Name: Culture Dish Coating을 위한 성인 인간 섬유아세포의 심장 세포외 기질 생산 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-22T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: 학습하세요 성인 인간 심장 섬유아세포를 이용한 심장 세포외 기질 생산 방법을 통해 세포-기질 상호작용을 연구하고 생체유사 조공학 발전에 기여하는 기술을 확인하세요.

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<meta charset="utf8"></head><body>세포 배양을 위한 심근 모방 추가 세포 기질 생성

<ol><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix%3A+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochim Biophys Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+extracellular+matrix+coatings+for+the+promotion+of+cell+proliferation+and+maintenance+of+cell+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific extracellular matrix coatings for the promotion of cell proliferation and maintenance of cell phenotype.</a> Biomaterials. 30 (23-24), 4021-4028 (2009).</li>
<li>Xing, H., Lee, H., Luo, L., Kyriakides, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-derived+biomaterials+in+engineering+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-derived biomaterials in engineering cell function.</a> Biotechnol Adv. 42, 107421(2020).</li>
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<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10 (5), e019338(2021).</li>
<li>Castaldo, C., Chimenti, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+progenitor+cells%3A+The+matrix+has+you%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiac progenitor cells: The matrix has you.</a> Stem Cells Transl Med. 7, 506-510 (2018).</li>
<li>Nurzynska, D., Iruegas, M. E., Castaldo, C., Müller-Best, P., Di Meglio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+biotechnology+in+myocardial+regeneration-tissue+engineering+triad%3A+cells%2C+scaffolds%2C+and+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Application of biotechnology in myocardial regeneration-tissue engineering triad: cells, scaffolds, and signaling molecules.</a> Biomed Res Int. 2013, 236893(2013).</li>
<li>Giacca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+regeneration+after+myocardial+infarction%3A+An+approachable+goal%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cardiol+Rep%22%5BJournal%5D)">Cardiac regeneration after myocardial infarction: An approachable goal.</a> Curr Cardiol Rep. 22 (10), 122(2020).</li>
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<li>Souders, C. A., Bowers, S. L., Baudino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast%3A+The+renaissance+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast: The renaissance cell.</a> Circ Res. 105 (12), 1164-1176 (2009).</li>
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<li>Hellewell, A. L., Rosini, S., Adams, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid%2C+scalable+method+for+the+isolation%2C+functional+study%2C+and+analysis+of+cell-derived+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Rapid, scalable method for the isolation, functional study, and analysis of cell-derived extracellular matrix.</a> J Vis Exp. (119), e55051(2017).</li>
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<li>Pagano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+versus+pathological+cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+differentially+modulates+cardiosphere-derived+cell+paracrine+properties+and+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Normal versus pathological cardiac fibroblast-derived extracellular matrix differentially modulates cardiosphere-derived cell paracrine properties and commitment.</a> Stem Cells Int. 2017, 7396462(2017).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+regulates+the+profibrotic+activity+of+fibroblasts+in+in+vitro+replica+settings+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Vitamin C regulates the profibrotic activity of fibroblasts in in vitro replica settings of myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 8379(2023).</li>
<li>Jaffré, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+angiotensin+receptors+in+cardiac+fibroblasts+coregulate+adrenergic-dependent+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Serotonin and angiotensin receptors in cardiac fibroblasts coregulate adrenergic-dependent cardiac hypertrophy.</a> Circ Res. 104 (1), 113-123 (2009).</li>
<li>Błyszczuk, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+cardiac+fibroblasts+control+contraction+of+human+fibrotic+cardiac+microtissues+by+a+%CE%B2-adrenoreceptor-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Activated cardiac fibroblasts control contraction of human fibrotic cardiac microtissues by a β-adrenoreceptor-dependent mechanism.</a> Cells. 9 (5), 1270(2020).</li>
