Name: 현미경 검사의 도움을 받은 병기 간절제술 절차를 위한 연관 간 분할 및 문맥 결찰의 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 배우세요 ALPPS 수술 기법을 이용한 간 재생 메커니즘 연구 방법을 PMX 마우스 모델에서. 단일세포 시퀀싱과 CRISPR 기술로 Gata3 및 Ramp2 균형과 새로운 세포 유형을 분석하여 임상 결과를 개선합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>단계적 간절제술을 위한 동물 모델에서 ALLPS의 간 재생 연구

<ol><li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+Biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: Biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 18 (1), 40-55 (2021).</li>
<li>Chapelle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+future+remnant+liver+function+is+a+better+tool+to+pr+edict+post-hepatectomy+liver+failure+than+platelet-based+liver+scores%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Estimation of the future remnant liver function is a better tool to pr edict post-hepatectomy liver failure than platelet-based liver scores.</a> Eur J Surg Oncol. 43 (12), 2277-2284 (2017).</li>
<li>Isfordink, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+vein+ligation+versus+portal+vein+embolization+for+induction+of+hypertrophy+of+the+future+liver+remnant%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Portal vein ligation versus portal vein embolization for induction of hypertrophy of the future liver remnant: A systematic review and meta-analysis.</a> Surg Oncol. 26 (3), 257-267 (2017).</li>
<li>Linecker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+adjustment+in+alpps+is+associated+with+a+dramatic+decrease+in+ear+ly+mortality+and+morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Risk adjustment in alpps is associated with a dramatic decrease in ear ly mortality and morbidity.</a> Ann Surg. 266 (5), 779-786 (2017).</li>
<li>Darnis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtotal+hepatectomy+in+swine+for+studying+small-for-size+syndrome+and+portal+inflow+modulation%3A+Is+it+reliable%5BTitle%5D)+AND+%22HPB+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Subtotal hepatectomy in swine for studying small-for-size syndrome and portal inflow modulation: Is it reliable.</a> HPB (Oxford). 17 (10), 881-888 (2015).</li>
<li>Casellas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+mouse+strains+and+genetic+stability%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">Inbred mouse strains and genetic stability: A review.</a> Animal. 5 (1), 1-7 (2011).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepatectomy+from+2012+to+2021%3A+A+bibliometric+analysis.+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Evolution of associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy from 2012 to 2021: A bibliometric analysis. Review.</a> Int J Surg. 103, 106648(2022).</li>
<li>Parola, M., Pinzani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+fibrosis%3A+Pathophysiology%2C+pathogenetic+targets+and+clinical+iss+ues%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Liver fibrosis: Pathophysiology, pathogenetic targets and clinical iss ues.</a> Mol Aspects Med. 65, 37-55 (2019).</li>
<li>Kikuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+associating+liver+partition+and+portal+vein+occlusion+for+st+aged+hepatectomy+on+tumor+growth+in+a+mouse+model+of+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Impact of associating liver partition and portal vein occlusion for st aged hepatectomy on tumor growth in a mouse model of liver metastasis.</a> Eur J Surg Oncol. 44 (1), 130-138 (2018).</li>
