완전한 재관류를 위한 Longa Middle Cerebral Artery Occlusion 방법의 최적화

생쥐의 일시적인 중뇌동맥 폐색에 대한 비디오 가이드에 오신 것을 환영합니다. 제 이름은 Rok Ister이고, 이 실험은 자그레브 대학교 의과대학의 재생 신경과학 실험실에서 진행되었습니다. 일시적 중뇌동맥법(transient middle cerebral artery method, 줄여서 tMCAO)은 허혈성 뇌졸중의 가장 일반적으로 사용되는 동물 모델입니다.

그것은 주로 쥐와 생쥐와 같은 설치류에서 이루어집니다. 주요 수술 방법인 총경동맥(general carotid artery)과 외경동맥법(external carotid artery method)은 필라멘트 삽입을 위한 동맥 절제술 부위에 따라 주로 다릅니다. 이 비디오에서는 외부 경동맥 방법을 사용하여 완전한 재관류를 보장하기 위한 수정 사항과 몇 가지 핵심 사항을 제시합니다.

권장 도구부터 시작하여 Dumont 5형 핀셋, Dumont 7형 핀셋, Dumont N0형 자동 폐쇄 핀셋 2개, 미니 대장균 견인기, 동맥 절제술용 직선 마이크로 스프링 가위가 필요합니다. 지혈을 위해 우리는 두 개의 혈관 마이크로 클램프를 각각의 애플리케이터와 함께 사용할 것입니다. 수술용 가위, 바늘 홀더 및 수술용 집게는 수술 상처의 개폐에 사용합니다.

재료의 경우 수술 상처에는 5/0 모노필라멘트 봉합사, 동맥 결자에는 6/0 꼰 실크 봉합사, 동물 고정에는 수술용 테이프, 동물의 눈 보호를 위한 눈 연고 젤, 추가 국소 마취에는 리도카인 젤을 사용합니다. 마지막으로, 과도한 피를 배출하기 위해 종이 타월의 뾰족한 조각을 사용합니다. 실체 수술 현미경은 이와 같은 미세 수술 절차에 매우 중요합니다.

마취된 설치류는 저체온증에 걸리기 쉬우므로 온도 모니터를 사용할 것입니다. 동물의 수술 측면에서는 마취 가스 공급 튜브와 함께 청소하기 쉽고 가열된 표면과 시술 중 동물의 체온을 안정적으로 모니터링할 수 있는 방법이 필요합니다. 왼쪽 테이블에는 우리가 사용할 몇 가지 도구와 재료가 더 있습니다.

절차의 특정 부분의 기간을 측정하는 것은 재현성뿐만 아니라 나중에 데이터 분석을 위해 매우 중요합니다. 빠르고 쉽게 사용할 수 있도록 Betadine 피부 소독제 및 장전 주사기. 동물의 털을 면도하기 위한 동물 이발기.

올바른 마취제 투여에 중요한 저울. 마지막으로 질소-산소 가스 혼합물을 2:1 비율로 전달할 수 있는 동물 가스 마취 시스템과 마취 유도를 위한 녹아웃 박스입니다. 이 비디오에 제시된 모든 동물 취급 및 절차는 자그레브 대학교 의과대학의 윤리 허가 위원회의 승인을 받았으며 교육을 받고 면허가 있는 직원이 수행했습니다. 프로토콜.

동물 및 수술 부위의 준비. 동물을 가열된 수술대에 놓고 코를 마취 마스크 안으로 가져옵니다. 동물의 눈에 눈 연고를 바르면 수분 공급과 불소 가스 사용으로부터 동물을 보호할 수 있습니다.

동물을 뒤로 돌리고 수술용 테이프로 만든 작은 베개를 동물의 목 아래에 놓아 목을 뻗습니다. 수술용 테이프를 사용하여 동물의 팔다리를 제자리에 고정합니다. 앞다리를 너무 많이 펴지 않도록 주의하고, 실수로 어깨 관절 탈구를 일으키지 않도록 주의하십시오.

바셀린 화이트 젤리를 사용하여 직장 프로브에 윤활유를 바르고 직장에 삽입하여 지속적인 체온 측정을 합니다. 수술 전에 식염수와 부프레노르핀을 복강 내에 주사하여 동물에게 수분을 충분히 공급하고 시술 중 통증을 느끼지 않도록 합니다. 무선 동물 이발기를 사용하여 목 부분의 동물 털 모양을 만듭니다.

