Name: Characterizing Modulators of Protease-Activated Receptors with a Calcium Mobilization Assay Using a Plate Reader(플레이트 리더를 사용한 칼슘 동원 분석으로 프로테아제 활성화 수용체의 조절인자 특성 분석) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-24T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 배우세요 플레이트 리더를 사용한 칼슘 동원 분석으로 프로테아제 활성화 수용체(PAR) 조절인자를 특성 분석하는 방법을. 내피 세포에서 파르마모딜린의 활성을 평가하여 혈전-염증성 질환 치료제 후보를 선별할 수 있습니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>내피 세포에서 프로테아제 활성화 수용체 리간드 연구

<table><tbody><tr><td>세포 배양 시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adherent EA.hy926 세포</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922</td><td></td></tr><tr><td>CellStripper 세포 해리 시약</td><td>Corning</td><td>25-056-CI</td><td>Trypsin을 선택적으로 사용할 수 있지만 PAR2 분석에서는 반드시 피해야 합니다.</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) w/phenol red</td><td>Corning</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Avantor</td><td>97068-091</td><td></td></tr><tr><td>돼지 껍질에서 추출한 젤라틴</td><td>MilliporeSigma</td><td>G2500</td><td>탈이온수로 0.4%(w/v) 수용액을 만드는 데 사용합니다. 살균하기 위해 사용하기 전에 오토클레이브.</td></tr><tr><td>펜/스트렙(100X)</td><td>코닝</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>코닝</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루(0.4% w/v)</td><td>코닝</td><td>25-900-CI</td><td></td></tr><<tr><td>강한>칼슘 동원 시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES)</td><td>Thermo</td><td>172571000</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td> <td>Avantor</td><td>97061-420</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘 이수화물</td><td>Thermo</td><td>42352-0250</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Thermo</td><td>J66650-AD</td><td></td></tr><tr><td>Fluo-4/AM</td><td>Invitrogen</td><td>F14201</td><td></td></tr><tr><td>Hank's balanced salt solution (Ca/Mg/phenol-red free)</td><td>Corning</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 육수화물</td><td>MilliporeSigma</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127 (Poloxamer 407)</td><td>Spectrum Chemical</td><td>P1166</td><td></td></tr><tr><td>Probenecid</td><td>TCI America</td><td>P1975</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨</td><td>VWR International</td><td>BDH9292</td><td></td></tr><tr><td>TFLLRN-NH2 (TFA salt)</td><td></td><td></td><td>Versiti Blood에서 Trudy Holyst가 준비했습니다. Research Institute</td></tr><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-well 배양 처리, 검은색 벽, 투명 바닥 분석 플레이트</td><td>Corning</td><td>3603</td><td>with transparent lids</td></tr><tr><td>원심분리기 튜브, 15 mL</td><td>Avantor</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브, 50 mL</td><td>Avantor</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>배양 플라스크, T-75</td><td>Corning</td><td>353136</td><td>조직 배양 처리된</td></tr><tr><td>일회용 시약 저장소, 50mL</td><td>Corning</td><td>RES-V-50-S</td><td></td></tr><tr><td>Enspire 플레이트 리더</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>단종</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브, 1.5mL</td><td>Avantor</td><td>20170-038</td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫, 9"</td><td>Fisher</td><td>13-678-6B</td><td>는</td></tr><tr><td>별도의 평면이 있는 멸균 PCR 튜브 스트립이어야 합니다. 캡 스트립</td><td>Avantor</td><td>76318-802</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁, 20 &마이크로; L</td><td>Biotix</td><td>63300042</td><td>멸균, 여과 팁</td></tr><tr><td>피펫 팁, 200 &마이크로; L</td><td>Biotix</td><td>63300044</td><td>멸균, 여과 팁</td></tr><tr><td>피펫 팁, 1250 &마이크로; L</td><td>Biotix</td><td>63300047</td><td>멸균, 필터링된 팁</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td></td><td>볼륨 6 사용</td></tr><tr><td>혈청학 피펫, 5 mL</td><td>Tradewinds 직접</td><td>&nbsp; 07-5005</td><td></td></tr><tr><td>혈청 피펫, 10 mL</td><td>Tradewinds 직접</td><td>&nbsp; 07-5010</td><td></td></tr><tr><td>혈청 피펫, 25 mL</td><td>Tradewinds 직접</td><td>&nbsp; 제07-5025</td><td></td></tr></tbody></table>호

characterizing modulators of protease-activated receptors with a calcium mobilization assay using a plate reader(플레이트 리더를 사용한 칼슘 동원 분석으로 프로테아제 활성화 수용체의 조절인자 특성 분석)

