Name: 성장 콘스의 고해상도 이미징을위한 Aplysia에서의 연결을 셀 문화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-20T18:40:00.000+00:00
Duration: 16 min 29 s
Description: 배우세요 Aplysia bag cell 신경원 배양 및 고해상도 성장 콘 이미징 기법을 통해 신경 성장과 유도 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 세포골격 역학 분석에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 해부 비디오 편집과 지원을위한 절차와 로드니 맥페일을 (생물 과학학과, 퍼듀 대학교) 촬영을 위해 라이언 마네리을 (오이스터캐쳐 프로덕션, LLC) 감사드립니다. 수터 실험실 연구는 DMS에 퍼듀 대학에서 NIH (R01 NS049233)와 빈들리 Bioscience 센터에서 기금에 의해 지원됩니다

솔루션 <ul><li> L15 - ASW의 세포 배양 매체 (일리터) <ul><li> L15 가루 1 봉지 </li><li> H 2 O ultrapure 800 ML을 추가 </li><li> NaCl 400 MM </li><li> MgSO 4 27 MM </li><li> MgCl 2 28 MM </li><li> L - 글루타민 4 MM </li><li> Gentamicin 50 μg / ML </li><li> HEPES 5 MM </li><li> 산도 7.9로 조정 </li><li> (precipitates 경우 스톱) 드롭 CaCl 2 9.3 MM을 들러 추가 </li><li> 1리터에 H 2 O ultrapure 추가 </li><li> osmometer (증기압, Wescor # 5520)와 osmolarity (950-1000 mmol / kg)를 확인 </li><li> 긍정적인 압력 여과 장치 (Millipore의 SVGV010RS 필터)를 사용하여 필터 0.22 μm의 </li><li> 최대 1 개월 4 ° C에 보관 </li></ul></li><li> 폴리 - L - 라이신은 (70-150 KD) 200 살균 H 2 O ultrapure에 μg / ML 주식 솔루션은 -20 O C에서 보관 </li><li> 0.5 M MgCl 2 용액 </li></ul> 1 일 : Aplysia 복부 신경절의 해부 효소 분리 솔루션의 준비 <ol><li> Eppendorf 튜브에 : Dispase 효소 (LS02111 워싱턴, 고양이)의 90-10 MG를 달다 </li><li> L15 - ASW 문화 매체 900 μl 및 살균 H 2 O ultrapure 100 μl 추가 </li><li> 실온 (RT)에서 혼합 및 장소 </li></ol> 복부 신경절의 해부 <ol><li> 0.5 M MgCl 2 솔루션으로 50 ML의 주사기를 채우십시오. </li><li> 탱크에서 한 동물을, 동물의 inking 방어 반응을 피하기 위해 부드럽게 처리할 수 있습니다. </li><li> 왼쪽으로 오른쪽, 꼬리쪽으로 절개 보드의 측면에 Aplysia (스티로폼 보드), 주동이의 옆에 놓습니다. </li><li> 그냥 머리 뒤에 동물에 바늘을 삽입하고 뱃속에 모든 MgCl 2 솔루션을 주입. </li><li> 부드럽게 뱃속 내내 MgCl 2 솔루션을 해산하기 위해 동물을 문질러 완전히 anaesthetized하는 동물을위한 몇 분 동안 기다립니다. </li><li> 이 바늘로 해부 보드 동물의 머리와 꼬리를 핀. </li><li> 측면에 큰 열기를 만들기 위해 머리와 꼬리를 향해 큰 가위로 피부와 근육의 계층을 통해 잘라내기, 피부를 리프트에 집게를 사용하십시오. </li><li> 브러시와 같은 난소에서 복부 신경절을 찾아보십시오. 복부 신경절 앞에서 1cm에 대한 연결 신경 잡아 집게를 사용하여, 포셉 보관 위치 앞에와 복부 신경절 뒤에 해부 가위로 신경을 절단. </li><li> 22 Dispase 솔루션 및 15-16 H에 대한 부화에 플레이스 신경절 ° C 온도 제어 물을 욕조를 사용합니다. </li></ol> 일 2 : Aplysia 가방 세포의 도금 폴리 - 라이신 - 코팅 coverslips 준비 <ol><li> 흐름 벤치에서, 4 ML L15 - ASW 매체 각을 작성, 신경절의 해부를 위해 요리를 작업을 피해 3 35mm 배양 접시를 준비합니다. 소화의 15.5 시간 후 작업 요리 중 하나 dispase 솔루션에서 복부 신경절을 전송합니다. </li><li> 포셉 취할 사용하면 산성 - 청소 # 1.5 coverslips (22x22 mm)는 에탄올에 저장된, 알코올을 제거하고 알콜 램프를 통해 간단히 그들을 불타는하여 coverslips을 소독. 문화 요리에 coverslips를 삽입하기 전에 그들이 잠시 더위 좀 식히자. </li><li> 알콜 램프에 비해 노란색 팁 (불꽃은 간단히 플라스틱의 용융을 피하기 위해를!) 굴곡하여 곡선 도금 팁을 준비합니다. </li><li> 무균 H 2 O ultrapure 200 μg / ML 주식 솔루션을 diluting 20 μg / ML - 폴리 리신 솔루션의 적절한 금액을 준비합니다. </li><li> 20 μg / ML - 폴리 리신과 RT에서 20 분에 대해 품어 500 μl 각 coverslip을 커버. </li><li> 500 μl 무균 H 2 O ultrapure 각 각 coverslip 3-5 번 씻으십시오. </li><li> coverslips 물을 제거, L15 - ASW 문화 매체 4 ML 각 요리를 입력합니다. </li></ol> 가방 세포의 분리 <ol><li> 해부 현미경에서 이전에 95 %의 에탄올 (그림 1 라인 1) 청소 이분의 일 사용 해부 가위와 집게의 복부 신경절를 잘라. </li><li> 가방 전지 클러스터 hemiganglion 세포 (그림 1 2 호선) 사이 컷 신경절, 그리고 가방 세포의 반대편에 남아있는 신경 확장 (그림 1 라인 3) 버려야 중 절반에. 