Name: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp 폐 허혈 재관류 손상 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 배우세요 쥐 모델에서 폐 허혈 재관류 손상을 연구하는 왼쪽 폐문 클램프 기법을 사용하여 중성구와 B세포의 역할을 분석하는 방법을. 이 프로토콜은 폐 이식 결과 개선에 중요한 통찰을 제공합니다.

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폐 허혈-재관류 손상을 연구하기 위한 마우스 모델

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<li>Santos, P., Teixeira, P. J. Z., Moraes Neto, D. M., Cypel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+after+circulatory+death+and+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bras+Pneumol%22%5BJournal%5D)">Donation after circulatory death and lung transplantation.</a> J Bras Pneumol. 48 (2), e20210369(2022).</li>
<li>Moskowitzova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+enhances+murine+lung+viability+and+recovery+after+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation enhances murine lung viability and recovery after ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (1), L78-L88 (2020).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+blockage+of+S100A8%2FA9+ameliorates+ischemia-reperfusion+injury+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Functional blockage of S100A8/A9 ameliorates ischemia-reperfusion injury in the lung.</a> Bioengineering (Basel). 9 (11), 673(2022).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+anti-HMGB1+monoclonal+antibody+on+lung+ischemia+reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Protective effects of anti-HMGB1 monoclonal antibody on lung ischemia reperfusion injury in mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 573, 164-170 (2021).</li>
<li>Wang, Q., Li, Y., Wu, C., Wang, T., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-1+inhibition+exacerbates+ischemia-reperfusion-induced+lung+injury+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-1 inhibition exacerbates ischemia-reperfusion-induced lung injury in mouse.</a> Am J Med Sci. 365 (1), 84-92 (2023).</li>
<li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury%3A+tricks+of+the+trade%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> J Surg Res. 194 (2), 659-666 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogen-activated+protein+kinases+regulate+HO-1+gene+transcription+after+ischemia-reperfusion+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitogen-activated protein kinases regulate HO-1 gene transcription after ischemia-reperfusion lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 283 (4), L815-L829 (2002).</li>
<li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A2A+receptor+activation+on+CD4%2B+T+lymphocytes+and+neutrophils+attenuates+lung+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adenosine A2A receptor activation on CD4+ T lymphocytes and neutrophils attenuates lung ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 139 (2), 474-482 (2010).</li>
<li>Yang, Z., Sharma, A. K., Linden, J., Kron, I. L., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+lymphocytes+mediate+acute+pulmonary+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">CD4+ T lymphocytes mediate acute pulmonary ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 137 (3), discussion 702 695-702 (2009).</li>
<li>Sayah, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+are+pathogenic+in+primary+graft+dysfunction+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps are pathogenic in primary graft dysfunction after lung transplantation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (4), 455-463 (2015).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 6 (7), 1672-1679 (2007).</li>
