Name: Superabsorbent Polymer-based Autotrophic Systems에서 Arbuscular Mycorrhizal Cultures 접종 및 관찰 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-14T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: 배우세요 초흡수성 고분자 기반 자양성 시스템에서 균근진균 배양 접종 및 관찰 방법을 통해 실시간 모니터링과 효율적인 균근진균 단일 배양 수립이 가능합니다.

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제안해 주신 두 명의 익명의 검토자에게 감사드립니다. 이 연구를 위한 자금은 프로젝트 J-002295(AAFC의 생물학적 컬렉션 관리 및 향상)에 따라 캐나다 농업 농식품부(AAFC)에서 제공했습니다.

1. 2칸 페트리 접시의 수정
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>페트리 접시 뚜껑을 수정하십시오.<ol><li>회전 도구와 적절한 조각 비트를 사용하여 뚜껑 상단에 두 개의 구멍(직경 ~7mm)을 뚫고 측면에 1cm 구멍을 뚫습니다. 하나의 구멍은 뿌리(질석) 구획을 관개하는 데 사용되고 다른 구멍은 균사(SAP) 구획에 사용됩니다.</li>
	</ol></li>
	<li>페트리 접시 바닥을 수정합니다.<ol><li>전기 회전 도구를 사용하여 식물 줄기를 위한 페트리 접시 바닥 측면에 노치를 뚫습니다. 액체가 배수되는 것을 방지하기 위해 노치가 너무 깊지 않은지 확인하십시오. 이 노치는 뚜껑의 1cm 구멍과 정렬됩니다(1.1단계).</li>
		<li>이중 구획 페트리 접시의 플라스틱 장벽을 나일론 메쉬 필터 멤브레인으로 교체하려면 전기 회전 도구를 사용하여 페트리 접시 바닥까지 30mm 직사각형 노치를 뚫습니다.</li>
		<li>고해상도 관찰을 위해 페트리 접시 바닥에 직경 ~25mm의 원형 구멍을 뚫습니다. 요구 사항에 따라 SAP 쪽에 단일 구멍 (또는 여러 구멍)을 만들거나 각 구획에 하나씩 만듭니다. 뚜껑의 관개 구멍 바로 아래에 구멍이 뚫리지 않았는지 확인하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>나일론 메쉬 필터 멤브레인을 설치합니다.<ol><li>금속 가이드와 종이 클립을 사용하여 나일론 메쉬 필터 멤브레인 조각을 제자리에 끼우고 플라스틱 장벽에 단단히 누릅니다. 멤브레인의 상단을 플라스틱 장벽의 상단에 맞춥니다. 멤브레인이 가이드 하단에서 돌출되어 있는지 확인하십시오.</li>
		<li>파이로그래피 키트를 사용하여 금속 가이드의 가장자리를 따라 절단하여 멤브레인을 페트리 접시 바닥과 두 구획을 분리하는 플라스틱 장벽에 밀봉합니다.</li>
		<li>금속 가이드와 종이 클립이 제자리에 있는 상태에서 핀셋으로 과도한 나일론 메쉬 필터 멤브레인을 조심스럽게 제거합니다.</li>
		<li>해부 현미경으로 나일론 메쉬 필터 멤브레인이 플라스틱에 제대로 밀봉되어 뿌리가 균사(SAP) 구획으로 침투하는 것을 방지하는지 확인합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>커버슬립을 설치하십시오. 알림: 커버슬립은 페트리 접시 아래에 놓입니다. 이렇게 하면 침지 오일을 사용하고 커버슬립을 청소할 수 있습니다.<ol><li>원형 구멍의 가장자리(페트리 접시 바닥 외부)를 따라 실리콘 실런트를 놓습니다.</li>
		<li>커버슬립을 페트리 접시 바닥 바깥쪽에 놓고 부드럽게 눌러 완벽한 접착을 보장합니다.</li>
		<li>건조시키고 면도날로 과도한 실런트를 제거하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>검사하고 청소하십시오.<ol><li>에어 블라스트를 사용하여 페트리 접시에 붙어 있을 수 있는 먼지나 플라스틱 조각을 제거합니다.</li>
		<li>해부 현미경으로 검사하여 결함을 식별하고 수정합니다. 알림: 페트리 접시에 지문이 묻지 않도록 장갑을 착용하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>2. 영양액 1L의 mMS-1 제조
<ol><li>스톡 솔루션을 준비합니다.<ol><li>다량 영양소: 다음을 무게를 측정하고 증류수 1L에 녹입니다. MgSO 4 7.31g·7H2O,KNO3 0.80g, KCl 0.65g, 및KH2PO40.048g.</li>
		<li>Ca(NO3) 2.88g의 무게2·4H2O를 증류수 1L에 녹인다.</li>
		<li>0.80g의 NaFeEDTA를 칭량하고 0.5L의 증류수에 녹입니다.</li>
		<li>0.375g의 KI를 칭량하고 0.5L의 증류수에 녹입니다.</li>
		<li>미량 영양소<ol><li>MnCl 2 3g을 녹입니다.증류수 100mL에 4H2O.</li>
