Name: 하대정맥(Inferior Vena Cava)에서 순차적 혈액 채취 후 문맥(portal vein)을 통해 생쥐의 장내 미생물 대사산물을 평가합니다. (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 9 s
Description: 학습하세요 생쥐 하대정맥과 문맥에서 순차적 혈액 채취를 통해 장내 미생물 대사산물을 평가하는 방법을. 단쇄지방산 생성과 흡수를 측정하여 폐 면역 반응과의 관계를 분석합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>생쥐의 장내 미생물 대사 산물을 평가하기 위한 개선된 혈액 샘플링 기술

<ol><li>vander Hee, B., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+regulation+of+host+physiology+by+short-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microbial regulation of host physiology by short-chain fatty acids.</a> Trends Microbiol. 29 (8), 700-712 (2021).</li>
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<li>Lucas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-chain+fatty+acids+regulate+systemic+bone+mass+and+protect+from+pathological+bone+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Short-chain fatty acids regulate systemic bone mass and protect from pathological bone loss.</a> Nat Commun. 9 (1), 55(2018).</li>
<li>Xie, C., Wei, W., Zhang, T., Dirsch, O., Dahmen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+systemic+and+hepatic+hemodynamic+parameters+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Monitoring of systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice.</a> J Vis Exp. (92), e51955(2014).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2,2,2 트리브로모에탄올, 97%(Avertin)</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>T48402-25G</td><td>마취제&nbsp;</td></tr><tr><td>부프레노르핀 하이드로클로라이드 주사 0.3 mg/mL</td><td>PAR 제약&nbsp;</td><td>NDC 42023-179-05</td><td>진</td></tr>통제 <tr><td>드레싱 펜치</td><td>Miltex&nbsp;</td><td>6-100</td><td>해부&nbsp;</td></tr><tr><td>그레이프 펜치</td><td>로보즈</td><td>RS-5136</td><td>해부&nbsp;</td></tr><tr><td>Hepatin sodium 1000 USP 단위/mL</td><td>Hikma</td><td>NDC 0641-0391-12</td><td>혈액 샘플 주사기/튜브 간화</td></tr><tr><td>Prolene 7-0</td><td>Ethicon</td><td>8696G</td><td>포털 정맥 결찰</td></tr><tr><td>가위</td><td>F.S.T</td><td>14058-11</td><td>해부&nbsp;</td></tr><tr><td>학생 Halsted-Mosquito Hemostats</td><td>F.S.T&nbsp;</td><td>91308-12</td><td>해부&nbsp;</td></tr><tr><td>수술 용 테이프&nbsp;</td><td>3M Transpore</td><td>1527-1</td><td>마우스 팔다리 고정</td></tr><tr><td>U-100 인슐린 주사기 28G1/2</td><td>EXEL</td><td>26027</td><td>혈액 샘플 수집&nbsp;</td></tr></tbody></table>

하대정맥(inferior vena cava)에서 순차적 혈액 채취 후 문맥(portal vein)을 통해 생쥐의 장내 미생물 대사산물을 평가합니다.

Sequential Blood Collection from Inferior Vena Cava Followed by Portal Vein to Evaluate Gut Microbial Metabolites in Mice

