대뇌 혈관의 해부학적 구조를 손상시키지 않고 중간 대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델

이 연구는 대뇌 혈관 통합을 유지하는 중대뇌 동맥 폐색 또는 재관류에 대한 쥐 모델을 개발합니다. 대뇌 혈관 해부학적 구조를 손상시키지 않고 쥐 허혈성 뇌졸중 모델을 유도하는 새로운 방법을 소개하는 데 중점을 둡니다. 이 프로젝트는 미세 수술 기술과 필라멘트 유도 허혈을 사용합니다.

총경동맥이나 외부 경동맥을 손상시키지 않고 허혈을 유도하는 방법을 소개합니다. 영구적으로 혈류를 손상시키거나 대뇌 혈관 해부학을 손상시킬 수 있는 기술과 달리 이 프로토콜은 여러 혈관의 해부학적 무결성을 유지합니다. 허혈성 뇌졸중 연구에 대한 보다 정확하고 덜 해로운 접근 방식을 제공합니다.

시작하려면 마취된 쥐를 작동 플랫폼에 놓습니다. 목구멍과 왼쪽 목 주변의 털을 면도한 후 베타딘과 70% 에탄올로 수술 부위를 3회 소독합니다. 목의 복부 쪽을 1.5cm 길이의 정중선으로 절개하여 표재성 근막을 엽니다.

둔기 박리를 수행하여 외부 경동맥, 내부 경동맥 및 총경동맥을 노출시킵니다. 총경동맥 주위에 3개의 4-0 실크 봉합사를 배치하고 내부 경동맥 분기점 근처의 외부 경동맥을 통해 또 다른 실크 봉합사를 배치합니다. 근위 총경동맥에 풀어줄 수 있는 슬립 매듭을 묶습니다.

지혈제를 사용하여 원위 총경동맥의 봉합사를 조여 혈류를 차단합니다. 봉합하는 동안 총경동맥 주위에 또 다른 슬립 매듭을 느슨하게 묶어 혈관이 막히지 않도록 합니다. 이제 가위를 사용하여 총경동맥의 근위부 실크 봉합사와 중간 봉합사 사이를 0.5mm 절개합니다.

3cm 길이의 4-0 필라멘트를 총경동맥에 삽입합니다. 총경동맥 주위의 실크 봉합사를 조여 내강내 필라멘트를 고정하고 출혈을 방지합니다. 그런 다음 원위 총경동맥에서 봉합사를 제거합니다.

외부 경동맥 주위의 봉합사를 제어하는 중대뇌동맥의 내강에 필라멘트를 계속 삽입합니다. 타이머를 시작하고 폐색이 시작되는 시간을 기록합니다. 절개 부위를 3-0 실크 봉합사로 봉합합니다.

동물을 회복 케이지에 조심스럽게 넣으십시오. 허혈 모델링 후 마취된 쥐의 목 절개 부위를 다시 엽니다. 해부 현미경으로 폐색 필라멘트를 부드럽게 빼내면서 마이크로 클램프를 내강내 봉합사 매듭 근처에 수평으로 놓습니다.

총경동맥 절개 부위 근처의 흰색 끝이 명확하게 보일 때까지 계속 빼냅니다. 그런 다음 필라멘트를 완전히 제거하고 고정된 내강내 봉합사 매듭을 풉니다. 근위 총경동맥 매듭의 심장 끝 쪽 근처에 다른 마이크로 클램프를 놓습니다.

그런 다음 근위 총경동맥 주변의 봉합사 매듭을 제거합니다. 절개 부위를 식염수로 헹굽니다. 멸균 면봉으로 해당 부위를 건조시켜 혈액을 제거하고 깨끗한 수술 부위를 만듭니다.

이제 4배 배율로 11-0 미세수술 봉합사를 사용하여 총경동맥 절개 부위를 단절 패턴으로 봉합합니다. 봉합 후 총경동맥 양쪽 끝의 마이크로 클램프를 제거하여 혈류를 회복합니다. 멸균 면봉으로 총경동맥 봉합 부위에 30초 동안 압력을 가합니다.

출혈이 발생하지 않는지 확인하기 위해 2분 동안 총경동맥을 관찰합니다. 목 절개 부위를 봉합하고 마취 회복을 위해 쥐를 섭씨 35도의 케어 박스에 넣습니다. 허혈 재관류 3일 후, 안락사된 쥐의 뇌를 제거합니다.

뇌를 영하 20도에서 20분 동안 동결합니다. 얼린 후 메스를 사용하여 뇌를 2mm 두께의 관상 절편으로 자릅니다. 섭씨 37도에서 20분 동안 2% TTC로 뇌 부분을 배양합니다.

배양 후 뇌 절편을 작은 페트리 접시에 옮기고 2%TTC를 버립니다. 그런 다음 실온에서 30분 동안 10% 포르말린으로 뇌 절편을 고정합니다. 포르말린을 버리고 PBS로 뇌 부분을 헹굽니다.

연속된 슬라이스의 디지털 사진을 캡처합니다. ImageJ 소프트웨어를 사용하여 경색 부위를 정량적으로 측정합니다. TTC 염색 후, 뇌허혈로 인한 경색이 선조체와 피질 모두에서 관찰되었습니다.

허혈성 뇌졸중 후 3일째 경과했을 때, 총 경색 환자의 비율은 반구의 약 30%에서 측정되었으며, 수술 후 사망률은 16.7%였습니다.