Name: 이식된 마우스 폐의 생체 내 2광자 현미경 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: 학습하세요 2광자 생체 현미경을 이용한 마우스 폐 이식 후 면역 반응 연구 방법을. 이 기술은 수용체 단핵구와 호중구 상호작용을 실시간으로 관찰하여 허혈-재관류 손상 메커니즘을 규명합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>생쥐 폐 이식에서 세포 역학의 실시간 모니터링

<table><tbody><tr><td>0.75% 포비돈-요오드</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>소독제용</td></tr><tr><td>1인치 20G IV 카테터</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>기관내관(ETT)용</td></tr><tr><td>1인치 실크 테이프</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>마우스를 위치에 고정하려면</td></tr><tr><td>20x 침수 긴 대물 렌즈</td><td>Olympus</td><td>N20X-PFH</td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond 접착제</td><td>Medi-Vet.com</td><td>10872</td><td>커버 유리를 폐에 접착</td></tr><tr><td>655nm 비표적 양자점</td><td>ThermoFisher</td><td>Q21021MP</td><td>혈관 라벨링용</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EX0281</td><td>소독제용</td></tr><tr><td>Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen</td><td>McKesson</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>Black O ring (2 cm)</td><td>철물점</td><td>N/A</td><td>맞춤형 이미징용 챔버</td></tr><tr><td>볼트 (2)</td><td>철물점</td><td>N/A</td><td>맞춤형 이미징 챔버용</td></tr><tr><td>황동 썸 너트 (2)</td><td>하드웨어 매장</td><td>N/A</td><td>맞춤형 이미징 챔버용</td></tr><tr><td>부프레노르핀 1.3 mg/mL</td><td>Fidelis Animal Health</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>통증 조절용</td></tr><tr><td>카멜레온 티타늄-사파이어 펨토초 펄스 레이저</td><td>코히런트</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>커버 유리(24mm x 50mm)</td><td>Thomas Scientific</td><td>1202F63</td><td>맞춤형 이미징 챔버용</td></tr><tr><td>곡선형 모기 클램프 (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>이중 채널 히터 컨트롤러</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>Fine scissors (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td></td></tr><tr><td>고정 스테이지 정립 현미경</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>거즈 (1cm x 3cm로 절단)</td> <td>McKesson</td><td>476709</td><td>왼쪽 폐 아래에 놓기</td></tr><tr><td>위해 고진공 그리스</td><td>다우 코닝</td><td>N / A</td><td>상판에 커버 유리를 부착하려면</td></tr><tr><td>Isoflurane 1 %</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>마취</td></tr><tr><td>용 케타민 염산염 100 mg / mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>마취</td></tr><tr><td>용 금속 시트 (3cm x 7cm)</td><td>철물점</td><td>N/A</td><td>맞춤형 이미징 챔버용</td></tr><tr><td>뾰족한 면 팁 어플리케이터</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>폐 조작 및 둔기 해부</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra clipper</td><td>Oster</td><td>078400-020-001</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Vet 눈 연고</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>눈 건조를 방지하기 위해</td></tr><tr><td>작은 동물 인공호흡기</td><td>Harvard 장치</td><td>: 55-0000</td><td></td></tr><tr><td>스트레이트 펜치 (1)</td> <td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>3 채널 셔터 드라이버</td><td>Uniblitz</td><td>VMM-D3</td><td>공진 스캐너</td></tr><tr><td>xyz 광학 스테퍼 모터</td><td>Prior Scientific</td><td>OptiScan II</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20 mg / mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>통증 조절</td></tr></tbody></table>