<li>Hsiao, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> J Clin Invest. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Sharma, A. K., Mulloy, D. P., Le, L. T., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+mediates+synergistic+effects+of+IL-17+and+TNF-alpha+on+CXCL1+expression+by+epithelial+cells+after+lung+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase mediates synergistic effects of IL-17 and TNF-alpha on CXCL1 expression by epithelial cells after lung ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (1), L69-L79 (2014).</li>
<li>Zanotti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+critical+role+of+Toll-like+receptor+4+in+lung+ischemia-reperfusion+injury+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Novel critical role of Toll-like receptor 4 in lung ischemia-reperfusion injury and edema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (297), L52-L63 (2009).</li>
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<li>Welbourn, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+ischaemia+reperfusion+injury%3A+central+role+of+the+neutrophil%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of ischaemia reperfusion injury: central role of the neutrophil.</a> Br J Surg. 78 (6), 651-655 (1991).</li>
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우리는 폐동맥과 정맥 및 기관지를 폐색하는 왼쪽 힐럼에 슬립매듭을 적용하여 온열 허혈을 유도한 후 재관류를 수행하는 hilar clamp 기술에 대해 설명합니다. hilar 클램핑 후 왼쪽 폐를 채취하여 조직학, 유세포 분석, 벌크 또는 단일 세포 시퀀싱, 정량적 중합효소 연쇄 반응과 같은 다양한 실험 기법을 사용할 수 있습니다. 또한 혈액과 비장은 전신 효과를 연구하는 데 사용할 수 있으며 비허혈성 우폐는 내부 제어 역할을 할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는 ABG 측정값을 얻고/하거나 세포 유출을 측정하는 자세한 방법도 설명합니다.
murine hilar 클램핑 기술은 폐 IRI 연구와 더 넓은 폐 이식 분야에 매우 중요합니다. 예를 들어, 이 hilar clamp 모델을 사용하여 우리 그룹은 비장 유래 CCR2+ 고전적 단핵구가 IRI18에 따라 폐로의 호중구 외출을 매개한다는 것을 발견했습니다. 또 다른 그룹은 hilar clamp model19를 사용하여 유형 II 폐포 상피 세포가 NADPH 산화효소-IL-17-TNFα 의존적 방식으로 CXCL1(호중구 화학 유인제)을 생성한다는 것을 보여주었습니다. TLR4는 hilar clamping20의 murine 모델에서 부종 발병에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌습니다.
기형외과 쥐 폐 이식은 임상적으로 더 적용 가능하고 온열 허혈과 냉간 허혈을 모두 시뮬레이션할 수 있지만, 혈관 및 기관지 문합으로 인한 외과적 외상과 기증자-수혜자 불일치로 인한 동종 자극도 도입합니다. 따라서 hilar clamp 기술의 주요 장점은 이러한 다른 요인으로부터 폐 IRI의 영향을 분리할 수 있다는 것입니다. 또한 경험이 부족한 쥐 미세외과 의사의 경우 hilar clamp 절차는 폐 이식에 비해 기술적으로 덜 까다롭고 더 빨리 마스터할 수 있습니다. hilar 클램프 모델의 한 가지 한계는 한랭 허혈을 달성하기 어렵다는 것입니다. 좌측 폐동맥(25)을 통한 전행성 플러시 관류를 가진 돼지에서 현장 냉간 허혈이 수행되었지만, 이는 마우스의 크기가 더 작고 수술 중 정상 체온증을 유지해야 할 필요성으로 인해 마우스에서 훨씬 더 까다롭습니다. 그럼에도 불구하고, 고립된 온열 허혈에 대한 연구는 일반적으로 냉간 허혈보다 장기 기능에 더 해롭기 때문에 중요하다 4,5,6. 더욱이, 이식 센터에서는 기존의 DBD 폐 이식보다 온열 허혈 기간이 훨씬 더 긴 DCD 폐 이식을 점점 더 많이 채택하고 있다7. 따라서 온열 허혈 동안의 사건과 후속 재관류 기간 동안의 사건에 대한 자세한 연구가 중요하며 이 hilar clamp 모델로 수행할 수 있습니다.
지난 수십 년 동안 hilar 클램프 기술의 많은 변형이 만들어졌습니다. 여기에는 비외상성 미세혈관 클램프(8,9,10,11,12,13), 루멜 지혈대(14,15) 및 힐룸(16) 주위에 슬립매듭이 있는 넥타이의 사용이 포함됩니다. 우리는 쥐에서 slipknot 기술의 적응을 설명합니다. 이 기술이 다른 hilar clamp 기술에 비해 갖는 주요 장점은 허혈 기간 동안 가슴을 닫을 수 있다는 것입니다., 이는 특히 허혈 기간이 긴 프로토콜에서 무감각한 체액 손실을 최소화합니다. 클램프 또는 지혈대가 hilum에 배치된 경우에는 이 작업을 수행할 수 없습니다.
동물 선택과 관련하여, 우리는 쥐나 돼지와 같은 대형 동물 모델이 아닌 마우스에서 이 모델을 개발하기로 결정했습니다. 그 이유는 두 가지입니다 - 우리 실험실은 orthotopic 마우스 폐 이식을 통한 마우스 미세 수술에 대한 광범위한 경험을 가지고 있습니다17. 둘째, 마우스는 랫트보다 작고 기술적으로 수술하기가 더 까다롭지만, 현재 랫드 균주보다 상업적으로 이용 가능한 형질전환 마우스 균주가 더 많다26,27. 마우스는 또한 더 빨리 번식하여 새로운 균주를 더 빨리 개발할 수 있으며, 이는 IRI의 면역 메커니즘을 조사할 때 특히 유용합니다. 이러한 이유로 우리는 생쥐에서 이 기술을 개발하기로 결정했습니다.
