Name: 면역저하 마우스에 인간 조혈모세포와 전구세포의 대퇴골내 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 40 s
Description: 배우세요 면역저하 마우스에 인간 조혈모세포와 전구세포를 대퇴골내 주입하는 방법을. 직접 주입으로 조직 이식률을 높여 정상 혈액 세포 발달과 노화, 질병 영향을 정량적으로 분석할 수 있습니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>인간 HSPC를 치사량이하로 조사된 마우스의 대퇴골에 주입

<ol><li>Dancey, J. T., Deubelbeiss, K. A., Harker, L. A., Finch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+kinetics+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neutrophil kinetics in man.</a> J Clin Invest. 58 (3), 705-715 (1976).</li>
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<li>McIntosh, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonirradiated+NOD%2CB6.SCID+Il2r%CE%B3%E2%88%92%2F%E2%88%92+KitW41%2FW41+%28NBSGW%29+Mice+support+multilineage+engraftment+of+human+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Nonirradiated NOD,B6.SCID Il2rγ−/− KitW41/W41 (NBSGW) Mice support multilineage engraftment of human hematopoietic cells.</a> Stem Cell Reports. 4 (2), 171-180 (2015).</li>
<li>Notta, F., Doulatov, S., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engraftment+of+human+hematopoietic+stem+cells+is+more+efficient+in+female+NOD%2FSCID%2FIL-2Rgc-null+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Engraftment of human hematopoietic stem cells is more efficient in female NOD/SCID/IL-2Rgc-null recipients.</a> Blood. 115 (18), 3704-3707 (2010).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Sci Rep. 6, 23886(2016).</li>
<li>Mende, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+molecular+and+functional+features+of+extramedullary+hematopoietic+stem+and+progenitor+cell+reservoirs+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Unique molecular and functional features of extramedullary hematopoietic stem and progenitor cell reservoirs in humans.</a> Blood. 139 (23), 3387-3401 (2022).</li>
<li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li>
<li>Eppert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+gene+expression+programs+influence+clinical+outcome+in+human+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cell gene expression programs influence clinical outcome in human leukemia.</a> Nat Med. 17 (9), 1086-1093 (2011).</li>
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<li>Li, J., Chen, H., Zhao, S., Wen, D., Bi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+intrafemoral+orthotopic+xenografts+of+peripheral+blood+or+bone+marrow+from+acute+myeloid+and+acute+lymphoblastic+leukemia+patients%3A+clinical+characterization%2C+methodology%2C+and+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived intrafemoral orthotopic xenografts of peripheral blood or bone marrow from acute myeloid and acute lymphoblastic leukemia patients: clinical characterization, methodology, and validation.</a> Clin Exp Med. 23 (4), 1293-1306 (2023).</li>
<li>Dobson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relapse-fated+latent+diagnosis+subclones+in+acute+B+lineage+leukemia+are+drug+tolerant+and+possess+distinct+metabolic+programs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Relapse-fated latent diagnosis subclones in acute B lineage leukemia are drug tolerant and possess distinct metabolic programs.</a> Cancer Discov. 10 (4), 568-587 (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 mL 인슐린 주사기와 29 G x 12.7 mm 바늘</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 인슐린 주사기와 29 G x 0.5" 바늘</td><td>BD</td><td>324827</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 튜브</td><td>Fisherbrand</td><td>509-GRD-PFB</td><td></td></tr><tr><td>3 mL 주사기&nbsp;</td><td>HENKE SASS WOLF GMBH</td><td>4020.000V0</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 라운드 바닥 폴리스티렌 시험관 셀 스트레이너 캡 12 x 75 mm</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td>FACS 튜브</td></tr><tr><td>5 mL 라운드 바닥 폴리스티렌 시험관 스냅 캡 12 x 75 mm</td><td>Falcon</td><td>352058</td><td>FACS 튜브</td></tr><tr><td>27 G 1/2" 바늘&nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>300635</tr><tr><td>40 &마이크로; 50 mL 튜브용 m 세포 여과기</td><td>Greiner Bio-one</td><td>542040</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 라운드 바닥 플레이트&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>351177</td><td></td></tr><tr><td>알코올 면봉</td><td>VITREX MEDICAL A/S</td><td></td><td></td></tr> 520213 <tr><td>BD LSR Fortessa X-20 세포 분석기&nbsp;</td><td></td><td></td> BD <td>유세포 분석기</td></tr><tr><td>Buphrenorphine</td><td>Animalcare</td><td>XVD190</td><td></td></tr><tr><td>CD14/PECy7 (클론 M5E2)</td><td>바이오레전</td><td>드 301814</td><td>1/1000</td></tr><tr><td>CD19/Alexa 700 (클론 HIB19)</td><td>바이오레전</td>드 <td>302226</td><td>1/300</td></tr><tr><td>CD19/FITC(클론 HIB19)</td><td>바이오레전</td><td>드 302206</td><td>1/200</td></tr><tr><td>CD3/APCCy7&nbsp;( 클론 HIT3a)</td><td>바이오레전</td>드 <td>300318</td><td>1/100</td></tr><tr><td>CD33/APC (클론 P67.6)</td><td>BD</td><td>345800</td><td>1/200</td></tr><tr><td>CD45/BV510 (클론 HI30)</td><td>바이오레전</td>드 <td>304036</td><td>1/500</td></tr><tr><td>CD45/PECy5 (클론 2D1)</td><td>바이오레전</td>드 <td>368526</td><td>1/300</td></tr><tr><td>CompBeads 안티 마우스 Ig, &kappa;/negative control compensation particles 세트</td><td>BD</td><td>에서 사용</td><td></td>552843</tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS002139</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P40-37500</td><td></td></tr><tr><td>Glycophorin A (GlyA)/PE (Clone GA-R2)</td><td>BD</td><td>340947</td><td>1/1000</td></tr><tr><td>Iscove Modified Dulbecco Media (IMDM)에서</td> 사용<td>PAN-Biotech</td><td>P04-20250</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane (IsoFlo 100% w/w 흡입 증기, 액체)</td><td>조에티스</td><td>115095</td><td></td></tr><tr><td>마이크로베트&nbsp; 300 리튬 헤파린 LH, 300 &마이크로; L</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>20.1309</td><td>마우스 채혈 튜브</td></tr><tr><td>NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 마우스&nbsp;</td><td>찰스 리버&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pancoll human, 밀도: 1.077 g/mL</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-60500</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190169</td><td></td></tr></tbody></table>

