자가 혈전을 이용한 폐색전증의 최소 침습적 쥐 모델 확립

우리 연구의 범위는 인간의 병태생리학을 모방하는 폐색전증에 대한 설치류 모델의 신뢰성과 재현성을 향상시키는 것입니다. 우리는 PE 모델을 유도하는 데 최소 침습 기술이 어떻게 사용되는지 답하는 것을 목표로 하며 새로운 치료 전략의 개발을 촉진하기를 바랍니다. 우리의 프로토콜은 표준 방식으로 자가 혈전을 생성하고 최소 침습성으로 외과적 설치류 PE 모델을 유도하여 PE 동물 실험의 신뢰성과 재현성을 향상시킵니다. 우리는 설치류에서 혈전 해결이 빠르다는 것을 밝혔습니다. 이것은 만성 혈전색전성 폐고혈압 모델을 확립하기 어려운 이유를 설명합니다. 여기서의 혈전 시각화 기술은 신뢰할 수 있는 CTAP 동물 모델의 개발을 안내할 것입니다. 우리는 의생명공학과 임상 심혈관 팀의 공동 연구실입니다. 이 모델을 통해 우리 연구실은 고급 생체 재료 솔루션을 기반으로 PE에 대한 새로운 혈전색전증 및 합병증 예방 전략을 개발하는 데 중점을 둘 것입니다.

[해설자] 시작하려면 마취된 동물을 누운 자세로 수술 플랫폼에 놓습니다. 양쪽 네 팔다리를 몸에서 수평으로 뻗고 뒷다리를 펴서 사타구니 부위를 적절하게 노출시킵니다. 의료용 테이프를 사용하여 동물을 이 위치에 고정합니다. 전기 면도기를 사용하여 흉골과 사타구니 주변의 털을 면도하십시오. 그런 다음 남은 모발에 제모 크림을 바르고 포비돈 요오드로 피부를 세 번 소독합니다. 1밀리리터 주사기에 부착된 27게이지 바늘을 수직으로 8mm 깊이까지 삽입하여 왼쪽 또는 오른쪽 두개정맥에 구멍을 뚫습니다. 그런 다음 주사기를 잡고 플런저를 부드럽게 뒤로 당겨 배럴 내에 음압을 생성합니다. 혈액이 들어올 때까지 바늘을 서서히 빼냅니다. 그런 다음 0.3밀리리터의 혈액이 채취될 때까지 그 자세를 유지합니다. 혈전 준비를 위해 수집된 혈액을 1.5밀리리터 원심분리기 튜브에 밀어 넣습니다. 그런 다음 혈주 길이가 10cm가 될 때까지 자체 제작 혈전 발생기의 실리콘 튜브에 혈액을 끌어당깁니다. 혈액이 응고될 때까지 30분 정도 기다리십시오. 그런 다음 혈전 혈액 기둥을 생리 식염수가 들어 있는 페트리 접시에 씻어냅니다. 그런 다음 가는 가위를 사용하여 혈전 기둥을 각각 길이가 4mm인 균일한 혈전으로 자릅니다. 생리 식염수 2밀리리터로 미리 채워진 자체 제작 주사기에 15-25개의 혈전을 그립니다. 마취된 쥐의 수술 부위를 소독한 후, 사타구니 부위의 표재성 상복부 혈관 기점 위에 5mm 피부 절개를 합니다. 10배 배율 실체 현미경을 사용하여 피하 지방의 얇은 층을 분리하여 표재성 상복부 혈관을 노출시킵니다. 표재성 상복부 정맥을 동맥, 신경 및 지방 조직에서 조심스럽게 분리하십시오. 그런 다음 8-0으로 원위쪽을 제어합니다. 멸균 봉합사를 고정하고 마이크로 클램프로 봉합사를 고정합니다. 8-0으로 근위쪽 제어 다른 마이크로 클램프에 부착된 멸균 봉합사 루프. 원위 루프를 묶고 소작기로 정맥을 횡단합니다. 다음으로, 분리된 정맥의 원위부에 작은 가로 절개를 하고 정맥 내강에 남아 있는 혈액을 생리 식염수로 씻어냅니다. 정맥이 깨끗해지면 마이크로 핀셋을 사용하여 정맥 절개 부위를 확대합니다. 색전술을 위해서는 자체 제작 주사기의 바늘을 정맥 절개를 통해 정맥에 부드럽게 삽입합니다. 바늘이 정맥에서 미끄러지는 것을 방지하기 위해 세 번째 클램프로 바늘을 고정합니다. 그런 다음 플런저를 천천히 눌러 소량의 생리 식염수를 투여합니다. 플런저를 계속 밀어 표재성 상복부 정맥 접근을 통해 대퇴 정맥으로 혈전을 투여합니다. 근위 봉합사로 정맥을 결찰합니다. 마지막으로 절개 부위를 봉합합니다. 이소플루란 과다 복용으로 쥐를 안락사시킨 후 큰 가위로 갈비뼈를 자르고 폐와 큰 혈관의 손상을 피하면서 가슴을 엽니다. 이제 주입 장치의 바늘을 좌심실에 삽입합니다. 주입 장치의 밸브를 열어 헤파린화 식염수 주입을 허용합니다. 가위를 사용하여 하대정맥과 왼쪽 부속기를 잘라 배액을 허용합니다. 관류 속도를 분당 50밀리리터로 제어합니다. 관류 후 4% 파라포름알데히드 용액으로 채워진 10밀리리터 주사기를 사용하여 우심실을 통해 폐동맥 줄기를 천공합니다. 총 부피 30밀리리터에 대해 폐를 통해 4%의 파라포름알데히드 풍부함을 수행하여 폐 조직을 고정합니다. 폐동맥 트리를 시각화하려면 실리콘 주조 화합물에 같은 양의 희석제를 첨가하십시오. 혼합물을 혼합한 후 5% 경화제를 첨가하고 혼합물을 다시 혼합합니다. 그런 다음 혼합물 1밀리리터를 1밀리리터 주사기에 넣습니다. 공기를 배출하고 우심실을 통해 폐동맥 줄기에 바늘을 삽입합니다. 플런저를 부드럽게 눌러 실리콘 주조 혼합물이 폐동맥 트리를 채울 수 있도록 합니다. 주조 혼합물이 결정화되도록 섭씨 4도 냉장고에 밤새 보관하기 전에 전체 덩어리를 페트리 접시에 넣으십시오. 폐를 각각 25%, 50%, 75%, 95% 및 100% 에틸 알코올 용액에 순차적으로 24시간 동안 담급니다. 탈수된 폐를 살리실산메틸에 24시간 동안 담급니다. 색전술 직후 적출된 폐에는 자가 혈전과 폐경색 부위가 나타났다. 색전의 부하가 높을수록 폐경색 면적이 더 커졌습니다. 색전술 직후 채취한 폐 샘플과 비교하여, 색전술 후 24시간 후에 채취한 폐 샘플은 경색 부위가 현저하게 감소하여 쥐의 내인적 섬유소용해 가능성이 강함을 나타냅니다. 이 그림은 정상 폐와 폐색전증 폐에 대한 깁스 및 조직 제거 후 폐동맥 트리를 보여줍니다.