우리가 아는 한, 이것은 슬립매듭이 있는 마우스의 왼쪽 폐 힐라 클램프 기술을 사용한 최초의 비디오 기반 기사입니다. Saito et al은 미세혈관 클램프22를 사용하여 쥐에서 hilar clamp를 입증하는 비디오 기반 기사를 발표했습니다. 마우스에서, Liao 등은 폐동맥(PA)이 슬립매듭으로 클램핑된 폐 IRI 모델을 발표했지만, 이 모델에서는 기관지가 클램프(28)에서 제외되기 때문에 폐는 환기된 상태로 유지된다. PA 클램핑 기술은 폐색전증(pulmonary embolism)29, 폐고혈압(pulmonary hypertension) 및/또는 우심실 부전(right ventricular failure)30,31을 연구하기 위한 모델로 사용되어 왔다. 연구 분야가 이식에서 폐 IRI이기 때문에 허혈성 손상 외에 기압 외상을 최소화하기 위해 기관지를 포함한 전체 hilum을 고정하기로 결정했습니다.
주목할 점은, 30분의 따뜻한 허혈 후 1시간의 재관류가 선택되었는데, 이는 우리가 IRI 이후 매우 초기에 폐 침투 세포의 역학에 관심이 있기 때문입니다. 예를 들어, 연구에 따르면 허혈 30분 후 2시간의 재관류 후 헴 옥시게나제 1과 같은 세포 보호 유전자의 상향 조절이 보고되었습니다13. 호중구는 이전에 IRI32 이후에 폐에 침투하는 중심 세포 유형으로 생각되었지만, 우리는 단핵구가 폐에 도착하는 데 호중구보다 먼저 도착한다는 것을 보여주었습니다18,24. 보다 최근에는 B 세포가 단핵구보다 먼저 나타나 재관류 후 1시간 이내에 폐로 들어간다는 사실을 발견했습니다(미공개 데이터). 이 기술을 적용할 때 온열 허혈 및 재관류 기간은 연구 질문 및 가설에 따라 조정할 수 있습니다. 이 기간 동안 가슴을 닫을 수 있기 때문에 과도한 체액과 열 손실에 대한 걱정 없이 더 오랜 기간의 온열 허혈이 가능합니다.
수술 전후에 여러 가지 합병증이 발생할 수 있으며, 최종적으로 흔한 결과는 수술 전후 사망입니다. 우리는 수술 중 동물의 죽음 발생률이 외과 의사가 이 기법을 반복함에 따라 감소하는 것을 관찰했습니다. 우리는 외과 의사가 기술이 정체기에 도달하기 위해 최소 2개월의 실습 및/또는 최소 20건의 사례가 필요하다고 추정합니다. 이 시점에서 수술 중 사망률은 약 50건 중 1건으로 추정됩니다. 마취된 쥐의 죽음은 종종 횡격막과 흉벽 근육의 강력한 수축을 포함하는 고통스러운 호흡으로 예고됩니다. 이러한 고통스러운 호흡이 시작되면 개입하지 않으면 3-5분 내에 사망에 이르게 됩니다. 수술 중 사망을 촉진할 수 있는 몇 가지 원인이 있으며, 그 중 다수는 인식할 수 있고 예방할 수 있습니다. 아래에서 이 수술의 중요한 단계와 성공적인 결과를 얻기 위한 문제 해결 기술을 강조할 것입니다.
삽관 첫 번째 중요한 단계는 신중한 삽관과 기도를 확보하여 부주의한 발관을 방지하는 것입니다. 생존 수술에서는 쥐가 발관 후 숨을 쉴 수 없기 때문에 초기 삽관 중에 성대가 손상되지 않도록 하는 것이 특히 중요합니다. 코드를 지나 ETT의 전진은 현미경을 통한 직접적인 시각화 하에 수행되어야 합니다. 삽관 중 저항이 만나면 ETT를 맹목적으로 진행해서는 안 됩니다. 모기 클램프로 구인두를 열어 두는 동안 혈액이 기도의 시야를 가릴 수 있으므로 구강 점막을 뚫지 않도록 주의해야 합니다. 삽관 시도 횟수는 5회 미만으로 제한해야 합니다.
우발적 발관 시술 중 어느 시점에서라도 폐가 적절하게 팽창하지 않는 것처럼 보이면 ETT가 빠져나갔을 수 있습니다. 오랜 기간 동안 눈에 띄지 않는 우발적인 발관의 또 다른 징후는 쥐가 갑자기 고통스러운 호흡을 시작하는 것입니다. 초기 삽관 후에는 실크 테이프로 ETT를 코 둘레에 잘 고정하도록 주의를 기울여야 하며 마우스의 목과 몸통의 조정을 제한해야 합니다. 왼쪽 폐와 오른쪽 폐가 모두 팽창하지 않으면 ETT가 기관 밖으로 나왔을 수 있습니다. ETT를 다시 밀어 넣으려고 시도할 수 있지만 동물의 조기 사망을 피하기 위해 쥐를 신속하게 다시 삽관해야 할 수도 있습니다. 양쪽 폐가 모두 팽창할 것으로 예상될 때 한쪽 폐만 팽창하는 경우 ETT가 너무 깊을 수 있으므로 조심스럽게 뒤로 당겨 다시 고정해야 합니다.
폐 동원술 압박 손상은 폐포를 손상시키고 폐의 순응도를 감소시킬 수 있으므로 좌측 폐 실질에 부드러운 압력을 가하면서 면으로 된 팁 어플리케이터를 사용하여 수행해야 합니다. 폐는 집게나 클램프로 잡으면 폐 실질이 손상될 수 있으므로 집게나 클램프로 잡아서는 안 됩니다.
hilar 클램프의 적용 왼쪽 힐라 클램프는 매듭을 너무 중앙에 놓거나(왼쪽 심방을 잡지 않도록) 너무 주변적으로(폐 실질이 잡히지 않도록) 주의하면서 직접 시각화 하에 배치해야 합니다. 힐라 클램프로 좌심방을 잡으면 심방세동과 그에 따른 사망을 촉진할 수 있습니다. hilum의 시각화는 시야를 확장하기 위해 적절한 갈비뼈 수축을 보장함으로써 향상될 수 있습니다. 슬립매듭을 묶은 후에는 ETT를 인공호흡기에 연결하는 유출 튜브를 수동으로 폐색하고 왼쪽 폐가 양압으로 팽창하지 않도록 하는 모집 조작을 수행하여 클램프가 완전히 폐색되도록 하는 것이 유용합니다. 혈관 폐색은 연골 기관지에 비해 폐동맥과 정맥의 축소 가능성이 높기 때문에 기관지 폐색이 확인된 것으로 추정됩니다. 또한, hilar clamp는 왼쪽 주줄기 기관지의 연골 부분을 부수고 hilar clamp를 놓은 후 왼쪽 폐의 팽창을 방지하므로 과도한 힘으로 묶어서는 안 됩니다. 힐라 클램프가 해제되면 다른 모집 조작을 수행하여 폐가 여전히 인공호흡을 할 수 있는지 확인하는 것이 중요합니다.
가슴 여밈 흉부를 닫을 때 4번째 갈비뼈와 5번째 갈비뼈는 폐가 최대로 힘을 낼 때 함께 모여야 합니다. 이렇게 하면 흉강에 남아 있는 공기의 양이 최소화되어 갈비뼈가 닫히면 기흉이 발생할 수 있습니다. 근육층과 피부는 긴장성 기흉이 발생하지 않도록 밀폐된 방식으로 닫아야 합니다.
ABG 얻기 마지막으로, ABG를 얻을 때 먼저 오른쪽 힐럼을 클램프핑하여 ABG 측정이 왼쪽 폐 기능만 반영하도록 하는 것이 중요합니다22,23. 오른쪽 힐라 클램프가 없으면 정상적으로 환기되는 오른쪽 폐가 손상된 허혈성 왼쪽 폐를 보상하고도 남을 것이며 ABG 측정은 정상으로 보입니다.
요약하면, 위에서 설명한 hilar clamp 기술은 폐 이식 연구에 유용한 도구이며, 중요한 것은 동종성, 외과적 문합 관련 외상 또는 냉간 허혈성 저장의 도입 없이 따뜻한 IRI 연구를 격리할 수 있습니다. 특히, 이 설명된 hilar 클램핑 기술은 쉽게 가르칠 수 있고 널리 채택할 수 있으며 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과로 이어질 수 있습니다.