이식된 마우스 폐의 생체 내 2광자 현미경

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

4 °C에서 1 시간의 저온 허혈성 보관 후 B6 마우스의 왼쪽 폐를 B6에 정형외과 이식했습니다. LysM-GFP 마우스4를 사용한 후, 위에서 설명한 바와 같이 생체 내 이광자 이미징을 수행하였다. 우리는 이식 후 2시간(그림 3A)과 24시간(그림 3B)의 두 시점에서 이미징을 수행했습니다. 혈관은 이미징 직전에 주입된 q-dots에 의해 빨간색으로 표시됩니다. 또한 24시간4에서 q-dots를 차지한 단핵구를 시각화할 수 있습니다. 녹색 표지가 부착된 수혜자 유래 호중구는 이식 후 24시간 시점의 해당 비디오에서 폐 이식편에 침투하는 것을 볼 수 있습니다(보충 비디오 1). 허파꽈리는 콜라겐의 SHG로 인해 어두운 분화구로 시각화할 수 있습니다( 그림 3의 흰색 화살표). 이식 후 24시간에는 이식 후 2시간에 비해 폐에 더 많은 호중구가 있는 것을 관찰할 수 있습니다(그림 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig01.jpg"> 그림 1: 이광자 이미징을 위한 마우스 준비. (A) 왼쪽 흉곽 절개술 위에 피부가 다시 열렸습니다. (B) 왼쪽 가슴 위로 절제된 피부 및 연조직. (씨,디) 갈비뼈는 분할하기 전에 10초 동안 고정되었습니다. (E) 왼쪽3-5번째 갈비뼈를 절제하여 두개골 쪽으로 ~0.8cm x 전후방으로 1.0cm 크기의 창을 만듭니다. (F) 왼쪽 폐를 왼쪽 가슴에서 들어 올려 거즈 스트립에 놓습니다. (G) 이미징 창이 있는 이미징 챔버가 왼쪽 폐 위에 있습니다. (아) 현미경 스테이지에 배치된 이미징 챔버. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig02.jpg"> 그림 2: 이미징 챔버 설정. (A) 현미경 스테이지에 배치된 이미징 챔버. (B) 왼쪽 폐 위에 상판을 고정하기 위한 스프링 장착 볼트 메커니즘의 확대도. (C) O-링과 커버글라스가 적용된 상판의 전면 및 후면. 흰색 선은 커버글라스를 상판에 부착하기 위해 진공 그리스가 적용되는 영역을 나타냅니다. 회색 원은 커버 유리에 적용할 접착제 고리를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig03.jpg"> 그림 3: B6에서 B6로 마우스 왼쪽 폐 이식의 이광자 생체 내 이미징. 1시간 저온 허혈성 보관이 가능한 LysM-GFP 마우스. 이미징은 이식 후 (A) 2시간 및 (B) 24시간에 수행됩니다. 빨간색은 q-점을 나타냅니다. 녹색은 B6의 호중구를 나타냅니다. LysM-GFP 수혜자. 파란색은 콜라겐이 풍부한 폐포에서 추출한 SHG를 나타냅니다. 흰색 화살표는 폐포 영공을 나타냅니다. 눈금 막대는 20μm를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 1: 추가 가열을 제공하기 위해 두 개의 저항이 부착된 상판. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Figure%201.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 비디오 1: B6에서 B6로 이식된 마우스 왼쪽 폐의 이광자 타임랩스 이미징. 1시간의 저온 허혈성 보관이 있는 LysM-GFP 마우스, 이식 후 24시간에 수행. 빨간색은 q-점을 나타냅니다. 녹색은 LysM-GFP 수혜자의 호중구를 나타냅니다. 파란색은 콜라겐이 풍부한 폐포에서 두 번째 조화로운 세대를 나타냅니다. 눈금 막대는 20 μm를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Video%201.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...

intravital-two-photon-microscopy-of-the-transplanted-mouse-lung

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

본 연구진은 흉선의 생체 내 영상 획득을 위한 새로운 실험실 도구 및 프로토콜을 개발하였습니다. 이러한 기술은 T 세포 발달이 일어나는 흉선 내의 "니치(niches)"를 식별하는 데 도움이 될 것입니다.

2 - 광자 현미경을 사용하여 마우스 Thymus의 Intravital 영상

이 프로토콜은 다광자 현미경을 사용하여 진공 안정화 이미징 창을 사용하여 실시간으로 온전한 폐의 장기 고해상도 단일 세포 이미징을 수행하는 방법을 설명합니다.

진공 안정 이미징 창으로 폐의 장기 고해상도 생체 내에 현미경

이 프로토콜 셀 전용 형광 마커를 표현 하는 유전자 변형 생쥐의 intravital 영상을 설명 합니다. Intravital 이미징 생체 삽입형 윈도 통해 프로세스의 미세한 시각화는 가능한를 사용 하 여 고해상도 관측에 대 한 비-침략 적 방법을 제공 한다. 이 방법은 경도 과정 공부에 특히 유용 합니다.

