Name: 자궁내막종과 관련된 불임을 연구하기 위한 실험적 마우스 모델 수립 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 배우세요 C57BL/6J 마우스를 이용한 자궁내막종 실험 모델 수립 방법을 통해 생식 의학의 불임 기전을 연구하고 치료법 개발에 활용하는 새로운 연구 도구를 탐색하세요.

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<meta charset="utf8"></head><body>새로운 자궁내막종 시뮬레이션 마우스 모델 개발

<table><tbody><tr><td>25G 바늘이 있는 1cc 주사기</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>301320</td><td></td></tr><tr><td>10mm 조직 배양 접시</td><td>송골매</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>10% 완충 포르말린</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>SF100-4 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>10x 인산염 완충 식염수(PBS) 완충액</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>바늘 30g</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>305107</td><td></td></tr><tr><td>5-0 검은 꼰 실크 비흡수성 봉합사</td><td>에티콘 주식회사</td><td>W500H</td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>접착식 현미경 슬라이드</td><td>마리엔펠트</td><td>810401</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 주사&nbsp;</td><td>의료 수의사 인터내셔널</td><td>RXBUPRENOR5</td><td></td></tr><tr><td>양두 면봉</td><td>산요(주)</td><td>후비-340</td><td></td></tr><tr><td>미세 집게(Fine Forceps)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>알파산 인터내셔널 bv</td><td>2203095-08</td><td></td></tr><tr><td>마이크로튜브</td><td>코닝&nbsp;</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>엑셀타 코퍼레이션</td><td>2827-NH-35-SE-ND</td><td></td></tr><tr><td>안과 연고</td><td>주요 의약품</td><td>10033691</td><td></td></tr><tr><td>요오드산 쉬프(PAS) 염색 키트&nbsp;</td><td>아브캠</td><td>AB150680</td><td></td></tr><tr><td>파우더 프리 멸균 장갑</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>19020558</td><td></td></tr><tr><td>카세트 처리/임베딩</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>15-197-700A</td><td></td></tr><tr><td>사이즈 3 메스</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>22-079-657</td><td></td></tr><tr><td>작은 톱니 모양의 반곡선 겸자</td><td>로보즈 외과 기구 주식회사</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>작은 수술용 가위</td><td>로보즈 외과 기구 주식회사</td><td>RS-5850</td><td></td></tr><tr><td>표준 광학 현미경</td><td></td><td></td><td>질 세포학 도말 검사 및 조직학적 분석을 평가합니다.</td></tr><tr><td>강철 메스 블레이드 #10</td><td>B.브라운</td><td>BB510 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈</td><td>메디콤</td><td>HMWS 077</td><td></td></tr><tr><td>멸균 파이렉스 유리 페트리 접시</td><td>코 닝</td><td>70160-101</td><td></td></tr><tr><td>온도 조절 전기 패드&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VICRYL RAPIDE (폴리글락틴 910) 흡수성 봉합사</td><td>에티콘 주식회사</td><td>W9918</td><td></td></tr><tr><td>자일라진&nbsp;</td><td>알파산 인터내셔널 bv</td><td>2110333-10</td><td></td></tr></tbody></table>

