven experiments using C.</a> elegans. J Undergrad Neurosci Educ. 15 (1), A44-A55 (2016).</li>
<li>Andersen, J., Krichevsky, A., Leheste, J. R., Moloney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+an+undergraduate+educational+tool+for+teaching+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Mol+Biol+Educ%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as an undergraduate educational tool for teaching RNAi.</a> Biochem Mol Biol Educ. 36 (6), 417-427 (2008).</li>
<li>Martins, R. R., McCracken, A. W., Simons, M. J. P., Henriques, C. M., Rera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+catch+a+smurf%3F+-+Ageing+and+beyond...+In+vivo+assessment+of+intestinal+permeability+in+multiple+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">How to catch a smurf? - Ageing and beyond... In vivo assessment of intestinal permeability in multiple model organisms.</a> Bio Protoc. 8 (3), e2722(2018).</li>
<li>Ellingwood, S. S., Cheng, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+clinical+aspects+of+glycogen+storage+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Biochemical and clinical aspects of glycogen storage diseases.</a> J Endocrinol. 238 (3), R131-R141 (2018).</li>
<li>Cori, C. F., Cori, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+formation+in+the+liver+from+d-and+l-lactic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bio+Chem%22%5BJournal%5D)">Glycogen formation in the liver from d-and l-lactic acid.</a> J Bio Chem. 81 (2), 389-403 (1929).</li>
<li>Wosilait, W. D., Sutherland, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+of+epinephrine+and+glucagon+to+liver+phosphorylase.+II.+Enzymatic+inactivation+of+liver+phosphorylase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The relationship of epinephrine and glucagon to liver phosphorylase. II. Enzymatic inactivation of liver phosphorylase.</a> J Biol Chem. 218 (1), 469-481 (1956).</li>
<li>Zhang, H., Ma, J., Tang, K., Huang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+energy+storage%3A+roles+of+glycogen+metabolism+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Beyond energy storage: roles of glycogen metabolism in health and disease.</a> FEBS J. 288 (12), 3772-3783 (2021).</li>
<li>Liu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+glycogen+molecular+structure+in+the+worm+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr+Polym%22%5BJournal%5D)">Characterization of glycogen molecular structure in the worm Caenorhabditis elegans.</a> Carbohydr Polym. 237, 116181(2020).</li>
<li>Cherkas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+molecular+mapping+and+assessment+of+glycogen+in+C%5BTitle%5D)+AND+%22elegans.Analyst%22%5BJournal%5D)">Label-free molecular mapping and assessment of glycogen in C.</a> elegans.Analyst. 144 (7), 2367-2374 (2019).</li>
<li>Gusarov, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+controls+Caenorhabditis+elegans+lifespan+and+resistance+to+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Glycogen controls Caenorhabditis elegans lifespan and resistance to oxidative stress.</a> Nat Commun. 8, 15868(2017).</li>
<li>Seo, Y., Kingsley, S., Walker, G., Mondoux, M. A., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+shift+from+glycogen+to+trehalose+promotes+lifespan+and+healthspan+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Metabolic shift from glycogen to trehalose promotes lifespan and healthspan in Caenorhabditis elegans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (12), E2791-E2800 (2018).</li>
<li>Frazier, H. N. 3rd, Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+sugar+provisioning+controls+survival+of+C.+elegans+embryos+in+adverse+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Adaptive sugar provisioning controls survival of C. elegans embryos in adverse environments.</a> Curr Biol. 19 (10), 859-863 (2009).</li>