<li>Duval, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+physiological+events+in+2D+vs.+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol%22%5BJournal%5D)">Modeling physiological events in 2D vs. 3D cell culture.</a> Physiol. 32 (4), 266-277 (2017).</li>
<li>Ungerleider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+characterization+of+injectable+hydrogels+derived+from+decellularized+skeletal+and+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Fabrication and characterization of injectable hydrogels derived from decellularized skeletal and cardiac muscle.</a> Methods. 84, 53-59 (2015).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+heart+ECM+hydrogel+using+supercritical+carbon+dioxide+for+improved+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Decellularized heart ECM hydrogel using supercritical carbon dioxide for improved angiogenesis.</a> Acta Biomater. 67, 270-281 (2018).</li>
<li>Liguori, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biomechanical+clues+from+cardiac+tissue+decellularized+extracellular+matrix+drive+stromal+cell+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biomechanical clues from cardiac tissue decellularized extracellular matrix drive stromal cell plasticity.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8, 520(2020).</li>
<li>Silva, A. C., Pereira, C., Fonseca, A. C. R. G., Pinto-do-Ó, P., Nascimento, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bearing+my+heart%3A+The+role+of+extracellular+matrix+on+cardiac+development%2C+homeostasis%2C+and+injury+response%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Bearing my heart: The role of extracellular matrix on cardiac development, homeostasis, and injury response.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 621644(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1L 실험실 병&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td>사용 전에 청소하고 오토클레이브</td></tr><tr><td>10 mL 혈청학적 피펫</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td>멸균,&nbsp; 폴리스티렌</td></tr><tr><td>100 mm 유리판&nbsp;</td><td>VWR</td><td>391-0578</td><td>사용 전 세척 및 오토클레이브</td></tr><tr><td>100mm 플레이트</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td>처리된 멸균 세포 배양 접시</td></tr><tr><td>15mL 멸균 튜브</td><td>Falcon</td><td>352097</td><td>원심분리기 멸균 튜브, 폴리프로필렌</td></tr><tr><td>22mm x 22mm 커버 안경</td><td>VWR</td><td>631-1570</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>25mL 혈청학적 피펫</td><td>Falcon</td><td>357525</td><td>멸균, &nbsp; 폴리스티렌</td></tr><tr><td>250 mL 실험실 병&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1593</td><td>사용 전 세척 및 오토클레이브</td></tr><tr><td>35mm 플레이트</td><td>Falcon</td><td>353001</td><td>처리된 멸균 세포 배양 접시</td></tr><tr><td>5mL 혈청학적 피펫</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td>멸균, 폴리스티렌</td></tr><tr><td>50mL 멸균 튜브</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td>원심분리기 멸균 튜브, 폴리프로필렌</td></tr><tr><td>500mL 실험실 병</td><td>VWR</td><td>215-1594</td><td>깨끗하고 사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>60mm 플레이트</td><td>Falcon</td><td>353004</td><td>처리된 멸균 세포 배양 접시</td></tr><tr><td>수산화암모늄(NH4OH)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>338818</td><td>Liquid</td></tr><tr><td>일회용 메스</td><td>VWR</td><td>233-5526</td><td>멸균 및 일회용</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>D6429-500ml</td><td>2-8 &deg에 저장; C; 빛에 노출을 피하십시오</td></tr><tr><td>소 태아 혈청 (FBS)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>F9665-500ml</td><td>-20°C에서 보관하십시오. 세럼은 더 작은 작업 볼륨으로 분주해야 합니다</td></tr>. <tr><td>미세 집게</td><td>VWR</td><td>232-1317</td> 사용 전 돼지 피부에서 추출한 젤라틴 세척 <td>및 오토클레이브</td></tr><tr><td></td><td>Sigma- Aldrich</td><td>G1890-100G</td><td>상업용 분말</td></tr><tr><td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>H1387-1L</td><td>분말</td></tr><tr><td>대형 수술용 가위</td><td>VWR</td><td>233-1211</td><td>깨끗하고 사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>미세 해부 가위&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S3146</td> 사용 전에 페니실린과 스트렙토마이신을 <td>청소하고 오토클레이브</td></tr><tr><td>;</td><td>시그마- 알드리치</td><td>P4333-100ml</td><td>-20°C에 보관합니다. 솔루션&nbsp; 더 작은 작업 볼륨으로 분주해야 합니다</td></tr>: <tr><td>칼륨 클로라이드</td><td>시그마- 알드리치</td><td>P9333</td><td>파우더</td></tr><tr><td>포타슘 포스페이트 단일염기</td><td>성 시그마- 알드리치</td><td>P5665</td><td>파우더</td></tr><tr><td>소듐 클로라이드&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S7653</td><td>파우더</td></tr><tr><td>소듐 인산염 이염기성</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>94046</td><td>파우더</td></tr><tr><td>Stericup 필터</td><td>Millipore</td><td>S2GPU05RE</td><td>멸균 및 일회용 0.22 mm 필터 멤브레인&nbsp;</td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마- 알드리치</td><td>9002-93-1</td><td>액체</td></tr><tr><td>트립신-EDTA</td><td>시그마- 알드리치</td><td>T4049-100ml</td><td>-20 >C. 더 작은 작업량으로 나누어 분주해야 합니다</td></tr></tbody></table>