수술용 테이프를 사용하여 면도한 털을 모두 모으십시오. 해당 부위에 털이 전혀 없도록 하려면 면도기로 해당 부위를 추가로 형성합니다. 수술대 위에 깨끗한 수술용 드레이프를 놓습니다.

동물의 면도한 피부에 베타딘 한 방울을 바릅니다. 면봉을 사용하여 소독제를 안쪽에서 바깥쪽으로 원을 그리며 피부에 문지릅니다. 그런 다음 에탄올에 적신 면봉으로 동일한 작업을 수행합니다.

각 반복에 대해 새 멸균 면봉으로 이 단계를 세 번 반복합니다. 국소 상처 진통제를 위해 향후 절개 부위의 소독 부위에 리도카인 젤을 살짝 바릅니다. 허혈 유도 수술.

메스를 사용하여 소독된 피부를 처음 절개하고 피부 절개 횟수를 최소한으로 유지하여 수술 상처가 쉽게 치유되도록 합니다. 7형 및 5형 겸자를 사용하여 표재성 근막을 떼어내고 아래 조직에서 타액선을 분리합니다. 침샘이 후속 단계를 방해하지 않도록 하면서 와이어 견인기를 초기 위치에 놓습니다.

7형 집게를 사용하여 깊은 목 근막을 제거하고 경동맥 영역에서 흉쇄유돌근을 분리하여 견인기의 위치를 변경합니다. 경동맥 영역에 접근할 수 있도록 흉쇄유돌근 아래에 도달하도록 견인기의 위치를 변경합니다. 경동맥 부위에 명확하고 시각적으로 쉽게 접근할 수 있도록 오모설근을 절제합니다.

경동맥 트라이어드의 측면에 있는 경동맥 근막을 꼬집고 부드럽게 옆으로 당겨 동맥, 신경, 정맥 및 주변의 모든 혈관 가지를 육안으로 식별합니다. 곡선형 7형 집게를 사용하여 CCA의 하부를 기저 조직과 근막에서 완전히 분리하고 향후 단계에서 클램핑할 준비가 되었는지 확인합니다. 두 개의 각각의 가지와 함께 신중하게 준비된 CCA를 사용하여 곡선형 7형 집게를 사용하여 ECA를 올리고 N0형 자동 폐쇄 집게로 고정합니다. ECA를 고정하고 N0형 핀셋으로 단단히 고정한 상태에서 ECA 뒤에 두 개의 꼰 명주실을 도입합니다.

두개골 실은 영구적이므로 완전히 묶고 여분의 실은 가위로 잘라냅니다. 꼬리 실을 느슨한 고정 매듭으로 묶습니다. 혈관 마이크로 클립을 사용하여 clamp 동맥 절제술 후 출혈을 방지하기 위해 CCA와 ICA를 닫습니다.

마이크로 스프링 가위를 사용하여 ECA 클램핑 부위 바로 아래에 작은 동맥을 만듭니다. ECA의 각도와 일치하는 각도로 필라멘트를 CCA에 근접한 방향으로 동맥 절개 부위에 삽입하고 ECA의 분지 쪽에 있는 느슨한 고정 매듭을 통과하여 필라멘트로 CCA의 루멘에 붙습니다. ICA 마이크로 클립을 조심스럽게 열고 제거합니다.

필라멘트를 ECA에 부분적으로 삽입하고 고정한 상태에서 완전한 동맥 절제술을 만들어 MCAO 필라멘트가 내부에 있는 ECA 그루터기를 느슨하게 합니다. 이 시점에서 N0 형 자동 폐쇄 겸자를 풀고 제거하십시오. 5형 핀셋 한 세트로 ECA 그루터기를 단단히 잡고 약간 올립니다.

다른 집게로 부분적으로 삽입된 필라멘트를 잡고 ECA 그루터기를 내리고 부드럽게 당겨 필라멘트의 안쪽 끝이 ICA 쪽으로 향하도록 합니다. 필라멘트의 실리콘 부분을 조이지 마십시오. 저항이 갑자기 증가할 때까지 Circle of Willis를 통해 MCAO 필라멘트를 천천히 전진시킵니다.