<li>da Silva, F. N., Zimath, P. L., do Amaral, T. A., Martins, J. R. N., Rafacho, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coadministration+of+olanzapine+causes+minor+impacts+on+the+diabetogenic+outcomes+induced+by+dexamethasone+treatment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Coadministration of olanzapine causes minor impacts on the diabetogenic outcomes induced by dexamethasone treatment in rats.</a> Life Sci. 322, 121660(2023).</li>
<li>Gusarov, I., Nudler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+at+the+crossroad+of+stress+resistance%2C+energy+maintenance%2C+and+pathophysiology+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Glycogen at the crossroad of stress resistance, energy maintenance, and pathophysiology of aging.</a> Bioessays. 40 (9), e1800033(2018).</li>
<li>Untersmayr, E., Brandt, A., Koidl, L., Bergheim, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+barrier+dysfunction+as+driving+factor+of+inflammaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">The intestinal barrier dysfunction as driving factor of inflammaging.</a> Nutrients. 14 (5), 949(2022).</li>
<li>Lin, P. Y., Stern, A., Peng, H. H., Chen, J. H., Yang, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+and+metabolic+regulation+of+intestinal+barrier+function+and+associated+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Redox and metabolic regulation of intestinal barrier function and associated disorders.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 14463(2022).</li>
<li>Dambroise, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+phases+of+aging+separated+by+the+Smurf+transition+as+a+public+path+to+death%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Two phases of aging separated by the Smurf transition as a public path to death.</a> Sci Rep. 6, 23523(2016).</li>
<li>Laranjeiro, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swim+exercise+in+Caenorhabditis+elegans+extends+neuromuscular+and+gut+healthspan%2C+enhances+learning+ability%2C+and+protects+against+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Swim exercise in Caenorhabditis elegans extends neuromuscular and gut healthspan, enhances learning ability, and protects against neurodegeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (47), 23829-23839 (2019).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+C%5BTitle%5D)+AND+%22elegans.WormBook%22%5BJournal%5D)">Maintenance of C.</a> elegans.WormBook. , 1-11 (2006).</li>
<li>McGhee, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C.+elegans+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%3A+The+Online+Review+of+C.+elegans+Biology%22%5BJournal%5D)">The C. elegans intestine.</a> WormBook: The Online Review of C. elegans Biology. , (2007).</li>
<li>McGee, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+intestinal+nuclei+and+intestinal+integrity+in+aging+C%5BTitle%5D)+AND+%22elegans.+Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Loss of intestinal nuclei and intestinal integrity in aging C.</a> elegans. Aging Cell. 10 (4), 699-710 (2011).</li>
<li>Gelino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+autophagy+improves+healthspan+and+longevity+in+C.+elegans+during+dietary+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+genetics%22%5BJournal%5D)">Intestinal autophagy improves healthspan and longevity in C. elegans during dietary restriction.</a> PLoS genetics. 12 (7), e1006135(2016).</li>
<li>Rera, M., Clark, R. I., Walker, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier+dysfunction+links+metabolic+and+inflammatory+markers+of+aging+to+death+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier dysfunction links metabolic and inflammatory markers of aging to death in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (52), 21528-21533 (2012).</li>