한 번에 신경절의 반은 작업, 첫 번째 클러스터의 세포가 도금되는 동안 접시에있는 다른 반쪽을 두십시오. </li><li> 이 포셉 (또는 한 포셉 및 해부 가위), 가방 전지 클러스터를 둘러싼 결합 조직 칼집을 별도로 추진하여 릴리스 가방 셀 클러스터를 사용합니다. 필요한 경우 해부 가위 들고 도망 결합 조직을 잘라. 이 과정에서 당기 너무 많은 가방 셀 클러스터를 만지지 않도록 조심하십시오. </li><li> 대부분 결합 조직의 제거되면 B를 전송벤트 노란 팁으로 새 작업을 그릇에 AG 전지 클러스터는 이전 준비. 가방 전지 클러스터가 노란색 팁 안에 갇혀 또는 공기 / 미디어 인터페이스에 붙어있을 수 있도록하지 않도록주의하십시오. </li><li> 개인 가방 세포를 제거하는 노란색 팁으로 클러스터를 씹다. 팁에서 퇴원 클러스터를 pipetting하여이 작업을 수행합니다. 낮은 전단 병력과 함께 시작하여 필요에 따라 힘을 향상시킬 수 있습니다. 항상 너무 많은 세포를 죽이지 않고 뉴런을 제거하는 데 필요한 최저 힘을 사용합니다. </li><li> 3-5 건강한 가방 세포를 수집하고 쓰임새 라이신 - 코팅 coverslip있는 요리로 전송할 수 있습니다. 죽은 세포 (그들은 중앙에 검은 / 투명) 및 결합 조직의 파편을 채취하지 마십시오. </li><li> 6 단계를 반복합니다. 각 coverslip의 중심에 15-25 살 뉴런에 대한 곳. 죽은 세포이나 먼지가 잘으로 전송하는 경우, 그것을 수확하거나 건강한 세포에서 멀리 불어하여 ​​원치 않는 물질을 제거합니다. 이 과정은 두 클러스터에 대한 2-3시간 걸립니다. </li><li> 일단 (원치 않는 진동을 피하기 위해 해제 흐름 벤치 송풍기 유지) 세포를 첨부할 수 있도록 RT 적어도 2 시간 흐름 벤치에서 문화 요리를 보관 마쳤다. </li><li> ° C 하룻밤, 또는 추가를 사용하기 전까지 14에서 인큐베이터에 요리를 놓습니다. 성장 원뿔은 40-10시간에서 개발 있습니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/old/662_2008_2_10_0/image001.jpg" alt="그림 1. Aplysia californica 복부 신경절의 개략도. 가방 전지 클러스터를 얻기 위해 상처 어디에 컬러 라인 나타냅니다." /> 그림 1. Aplysia californica 복부 신경절의 개략도. 가방 전지 클러스터를 얻기 위해 상처 어디에 컬러 라인 나타냅니다. 3 일 : Aplysia 가방 세포의 라이브 영상을위한 챔버 설정 이미지 챔버 조립 <ol><li> 라이브 셀 이미징 실험을위한 가방 세포를 사용하기 전에, 낮은 전력 현미경에서 세포를 검사합니다. 세포가 건강하게 성장 콘을 개발하지 않은 경우, 1-2 시간 동안 RT에서 신선한 매체와 휴가를 제공합니다. </li><li> 신선한 L15 - ASW 매체와 번호판을 공급하기 위해 진공 라인 오래된 매체의 절반 (~ 2ml)를 제거하고 새로운 2 ML L15 - ASW의 배양 접시 당 매체를 추가하십시오. 이 coverslip에서 세포를 제거하므로 완전히 한꺼번에 접시에서 모든 매체를 제거하지 않는 것이 중요합니다. </li><li> 가방 세포 이미징을 위해, 우리는 샌드위치와 같은 영상 챔버의 두 coverslips 두 플라스틱 스페이서를 조립. 샌드위치의 맨 coverslip는 중간 및 시약을 쉽게 교환할 수 있도록 짧은 컷입니다. 조립하는 동안 연결된 가방 세포와 coverslips는 dislodging에서 세포를 방지하기 위해 항상 L15 - ASW 매체에 빠져들해야합니다. </li><li> 챔버를 준비하려면, 잘라 ~ 2mm를 다이아몬드 펜 (유리 커터)와 통치자와 # 1 coverslips 22x22 mm의 오른쪽에서. </li><li> 1 ML의 주사기를 사용하여 짧은 coverslip의 양면 높은 진공 그리스를 적용하고, 각 측면에 플라스틱 스페이서를 연결합니다. 두 스페이서의 상단에 진공 그리스를 적용합니다. </li><li> coverglass에 가방 세포를 포함하는 페트리 접시에 coverslip와 스페이서 조립, 장소 반전. 정렬 부드럽게이 Q - 팁 리버스 엔드와 하단 coverslip 맨 coverslip을 막대기 아래로 누르십시오. </li><li> 포셉을 사용하여 부드럽게 밖으로 누출 매체없이는 배양 접시의 샌드위치 조립을 리프트. 필요한 경우, 두 coverslips를 정렬하고, Kimwipe로 초과 매체를 닦아. 현미경 슬라이드 홀더의 하단 부분에 샌드위치를​​ 장소와 클립을 사용하여주의 덮개를 부착합니다. </li><li> Q - 팁을 샌드위치의 맨 위에 측면의 중심을 깨끗이 유리 청소기 ( &#39;스파클&#39;은 유리 청소기로 사용됩니다)에 dabbed. 신속 리크 라인을 피하기 위해 두 번째 건조 Q - 팁과 유리 청소기를 건조. 하단 coverslip에 대해 동일한 작업을 수행. 리크 라인 무료 깨끗한 coverslips는 고품질의 영상을 위해 중요합니다. </li></ol> 현미경에 가방 세포 Aplysia 가방 세포의 연결을 문화가 저밀도에 있기 때문에 귀하의 현미경 설정은 세포 사이를 전환할 촉진 무대 위치 기능을 가지고있다면, 그것은 최고입니다. 가방 세포는 쉽게 이미징 실험을하는 동안 무대에서 몇 시간 동안 RT에 보관하실 수 있습니다. 증발을 방지하기 위해 정기적으로 매체를 교환.