Characterizing Modulators of Protease-Activated Receptors with a Calcium Mobilization Assay Using a Plate Reader

이 분석의 목적은 일반적으로 3-4개의 새로운 파모듈린에 대한 농도-반응 곡선(CRC)을 생성하는 것입니다. 각 분석 플레이트에서 NRD-21과 같은 알려진 화합물에 대한 추가 CRC가 종종 생성되며, 이는 알려진 IC50으로 인해 실험에 대한 품질 검사 역할을 합니다. CRC를 생성하려면 표 1 에 표시된 것과 같은 플레이트 맵을 계획해야 합니다. 대신 단일 포인트 농도 반응이 필요한 경우 10μM 최종 농도(또는 기타 선호 농도)의 화합물을 최소 3개의 웰에 추가해야 합니다.
분석을 수행할 때 플레이트 리더에 의해 표시되는 형광이 빠르게 증가해야 합니다(증가는 처음 3-4회 스캔 내에서 시작되어야 함). 플레이트 리더가 형광의 증가를 정확하게 포착할 수 있도록 작용제를 빠르게(15초 이내) 추가해야 한다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 실제 실험에서 차량 웰의 형광 신호는 평평하게 유지되어야 하는 반면, 포지티브 컨트롤 웰(차량 + 6.5 μM TFLLRN-NH2)의 형광 신호는 3회 또는 4회 스캔 후에 증가하기 시작해야 합니다. 최대값에 도달하면(~10회 스캔 후) 형광 신호가 천천히 감소하기 시작해야 합니다. 매우 효과적인 길항제에 대한 실험에서 길항제 농도가 가장 높은 우물은 음성 대조군과 유사하게 상대적으로 평평하게 유지되는 신호를 가져야 합니다. 또한 양성 대조군의 신호와 길항제의 농도가 낮은 우물의 신호 사이에는 거의 차이가 없어야 합니다(그림 2C). 가장 낮은 농도의 길항제가 여전히 칼슘 동원을 억제하는 경우, 더 낮은 농도를 포함하도록 선별된 농도를 조정해야 합니다. 생성된 CRC에는 곡선의 시그모이드 특성을 완전히 보여주기 위해 하나 이상의 데이터 포인트~100%가 있어야 합니다.
실험이 효과가 없었다는 가장 흔한 징후는 포지티브 대조군(vehicle + 6.5 μM TFLLRN-NH2)에서 형광이 크게 증가하지 않는 경우입니다(그림 2B). 이는 다양한 이유로 발생할 수 있습니다: 세포 수가 적거나(밀도가 확인되지 않은 경우), 작용제 용액이 손상되었을 수 있거나, 세포가 부적절한 양의 염료를 흡수했을 수 있습니다. 특정 우물에 작용제를 실수로 추가하지 않을 수도 있습니다.
프로그래밍된 방법을 사용하면 데이터가 6개의 개별 스프레드시트로 출력되며, 각 스프레드시트에는 2개의 열에 대한 데이터가 포함됩니다. 기저 형광의 5개 스캔은 자체 행에 있으며, 바로 아래 행에 작용제를 추가한 후 20개의 스캔이 수행됩니다(대표 출력은 그림 3 참조). 계산 예의 경우 NRD-21을 사용한 실험의 열이 사용됩니다. 내보낸 파일(그림 3)에서 각 웰의 기저 형광은 C에서 G열로 출력되고 작용제 첨가(다음 20회 스캔) 후의 데이터는 후속 행의 C에서 V열로 출력됩니다. 파일의 14-17행에는 두 개의 개별 열에 대한 포지티브 제어가 포함되어 있습니다. 포지티브 컨트롤 웰 중 하나에 대한 기저 행의 평균은 1,039.8의 값을 제공하는 "=AVERAGE(C16:G16)" 명령을 사용하여 계산되었습니다. 이 명령은 각 웰의 추가 기초 측정에 대해 반복되었습니다. 실험적 스캔의 최대값은 2,629의 값을 제공하는 "=MAX(C16:V16)" 명령을 사용하여 계산되었습니다. 다시 말하지만, 그 명령은 모든 우물에 대해 반복되었습니다. 그런 다음 각 웰에 대한 기저 형광을 최대값에서 뺐습니다. 이 실험에서는 각 웰의 음성 대조군에서 형광 변화를 빼서 데이터를 정규화했습니다(예제 열에서는 142.6). 그런 다음 이 값을 포지티브 대조군의 유사하게 계산된 값으로 나눴습니다. 이 열에서 최대값은 2,629, 평균 기초 측정값은 1,039.8, 공백에서 뺀 값은 142.6입니다. 따라서 조정된 포지티브 컨트롤 값은 1,446.6(방정식에서 계산)입니다. 이 방정식은 열의 각 웰에 대해 반복되며 계산된 값을 1,446.6으로 나누어 형광의 상대적 변화를 제공합니다. 그런 다음 비율을 백분율로 변환하여 분석 소프트웨어에 복사했습니다. 이 프로세스는 다른 11개 열에 대해 반복되었습니다.