위에서 설명한 방법을 사용하면 동일한 마우스에서 IVC 및 PV의 혈액 샘플을 순차적으로 수집하여 95% 이상의 성공률을 얻을 수 있습니다. 수집된 혈액 샘플의 평균 부피는 IVC의 경우 0.25mL, PV의 경우 0.35mL입니다.
가스 크로마토그래피-질량분석법(GC-MS)을 사용하여 대변, PV 혈액 및 IVC 혈액 내 SCFA의 농도를 측정하여 장내 세균을 발효시켜 생성되는 결장 구획에서 아세테이트(C2), 프로피오네이트(C3) 및 부티레이트(C4)가 전신 순환계로 흡수 및 이동하는 과정을 추적할 수 있었습니다.
구체적으로, 이 실험에서는 식이섬유 섭취가 생쥐의 SCFA 생성에 미치는 영향을 조사했습니다. 생쥐에게 1주 또는 2주 동안 고섬유질 식단(섬유질 35%)을 제공하고 섬유질이 없는 식단을 먹인 쥐와 비교했습니다. 우리는 고섬유질 그룹에서 섬유 발효 박테리아 분류군의 증가를 예상하고 관찰했습니다(데이터는 표시되지 않음). 다음으로 SCFA 수치에 대한 결장 내용물, PV 혈액 및 전신 순환(IVC) 혈액을 조사했습니다(미시간 대학의 대사체학 핵심 시설에서 GC-MS로 정량화)3 (그림 2). PV 샘플에서 식이 섬유 노출에 따른 SCFA의 일관된 증가를 감지할 수 있었지만, 대장 분변 샘플의 SCFA 측정은 PV 및 IVC 혈액 측정에 비해 마우스마다 훨씬 더 다양했습니다( 그림 2에서 아세테이트, 프로피오네이트 및 부티레이트에 대한 PV/IVC 혈액 대 결장 분변 물질). 이러한 변동성은 대변 물질에서 SCFA의 불균일한 분포 때문일 수 있거나 장 상피에 의한 SCFA의 다양한 흡수를 반영할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, SCFAs가 숙주 장 외 생리학에 미치는 영향을 조사하기 위한 목적으로, PV 내 및 말초 순환계의 수준이 연구에 더 관련성이 있을 수 있습니다.
PV 내 SCFA 수치를 전신 IVC 혈액 내 수치와 비교함으로써 간에서 아세테이트와 프로피오네이트의 흡수 수준도 관찰할 수 있었습니다(그림 2A, B). 간을 통과한 후 전신 혈액에 남아 있는 아세테이트의 비율(PV와 비교)은 프로피오네이트보다 높습니다(PV 아세테이트의 50% 이상이 말초 순환계로 유입된 반면 프로피오네이트의 경우 30% 미만). 이는 프로피오네이트가 간에 흡수되거나 사용되며, 낮은 수치가 전신 순환에 들어가는 반면, 아세테이트는 근육 조직13,20과 같은 다른 말초 조직에서 흡수되거나 사용될 수 있다는 이전 보고서와 일치합니다(그림 2A, B). 그럼에도 불구하고, 몇몇 그룹으로부터의 이전 연구는 전신 순환으로 흡수되는 프로피오네이트의 수준이 먼 장기의 생리학 및 병리학에 상당한 영향을 미칠 수 있음을 보여주었다 21,22,23,24.
또한, PV와 전신 혈액 모두의 부티레이트 농도가 프로피오네이트보다 훨씬 낮다는 것을 발견했지만, 부티레이트와 프로피오네이트의 대변 농도는 매우 유사했습니다. 이러한 발견은 결장에서 장에서 생성된 부티레이트가 장 상피에 의해 국소적으로 주로 흡수되고 사용된다는 이전 연구를 확인시켜주었습니다. 11 (그림 2C).
일반적으로 복부 절개 중에는 PV의 치수가 IVC보다 작다는 것을 관찰할 수 있습니다(그림 3A). 그러나 PV 주위의 봉합사를 묶고(간부보다 약 4mm 아래) 혈관을 결찰한 후 PV의 크기가 증가하고 PV 결찰 전의 IVC의 원래 크기와 직경이 거의 같습니다 (그림 3B). 그림에서 볼 수 있듯이 IVC는 PV 결찰 후 약간 붕괴됩니다(그림 3B). 전반적으로, 이 접근법은 마우스의 PV에서 혈액의 최대 수집을 촉진합니다. 우리의 경험에 비추어 볼 때, PV 혈액을 먼저 채취한 다음 IVC 혈액을 채취하는 것은 결과보다 덜 최적화되었습니다. 이는 PV 혈액 채취 후 IVC의 현저한 붕괴를 관찰했기 때문입니다.
<img alt="간 해부학 다이어그램, 문맥 결찰술은 간 문, 비장 및 십이지장 정맥을 식별합니다." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66673/66673fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1: PV 결찰. 봉합사는 십이지장 정맥과 비장 정맥 사이의 PV 뒤로 통과합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66673/66673fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="섬유질 섭취에 의한 대변, 혈액, 혈장의 대사산물 변화(C2, C3, C4)를 보여주는 상자 그림 차트." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66673/66673fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2: 대변, 문맥(PV) 혈액 및 전신 정맥혈의 단쇄 지방산(SCFA) 농도. SCFA의 수준은 2주 동안 섬유질이 없는 식단(n=10마리 마우스), 1주 동안 고섬유질 식단(n=9마리 마우스), 2주 동안 고섬유질(n=7마리 마우스)을 포함한 3가지 다른 실험 마우스 그룹에 대해 측정되었습니다. (A) 아세테이트(C2), (B) 프로피오네이트(C3) 및 (C) 부티레이트(C4). 대변의 SCFA 수준은 분변 물질의 nM/mg(왼쪽 Y축)으로 보고되고 PV 및 하대정맥(IVC) 혈장에서는 μM(오른쪽 Y축)로 보고됩니다. 그림의 데이터는 평균± SD로 표현되며, 통계 분석은 2꼬리 비모수 Mann-Whitney 분석을 사용하여 수행되었습니다. P 값이 0.05&lt; 유의한 것으로 간주되었습니다. P 값은 다음과 같이 표시됩니다 : * P &lt; 0.05; **p &lt; 0.01; p &lt; 0.001; P &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66673/66673fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="문맥 결찰 수술 다이어그램; 문맥(PV) 및 하대정맥(IVC)으로 표시된 혈관." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66673/66673fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3: 생쥐 PV는 간에서 4mm 아래 4mm에 합자를 묶은 후 팽창하고 팽창합니다. (A) PV 결찰 전의 PV 및 IVC; (B) PV 결찰 후 PV 및 IVC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66673/66673fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