<ol><li>Forscher, P., Kaczmarek, L. K., Buchanan, J. A., Stephen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+AMP+induces+changes+in+distribution+and+transport+of+organelles+within+growth+cones+of+Aplysia+bag+cell+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cyclic AMP induces changes in distribution and transport of organelles within growth cones of Aplysia bag cell neurons.</a> J. Neurosci. 7, 3600-3611 (1987).</li>
<li>Suter, D. M., Errante, L. D., Belotserkovsky, V., Forscher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ig+superfamily+cell+adhesion+molecule%2C+apCAM%2C+mediates+growth+cone+steering+by+substrate-cytoskeletal+coupling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">The Ig superfamily cell adhesion molecule, apCAM, mediates growth cone steering by substrate-cytoskeletal coupling.</a> J. Cell. Biol. 141, 227-240 (1998).</li>
<li>Schaefer, A. W., Kabir, N., Forscher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filopodia+and+actin+arcs+guide+the+assembly+and+transport+of+two+populations+of+microtubules+with+unique+dynamic+parameters+in+neuronal+growth+cones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Filopodia and actin arcs guide the assembly and transport of two populations of microtubules with unique dynamic parameters in neuronal growth cones.</a> J. Cell. Biol. 158, 139-152 (2002).</li>
<li>Suter, D. M., Schaefer, A. W., Forscher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+dynamics+are+necessary+for+SRC+family+kinase-dependent+growth+cone+steering%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Microtubule dynamics are necessary for SRC family kinase-dependent growth cone steering.</a> Curr. Biol. 14, 1194-1199 (2004).</li>
</ol>