참조된 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하려면 나란히 있는 열에 세 번의 반복 측정을 포함할 수 있는 옵션과 함께 XY 테이블을 선택해야 합니다. 각 농도의 -log 값은 x-값에 입력되어야 하며 계산된 백분율은 y-값에 추가되어야 합니다. 데이터에 대해 비선형 회귀 분석을 수행해야 하며, 이로 인해 4개의 농도-반응 곡선이 생성됩니다. 이 프로그램은 또한 IC50 값, 정량화된 오류 통계량 및 적합도 통계량을 출력합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig01.jpg"> 그림 1: EA.hy926 셀에 로드된 Fluo-4/AM. Fluo-4는 염료 배양 및 세척 단계 후 EA.hy926 세포에 선택적으로 로드됩니다. 모든 형광은 염료 누출 없이 세포 내에 있습니다. EVOS 세포 이미저의 GTP 설정과 20배 배율을 사용하여 얻은 이미지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig02.jpg"> 그림 2: 분석의 잠재적 출력. (A) 작업 분석의 대표 플레이트 리더 출력. A행은 음극 대조군이며 형광에 변화가 없습니다. B행은 양성 대조군이며 형광의 급격한 증가를 보여줍니다. 행 C-H는 플레이트에서 더 낮은 파모듈린 농도가 높은 실험용 웰입니다. (B) 실패한 실험의 출력 예. 양성 대조군인 B행에서는 형광의 증가가 보이지 않습니다. (C) PAR1 작용제 TFLLRN-NH2에 의해 유도된 시간 경과에 따른 형광 변화. 제공된 설정을 사용하여 96웰 플레이트의 두 컬럼을 스캔하는 데 PerkinElmer EnSpire 플레이트 리더에서 ~5분이 걸립니다(즉, 각 웰 스캔 사이에 ~15초). 다른 NRD-21 용액은 표시된 바와 같이 "작용제"는 6.5 μM TFLLRN-NH2, n = 1입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig03.jpg"> 그림 3: 작업 분석에 대한 Excel 출력의 예. 기저 형광은 10행에서 시작하여 짝수 행으로 출력되며, 작용제 첨가 후 처음 10개 스캔의 결과는 후속 홀수 행에 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig04.jpg"> 그림 4: 로봇 액체 핸들링과 "플릭". 분석 플레이트를 젤라틴으로 사전 코팅하고 플레이트를 튕기고 말리는 방식으로 배지 교환을 수동으로 수행하면 변동성이 낮은 농도-반응 곡선이 생성됩니다. (A) 파모듈린 ML161 및 NRD-21 및 5μM TFLLRN-NH2, n = 3(자동 액체 처리)의 농도-반응 곡선. (B) parmodulins ML161 및 NRD-21 및 5μM TFLLRN-NH2, n = 3(젤라틴 코팅, 플릭 플레이트)의 농도-반응 곡선. 데이터는 SEM± 수단입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig05.jpg"> 그림 5: 온도 연구. 37°C에서 분석을 수행하면 실온에서보다 더 많은 재현성 있는 데이터가 생성됩니다. (A) ML161 및 5μM TFLLRN-NH2, n = 3(실온)의 농도-반응 곡선. (B) ML161 및 5μM TFLLRN-NH2의 농도-반응 곡선, n = 3(37°C). 데이터는 SEM± 수단입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig06.jpg"> 그림 6: 세포 밀도 연구. 최적의 세포 밀도는 분석을 시작하기 16-24시간 전에 파종할 때 60,000 cells/well입니다. (A) 다른 세포 밀도에서 TFLLRN-NH2 의 농도-반응 곡선, n = 3. (B) 60,000 cells/well의 최적 세포 밀도에서 TFLLRN-NH2 의 농도-반응 곡선. 