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An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/66232">Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury</a>. The Protocol and Representative Results&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

장기 이식 중 IRI는 원발성 이식편 기능 장애 및 이후 이식편 거부 반응의 주요 위험 요인입니다 1,2. 이식 중 온열 허혈 시간은 기증자 대동맥 교차 클램프에서 냉간 관류 시작까지의 기간과 얼음에서 장기 제거에서 장기 이식까지의 기간으로 정의됩니다. 냉장 보관 시간은 냉간 관류가 시작된 시점부터 얼음에서 장기를 제거할 때까지의 기간으로 정의된다3. 온난허혈은 한랭허혈보다 후기 장기 기능에 더 해롭다 4,5,6, 그리고 그 기저에 깔린 메커니즘은 전임상 모델에서 추가 연구를 필요로 한다. 또한, 심장사 후 기증을 통한 장기 이식(DCD)은 뇌사(DBD) 후 전통적인 기증보다 따뜻한 허혈 시간이 더 긴 것과 관련이 있습니다(7). DCD 기증자의 사용은 기증자 풀을 확장하고 폐 이용률을 높일 수 있지만, 이식 후 폐 기능에 대한 온열 허혈의 영향을 평가하기 위한 추가 전임상 연구가 필요합니다. 아래에서는 왼쪽 폐 hilar 클램프를 통한 마우스의 따뜻한 IRI 모델을 설명합니다.
폐 힐라 클램핑의 여러 동물 모델이 지난 몇 년 동안 개발 및 적용되었으며 비외상성 미세혈관 클램프 8,9,10,11,12,13, 루멜 지혈대14,15 또는 봉합 결찰16의 사용이 포함될 수 있습니다 Hilar 클램프로. hilar 클램프의 핵심은 가역적이어야 하며 재관류가 달성될 수 있도록 hilar 구조에 손상을 최소화하거나 전혀 일으키지 않아야 한다는 것입니다. 여기에서는 좌측 폐 hilum의 가역적 봉합 결찰을 슬립매듭으로 포함하는 마우스의 hilar clamp 기술에 대해 설명합니다. 이 방법은 폐동맥 유입, 정맥 유출 및 기관지 주엽 안팎의 공기 흐름을 차단합니다. 혈관 클램프, 클립 또는 지혈대에 대한 슬립매듭의 주요 이점은 허혈이 장기간 지속되는 동안 가슴을 닫을 수 있어 마우스의 무감각한 체액과 열 손실을 최소화할 수 있다는 것입니다. 당사는 신뢰할 수 있는 동맥혈 가스(ABG) 측정을 얻고 hilar 클램핑 후 세포 유출을 측정하기 위한 프로토콜을 제공합니다.
이 힐라 클램프 기술은 폐 이식에 대한 광범위한 연구에서 중요한 위치를 차지합니다. 기상피성 폐 이식의 소동물 모델과 비교했을 때, 힐라 클램프 기법은 외과적 문합 외상이나 동종성을 추가하지 않고도 IRI의 효과를 분리할 수 있다17. 또한 hilar clamp 기술은 마우스 폐 이식보다 더 쉽고 빠르게 마스터할 수 있습니다. 실제로, hilar 클램프 기술을 사용하여 지난 10 년 동안 TLR4, NADPH 산화 효소 및 아데노신 A2A 수용체 14,18,19,20과 같은 IRI의 발병기전에서 몇 가지 중요한 메커니즘이 확인되었습니다. 다음 프로토콜에서는 폐 IRI를 연구하기 위한 도구로서 신뢰할 수 있고 학습 가능하며 재현 가능한 hilar 클램핑 방법을 제시합니다.