Aplysia 가방 세포 뉴런은 거의 비의 연결을 세포와 혈청의 연결이없는 세포 배양 시스템을 제공합니다. 이러한 뉴런 중요한 세포 생물 학적 질문 숫자를 해결하기 위해 적합한 매우 큰 성장 원뿔을 형성합니다. 가방 세포 뉴런 쉽게 몇 시간 동안 조작하고 실온에서 몇 군데하실 수 있습니다. 형광등을 사용하면 하나 양적 F - 굴지와 미세 소관의 중합 및 translocation 역학의 다양한 매개 변수를 분석할 수 현미경 (FSM)을 스페클. 최근 출시된 Aplysia 게놈 정보뿐만 아니라 개선 표현 기법과 함께 이러한 이미징 도구의 연결을 성장 콘 운동성 및지도 분자 및 세포 메커니즘을 공부하고 이러한 뉴런은 강력한 모델 시스템을합니다.

<table><tbody><tr><td>#1 유리 커버슬립 22x22 mm</td><td>도구</td><td>VWR international</td><td>48366067</td><td></td></tr><tr><td>#1.5 유리 커버슬립 22x22 mm</td><td>도구</td><td>Corning</td><td>2870-22</td><td></td></tr><tr><td>35 mm 페트리 접시</td><td>도구</td><td>Falcon BD</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>배지 여과용 필터</td><td>도구</td><td>EMD Millipore</td><td>SVGV010RS</td><td></td></tr><tr><td>고진공 그리스</td><td>도구</td><td>Dow Corning</td><td>1597418</td><td></td></tr><tr><td>삼투압 측정기</td><td>도구</td><td>Wescor</td><td>5520</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 심</td><td>도구</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>SHSP-200</td><td></td></tr><tr><td>염화 칼슘</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>15750-060</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4030</td><td></td></tr><tr><td>L15 배지</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>41300-039</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8540</td><td></td></tr><tr><td>염화 마그네슘</td><td>시약</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>5958-04</td><td></td></tr><tr><td>황산 마그네슘</td><td>시약</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>6070-12</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lysine (70-150 kD)</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6282</td><td></td></tr><tr><td>염화 나트륨</td><td>시약</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>7581</td><td></td></tr><tr><td>중성 프로테아제 (Dispase)</td><td>시약</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS02111</td><td></td></tr></tbody></table>