자궁내막종과 관련된 불임을 연구하기 위한 실험적 마우스 모델 수립

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

OMA의 성공적인 설립 이식 프로토콜에 투입된 12마리의 생쥐 중 10마리는 전체적인 해부학적 및 조직학적 수준 모두에서 특징적인 OMA 병변을 보였으며, 이는 83%의 성공률로 해석됩니다. 전체 검사에서 난소에 부착된 액체로 채워진 병변이 발견되었으며, 이는 임상적 OMA 증상을 연상시킵니다(그림 2). 그림 3에서 볼 수 있듯이 조직병리학적 정밀 검사는 이소성 자궁내막 조직의 성공적인 착상을 확인했다. 더욱이, 자궁내막증 병변의 침투는 보형물 옆의 난포의 대량의 폐쇄를 유발했는데, 이는 난소 환경에 대한 간섭을 나타냅니다.
모델 특이성 모델의 타당성에 결정적인 영향을 미친 것은 난소 자궁내막증에 대한 특이성이었습니다. 철저한 검사 결과, 다른 골반 또는 복부 장기에서 외부 자궁내막증 보형물이 확인되지 않았으며, 이는 자궁내막종 및 관련 불임을 조사하기 위한 강력한 도구로서 모델의 정확성과 잠재력을 강조했습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig01.jpg"> 
그림 1: 자궁내막종 모델 세대. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig02.jpg"> 
그림 2: 자궁내막종의 전체 해부학적 구조. 가짜 대조군과 비교했을 때, 이소성 자궁내막 낭성 성장은 이식 후 4주 후에 OMA 그룹에서 형태학적으로 난소 형태와 관련하여 관찰되었다. 파란색 점선 윤곽선: 자궁내막성 병변. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig03.jpg"> 
그림 3: 마우스 모델에서 자궁내막 병변의 조직학적 염색 절편. 가짜 대조군과 비교했을 때, 이소성 자궁내막 낭포성 성장은 조직학적으로 OMA 그룹에서 이식 4주 후 난소와 관련하여 관찰되었다. 검은색 화살표는 폐쇄성 여포를 나타냅니다. 스케일 바 = 0.5mm. 약어: OMA = 자궁내막종. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