<table><tbody><tr><td>Medications</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% 포비돈-요오드 용액</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>소독제</td></tr><tr><td>부프레노르핀 1.3 mg/mL</td><td>Fidelis Animal Health</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>통증 조절용</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Cronus Pharma</td><td>NDC 69043-027-18</td><td>통증 조절용</td></tr><tr><td>Heparin 1000 units/mL</td><td>Sagent</td><td>NDC 25021-404-01</td><td>동맥혈</td></tr><tr><td>Isoflurane 1%-1.5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>마취용</td></tr><tr><td>케타민 염산염 100 mg/mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>마취용</td></tr><tr><td>Puralube Vet 안구 연고</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>눈 건조를 방지하기 위해</td></tr><tr><td>Xylazine 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>통증 조절</td></tr><tr><td><강한>도구 및 기구</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>은빛 고온 미세 팁 소추 펜</td><td>McKesson</td><td>231</td><td>혈관 응고용</td></tr><tr><td>곡선형 모기 클램프</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td>외과적 절차용</td></tr><tr><td>미세 곡선 겸자</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>수술용 절차</td></tr><tr><td>Fine Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td>수술 절차용</td></tr><tr><td>삽관 클램프 설정</td><td>Fine Science Tools</td><td>18374-44, 18144-30</td><td>삽관 중 혀로 마우스를 수직으로 잡기 위해. 보충 그림 1A를 참조하십시오.&nbsp;</td></tr><tr><td>마그네틱 리브 견인기</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-01, 18200-10</td><td>개흉술 후퇴용. 마그네틱 고정 장치와 견인기는 아래의 마이크로 라텍스 튜브로 연결해야합니다.</td></tr><tr><td>광학 등급 플라스틱 광섬유 Unjacketed, 500&mu; m</td><td>Edmund Optics</td><td>02-532</td><td>기관내관의 도입기를 만들기 위해. 보충 그림 1B를 참조하십시오. 이 광섬유의 1.5인치 길이는 한쪽 끝에 실크 테이프 조각이 고정되어 있어야 합니다. 그런 다음 기관내관의 도입부로 사용할 수 있습니다. 도입부의 끝은 약간 곡선이어야 합니다.</td></tr><tr><td>파워 프로 울트라 클리퍼</td><td>Oster</td><td>078400-020-001</td><td>클립 헤어</td></tr><tr><td>가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>14370-22</td><td>수술 용</td></tr><tr><td>작은 동물 발열 패드</td><td>K& H Pet Products</td><td>Thermo-Peep 가열 패드</td><td>정상 온도 유지용</td></tr><tr><td>소동물 인공호흡기</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-0000</td><td>환기용(TV 0.35cc, PEEP 1cm H2O, RR 100-105/min, FiO2 100%)</td></tr> <tr><td>Spearit Micro Latex Rubber Tubing (외경 1/8, 내경 1/16)</td><td>Amazon.com</td><td>https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1</td><td>수축용 개흉술</td></tr><tr><td>통계 프로필 프라임 중환자 혈액 가스 분석기</td><td>Nova Biomedical</td><td>https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 2aM8WGPiUVhicPQZ Wj2AaAqhDEALw_wcB&nbsp; &nbsp;</td><td>개흉술 철회를 위해</td></tr><tr><td>스트레이트 클램프</td><td>Fine Science Tools</td><td>13008-12</td><td>수술 절차용</td></tr><tr><td>스트레이트 펜치</td><td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td>수술 절차용</td></tr><tr><td>수술용 현미경</td><td>Wild Heerbrugg</td>는 <td>더 이상 생산되지 않습니다</td>. <td>삽관 및 수술 절차를 위해; Leica surgical</td></tr> <tr><td>microscopesSupplies</strong</td>으로 교체하는 것을 권장합니다><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&frac12; cc 주사기와 &frac12; 인치 29G 바늘</td><td>McKesson</td><td>942665</td><td>케타민/자일라진을 복강내로 주입하기 위해</td></tr><tr><td>&frac12; 1cc 투베르큘린 주사기에 인치 31G 바늘</td><td>McKesson</td><td>16-SNT1C2705</td><td>좌심실에서 동맥혈 흡인을 위해</td></tr><tr><td>1인치 20G IV 카테터</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>기관내관(ETT)을 위해</td></tr> <tr><td>1인치 실크 </td><td>테이프 Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>ETT를 코에 테이프로 붙이고 팔다리를 고정하기 위해</td></tr><tr><td>5/16 인치 31G 바늘이 있는 3/10cc 주사기</td><td>McKesson</td><td>102-SN310C31516P</td><td></td></tr><tr><td>P-10 바늘에 하대정맥 6-0 모노필라멘트 봉합</td>사 <td>McKesson</td><td>S697GX</td><td>개흉술, 근육층 및 피부 봉합</td></tr>용 <tr><td>6-0 실크 넥타이</td><td>외과 전문 보기</td><td>SP102</td><td>힐라 클램프용 슬립매듭을 만들기 위해</td></tr><tr><td>뾰족한 면 팁 어플리케이터</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>폐를 조작하고 둔기 해부를 위해</td></tr></tbody></table>