culture dish coating을 위한 성인 인간 섬유아세포의 심장 세포외 기질 생산

Production of Cardiac Extracellular Matrix from Adult Human Fibroblasts for Culture Dish Coating

배양물에 배치된 천연 심근의 작은 조각에서 섬유아세포의 성장은 3-5일 이내에 관찰되었습니다(그림 1).
그 후 며칠 동안, 섬유아세포의 수는 계속 증가했는데, 이는 아마도 심장 조직 표본의 지속적인 성장과 접시 표면에서 이동된 섬유아세포의 증식 때문일 수 있습니다. 메스를 사용한 기계적 분해에 의해 얻어진 모든 심근 단편이 동일한 시간 내에 동일한 수의 섬유아세포를 생성한다고 기대해서는 안 되며, 그 결과 생성된 조직 단편은 약간 다른 부피와 세포 생존율을 가질 수 있습니다. 특히, 돌출 활성이 확인된 심근 절편은 잔류 및 재도금할 수 있어 섬유아세포 분리를 위해 최소 두 번 사용할 수 있습니다.
섬유아세포는 추가 실험에 사용할 수 있는 세포의 수를 늘리기 위해 여러 통로에 대해 하위 배양할 수 있습니다. 그러나 일단 합류점에 도달하면 섬유아세포는 시험관 내에서 증식을 멈추고 합성 및 분비 활동을 가정하여 세포외 기질을 침착합니다. 후속 탈세포화는 플레이트 표면을 심장 ECM 메쉬로 코팅합니다(그림 2). 섬유아세포 제거 중 도립 위상차 현미경을 사용하여 배양 접시를 육안으로 관찰하는 것은 탈세포화 용액에서 배양 시간을 필요하고 충분한 최소한으로 최소화하는 데 필수적입니다. 배양 중 떠 있는 베일의 존재는 섬유아세포의 단층의 투과 및 분리를 나타내며 탈세포화 용액은 그 직후에 희석하여 제거해야 합니다.
섬유아세포 유래 심장 ECM의 구성은 섬유아세포의 원인에 따라 다릅니다. 우리의 실험에서, 허혈성 심장병증이 있는 인간의 심장과 정상인의 심장에서 분리된 섬유아세포에 의해 생성된 심장 ECM은 단백질 함량이 다르고 원시 심장 세포 증식, 세포 사멸 및 이동에 다른 영향을 미쳤습니다11,12. 탈세포화 과정에서 ECM 단백질 손실이 불가피하지만, 본 프로토콜에 사용된 방법은 시험관 내에서 생산된 심장 ECM의 조성 및 구조를 상당 부분 보존했습니다(그림 3).
이 프로토콜에서는 심방 조직이 사용되었는데, 그 이유는 정상(기증자) 심장과 병리학적(수혜자) 심장 모두에서 얻을 수 있기 때문입니다. 병리학적(수혜자) 심장 전체를 절편하여 연구에 사용할 수 있지만(헬싱키 선언의 원칙에 따라 지역 윤리 위원회의 승인을 받아) 이식 시 기증자의 심장에서 심실 샘플을 얻는 것은 불가능합니다. 이러한 이유로 연구 범위가 정상 상태와 병리학적 조건에서 심장 조직 간의 차이를 조사하는 것이라면 가장 좋은 샘플 소스는 심방벽입니다. 다른 생존 가능한 심장 조직 소스의 가용성에 따라 정상 또는 병리학적 심장의 심방 또는 심실 벽에서 채취한 샘플을 심장 ECM 접시 코팅에 대해 동일한 프로토콜에 따라 사용할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig01.jpg"> 그림 1: 심장 섬유아세포의 분리. 배양 4일(A), 8일(B) 및 12일(C) 후 심근 절편에서 섬유아세포 증식. 스케일 바: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig02.jpg"> 그림 2: 세포외 기질의 탈세포화. 탈세포화 용액에서 약 10초(A), 20초(B), 30초(C), 40초(D), 50초(E) 및 60초(F) 배양 후의 섬유아세포. 스케일 바: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig03.jpg"> 그림 3: 탈세포화 전후의 세포외 기질 조성. III형(A,E) 및 IV형(B,F) 콜라겐, 라미닌(C,G) 및 피브로넥틴(D,H)을 포함한 대표적인 심장 세포외 기질 단백질의 간접 면역형광 염색, 섬유아세포 제거 전(A-D) 및 후(E-H). 세포핵을 DAPI(파란색)로 염색하였다. 눈금자: (A-C,E-G) 50 μm; (D,H) 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>솔루션</td>
			<td colspan="2">용액의 구성</td>
			<td>최종 볼륨</td>
			<td>코멘트</td>
		</tr><tr><td>Hank의 균형 소금 솔루션(HBSS)</td>
			<td colspan="2">상업적으로 구동되는 소금 + 이중 증류 멸균수 + 중탄산나트륨 0.35g</td>
			<td>1개 리터</td>
			<td>여과로 멸균/4°C에서 보관</td>
		</tr><tr><td>Decellularization 솔루션</td>
			<td colspan="2">0.25% 트리톤 X-100 + 10mM NH4OH+ PBS</td>
			<td>50mL</td>
			<td>여과로 멸균/4°C에서 보관</td>
		</tr><tr><td>둘베코의 수정된 독수리 매체(DMEM)</td>
			<td colspan="2">223.75mL DMEM + 25mL 소 태아 혈청 + 1.25mL 페니실린/스트렙토마이신 용액</td>
			<td>250mL</td>
			<td>4 °C에서 보관하십시오</td>
		</tr><tr><td>젤라틴 용액</td>
			<td colspan="2">젤라틴 분말 0.2g + 인산염 완충 식염수 100mL</td>
			<td>100mL</td>
			<td>여과로 멸균/4°C에서 보관</td>
		</tr><tr><td>인산염 완충 식염수(1x PBS)</td>
			<td colspan="2">인산칼륨 0.1g 일염기성 + 염화칼륨 0.1g + 염화나트륨 4.0g + 인산나트륨 0.575g 이염기성 + 이중 증류수 멸균수</td>
			<td>500mL</td>
			<td>여과로 멸균/4°C에서 보관</td>
		</tr><tr><td>트립신 정지 용액(TSS)</td>
			<td colspan="2">소 태아 혈청 5mL + Hank's Balanced Salt Solution 45mL</td>
			<td>50mL</td>
			<td>4 °C에서 보관하십시오</td>
		</tr></tbody></table>표 1: 연구에 사용된 각 용액에 대한 성분 및 각각의 농도.