우리 연구의 범위는 자궁내막종 관련 불임의 기저에 있는 메커니즘을 이해하는 데 중점을 두고 있습니다. 우리는 자궁내막종을 시뮬레이션하는 마우스 모델을 개발하고 그것이 생식력에 미치는 영향을 조사함으로써 지식의 격차를 해소하는 것을 목표로 합니다. 자궁내막증 연구 분야에서 최근 발전에는 자궁내막증의 근본적인 분자 메커니즘 이해의 발전, 진단 및 치료를 위한 새로운 마커 식별, 자궁내막종과 같은 특정 하위 유형을 연구하기 위한 혁신적인 모델 개발이 포함됩니다. 이러한 발전은 자궁내막증에 대한 지식과 잠재적인 치료 전략을 향상시키는 데 기여합니다. 자궁내막종 연구의 현재 실험적 과제에는 신뢰할 수 있는 동물 모델의 부족, 병인 및 생식력 영향에 대한 제한된 이해, 재발 연구 및 진단 테스트의 필요성 등이 포함됩니다. 자궁내막종 마우스 모델과 연구 결과의 통합은 이러한 문제를 해결하고 이 분야를 발전시킵니다.우리의 프로토콜은 다른 기술에 비해 뚜렷한 이점을 제공합니다. 특히 자궁내막종을 모방하는 데 중점을 두고 있지만 이 방법으로 다른 하위 유형은 확립되지 않았습니다. 높은 성공률로 유전자 변형이 가능하고 인간과 유사한 생식 특성을 복제하므로 자궁내막종 관련 불임을 연구하는 데 유용한 도구가 됩니다. 우리의 발견은 자궁내막증 연구의 새로운 시대를 위한 길을 열었습니다. 오랜 격차를 메움으로써 우리 모델은 혁신적인 통찰력을 약속하고 자궁내막종에 대한 이해, 치료 및 잠재적으로 예방에 혁명을 일으킵니다. 재발 및 진단 연구 결과를 통합함으로써 우리의 연구는 자궁내막증 연구 및 환자 치료의 더 넓은 맥락을 향상시킵니다.[해설자] 수컷 페로몬이 함유된 침구를 채취한 후 암컷 쥐 케이지에 48시간 동안 도입합니다. 페트리 접시에 PBS 10밀리리터를 붓고 면봉의 한쪽 끝을 담가 액체를 흡수합니다. 케이지에서 쥐 한 마리를 부드럽게 꺼내 뚜껑 위에 올려 놓습니다. 적신 면봉을 질에 조심스럽게 삽입하고 면봉을 동물의 몸의 장축을 기준으로 45도 부드럽게 회전시킵니다. 질 발광벽에서 세포를 채취한 후 면봉을 조심스럽게 빼냅니다. 깨끗하고 미리 라벨이 붙은 유리 슬라이드에 면봉 끝을 부드럽게 굴려 수집된 세포를 옮깁니다. 발정기를 나타내는 각질화된 상피 세포의 존재에 대해 현미경으로 슬라이드를 검사합니다. 시작하려면 기증자가 안락사한 발정기 암컷 마우스의 복부 부위를 70% 에탄올로 소독합니다. 멸균 수술용 가위를 사용하여 복막 정중선을 따라 1cm 절개를 하여 근육층을 노출시킵니다. 그런 다음 다른 가위를 사용하여 근육층을 자르고 골반강을 드러냅니다. 집게의 끝을 닫고 뭉툭한 중앙 부분을 사용하여 장을 부드럽게 들어 올립니다. 자궁을 찾은 후 자궁 뿔 전체를 멸균 해부하여 양쪽 자궁 뿔을 제거합니다. 절제된 조직을 PBS가 들어 있는 페트리 접시에 넣고 과도한 지방 조직을 제거합니다. 멸균 메스를 사용하여 조직을 1mm 입방체 조각으로 세밀하게 해부합니다. 조직을 촉촉하게 유지하기 위해 주기적으로 PBS를 첨가하십시오. 마취된 수혜자 마우스를 멸균 수술 보드 위에 바로 누운 자세로 놓습니다. 뒷다리를 부드럽게 조작하여 피부 아래에 뼈가 돌출되어 있는 것을 느껴 수술 부위를 식별합니다. 70% 에탄올 면봉으로 수술 부위를 소독한 다음 베타딘으로 소독합니다. 선택한 부위에서 3mm에서 5mm 사이의 정확한 측면 절개를 합니다. 주로 사용하지 않는 손 겸자로 난소를 안정화하고 100마이크로리터의 PBS를 난소 활액낭에 주입하여 약간의 분리를 관찰합니다. 활액낭에 작은 슬릿을 만들고 마이크로 겸자를 사용하여 1mm 입방체의 자궁 조직 조각을 이식합니다. 수술 후 흡수성 봉합사로 근육층을 봉합하고 비흡수성 봉합사로 피부를 봉합합니다. 4주 후, 이식된 수혜자 마우스를 하우징 케이지에서 제거합니다. 안락사된 수혜자 마우스를 정중선 절개하고 장기 검사를 위해 복강을 노출시킵니다. 외부 자궁내막증 병변이 있는지 복강을 철저히 검사하십시오. 그런 다음 사진을 찍기 위해 눈에 보이는 병변이 있는 난소를 추출합니다. 병변이 있는 난소를 10% 중성 완충 포르말린으로 고정합니다. 조직 절편을 절편화하고 슬라이드에 장착한 후 슬라이드 자일렌 용액을 배치하여 파라핀을 제거합니다. 슬라이드를 일련의 감소하는 에탄올 농도에 배치하여 조직 절편을 재수화합니다. 조직 절편을 실온에서 5-10분 동안 1% 요오산으로 처리합니다. 그런 다음 슬라이드를 증류수로 철저히 헹구어 잔류 요오드산을 제거합니다. 이제 15분 동안 이동 용액으로 조직 절편을 염색합니다. 슬라이드를 뜨거운 수돗물로 헹구어 여분의 얼룩을 제거한 다음 증류수로 헹굽니다. Mayer의 헤마트톡실린으로 조직 절편을 2-3분 동안 대조염색합니다. 블루잉 시약을 30초 동안 바르기 전에 흐르는 수돗물로 슬라이드를 헹굽니다. 증류수로 슬라이드를 헹군 후 에탄올 농도를 증가시켜 절편을 탈수합니다. 섹션을 자일렌에 담그고 투명하게 만듭니다. 섹션에 장착 매체를 바르고 기포를 피하면서 덮개 슬립을 부드럽게 놓습니다. 건조 후 광택 현미경으로 슬라이드를 검사하여 난소의 자궁내막증을 확인하는 자궁내막선, 간질 및 출혈성 낭종의 존재 여부를 검사합니다. 가짜 대조군과 비교하여 자궁내막군에서 이식 후 4주 후에 난소 형태와 관련하여 이소성 자궁내막 낭성 성장이 관찰되었습니다. 추가 조직병리학적 조사를 통해 자궁내막군에서 이소성 자궁내막 조직의 성공적인 이식이 확인되었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

장 장간막의 동맥 계단식으로 자궁 조직의 자동 이식에 의한 마우스 및 쥐에 endometriosis의 수술 유도의 설명입니다.