<li>Zhang, G., Gu, Y., Dai, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+bilberry+anthocyanin+extracts+on+dextran+sulfate+sodium-induced+intestinal+damage+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Protective effect of bilberry anthocyanin extracts on dextran sulfate sodium-induced intestinal damage in Drosophila melanogaster.</a> Nutrients. 14 (14), 2875(2022).</li>
<li>Gelino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+autophagy+improves+healthspan+and+longevity+in+C.+elegans+during+dietary+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Intestinal autophagy improves healthspan and longevity in C. elegans during dietary restriction.</a> PLoS Genet. 12 (7), e1006135(2016).</li>
<li>Qu, M., Xu, K., Li, Y., Wong, G., Wang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+acs-22+mutant+Caenorhabditis+elegans+to+detect+the+toxicity+of+nanopolystyrene+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Using acs-22 mutant Caenorhabditis elegans to detect the toxicity of nanopolystyrene particles.</a> Sci Total Environ. 643, 119-126 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 마이크로튜브&nbsp;</td><td>현지 공급업체</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>37도 인큐베이터</td><td>KS 4000i&nbsp;</td><td>97014-816</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원뿔형 튜브</td><td>현지 공급 업체</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>6cm 페트리 플레이트&nbsp;</td><td>현지 공급 업체</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>한천 세균</td><td>Din&acirc; 운모 Qu&iacute; 운모 컨템포러&acirc; 네아 Ltda.</td><td>9002-18-0</td><td></td></tr><tr><td>C. elegans Bristol N2 (야생형)</td> <td>Caenorhabditis elegans Genetic Center (CGC, Minnesota, USA)</td> <td>-</td><td></td></tr><tr><td>CaCL2</td><td>Din&acirc; 운모 Qu&iacute; 운모 컨템포러&acirc; 네아 Ltda.</td><td>10035-04-8</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테롤</td><td>시그마-알드리치 브라질 Ltda</td><td>57-88-5</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-글루코스 무수&nbsp;</td><td>Neon</td><td>50-99-7</td><td></td></tr><tr><td>증류 H2O</td><td>현지 공급 업체</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Erioglaucine disodium salt</td><td>Sigma-Aldrich Brasil Ltda</td><td>3844-45-9</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli OP50</td><td>Caenorhabditis elegans Genetic Center (CGC, Minnesota, USA)</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>플로우 후드</td><td>Mylabor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>북미 Panasonic 헬스케어 회사, MIR-254-PA.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>딘&acirc; 운모 Qu&iacute; 운모 컨템포러&acirc; 네아 Ltda.</td><td>7778-77-0</td><td></td></tr><tr><td>레바미솔 염산염</td><td>RIPERCOL L 150F-Lugol</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>솔루션</td><td>Sigma-Aldrich Brasil Ltda</td><td>L6146</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Synth</td><td>S1063-01-AH</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기</td><td>원심분리기 5425R Eppendorf SE, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Din&acirc; 운모 Qu&iacute; 운모 컨템포러&acirc; 네아 Ltda.</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>딘&acirc; 운모 Qu&iacute; 운모 컨템포러&acirc; 네아 Ltda.</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Nystatin</td><td>Sigma-Aldrich Brasil Ltda</td><td>N6261</td><td></td></tr><tr><td>펩톤 세균학적</td><td>&ecirc; xodo cient&iacute; fica</td><td>91079-38-8</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Leica S8 Apo 실체현미경 (S&atilde; o 파울루, 브라질)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>스트렙토마이신 설페이트</td><td>Estreptomax</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