<li>Schlegel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpps%3A+From+human+to+mice+highlighting+accelerated+and+novel+mechanism+s+of+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Alpps: From human to mice highlighting accelerated and novel mechanism s of liver regeneration.</a> Ann Surg. 260 (5), 839-846 (2014).</li>
<li>Dili, A., Lebrun, V., Bertrand, C., Leclercq, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepate+ctomy%3A+Establishment+of+an+animal+model+with+insufficient+liver+remnan+t%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Associating liver partition and portal vein ligation for staged hepate ctomy: Establishment of an animal model with insufficient liver remnan t.</a> Lab Invest. 99 (5), 698-707 (2019).</li>
<li>Schadde, E., Hertl, M., Breitenstein, S., Beck-Schimmer, B., Schläpfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+the+associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepatectomy+%28alpps%29+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rat model of the associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy (alpps) procedure.</a> J Vis Exp. (126), e55895(2017).</li>
<li>Allaire, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+frontiers+in+liver+resection+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22JHEP+Rep%22%5BJournal%5D)">New frontiers in liver resection for hepatocellular carcinoma.</a> JHEP Rep. 2 (4), 100134(2020).</li>
<li>Memi, F., Ntokou, A., Papangeli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crispr%2Fcas9+gene-editing%3A+Research+technologies%2C+clinical+applications+and+ethical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Crispr/cas9 gene-editing: Research technologies, clinical applications and ethical considerations.</a> Semin Perinatol. 42 (8), 487-500 (2018).</li>
<li>Saviano, A., Henderson, N. C., Baumert, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+genomics+and+spatial+transcriptomics%3A+Discovery+of+novel+cell+states+and+cellular+interactions+in+liver+physiology+and+disease+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Single-cell genomics and spatial transcriptomics: Discovery of novel cell states and cellular interactions in liver physiology and disease biology.</a> J Hepatol. 73 (5), 1219-1230 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>5% 포도당 주사(500mL)</td><td>Shapuaisi 제약(http://www.zjspas.com/)</td><td>H20003666</td><td>효율적이고 저렴하며 접근하기 쉬운</td></tr><tr><td>마취기</td><td>RWD(www.rwdls.com)</td><td>R500</td><td>저렴한 가격과 귀중한 품질. 초보자</td></tr><tr><td>작업에 적합합니다 C57 BL/6</td><td>The Jackson Lab</td><td>22349-2023</td><td>균주의 안정성</td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>KCSW (kcsw.szqisoubao.com)</td><td>H19980141</td><td>내구성, 비용 효율적인</td></tr><tr><td>meloxicam</td><td>Boehringer-Ingelheim</td><td>H20020217</td><td>내구성 및 효율적인</td></tr><tr><td>마이크로펜치</td><td>60018920</td><td></td><td>내구성 및 효율성</td></tr><tr><td>microinstrument</td><td>CH microsurgical instrument 공장</td><td>HC-A804-1</td><td>내구성, 비용 효율적인</td></tr><tr><td>젖산 나트륨 ringer</td><td>Shapuaisi 제약 (http://www.zjspas.com/)</td><td>H20193277</td><td>효율적이고 저렴하며 접근하기 쉬운</td></tr><tr><td>봉합사 라인</td><td>CH microsurgical instrument 공장</td><td>6-0/8-0</td><td>고성능 가격 비율</td></tr><tr><td>국소 항체</td><td>chenxin 약리학 ( www.cisen-pharma.com)</td><td>H20020217</td><td>절개 감염을 효과적으로 방지</td></tr></tbody></table>