Culture Dish Coating을 위한 성인 인간 섬유아세포의 심장 세포외 기질 생산

The myocardium is composed of cardiomyocytes and an even greater number of fibroblasts, the latter being responsible for extracellular matrix production. ...

production-cardiac-extracellular-matrix-from-adult-human-fibroblasts

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

기본 마우스 심근 문화는 근원 섬유 조직과 기능의 조사를 위해 중요한 도구 중 하나입니다. 다음 프로토콜은 신생아 마우스 마음에서 차 심근의 격리와 문화를 설명합니다. 얻어진 심근 배양 이후 역학적, 생화학 및 세포 생물학의 다양한 분석을 위해 사용될 수있다.

분리 및 문화 신생아 마우스 심근

이 원고는 표면 마커 발현과 세포 분류를 사용하여 정의된 공학적 심장 조직의 생성을 설명합니다. 그런 다음 정의된 조직을 다중 조직 생물반응기에서 사용하여 심장 세포 치료의 메커니즘을 조사하여 기능적이면서도 제어된 인간 심장 모델 시스템을 제공할 수 있습니다.

정의 인간 공학 심장 조직의 건설 심장 세포 치료의 메커니즘을 연구하는

이 연구에서 우리는 재생 연구에 사용되는 소설, 신생아, 쥐의 심장 발판을위한 방법론을 제공합니다.