예쁜꼬마선충(caenorhabditis elegans)의 글리코겐 축적 및 장 무결성을 시각화하기 위한 저비용 염료 사용

Using Low-Cost Dyes to Visualize Glycogen Accumulation and Gut Integrity in Caenorhabditis elegans

글리코겐 함량 분석은 글리코겐 합성 또는 분해에 영향을 줄 수 있는 다양한 균주에 대한 비교 연구와 같은 다양한 테스트 조건을 스크리닝하기 위한 강력하고 신속한 방법을 제공합니다. 이 연구에서 L4 웜은 단식, 섭식, 포도당이 풍부한 그룹의 세 가지 뚜렷한 테스트 조건을 받았습니다. 분석은 세 번 수행되었으며 각 분석에서 각 조건이 두 번 복제되었습니다. 대표 이미지가 그림 3에 표시되어 있습니다. 각 분석 후, Lugol의 요오드 용액으로 염색된 웜을 실체현미경을 사용하여 관찰하고, 웜의 염색과 관련하여 그룹 간에 정성적 비교를 수행했습니다. 육안 관찰 측면에서, 공복 그룹(굶주림)의 기생충은 E. coli OP50(일반)을 먹인 지렁이와 E . coli OP50 및 D-glucose(고포도당)를 먹인 지렁이에 비해 덜 강렬한 얼룩을 보였습니다. 또한 E. coli OP50 및 D-glucose(고포도당)를 먹인 벌레는 가장 강렬한 염색을 나타냈습니다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66084/66084fig03.jpg"> 그림 3: 글리코겐 함량 분석의 대표 이미지. 예쁜꼬마선충(C. elegans )의 글리코겐 수치는 요오드 염색을 통해 평가되었습니다. 현미경 이미지는 대표적인 예쁜꼬마선충(C. elegans worms)이 48시간 동안 (A) 굶주림, (B) 규칙적인 또는 (C) 고혈당 조건에 노출된 것을 묘사합니다. 웜을 Lugol의 요오드/M9 완충액(1%)에 5분 동안 담가 1.4단계에서 자세히 설명한 절차에 따라 염색했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/66084fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
장 투과성 결과는 장이 온전한 어린 기생충(L4)과 노화로 인해 장막이 손상된 늙은 기생충(성충 7일째)의 염색 차이를 보여줍니다(그림 4). 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 장은 소화와 신진대사에 중요한 역할을 하고 스트레스 반응과 노화 조절을 위한 신호 센터 역할을 하기 때문에 건강에 매우 중요한 조직이다21. 어린 벌레에서 예쁜꼬마선충(C. elegans)의 장은 장 내용물의 누출을 방지하는 강력한 장벽으로 구성되어 있습니다. 그러나 이러한 벌레가 나이가 들어감에 따라 장 장벽 기능이 감소하고 세포와 미세 융모의 점진적인 분해와 노화 장에 박테리아가 축적되어 파괴에 더 민감해집니다21,22. 어린 예쁜꼬마선충(C. elegans)이 염료인 에리오글라우신 디소듐 염(Erioglaucine disodium salt)을 섭취하면 선충의 장이 염색됩니다(그림 4A). 반면에, 노화된 지렁이는 염료의 유출을 나타내어 지렁이의 몸 전체에 침투하는 것을 관찰할 수 있으며, 이는 장막의 손상을 나타냅니다(그림 4B).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66084/66084fig04.jpg"> 그림 4: 예 쁜꼬마선충(C. elegans )이 에리오글라우신 디소듐 염으로 염색한 대표 이미지. 현미경 이미지는 장이 손상되지 않은 예쁜꼬마선 충(L4기)과 장이 파열된 기생충(성체 7일 째)을 보여줍니다. 웜을 2.2.4 단계에 따라 25 % Erioglaucine 디 소듐 염 용액에 3 시간 동안 담가 염색 하였다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/66084fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 1: 예쁜꼬마선충 윤곽을 선택하기 위한 ImageJ 스크린샷. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/Supplementary%20Figure%201_RE.png" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 2: 평균 계산을 위한 ImageJ 스크린샷. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/Supplementary%20Figure%202_RE.png" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 표 1: 배지, 완충액 및 배양 레시피. 현재 프로토콜에 사용되는 다양한 미디어, 버퍼 및 문화권의 구성입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/Supplementary%20Table%201_RE.xlsx" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 1: 웜의 글리코겐 함량을 정량화하기 위한 ImageJ 소프트웨어에 대한 자세한 설명입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66084/Supplementary%20File%202_NEW.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)의 글리코겐 축적 및 장 무결성을 시각화하기 위한 저비용 염료 사용

Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a transparent, non-parasitic nematode with a simple biology, which makes it a great tool for biological sciences ...

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우리는 사는 표피를 시각화하는 방법을...

의 시각화 Caenorhabditis Elegans</emLipophilic 바이탈 염료, DiI를 사용하기> 표피 구조

여기에서는 고정되고 손상되지 않은 선충에서 게놈 DNA를 시각화하는 데 사용되는 기술에 대해 설명합니다. 이 비디오에는 수정되지 않은 예쁜꼬마선충 난모세포에서 염색질을 계수하는 프로토콜의 예가 포함되어 있습니다.