면역저하 마우스에 인간 조혈모세포와 전구세포의 대퇴골내 주입 

Intrafemoral Injection of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells into Immunocompromised Mice

대퇴 내 주입 세포의 생착은 실험 설계에 따라 24시간부터 언제든지 평가할 수 있습니다. 종료 시점에는 IF, BM, PB 및 비장이 수집될 수 있습니다. 이를 처리할 수 있으며 유세포 분석을 통해 생착 수준을 평가할 수 있습니다. 낮은 수준에서도 인간 생착을 강력하게 부르기 위해 인간 CD45에 대한 두 가지 뚜렷한 항체(클론 HI30 및 클론 2D1)로 염색했습니다. 두 항체(CD45++)에 모두 양성인 세포만 인간 유래로 간주되었습니다. 생착 임계값은 (% CD45++ + % GlyA+) ≥ 0.01%로 설정되었으며 두 게이트에서 최소 30개의 세포가 기록되었습니다(그림 1)7,8. 주입된 뼈가 아닌 다른 뼈로 인간 세포의 이동은 일반적으로 지연됩니다. 따라서 8주 전에 뼈를 채취하면 IF의 생착률이 BM보다...

Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their lifelong ability to produce all blood cell types. This is operationally tested by transplanting cell ...

intrafemoral-injection-human-hematopoietic-stem-progenitor-cells-into

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜 세부 마우스 배아의 줄기 세포 (ESC)와 lethally 조사받는 마우스에 그들의 이후의 주입에서 transplantable 조혈 줄기 세포의 유도. 간단히, ESC는 다음 retroviral HoxB4 및 OP9 stromal 세포와 조혈 크린 시토킨 공동 양식에 감염된 embryoid 단체로 구별됩니다.

Murine 배아 줄기 세포로부터 조혈 줄기 세포의 유도

이 비디오는 인간 면역 체계(HIS) 마우스를 생성하는 기술을 보여줍니다. CD34+ 조혈모세포(HSC)는 항체로 코팅된 마그네틱 비드를 사용하여 인간 제대혈 버피 코트 세포에서 분리됩니다. CD34+ HSC는 사이토카인이 풍부하고 동결 보존된 성장 배지에서 확장됩니다. 마지막으로, 해동된 HSC를 면역결핍 새끼 마우스에 주입하여 HIS 마우스 모델을 확립합니다.