murine left pulmonary hilar clamp 폐 허혈 재관류 손상 모델

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

폐 이식 중 허혈 재관류 손상(IRI)은 원발성 이식편 기능 장애, 급성 및 만성 거부 반응, 사망률을 포함한 이식 후 합병증의 주요 위험 요소입니다. IRI의 토대를 연구하기 위한 노력은 좌측 폐 힐라 클램핑의 신뢰할 수 있고 재현 가능한 마우스 모델의 개발로 이어졌습니다. 이 모델은 마취되고 삽관된 마우스에서 수행된 수술 절차를 포함합니다. 좌측 흉곽 절개술을 시행한 후 조심스럽게 폐를 움직이고 좌측 폐 하골을 절제합니다. hilar clamp는 슬립매듭으로 폐 hilum의 가역적 봉합 결찰을 포함하여 동맥 유입, 정맥 유출 및 좌측 주줄기 기관지를 통한 공기 흐름을 차단합니다. 재관류는 봉합사를 조심스럽게 제거함으로써 시작됩니다. 우리 실험실은 현재 연구에서 실험 모델에 대해 30분의 허혈과 1시간의 재관류를 사용합니다. 그러나 이러한 기간은 특정 실험 질문에 따라 수정될 수 있습니다. 희생 직전, 4분 동안 오른쪽 힐라 클램핑을 한 후 좌심실에서 동맥혈 가스를 얻을 수 있어 얻은 PaO2 값이 손상된 왼쪽 폐에만 기인하는지 확인할 수 있습니다. 또한 유세포 분석을 통해 세포 유출을 측정하는 방법에 대해서도 설명하는데, 이는 희생 전에 연구할 세포에 특이적인 형광 색소 표지 항체의 정맥 주사를 포함합니다. 그런 다음 유세포 분석, 동결 또는 고정, 파라핀 포매 면역조직화학, 정량적 중합효소 연쇄 반응을 위해 왼쪽 폐를 채취할 수 있습니다. 이 힐라 클램프 기술을 사용하면 IRI의 기저에 있는 세포 및 분자 메커니즘을 자세히 연구할 수 있습니다. 대표적인 결과는 좌측 폐 산소 공급이 감소하고 힐라 클램핑 후 폐 손상의 조직학적 증거를 보여줍니다. 이 기법은 미세수술 경험이 있든 없든 누구나 쉽게 배우고 재현할 수 있어 신뢰할 수 있고 일관된 결과를 얻을 수 있으며 폐 IRI를 연구하기 위해 널리 채택할 수 있는 모델 역할을 합니다.