성장 콘스의 고해상도 이미징을위한 aplysia에서의 연결을 셀 문화

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

의 연결을 성장 콘은 환경에서지도 신호를 감지하고 적절한 대상 세포쪽으로 방향 움직임에이 정보를 transduce 수 axons의 끝에 높은 운동성이있는 구조입니다. 완벽하게지도 정보가 기본 동적 cytoskeletal 네트워크에 세포 표면에서 전달하는 방법 이해하기 위해서, 하나는 높은 시간적 및 공간적 해상도에서 단백질 역학 라이브 셀 이미징에 적합한 모델 시스템이 필요합니다. 전형적인 척추 성장 콘은 양적 F - 굴지와 미세 소관의 역학을 분석하는 너무 작은 수 있습니다. 군소 Aplysia californica에서 뉴런은 뉴런 척추보다 5-10 배 큰 쉽게 실온에서 보관 수 있으며, 미세 조작 및 biophysical 측정을 매우 강력한 세포 수 있습니다. 그들의 성장 콘은 매우 세포질 지역과 잘 설명 cytoskeletal 시스템을 정의했습니다. 의 연결을 세포 기관은 성장 콘 운동성 및지도를 공부에 대한 프로브의 다양한 microinjected 수 있습니다. 현재의 프로토콜에서는 복부 신경절, 가방 셀 뉴런의 문화와 성장 콘 라이브 셀 이미징에 대한 이미징 챔버를 설정 해부를위한 절차를 설명합니다.

Aplysia californica의 뉴런 성장 콘 운동성 및지도 고해상도 이미지를위한 최고의 아르 문화의 큰 성장 콘을 개발. 여기서 우리는 절개 및 Aplysia 가방 셀 뉴런의 도금뿐만 아니라 라이브 셀 이미징을위한 챔버를 설정을위한 프로토콜을 제시한다.

성장 콘스의 고해상도 이미징을위한 Aplysia에서의 연결을 셀 문화

신경세포 성장원추는 축삭 끝에 위치한 매우 운동성이 높은 구조물로, 환경 내의 유도 신호를 감지하고 이 정보를 전달하여...

가상 실험실에서 우리는 해양 연체동물인 Plegia californica의 신경절 세포를 배양합니다. 이 뉴런들은 매우 큰 성장 원추(growth cone)를 뻗어내기 때문에, 특히 세포골격 역학을 분석하기 위한 성장 원추의 운동성 및 유도에 관한 고해상도 연구에 매우 적합한 모델 시스템이 됩니다. 본 영상에서는 Plegia의 해부 및 신경절 세포 배양 방법을 시연합니다.안녕하세요, 퍼듀 대학교 생물과학과의 Daniel Suter입니다. 오늘은 glial back cell 뉴런의 박리, 배양 및 이미징 절차를 보여드리겠습니다. C, her apia CAA의 뉴런은 학습 및 기억 연구에 광범위하게 사용되어 왔습니다.Apia는 단순한 신경계를 가지고 있으며 전기생리학 연구에 적합한 거대 뉴런을 보유하고 있습니다. 본 연구실에서는 이러한 뉴런들의 성장 원추(growth cone)가 크고, 성장 원추의 운동성 및 유도와 관련된 단백질 역학의 고해상도 이미징에 매우 적합하기 때문에 이를 사용합니다. 전체 과정은 다음과 같은 단계로 구성됩니다.1일 차에는 동물을 희생시키고 해부하여 복부 신경절을 얻습니다. 2일 차에는 배양 플레이트를 준비합니다. 등쪽 세포 군집을 해부하고 개별 뉴런을 플레이팅합니다.3일 차에는 DIC(미분 간섭 대비) 현미경을 이용한 세포의 타임랩스 이미징을 위한 이미징 챔버를 제작하며, 이를 시연하고 설명합니다. 오늘의 실험 절차는 저희 연구실의 대학원생인 iTune Lee가 진행하겠습니다. 이제 그녀가 배양된 신경세포를 준비하는 방법을 보여드리겠습니다.시작하겠습니다. 후세포 뉴런은 플레기아 신경계의 복부 신경절의 일부이므로, 효소 소화를 위해 복부 신경절 전체를 박리하겠습니다. 그런 다음 나머지 신경절로부터 두 개의 백 세포 클러스터를 분리하겠습니다.복강 신경절을 이 2단계 용액에서 15~16시간 동안 소화시켜 결합 조직을 느슨하게 만듭니다. 이제 동물을 희생시키기 위해 0.5 M 염화마그네슘을 채운 대용량 60 mL 주사기와 세척된 해부 도구인 핀셋, 해부 가위, 대형 가위를 준비해야 합니다. 우리는 캘리포니아 해안에서 채집한 무게 약 150 g의 야생 Plegia California car를 사용합니다.동물은 바닷가재 수조에서 최대 3~4주 동안 유지합니다. 염화마그네슘 용액을 동물의 머리 근처 체강에 주입합니다. 동물을 가볍게 문질러주면 용액이 잘 퍼지며 동물이 수축하는 것을 방지할 수 있습니다