제대혈 조혈 줄기세포를 분리하여 인간 면역계 마우스를 생성하다

이 프로토콜은 마우스를 희생하지 않고 대퇴골수(BM)를 연속적으로 샘플링하는 절차를 설명합니다. 이 절차는 시간 경과에 따른 마우스의 BM 구성에 대한 종단 연구를 용이하게 하고 생체 외 및 이식 연구를 위해 BM 내 세포에 대한 직렬 액세스를 제공합니다.

라이브 쥐의 대퇴부 골수 흡인

조혈 줄기 및 전구 세포의 표시 조합 5 형광 단백질은 재생 중에 골수 조혈 아키텍처에 대한 통찰력을 제공하는 공 초점과 두 광자 현미경을 통해 생체 클론 추적에 있습니다. 이 방법은 이식 다음 시간의 광범위한 기간에 대한 손상 조직의 스펙트럼으로 구분 HSPCs 유래 세포의 비 침습적 운명 매핑 할 수 있습니다.

공 초점 및 다중 광자 현미경을 사용하여 다섯 형광 단백질에 의해 표시됨 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 클론 추적에서

조혈 줄기 및 전구 세포 (HSPCs) 및 골수 틈새 시장 사이의 상호 작용의 본질은 제대로 이해된다. 맞춤형 하드웨어 변형 및 다단계 획득 프로토콜은 생체 화상 골수 영역 내에 홈 표지 HSPCs 추적 상호 작용과 움직임 이광자 및 공 초점 현미경의 사용을 허용한다.

성인 마우스 두개골 골수에서 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 4 차원 추적에서

Intravital 형광 현미경 검사 법 (IVFM)는 calvarium의 유도 및 조 혈 모 세포의 골 수 (BM) 틈새로 engraftment 연구 유전 동물 모델에 적용 됩니다.

Intravital 형광 현미경 검사 법 (IVFM)를 결합 하 여 유전자 모델 골 틈새에 조 혈 모 세포의 Engraftment 역학을 공부 하

우리는 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 기술합니다 - 번역형 면역 종양학 연구를 위한 기지를 둔 인간화한 이종이식 마우스 모형. 이 프로토콜은 I-O 치료 평가를 위한 유사한 모형을 설치하고 특성화하기 위한 일반적인 지침으로 봉사할 수 있었습니다.

인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 번역 면역 종양학에 대한 인간화 제종이식 모델 (I-O) 연구

여기에 기술된 것은 인간화된 마우스에 있는 HIV 감염의 역학을 공부하기 위한 3개의 실험적인 접근입니다. 첫 번째는 만성 감염 사건의 연구를 허용하는 반면, 두 후자는 1 차감염 또는 바이러스 재활성화 후 급성 사건의 연구를 허용합니다.

인간화 면역 결핍 마우스 모델에서 만성, 급성 및 재활성화 HIV 감염

이 프로토콜은 쥐 이종 이식 모델에서 유전자 편집 세포를 포함한 몇 가지 조혈 또는 백혈병 줄기 세포의 대퇴 내 주사를 설명하며, 이를 통해 세포의 빠르고 안전한 이식뿐만 아니라 골수의 연속 분석도 가능합니다.

살아있는 마우스를 사용한 간소화된 대퇴강 주사로 지속적인 골수 분석 가능

여기서, 우리는 손상된 조혈 및 면역 체계의 재건을 위해 치료용 조혈 줄기세포/전구 세포를 수확하기 위해 뼈 형태 유전 단백질-2 로딩 젤라틴 골격에 의해 유발되는 생체 내 골 오가노이드를 확립했습니다. 전반적으로 이 접근법은 세포 치료를 위한 유망한 세포 공급원을 제공할 수 있습니다.

치료용 조혈 줄기세포/전구세포를 채취하기 위한 In vivo Osteo-organoid 접근법

배우세요 면역저하 마우스에 인간 조혈모세포와 전구세포를 대퇴골내 주입하는 방법을. 직접 주입으로 조직 이식률을 높여 정상 혈액 세포 발달과 노화, 질병 영향을 정량적으로 분석할 수 있습니다.

면역저하 마우스에 인간 조혈모세포와 전구세포의 대퇴골내 주입

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