좌측 흉곽 클램핑 후 좌측 폐에 기인 한 동맥혈 (PaO2)의 산소 분압은 ~ 100 mmHg이며, 이는 가짜 흉곽 절제술 후 ~ 500 mmHg에 비해 현저히 낮습니다 (그림 7A, n = 6-7). 주목할 만한 점은, B6 마우스에서 가짜 흉곽 절제술을 수행했으며, ABG 측정은 4분 동안 오른쪽 힐라 클램핑을 한 후 수행되었으며, 이는 왼쪽 폐에만 기인한 값을 나타냅니다. 좌측 폐의 H&amp;E 염색은 기도를 채우는 염증 세포의 침투와 적혈구로 혈관을 충혈하는 것을 보여주었지만, 이러한 소견은 순진한 좌측 폐에서는 나타나지 않았습니다(그림 7B, n=2). 이러한 결과는 허혈 및 재관류 기간 후 즉각적인 조직 손상 및 세포 침투를 보여줍니다.
6단계에서 논의한 바와 같이, 혈관 내 및 간질성 호중구는 희생 5분 전에 FITC 표지된 항-Ly6G 항체를 정맥 주사로 감별할 수 있으며, 그 후 모든 호중구에 APC-Ly6G 항체18,24를 표지할 수 있습니다. 대표적인 도표에 따르면 호중구의 ~75%는 혈관내(APC-Ly6G+FITC-Ly6G+)이고 ~25%는 좌폐의 힐라 클램핑 후 간질(APC-Ly6G+FITC-Ly6G-)입니다(그림 7C, n=4). 이러한 결과는 호중구 유출을 평가하는 신뢰할 수 있는 방법을 보여주며 사용된 항체(즉, 단핵구의 경우 anti-Ly6C, B 세포의 경우 anti-CD19)에 따라 다른 세포 유형에 적용할 수 있습니다. 이 기술은 IRI를 따르는 세포 역학 연구에 유용합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2.jpg"> 그림 1: 마우스 삽관. (A) 왼쪽 가슴과 복부를 면도한 마우스. (B) 인공호흡기 튜브에 연결된 기관내관. (C) 삽관이 확인되면 튜브를 쥐의 코에 원주종으로 테이프로 붙입니다. (D) 소동물 인공호흡기에서 유입 및 유출 튜브가 있는 삽관된 마우스. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig02.jpg"> 그림 2: 좌측 흉곽 절개술. (A) 4번째 늑간 공간(ICS)에 걸친 피부 절개. (B) 4번째 늑간 공간에 걸쳐 나뉘어진 근육층. (C) 5번째 갈비뼈 바로 위를 작게 절개합니다. (D) 4번째 ICS에서 전방 및 후방으로 절개 확장. (E) 4번째 ICS에서 시각화된 폐. (F-G) 리브 견인기가 배치되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig03.jpg"> 그림 3: 왼쪽 hilar clamp. (A) 면봉으로 왼쪽 폐를 움직였습니다. (B) 하부 폐 인대(IPL)가 시각화되었습니다. (C) 왼쪽 폐를 앞쪽으로 뒤집은 상태에서 실크 넥타이를 hilum 뒤쪽에 놓습니다. (D) 실크 넥타이 위에 왼쪽을 뒤쪽으로 뒤집으면 전방 힐룸이 시각화됩니다. (E) 왼쪽 hilum 위의 slipknot의 악기 넥타이. (F) hilum에 Slipknot. (G) 유출을 수동으로 폐색하면 왼쪽 폐가 팽창하지 않아 성공적인 힐라 클램프를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig04.jpg"> 그림 4: 왼쪽 힐라 클램프 및 왼쪽 가슴 폐쇄의 해제. (A) 슬립매듭을 풀면 왼쪽 폐가 다시 팽창됩니다. (B) 4번째 갈비뼈 바로 위에 한 번 물린 갈비뼈 폐쇄 및 (C) 6번째 갈비뼈 바로 위에 한 입 물린 갈비뼈 폐쇄. (D-E) 가슴을 닫고 한 바늘 끝에 묶습니다. (F) 중단된 스티치가 있는 피부 폐쇄(러닝 스티치로 근육층 폐쇄 후). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig05.jpg"> 그림 5: 개복술, 양측 조가골 흉곽 절개술, 동맥혈 채취. (A) 마우스를 누운 자세로 조정했습니다. (B) 정중선 복부에 대한 피부 절개. (C) 개복술은 시푸스에서 치골까지 확장되며, 가장 아래쪽 갈비뼈를 따라 좌우로 확장됩니다. (D-E) 흉강으로 들어가기 위한 횡격막을 열고 가장 아래쪽 늑골(점선)을 따라 좌우로 횡격막 절개를 확장합니다. (F) 가슴 정점을 향한 전방 겨드랑이 선(점선)을 절개하는 양측 조개 껍질 흉곽 절개술. (G) 하대정맥(inferior vena cava) 후방에서 좌흉으로 뻗어 있는 우측 폐의 부속엽. (H) 부속엽이 동원되어 오른쪽 가슴으로 돌아갔다. (I) 좌심실에서 동맥혈의 흡인(삽입물: 우심실과 좌심실의 색상 차이). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig06.jpg"> 그림 6: 하대정맥(inferior vena cava)에 정맥 주사 . (A) 하대정맥(IVC)을 노출시키기 위한 우측 내측 내장 회전. (B) IVC에 용액 주입. (C) 지혈을 달성하기 위해 IVC에 압력을 가합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig07.jpg"> 그림 7: 좌측 힐라 클램프 후 폐 산소화, 조직학 및 호중구 유출의 대표적인 결과. (A) 가짜 흉곽 절개술을 받은 C57BL/6 마우스의 동맥혈 내 산소 분압 대 hilar clamp. 결과는 SEM± 평균, n=6-7로 표시됩니다. Mann-Whitney U 검정으로 계산된 p 값. **피 &lt;0.01. (B) 가짜 흉곽 절개술 대 hilar clamp를 받은 C57BL/6 마우스의 포르말린 고정, 파라핀 내장 폐 절편의 H&amp;E 염색. 눈금 막대는 250 μm를 나타냅니다. (C) hilar 클램프 후 C57BL/6 마우스에서 혈관 내(APC-Ly6G+FITC-Ly6G+) 대 혈관 외(APC-Ly6G+FITC-Ly6G-) 호중구의 분포를 나타내는 대표적인 그림. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig07large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 1: 기관내관용 도입기. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/Supplemental_Figure_1_updated.pdf" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 프로토콜은 마우스 모델에서 폐 허혈 재관류 손상을 연구하는 데 사용할 수 있는 실현 가능하고 신뢰할 수 있으며 재현 가능한 좌폐 고막 클램핑 방법을 설명합니다.

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp 폐 허혈 재관류 손상 모델

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft ...

우리는 근본적인 세포 및 분자 메커니즘을 이해하는 것을 목표로 폐 이식 후 결과에 대한 허혈 재관류 손상의 영향을 연구하는 데 관심이 있습니다. 폐로 유입되는 호중구는 허혈 재관류 손상(ischemia-reperfusion injury, IRI)을 유발합니다. 우리는 최근에 B 세포가 호중구가 폐로 들어가는 과정을 진행한다는 것을 발견했으며, IRI에 이어 호중구를 모집하는 데 중요한 역할을 합니다.쥐에 좌측 폐를 이식하는 것은 기술적으로 까다로우며, 일관된 결과를 얻기 위해 수개월에 걸친 전담 교육이 필요합니다. 또한 알레르기 유발 및 외과적 문합 외상을 소개합니다. 따라서 우리는 허혈 재관류 손상에 대한 연구를 분리할 수 있는 보다 접근하기 쉬운 기술이 필요합니다.우리의 hilar clamp 모델을 사용하여 우리는 B 세포가 허혈 재관류 손상 후 일찍 폐에 들어가고 B 세포 수용체의 고전적인 단핵구를 TLR4 의존 방식으로 모집한다는 것을 발견했습니다. 이는 궁극적으로 폐로의 호중구 유출을 증가시키는 결과를 낳습니다. 우리의 프로토콜은 슬립 매듭으로 왼쪽 폐 힐럼의 가역적 봉합 결찰을 포함합니다.봉합사의 유연하고 눈에 거슬리지 않는 특성으로 인해 흉부 폐쇄가 가능하며, 이는 흉부 폐쇄가 마우스의 열과 무감각한 체액 손실을 최소화하기 때문에 장기간 온열 허혈을 연구하는 데 유용합니다.