데이터는 SEM± 수단입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig07.jpg"> 그림 7: 분석 부피. 100 μL의 분석 부피를 사용하면 200 μL의 최종 부피를 사용하는 분석보다 더 재현 가능한 농도-반응 곡선이 생성됩니다. (A) ML161 및 5 μM TFLLRN-NH2, n = 3 (200 μL 최종 부피)의 농도-반응 곡선. (B) ML161 및 5μM TFLLRN-NH2, n = 3(100μL 최종 부피)의 농도-반응 곡선. 데이터는 SEM± 수단입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig07large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig08.jpg"> 그림 8: 히트 화합물을 검출하는 분석의 능력을 결정하기 위한 Z' 인자 생성. 6.5μM TFLLRN-NH2 (B열)와 선택적 PAR1 길항제인 10μM NRD-21(C열) 또는 0.316μM vorapaxar(D열)를 사용한 칼슘 동원 반응. (A) 세포 파종 후 16시간 후에 분석이 완료되었습니다. (B) 세포 파종 후 24시간 후에 분석이 완료되었습니다. (C) 다음 방정식을 사용하여 계산된 Z'-계수 표: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66507/66507eq01v5.jpg" style="margin: auto;">여기서 σp 는 양성 대조군의 표준 편차이σn 은 음성 대조군 또는 샘플의 표준 편차이μp 는 양성 대조군의 평균이고 μn 은 음성 대조군 또는 샘플의 평균입니다. 각 값은 vehicle + 6.5 μM TFLLRN-NH2 를 양성 대조군으로 지정하고 표시된 조건과 음성 대조군(차량) 또는 샘플(NRD-21 및 vorapaxar)로 비교하여 계산합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig08large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66507/66507fig09.jpg"> 그림 9: PAR2 작용제의 칼슘 동원. 10 μM SLIGKV-NH2, n = 4에 의해 유도된 시간 경과에 따른 형광 변화. 데이터는 SEM± 의미합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507fig09large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 1: 화합물 스크리닝을 위한 96웰 플레이트 맵의 예. 각 농도는 삼중으로 측정됩니다. 행 A에는 음성 대조군(길항제 없음, 작용제 없음)이 포함되고 행 B에는 양성 대조군(길항제 없음, 작용제 없음)이 포함됩니다. 1열에서 3열에는 품질 관리에 선택적으로 사용할 수 있는 파모듈린 NRD-21의 6개의 하프 로그 농도가 포함되어 있습니다. PM-A, PM-B, PM-C는 명명되지 않은 파모듈린입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507_Table%201.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 2: 이전에 발표된 프로토콜과 새롭고 최적화된 프로토콜 비교. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66507/66507_Table%202.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Characterizing Modulators of Protease-Activated Receptors with a Calcium Mobilization Assay Using a Plate Reader(플레이트 리더를 사용한 칼슘 동원 분석으로 프로테아제 활성화 수용체의 조절인자 특성 분석)