현미경 검사의 도움을 받은 병기 간절제술 절차를 위한 연관 간 분할 및 문맥 결찰의 마우스 모델

A Mouse Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy Procedure Aided by Microscopy

PVL(프로토콜 단계 2,3,4 및 5)과 대조적으로, ALPPS(단계 2,3,4,5 및 6) 외과적 개입을 받은 마우스는 세포 증식에 대한 높은 경향을 보여주었습니다. 그림 2 는 ALPPS와 PVL의 주요 차이점인 간 절개 중 시야와 함께 문맥 결찰 후 중간 간엽의 허혈성 경계를 나타냅니다. 특히, 간 조직 내 종양괴사인자-α(TNF-α), 인터류킨, 간성장인자(HGF)를 포함한 염증 매개체의 수치가 PVL 그룹에서 관찰된 수치를 능가합니다. 이는 그림 4C 에서 볼 수 있듯이 ALPPS 그룹은 PVL 그룹보다 IL-6 수치가 높았으며, 이는 염증이 빠른 간 재생에 관여할 수 있음을 시사합니다. 이러한 연구 결과를 더욱 입증하기 위해, 간 대 체중 비율과 수술 후 2일 후 간 조직 내에서 세포 증식의 널리 알려진 지표인 ki67의 발현 수준에 대한 비교 분석이 수행되었습니다. 그림 4A, B 및 그림 5 는 ALPPS 그룹의 간이 향상된 증식 능력을 보여준다는 것을 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig01.jpg"> 그림 1: 수술 기구 및 소모품. (A) 1: 절개를 위한 국소 항생제; 2: 6-0, 8-0 외과 봉합사; 3 : 지혈 젤라틴 스폰지. (B) 1 : 가위와 2 : 바늘 홀더는 복강의 절개 및 봉합에 사용됩니다. (C) 현미경 시술은 1 : 가위, 2 : 겸자, 3, 4 : 해부 겸자, 5 : 복부 견인기를 사용해야합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig02.jpg"> 그림 2: 간 수술 절차. (A) 문맥 결찰 및 절개. 1, 2, 3의 순차적 결찰은 중엽 내의 간 실질의 세심한 분할과 동시에 꼼꼼하게 실행됩니다. (B) 중간 엽의 경계선은 흰색 점선의 존재로 시각적으로 묘사됩니다. (C) 현미경 검사 후, 간은 묘사된 허혈 경계를 따라 꼼꼼하게 절개됩니다. 약어: RLL = 우측엽; Love My Life = 왼쪽 중엽; LLL = 좌측 외측엽; RML = 우측 정중엽. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig03.jpg"> 그림 3: 문맥 결찰술. (A) 우측 외측엽의 문맥 결찰; 점선 영역은 결찰된 RLL에 해당합니다. (B) 좌측 중간 엽과 좌측 외측엽의 문맥 결찰; 점선 영역은 문맥 가지의 결찰을 위한 입구를 나타냅니다. (C) 점선 영역은 결찰된 love my life 및 LLL에 해당합니다. (D) 미상엽(caudate lobe)의 문맥 결찰(portal vein ligation); 점선 영역은 생리학적으로 관류된 오른쪽 중간 엽을 묘사하는 반면, 화살표는 간 실질 내에 조심스럽게 자리 잡은 미상엽의 문맥 가지를 구분합니다. 약어: RLL = 우측엽; Love My Life = 왼쪽 중엽; LLL = 좌측엽. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig04v2.jpg"> 그림 4: ALPPS와 PVL 간의 첫 주 동안 미래 간 잔여물, 운동 성장 비율, 생존율 및 혈장 ALT의 비교. (A) FLR은 수술 후 PVL 그룹과 PVL+T 그룹에서 평가되었습니다. (B) KGR은 일당 LMR/체중 비율의 증가로 평가되었습니다. ALPPS 그룹의 KGR은 수술 후 2일 이내에 급격히 증가한 후 점차 감소했지만 여전히 PVL 그룹보다 높았습니다. (C) PVL과 ALPPS 사이의 플라즈마 IL-6. (D) PVL 및 ALPPS 후 생존 곡선. (E) PVL과 ALPPS 사이의 플라즈마 AST. 약어: FLR = 미래 간 잔여물; PVL = 문맥 결찰; PVL + T = 문맥 결찰 + 횡단; KGR = 운동 성장 비율; LMR = 왼쪽 ; ALPPS = 단계적 간절제술을 위한 간 분할 및 문맥 결찰 연관; ALT = 알라닌 아미노전이효소. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig04largev2.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig05.jpg"> 그림 5: 문맥 결찰술 또는 결합 절개 후 간 재생의 마커 및 형태. (A) 가짜 수술 그룹, PVL 그룹 및 PVL+T 그룹에서 수술 2일 후 간 형태를 평가했습니다. 묘사 된 영역은 재생 된 간엽을 의미합니다. 눈금 막대 = 1cm. (B) 형광 염색은 간의 뚜렷한 수술 코호트에서 이질적인 수준의 세포 증식을 드러냈습니다. 눈금 막대 = 100 μm, ***P &lt; 0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig06.jpg"> 그림 6: ALPPS 후 문맥에서 중심 정맥까지의 HE 이미지. (A) 0일에서 2일까지 염색된 ALPPS HE의 간. (B) 3 일에서 7 일까지의 HE 염색. 눈금 막대 = 100 μm. 약어: HE = 헤마톡실린 및 에오신; ALPPS = 단계적 간절제술을 위한 간 분할 및 문맥 결찰 연관. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Hepatectomy is widely regarded as the primary treatment for hepatic malignancies; yet, postoperative liver failure remains a major cause of perioperative ...

a-mouse-model-associating-liver-partition-portal-vein-ligation-for

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 포털 깡패 폐색에 대한 교수형 체중 시스템의 소설 murine 모델을 설립했습니다. 이 기술은 murine 간장 모델에서 국소 빈혈의 향후 수사 유용할 수 있습니다.