neuronal-cell-cultures-from-aplysia-for-high-resolution-imaging

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

의 준비 Aplysia 감각 - 모터의 연결을 셀 문화

이 비디오에서는, 우리는 찬란 태그 PKCS을 사용하여 살아있는 세포에서 PKC translocation의 시각화를 보여줍니다.

Sf9 세포에서 Aplysia 감각 뉴런에서 PKC Translocation의 라이브 영상

우리는 세포 내 무료 칼슘 농도와 신경 효능의 변화가 동시에의 신경절 준비에 모니터링 할 수있는 방법을...

연체 동물에서 세포 내 칼슘 농도와 시냅틱 효능의 모니터링 변경<em&gt; Aplysia</em

에서 신경 Explant의 문화<em&gt; Xenopus laevis</em

이 비디오는 아밀로이드 β(Aβ) 응집체에 의한 신경 성장 원뿔 붕괴의 체외 평가를 보여줍니다. 뉴런을 Aβ 응집체로 처리하면 세포골격 불안정화가 발생하여 축삭돌기 끝에 있는 성장 원뿔이 붕괴됩니다. 성장 원뿔의 붕괴 정도를 평가하기 위해 처리된 세포를 대조 세포와 비교합니다.

뉴런 성장 원뿔 붕괴에 대한 응집된 아밀로이드 β의 체외 평가

우리는 해양 바다 토끼 신경계의 해부를...

의 감각 뉴런의 분리<em&gt; 군소 californica</em&gt; 글루타메이트 전류의 패치 클램프 녹음을위한

해양 달팽이 Aplysia californica 널리 행동의 세포와 분자 기초에 연구에 대 한 신경 생물학 모델로 사용 되었습니다. 여기서 방법론은 확인된 신경 회로의 단일 뉴런의 전기 생리및 분자 분석을 위한 Aplysia의 신경계를 탐구하기 위해 설명된다.

아피시아 단일 뉴런의 전기 생리 및 분자 분석을 위한 신경리아 준비

이 절차는 신경 돌기를 유도하는 마이크로 피펫에 고정 된 폴리 -D- 라이신 - 코팅 된 비드를 사용하여 마이크로 유체 챔버에서 조직화 된 신경을 신속하게 개시, 연장 및 연결하는 방법을 설명합니다.

재귀 신경 회로의 연구 : 빠른 신경 돌기 확장과 기능적 신경 연결을위한 새로운 방법

여기서, 우리는 거대한 ankyrin-G의 부재로 인해 사전 조립된 AIS가 부족한 해마 뉴런의 축삭 초기 세그먼트(AIS)의 조립 및 구조를 정량적으로 연구하는 프로토콜을 기술하였다.

축 사 초기 세그먼트의 조립을 공부 하는 기본 배양 된 해마 뉴런의 사용

이 프로토콜은 현장 축삭 성장 및 성장 원뿔 역학 을 연구하는 간단하고 강력한 방법을 보여줍니다. 생체외 생리학적으로 관련된 급성 뇌 조각을 준비하는 방법을 설명하고 사용자 친화적인 분석 파이프라인을 제공합니다.

시투에서 Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures 시각화

진급하려면 성장 콘이 외부 환경에 대한 견인력을 발휘해야 합니다. 견인력의 생성은 액틴 역학 및 클러치 커플링에 의존합니다. 본 연구는 성장 콘 발전을 위한 액틴 역학, 클러치 커플링 및 견인력을 분석하는 방법을 설명합니다.

액틴 다이내믹스, 클러치 커플링, 성장 콘 발전을 위한 견인력 분석

배우세요 Aplysia bag cell 신경원 배양 및 고해상도 성장 콘 이미징 기법을 통해 신경 성장과 유도 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 세포골격 역학 분석에 활용됩니다.

성장 콘스의 고해상도 이미징을위한 Aplysia에서의 연결을 셀 문화

더 많은 동영상 탐색