Changes in calcium concentration in cells are rapidly monitored in a high-throughput fashion with the use of intracellular, fluorescent, calcium-binding ...

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

여기에 설명 된 형광 기반의 칼슘 동원 분석은 고아 G 단백질 결합 수용체 (GPCR에)의 기능 활성화 리간드 (들)의 식별을위한 중간 처리 역 약리학 심사 시스템입니다.

형광 기반의 칼슘 동원 분석에 의해 G 단백질 결합 수용체의 특성

설명된 세포 분석 결과 CXC chemokine 수용 체 4 (CXCR4)의 식별을 위해 설계 되었습니다-상호 작용 하거나 에이전트는 억제 자극, 경쟁적으로 또는 allosterically, 세포내 캘리포니아2 + 릴리스 CXCR4 활성화에 의해 시작.

운동 형광 기반 Ca2 + 동원 분석 결과 G 단백질 결합 된 수용 체 주 작동 근, 길 항 근, 그리고 Allosteric 변조기를 식별 하

우리는 바이러스 성 퓨전 펩 티 드의 분열 사이트를 대표 하는 펩 티 드에 프로 테아의 분해 활동의 신속한 심사를 허용 하는 fluorogenic 펩 티 드 분열 분석 결과 제시. 이 방법은 효소 활동에 대 한 테스트 하려면 단백질 시퀀스 내에서 다른 아미노산 주제에 사용할 수 있습니다.

분해 활동에 대 한 화면에 Fluorogenic 펩 티 드 분열 분석 결과: 코로나 바이러스에 대 한 응용 프로그램 스파이크 단백질 활성화

MRGPRX2 수용체를 통해 비만 세포를 활성화할 수 있는 짧은 펩티드 라이브러리를 생성하기 위한 기술이 기재되어 있다. 관련 기술은 쉽고 저렴하며 다른 세포 수용체로 확장 될 수 있습니다.

엔지니어링 된 HEK 세포를 사용하여 MRGPRX2를 활성화하는 펩티드 스크리닝

이 작업에서는 재조합 G 단백질 결합 수용체(GPCR)에서 소분자 라이브러리를 스크리닝하기 위한 384웰 플레이트에 대한 고처리량 세포 내 칼슘 형광 분석에 대해 설명합니다. 표적, 소열 진드기, Rhipicephalus microplus 의 키닌 수용체는 CHO-K1 세포에서 발현됩니다. 이 분석은 하나의 "이중 첨가" 분석에서 동일한 세포를 사용하여 작용제와 길항제를 식별합니다.

재조합 G 단백질 결합 수용체의 고처리량 스크리닝을 위한 "이중 첨가" 칼슘 형광 분석

우리는 정제된 박테리아 히스티딘 키나아제의 자가인산화를 정량화하는 데 사용할 수 있는 최적화된 니트로셀룰로오스 결합 분석을 보고하고 시연합니다. 우리의 방법은 전통적인 SDS-PAGE 기반 기술에 비해 몇 가지 장점이 있어 이러한 중요한 단백질을 특성화하기 위한 귀중한 대안을 제공합니다.

니트로 셀룰로오스 결합 분석을 사용하여 세균 히스티딘 키나제자가 인산화의 정량

여기서, 우리는 효율적인 가수 분해 및 니켈 쉬프 염기 착체로부터 분리 아미노산 후속 FMOC 보호를 제시한다. 산해리 측쇄 보호기의 유지가 요구되는 경우 여기 제시된 가수 분해 조건을 사용하기에 적합하다. 이 기술은 천연 아미노산의 다양한 기판에 적용 할 수있다.

보호 그룹 산 - 불안정의 보존에 적합한 니켈 쉬프 - 자료의 가수 분해 복잡한 사용 조건

여기, 우리는 고립 된 미토 콘 드리 아 및 경작된 한 세포에 있는 미토 콘 드 리아 캘리포니아2 + 유입의 측정에 대 한 두 개의 프로토콜을 제시. 고립 된 미토 콘 드리 아에 대 한 우리는 플레이트 리더 기반 Ca2 + 가져오기 세부 분석 결과 사용 하 여 Ca2 + 민감한 염색 칼슘 그린-5N. 경작된 한 세포에 대 한 우리 confocal 현미경 검사 법 방법 Ca2 + 염료 오전-2/로드를 사용 하 여 설명 합니다.

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여기 prenylation과 guanosine-5'-3 인산 염 (GTP)를 조사 하는 프로토콜 설명-Rho GTPase의 로드. 이 프로토콜 두 가지 상세 방법의 구성, 즉 막 분류 및 GTPase 연결 된 immunosorbent 분석 결과. Prenylation와 GTP를 측정 하기 위한 프로토콜을 사용할 수 있습니다 다른 작은 GTPases 다른 로드.

작은 GTPase Prenylation와 GTP 바인딩 사용 하 여 막 분류 및 GTPase 연결 된 Immunosorbent 분석 결과의 검색

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Characterizing Modulators of Protease-Activated Receptors with a Calcium Mobilization Assay Using a Plate Reader(플레이트 리더를 사용한 칼슘 동원 분석으로 프로테아제 활성화 수용체의 조절인자 특성 분석)

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