murine-left-pulmonary-hilar-clamp-model-lung-ischemia-reperfusion

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

외과 외상은 염증 반응을 유도합니다. 크린 시토킨 및 내생 리간드는 국소 빈혈과 reperfusion에 따라 심근 경색 크기를 조절하는 것으로 알려져 있습니다. 우리는 thoracotomy의 영향을 최소화하기 위해 매달려 가중치를 사용하여 murine 국소 빈혈과 reperfusion의 수정된 폐쇄 가슴 모델을 제시.

심근 국소 빈혈 및 Reperfusion의 Murine 폐쇄 가슴 모델

우리는 재현성을 높이기 위해 좌전 하행 동맥 (LAD)에 결찰의 위치에서 더 명확 수 있습니다 마우스 모델에서 심근 경색 (MI)을 시뮬레이션하기 위해 실험 허혈 / 재관류 (I / R) 손상을 유발하는 수술 방법을 소개합니다 마우스에있는 MI 실험.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

고유 한 쥐의 간 문부 클램프 모델은 허혈 - 재관류 손상을 완화의 약물 분자의 영향을 연구하기 위해 개발되었다. 이 모델은 직접 간 전송을 허용, 포털 정맥의 지점을 통해 허혈성 간 세그먼트 포털 공급의 직접 삽관이 포함되어 있습니다.

쥐 간 문부 클램프 모델을 사용하여 직접 분절 인트라 간 납품 방법

여기서 우리는 마우스에서 좌측 전방 의 관상 동맥의 영구적 인 결찰을 달성하는 방법을 보여주는 외과 적 절차를 설명합니다. 이 모형은 심근 경색의 병리생리학 및 수반되는 생물학 프로세스를 조사하기 위하여 높은 관련성입니다.

왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰을 사용하는 뮤린 심근 경색 모델

우리는 임상적으로 관련된 대장암 간 전이(CRLM) 종양 모델과 종양 성장 및 전이에서 간 허혈 재관류(I/R)의 영향을 상세히 기술한다. 이 모델은 간 전이성 성장의 수술 유발 승진의 근본적인 기계장치를 더 잘 이해하는 것을 도울 수 있습니다.

허혈 재관류 손상의 설정에서 전이성 간 종양의 뮤린 모델

쥐 심장의 심근 허혈-재관류 모델은 자체 제작된 리트랙터, 폴리염화비닐 튜브, 및 독특한 매듭 방법을 사용하여 개선된다. 심전도, 트리페닐테트라졸륨 클로라이드 및 조직학적 염색 및 퍼센트 생존율 분석 결과는 개선된 모델 그룹이 이미 존재하는 모델 그룹보다 더 높은 성공률 및 생존율을 갖는다는 것을 보여주었다.

심근 허혈 및 재관류 손상의 개선 된 설치류 모델

환기를 유지하고 저산소증을 피하면서 왼쪽 폐 허혈 재관류 (IR) 손상을 만드는 마우스 수술 모델.

Orotracheal 삽관 및 환기 폐 허혈 재관류 수술의 마우스 모델

여기에 제시된 것은 생쥐에서 왼쪽 관상 동맥의 영구 결찰을위한 수술 절차입니다. 이 모델은 심근 경색 후 병태생리학 및 관련 염증 반응을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

좌측 관상동맥 결찰술: 심근경색의 외과적 쥐 모델

이 연구는 쥐에서 개복술을 통한 복강 대동맥 교차 클램핑 중 내장 허혈-재관류 후 급성 폐 손상 모델을 설명합니다. 이를 통해 대동맥 클램핑의 임상적, 생물학적 효과뿐만 아니라 허혈-재관류가 기본 장기 및 원격 폐 손상에 미치는 영향을 조사할 수 있습니다.

쥐에서 Supra-Coeliac Aortic Cross Clamping에 의한 내장 허혈-재관류 후 급성 폐 손상 모델

우리는 쥐를 받아야하는 중간 및 심한 허혈 - 재관류 신장 손상의 모델을 설명 일방적 신 경 각각 동시 또는 지연 반대측 신장 절제 뒤에 체결. 이러한 모델은 지속적으로 신장 기능 장애 및 사후 부상 섬유증을 야기하지만, 부상 정도와 생존율 마우스 배경, 나이, 수술 장비에 따라 달라집니다.

마우스의 급성 신장 손상 및 사후 상해 섬유증의 허혈 - 재관류 모델

배우세요 쥐 모델에서 폐 허혈 재관류 손상을 연구하는 왼쪽 폐문 클램프 기법을 사용하여 중성구와 B세포의 역할을 분석하는 방법을. 이 프로토콜은 폐 이식 결과 개선에 중요한 통찰을 제공합니다.

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp 폐 허혈 재관류 손상 모델

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