마우스의 간 국소 빈혈에 대한 교수형 - 체중 시스템의 사용

이 비디오는 장기의 안정화 후 다광자 현미경을 사용하여 마우스 간 조직의 혈관 내 역학을 관찰하고 연구하는 이미징 절차를 설명합니다. 다광자 현미경 검사는 생체 내에서 높은 공간 해상도로 생물학적 조직을 이미징할 수 있습니다.

다광자 현미경 기반 혈관 시각화를 위한 이미징 픽스처 지원 마우스 간 스테이징: 마우스 간 혈관의 다차원 이미지를 얻기 위한 안정화 장치 보조 이미징 기술

혈관 재생을 시각화하는 데 사용되는 도구에는 혈관 나무를 대조하는 방법이 필요합니다. 이 필름은 혈관 나무의 최적 대비를 달성하는 데 사용되는 섬세한 주입 기술을 보여주고 μCT 및 조직학적 연속 절편을 사용하여 결과 표본의 자세한 분석으로 인한 잠재적 이점을 설명했습니다.

일반 마우스의 70 % 부분 간 절제술 후 혈관 및 실질 재생의 시각화

상연 hepatectomy에 대 한 연결 간 파티션 및 포털 정 맥 결 찰을 사용 하 여 빠른 간 비 대를 유도 (ALPPS) 경계선 불과하다 간 종양의 절제에 대 한 제안 되었습니다. 이 모델 급속 한 비 대에 관여 하는 메커니즘을 명료 하 고 홍보 또는 중생의 가속을 차단 하는 약물의 테스트 있습니다.

연결 간 파티션과 무대 Hepatectomy (ALPPS) 절차에 대 한 포털 정 맥 결 찰의 쥐 모델

여기, 선물이 간 부상 및 설치류에서 중생의 외과 모델로 부분 담 관 결 찰.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

현재 프로토콜은 비알코올성 지방간염(NASH) 동안 세포외 기질(ECM) 리모델링의 역학을 시각화하기 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼을 구축하기 위해 간 상피내 관류/탈세포화 및 이광자 현미경 방법을 최적화합니다.

비알코올성 지방간염 마우스 모델에서 간 세포외 기질의 3D 이미징

여기에서 우리는 간동맥 결찰을 포함하거나 포함하지 않는 동소 간세포 암종 이종이식편을 만들고 [18 F]플루오로미소니다졸([18 F]FMISO) 및 [18F]플루오로데옥시글루코스([18F]FDG).

간세포 암종의 동소 마우스 모델에서 비침습적 PET/MR 이미징

우리는 담도 폐쇄증(BA)에 대한 바이러스 유발 간 섬유증 기계론적 연구에 적합한 동물 모델과 향후 BA 치료를 위한 플랫폼을 제공하는 만성 간 섬유증의 마우스 모델을 확립했습니다.

담도 폐쇄증 연구를 위한 만성 간 섬유증의 마우스 모델

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

부분 2/3(66%) 간절제술의 마우스 모델은 문헌에 잘 설명되어 있지만, 간 이식 후 소형 증후군을 모방한 더 확장된 간절제술은 거의 사용되지 않았습니다. 우리는 건강한 마우스에서 약 50%의 수술 후 치사율을 초래하는 마우스 모델에서 확장된 78% 간 절제술 절차에 대해 설명합니다.

마우스 수술 모델에서 확장된 78% 간절제술

이 프로토콜은 간별 세포 형태를 온전한 간 조직에서 시각화하고 모델링하기 위한 포괄적인 영상 파이프라인을 제공합니다. 이 접근법은 마우스 유전학을 이용한 형광 표 지, 현장 간 관류 기반 조직 준비, 그리고 광학 투명성을 달성하기 위한 수정된 iDISCO 조직 클리어링 방법을 결합합니다.

간 섬유증 마우스 모델에서 간 별형 세포 형태 매핑

배우세요 ALPPS 수술 기법을 이용한 간 재생 메커니즘 연구 방법을 PMX 마우스 모델에서. 단일세포 시퀀싱과 CRISPR 기술로 Gata3 및 Ramp2 균형과 새로운 세포 유형을 분석하여 임상 결과를 개선합니다.

현미경 검사의 도움을 받은 병기 간절제술 절차를 위한 연관 간 분할 및 문맥 결찰의 마우스 모델

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