Intravital 현미경 종양 관련 맥 관 구조를 사용 하 여 고급 등 유전자 변형 형광 생쥐 피부 집계 창 실

이 연구에서는 선물이 인플루엔자 바이러스 감염 후 murine tracheal 점 막에서 2 광자 intravital 이미징 및 세포 상호 작용 분석을 수행 하는 프로토콜. 이 프로토콜은 호흡기 감염 시 면역 세포 역학을 공부 하는 연구자와 관련이 있을 것입니다.

영상 셀 상호 작용 Tracheal 점 막에서 2 광자 Intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 인플루엔자 바이러스 감염 중

여기 소개 된 프로토콜 vivo에서 염증 성 조건 하에서 기본 인간 림프 톨의 폐 유도 용량 특성을 수 있습니다. 알레르기 염증의 마우스 모델에서 adoptively 전송된 인간의 면역 세포의 폐 침투 몇 군데 하 고 화학적으로 허가 폐 조직의 빛 시트 형광 현미경 검사 법에 의해 측정할 수 있습니다.

고급 폐 유도 빛 시트 현미경 검사 법에 따라 알레르기 염증의 Vivo 모델에서 실험에서 인간 림프 톨의 이미징

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

여기에서, 우리는 폐의 고해상도, 인트라비티 이미징을 가능하게 하는 뮤린 흉부에 대한 영구적으로 깃드는 광학 창의 외과 이식을 위한 프로토콜을 제시합니다. 창의 영속성은 폐에 있는 동적 세포 프로세스의 연구 결과, 특히 보급된 종양 세포의 전이성 진행과 같이 천천히 진화하는 그들에 적합합니다.

폐에 암 전이를 조사하기위한 영구적 인 창

우리는 마우스 뇌에서 루시페라아제-녹색 형광 단백질 (GFP)을 발현하는 이중 리포터 벡터로 형질도입된 인간 신경 전구 세포의 사다리꼴 이식을 기술한다. 이식 후, 루시퍼라아제 신호는 형광 현미경을 사용하여 뇌 절편에서 확인된 생체 내 생체 발광 및 GFP 발현 이식된 세포를 사용하여 반복적으로 측정된다.

Intracerebral 이식 및 마우스 뇌에서 인간 신경 전구 세포의 생체 내 생체 발광 추적

이 원고는 전이성 캐스케이드의 모든 단계에서 개입할 수 있는 orthotopically 주입된 유방 종양의 자발적 폐 전이의 확립 및 종단 성장 모니터링을 위한 방법론을 설명합니다.

생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

세포 요법은 전구 세포를 사용하여 손상된 조직을 복구하고 폐 기능을 개선함으로써 폐 섬유증에 대한 유망한 중재를 제공합니다. 이미징이 세포 통합을 추적하는 데 중추적인 역할을 하기 때문에 여기에서는 마우스 모델에서 폐 섬유증에 대한 세포 요법의 자기 입자 이미징 유도 생체 내 추적에 대해 설명합니다.

자기 입자 이미징을 사용한 폐 섬유증에 대한 이식된 원위 폐 상피 전구 세포의 이미지 유도 생체 내 추적

여기서는 BSL-2 승인 마이코박테리움 결핵 증의 감쇠 체내 영상 프로토콜을 제시합니다. 영구 폐 창을 이용한 쥐 폐 내 스트레스. 이 접근법은 동일한 폐 미세환경 내에서 세균 위치, 혈관 역학, 대식세포 흡수 등 초기 숙주-병원체 상호작용의 종단적 단일 세포 분해 분석을 가능하게 합니다.

초기 혈관 내 감염 중 쥐 폐에서 희석된 위영양성 결핵 균의 생명체 내 영상

학습하세요 2광자 생체 현미경을 이용한 마우스 폐 이식 후 면역 반응 연구 방법을. 이 기술은 수용체 단핵구와 호중구 상호작용을 실시간으로 관찰하여 허혈-재관류 손상 메커니즘을 규명합니다.

이식된 마우스 폐의 생체 내 2광자 현미경

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