하대정맥(Inferior Vena Cava)에서 순차적 혈액 채취 후 문맥(portal vein)을 통해 생쥐의 장내 미생물 대사산물을 평가합니다.

Gut microbial products are known to act both locally within the intestine and get absorbed into circulation, where their effects can extend to numerous ...

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 영화는 생쥐의 조직 및 간 혈류 역학을 취득하는 방법을 보여줍니다. 전체의 모니터링은 중요한 파라미터, 전신 혈압, 중심 정맥압, 간동맥 유량 및 포털 정맥 압력뿐만 아니라 마우스에서 포털 유량의 획득을 포함한다.

마우스의 전신과 간장 혈 역동 학적 파라미터의 모니터링

영양소, microbiota 대사와 순환에 의약품의 액세스 창 자-혈액 장벽 (GBB)에 의해 제어 됩니다. 우리는 GBB 침투성에서 vivo에서, 일반적으로 사용 되는 간접 방법, 달리는 거의 영향을 받지 않습니다 간 및 신장 기능을 측정 하기 위한 직접적인 방법을 설명 합니다.

창 자-혈액 장벽 및 간 대사 Microbiota 제품의 평가 위한 Vivo에서 방법

이 연구 보고 안경 돋보기와 진공 추출 튜브 시스템을 사용 하 여 쥐에서 꼬리 정 맥에서 혈액 샘플링 합니다. 우리의 방법은 연습을 쉽게 이며 쥐에 반복 혈액 샘플링에 사용 될 수 있었다.

진공 혈액 수집 시스템 및 안경 돋보기와 비 취 쥐의 꼬리 정 맥에서 혈 수정된

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생쥐의 쇄 골 정 맥 천자를 통한 혈액 채취

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이 프로토콜에서는 마우스 모델에서 GC-MS를 사용하는 BAT에 최적화된 동정맥 대사체학과 관련된 방법을 간략하게 설명합니다. 이러한 방법을 통해 유기체 수준에서 BAT 매개 대사 산물 교환에 대한 귀중한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

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여기에서는 란셋을 사용한 안면 정맥 천자를 통해 쥐 피험자의 최적화된 채혈 기술을 위한 프로토콜을 제시합니다. 우리는 유세포 분석 평가와 함께 이 기술을 사용하여 형질전환, 선천성 및 리포터 균주의 세포 표현형을 특성화합니다. 혈청 사이토카인 분석 및 당뇨병 연구에도 적합합니다.

쥐 채혈을 위한 안면 정맥 정맥 천자

쇄골하 심장 천자는 마우스에서 말기 혈액을 채취하는 간단하고 신뢰할 수 있는 방법입니다. 조작이 쉽고 고순도 샘플을 보장합니다.

쥐에서 쇄골하 천자를 통한 심장 혈액 수집

학습하세요 생쥐 하대정맥과 문맥에서 순차적 혈액 채취를 통해 장내 미생물 대사산물을 평가하는 방법을. 단쇄지방산 생성과 흡수를 측정하여 폐 면역 반응과의 관계를 분석합니다.

하대정맥(Inferior Vena Cava)에서 순차적 혈액 채취 후 문맥(portal vein)을 통해 생쥐의 장내 미생물 대사산물을 평가합니다.

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