에탄올 고정 및 DAPI 염색: 예쁜꼬마선충에서 DNA를 시각화하는 방법

우리는 공부에 대한 강력한 생화학 및 미세 방법을...

에서 지방 질량의 생화학 및 높은 처리량 미세 평가<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

골격 근육은 운동을 위해 필수적이며, 몸의 주요 단백질 저장소입니다. C. elegans의 내 근육 건강 측정이 설명되어 있습니다. 근육의 구조와 기능에 대한 전향 적 변화는 지역화 된 GFP 및 양이온 성 염료를 사용하여 평가됩니다.

방법은 근육의 세포 내 구획을 평가하기 위해 C. 엘레

C. 선 충 pH에 민감한 중요 한 염료 5 (6)-카-를 사용 하 여 2', 7'-dichlorofluorescein diacetate (cDCFDA)의 소장에 lysosomal 산의 손실을 조사 하는 단계별...

라이브 창 꼬마 선 충 에 Lysosomal Alkalinization 평가

우리는 수정 된 소규모 추출 및 젖 산 염 그리고 pyruvate는 선 충 류에서의 색도계 분석 실험 설명 C. 선 충. 상업적인 분석 키트를 이용 하는 때 그들의 감도 정확도의 기술 개발이 중요 합니다. 추출 강 수 단백질은 세포내 대사 산물의 양적 결정에 대 한 가장 중요 한 단계 이다.

소규모 색도계 분석 실험의 세포내 젖이 나올와 꼬마 선 충 의 선 충 Pyruvate

이 프로토콜 열 스트레스 단백질 핵 전 좌는 녹색 형광 단백질 (GFP) 퓨전 단백질 마커로 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)를 사용 하 여 추적 하는 방법을 보여 줍니다 얼룩. 프로토콜을 얼룩이 DAPI 빨리 고 GFP 단백질 subcellular 지 방화 신호 유지.

녹색 형광 단백질 태그와 4', 6-Diamidino-2-phenylindole 꼬마 선 충 에 얼룩이 단백질 Subcellular 지 방화를 감지

이 프로토콜에서는 고체 미디어 꼬마 선 충 의 대규모 재배 하는 방법을 설명합니다. 액체 문화 하는 대신,이 프로토콜 플레이트 기반 재배 아래 다른 비늘의 매개 변수를 얻기 수 있습니다. 액체와 고체 미디어 문화 형태학 및 대사 차이 생략 하 여 결과의 comparability를 늘어납니다.

꼬마 선 충의 대규모 재배 플레이트 기반: 당뇨병에서 대사 변경의 연구에 대 한 샘플 준비

이 프로토콜은 예쁜꼬마선충의장 투과성을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 장 내 박테리아와 숙주 간의 상호 작용과 관련된 장 건강에 대한 기본 생물학적 연구와 새는 장 증후군 및 염증성 장 질환을 치료하는 프로바이오틱 및 화학 약제 식별 스크리닝에 유용합니다.

케노하브디티스 예쁜꼬마선충의 장 내 침투성에 대한 박테리아와 화학물질의 영향 측정

여기에서, 선충류 예쁜꼬마선충에서의 단백질 응집 동역학의 분석을 위한 방법이 제시 된다. 연령 동기화 된 집단의 동물은 서로 다른 시점에서 이미지화되고 CellProfiler에서 반자동 포함 계수가 수행되고 AmyloFit의 수학적 모델에 적합합니다.

Caenorhabditis elegans에서 자동 포함 계수를 사용하여 생체 내에서 단백질 응집 동역학 모니터링

배우세요 Caenorhabditis elegans를 이용한 저비용 염료 기반 글리코겐 축적 및 장 무결성 분석법. 요오드 염색과 푸른 염료를 활용하여 대사 과정과 노화를 시각적으로 관찰하는 생물학 교육용 실험 기법입니다.

예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)의 글리코겐 축적 및 장 무결성을 시각화하기 위한 저비용 염료 사용

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