자궁의 자동 이식하여 수술 유발 Endometriosis의 마우스 모델

여기, 선물이 붙일 레이블된 인간의 자궁내 막 조각 쥐에 투입의 라이브 이미징에 대 한 프로토콜. 메서드를 모니터링을 통해 endometriotic 병 변 크기에 선택의 약의 효과 실시간으로 형광 기자에 의해 방출 되는 형광의 정량화를 공부 하 고 수 있습니다.

궁의 분리 마우스 모델에서 병 변 크기의 비 침 투 적인 모니터링

자궁내막증의 많은 설치류 모델은 기술적 복잡성, 재현성 및/또는 면역 손상된 동물 또는 특수 리포터 마우스에 대한 필요성에 의해 제한됩니다. 우리는 독립적으로 검증 가능하고 객관적인 점수 매기기 시스템을 갖춘 실험용 마우스를 사용하여 병변 유도의 단순화 된 시스템을 제시하며, 난소 절제술 이나 생존 수술에 대한 요구 사항이 없습니다.

자연적으로 사이클링 마우스를 사용하는 자궁내막증의 신제닉 뮤린 모델

이 프로토콜은 유전자 발현 및 조직학적 분석을 위한 마우스 자궁내막 상피 오가노이드를 확립하는 방법론을 설명합니다.

마우스 자궁에서 3D 자궁 내막 오가노이드 확립

임신 확립은 복잡한 배아와 자궁 누화를 포함하는 역동적인 과정입니다. 이러한 과정에 대한 산모의 자궁 환경의 정확한 기여는 여전히 활발한 조사 영역으로 남아 있습니다. 여기에서는 이러한 연구 질문을 해결하기 위해 생체 내 동물 모델을 설계하는 데 도움이 되는 자세한 프로토콜이 제공됩니다.

난소 절제된 마우스 모델에서 임신 확립에 대한 자궁 기여도를 연구하는 방법

이 프로토콜은 배아 착상 과정에 영향을 미치는 관련 분자를 평가하기 위한 간단하고 효율적인 체 외 배아 이식 모델을 수립하기 위한 방법론을 설명합니다.

In vitro 배아 이식 모델 확립

이 논문은 1-3분 이내에 95% 에탄올을 마우스 자궁에 주입하여 사망률이 매우 낮고 자궁 내 유착을 최소화하면서 신뢰할 수 있고 재현 가능한 얇은 자궁내막을 생산하기 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

얇은 자궁내막의 마우스 모델 구축

복막 무결성의 손실을 이해하고 만성 골반 통증을 치료 endometriosis의 가벼운 형태의 여성과 쉽게 laparoscopy시 염료의 intraoperative 떨어 뜨림을 사용하여 감지 할 수 할 수있는 새로운 패러다임을 제공합니다.

미묘한 Endometriosis의 Intraoperative 감지 : 복막 무결성의 손실과 관련된 골반 통증의 감지 및 치료를위한 소설 패러다임

표준 배양 방법에 세포 생리 학적 환경 꺼내하고 접시의 플라스틱 표면에 성장합니다. 일차 인간 골수 세포의 거동을 연구하기 위해, 우리는 세포가 조직의 미세 환경을 네이티브 recapitulating 조건에서 재배되는 3-D 배양 시스템을 만들었다.

차 사람 골수 및 악성 종양을 연구하는 세 가지 차원 조직 배양 모델

우리는 인간의 유방암에서 호르몬 작용을 연구하기위한 새로운 생체 모델을 개발했다. 이 조직 구조, 세포 간 상호 작용 및 분비 신호를 보존 수술 유방 조직 표본으로부터 분리 미세 조직에 기초한다.

<em&gt; 생체 내</em&gt; 모델은 인간의 유방암에서 호르몬 행동을 연구하기 위해

배우세요 C57BL/6J 마우스를 이용한 자궁내막종 실험 모델 수립 방법을 통해 생식 의학의 불임 기전을 연구하고 치료법 개발에 활용하는 새로운 연구 도구를 탐색하세요.

자궁내막종과 관련된 불임을 연구하기 위한 실험적 마우스 모델 수립

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