이 시점에서 필라멘트의 남은 길이를 관찰하는 것이 중요합니다. 성체 마우스의 경우 필라멘트는 ICA 분기점에서 최소 7mm 이상 쉽게 진행해야 합니다. 허혈 기간 동안 필라멘트가 변위되지 않도록 고정 매듭을 조입니다.

CCA 클립을 제거하고 시간을 기록해 두면 허혈 발병이 시작됩니다. 와이어 견인기를 제거하고 수술 상처의 가장자리를 서로 더 가깝게 가져옵니다. 조직이 해부학적 위치로 돌아갈 수 있도록 수술 부위를 몇 초 동안 가라앉히십시오.

허혈 기간 후 상처가 더 빨리 다시 열릴 수 있도록 테이프 상처 봉합을 사용하여 수술 상처를 봉합합니다. 허혈 기간. MRI 또는 다른 정량적 관류 측정 방법을 사용하여 수술의 성공을 검증합니다.

필라멘트 철수 수술. 테이프 상처 클로저를 제거하고 와이어 리트랙터로 수술 상처를 다시 엽니다. N0형 겸자를 사용하여 ECA 그루터기의 가장자리를 복부 쪽으로 꼬집고 당겨 ECA 그루터기에 장력을 가합니다.

Clamp 대혈관 클립으로 CCA를 다시 누릅니다. 필라멘트의 실리콘 부분이 ECA 그루터기에서 튀어나오기 시작할 때까지 MCAO 필라멘트를 천천히 빼냅니다. 필라멘트가 완전히 빠질 수 있도록 고정 매듭을 약간 조입니다.

필라멘트의 실리콘 끝에 가까워지면 MCAO 필라멘트를 밀어내고 ECA 그루터기를 한 번에 닫는 방식으로 고정 매듭을 조입니다. 필라멘트가 빠진 후 매듭을 완전히 조입니다. CCA 클립과 함께 끼는 집게를 열고 제거합니다.

수술 상처 주변부에서 시작하여 봉합하여 밑 조직이 보이지 않도록 상처를 완전히 봉합합니다. 필요한 봉합사의 수는 수술 상처의 크기에 따라 다릅니다. 소독용 알코올 물티슈를 사용하여 수술 부위를 청소하고 소독합니다.

대표적인 결과. 시술이 성공적으로 끝나면 MRI 스캔 결과가 이와 유사해야 합니다. 수술 중 허혈 기간 동안에는 관류 가중 이미지에서 허혈이 있는 명확한 영역을 관찰할 수 있어야 합니다.

겉보기 확산 계수 병변은 대략 동일한 영역을 덮어야 합니다. 수술 후, 필라멘트를 빼낸 후에는 관류 가중 이미지에서 과관류 병변 코어를 이상적으로 관찰해야 합니다. 허혈성 코어를 제외하고 병변의 ADC 값에서 회복과 약간의 오버슈트를 볼 수 있어야 합니다.

시술 후 2일째 되는 날에는 병변을 완전히 재관류해야 합니다. ADC 값은 뇌 부종으로 인해 허혈성 병변 코어에서 다시 떨어져야 하며, 이는 T2 이미지에서도 볼 수 있어야 합니다. 필라멘트로 인한 출혈의 경우, 수술 후 관류 또는 ADC 맵에서 개선이 관찰되지 않습니다.

또한 수술 중 및 수술 후 T2 이미지에서 명확한 출혈 징후를 관찰할 수 있습니다. 결론. 쥐의 뇌 혈관 구조에 대한 최근의 해부학적 연구 덕분에, 우리는 새로운 지식을 기반으로 MCAO 모델을 조정하고 수정할 수 있게 되었습니다. 녹색으로 칠해진 후방 통신 동맥은 가장 일반적으로 사용되는 마우스 균주의 10%에서만 양측으로 특허를 받았습니다.

이러한 이유로 MCA에서 근위부에 있는 가지에 혈류를 제공하는 데 신뢰할 수 있습니다. 따라서 CCA는 허혈 기간 동안 특허를 유지해야 하며 필라멘트의 실리콘 부분은 길이가 3mm를 초과하지 않아야 합니다. 이 비디오에서 유익하고 간결한 정보가 되었기를 바랍니다.

시청해 주셔서 감사합니다.