신생아 심장 공사장 공중 발판 : 회생 연구 소설 행렬

이 프로토콜의 세포 외 기질 구성 요소를 유지 하면서 인간의 심근의 완전 한 decellularization에 설명 합니다. 더 미와 cytoprotective 자가 조립 하이드로 겔의 생산에서 기질 결과의 처리.

기질 자체 히드로 생체 외에서 그리고 Vivo에서 응용 프로그램에 대 한 조립으로 인간의 심장 조직 처리

심장 세포 외 기질 (ECM) 생활 내내 개장 하는 생리 적 지속 하는 동안 조직 및 장기에서 핵심 프로세스를 조정 하는 분자의 복잡 한 네트워크입니다. 태아 및 성인 심 혼의 표준된 decellularization는 네이티브 아키텍처 및 biomechanical 속성을 포착 하 여 3D 컨텍스트에서 두 조직의 비교 실험 연구를 허용 합니다.

시험관 연구에 대 한 3D 같은 플랫폼으로 태아와 성인 심장 조직 Explants의 비교 Decellularization

이 프로토콜 만족 구조적 무결성 및 동기 박동 동작 3 차원 비 계 없는 심장 조직을 만들 순 형 기반 방법을 설명 합니다.

비 계-무료 3 차원 심장 조직 창조의 그물 형 기반 방법

이 프로토콜의 목표는 재생 비 계 임 플 란 트의 일환으로 전 임상 평가 위한 적당 한 상처 복구에 대 한 대상 전체 기질 섬유의 생산입니다. 이러한 섬유는 빈 섬유 막에 섬유 아 세포의 문화에 의해 생성 하 고 세포 막의 해체에 의해 추출.

희생 빈 섬유 막 세포 배양을 통해 기질 섬유의 생산

The aim of this method is to obtain fibroblast-derived 3D matrices as a natural scaffold for subsequent cellular assays. 섬유아세포는 전처리된 배양판에 씨를 뿌리고 매트릭스 생성을 위한 아스코르브산으로 자극된다. 행렬은 탈세포화되고 관련 세포(예를 들어, 내피 세포)를 배양하도록 차단된다.

섬유 아세포 유래 3D 매트릭스 시스템은 내피 튜브 형성 분석에 적용

본 프로토콜은 인간 유도만능 줄기 세포에서 유래한 심혈관 세포를 포함하는 메쉬 모양의 엔지니어링 된 심장 조직을 생성하여 심장 질환에 대한 세포 이식 요법의 조사를 허용합니다.

생체 내 심근 수리를 위한 인간 iPS 세포에서 파생된 메쉬 모양의 조작된 심장 조직의 준비

여기서, 우리는 미리 분화된 인간 유도만능 줄기 세포 유래 심근세포, 심장 섬유아세포 및 내피 세포로 구성된 3D 자가 조립 심장 미세 조직 배열을 생성하는 사용하기 쉬운 방법론을 기술합니다. 심장 미세 조직을 생성하는 기술을 요구하는 이 사용자 친화적이고 낮은 세포는 질병 모델링 및 약물 개발의 초기 단계를 위해 구현될 수 있습니다.

인간 iPSC 유래 심근세포, 심장 섬유아세포 및 내피 세포를 사용하여 3D 심장 미세 조직 배열의 제조

여기에 제시된 프로토콜은 기계학 연구, 질병 모델링 및 스크리닝 애플리케이션에 적합한 이중 극이 있는 다중 우물 판에서 48개의 조직의 병렬 배양에 대한 엔지니어링 된 결합 조직을 생성하는 프로토콜입니다. 프로토콜은 다른 장기와 종에서 섬유 아세포와 호환되며 인간의 기본 심장 섬유 아세포와 함께 여기에 예시됩니다.

섬유아세포, 선별 애플리케이션을 위한 인간 공학형 결합 조직

학습하세요 성인 인간 심장 섬유아세포를 이용한 심장 세포외 기질 생산 방법을 통해 세포-기질 상호작용을 연구하고 생체유사 조공학 발전에 기여하는 기술을 확인하세요.

Culture Dish Coating을 위한 성인 인간 섬유아세포의 심장 세포외 기질 생산

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