			<li>1.325g의 ZnSO4·증류수 100mL에 7H2O.</li>
			<li>0.75 g의 H3BO3 를 증류수 100 ml에 녹입니다.</li>
			<li>용해되면 2.1.5.1-2.1.5.3 단계에서 준비한 용액을 섞습니다.</li>
			<li>무게 0.65g의 CuSO4·5H2O를 증류수 50mL에 녹인다.</li>
			<li>0.12g의 Na2MoO4 ·증류수 100mL에 2H2O.</li>
			<li>2.1.5.5단계에서 얻은 용액 5mL와 2.1.5.6단계에서 얻은 용액 1mL를 2.1.5.4단계에서 얻은 용액에 추가합니다.</li>
			<li>2.1.5.7 단계에서 얻은 용액의 부피를 증류수로 500mL로 조정합니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>mMS-1 배지 1L를 준비합니다.<ol><li>700L 유리병에 증류수 2mL를 추가합니다.</li>
		<li>마그네틱 막대로 계속 저어주면서 다량 영양소 용액 100mL(2.1.1단계), 질산칼슘 용액 100mL(2.1.2단계), 5mL의 철 EDTA 용액(2.1.3단계), 1mL의 KI 용액(2.1.4단계) 및 1mL의 미량 영양소 용액(2.1.5단계).</li>
		<li>용액의 부피를 1000mL로 조정합니다. 참고 : mMS-1은 Bécard and Fortin (1988) 14에서 채택되었습니다. SAP-AS는 멸균 상태가 아니므로 121°C에서 15분 동안 멸균하는 것은 선택 사항입니다. SAP는 강력한 완충 효과를 가지고 있기 때문에 pH는 조정되지 않으며, Paré et al. (2022)12 는 SAP의 조건이 상대적으로 중립적(6.7 - 7.4)임을 보여주었습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. SAP 준비
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>수액 수화: 건조 SAP 5g과 mMS-1 영양 용액 500mL를 혼합합니다(2.2단계).</li>
	<li>실온(RT)에서 12시간(하룻밤) 동안 수분을 공급하십시오.</li>
	<li>수화 된 SAP 곡물을 배출하고 수집하십시오.<ol><li>수화 SAP를 사용하여 12웰 플레이트(섹션 7)를 채우는 경우 수화된 SAP를 배출하지 말고 수화 곡물과 남은 mMS-1 영양 용액을 혼합하십시오. 알림: 건조 SAP의 세 가지 입도를 사용할 수 있습니다: 소형, 중형 및 대형. 중간 입도계(1-2mm)가 가장 적합합니다. 큰 입도계의 SAP는 수분을 공급할 때 너무 많이 삼키고 페트리 접시 뚜껑을 닫을 수 없는 반면, 작은 입도계의 SAP는 그 사이에 공간을 거의 남기지 않아 입자 사이의 곰팡이 구조를 관찰하는 데 제한이 있습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>4. 묘목의 준비
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>페트리 접시에 mMS-1 영양 용액을 적신 압지에 P. lanceolata 의 씨앗을 발아시킵니다.</li>
	<li>RT에서 어둠 속에서 배양합니다.</li>
	<li>뿌리의 길이가 최소 2cm가 될 때까지 필요에 따라 수분을 보충하십시오.</li>
</ol>5. SAP-AS의 조립 및 관리
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>SAP-AS 조립(1단계 + 2단계 + 3단계 + 4단계)<ol><li>뿌리가 안쪽으로, 자엽/잎 및 줄기가 바깥쪽으로 향하도록 페트리 접시 측면의 노치에 묘목 줄기를 놓습니다.</li>
		<li>약 1.5-2g의 질석으로 뿌리를 덮으십시오.</li>
		<li>8mL의 mMS-1 영양 용액으로 뿌리 구획에 수분을 공급합니다. 이것은 뿌리와 질석을 안정화하는 데 도움이 됩니다.</li>
		<li>루트 컴파트먼트 측면의 나일론 메쉬 필터 멤브레인을 따라 수화된 SAP 5g을 추가합니다.</li>
		<li>수화 SAP 15g을 균사 구획에 추가합니다. 하이팔 구획은 페트리 접시 바닥 측면에 노치가 없는 구획입니다.</li>
		<li>페트리 접시를 뚜껑으로 닫기 전에 뚜껑의 측면 노치와 페트리 접시 바닥이 줄기가 손상되지 않도록 정렬되어 있는지 확인하십시오.</li>
		<li>베이스와 뚜껑을 연결하는 파라핀 스트립으로 페트리 접시를 밀봉하고 어린 줄기가 부서지지 않도록 주의합니다.</li>
		<li>페트리 접시의 평균 무게를 측정하고 기록하여 SAP-AS를 재수화해야 하는 시기를 결정합니다.</li>
		<li>공간을 최적화하기 위해 페트리 접시를 쌓습니다. 측면에 묘목을 위한 구멍이 있는 불투명한 덮개를 사용하여 페트리 접시를 어두운 곳에 보관하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>SAP-AS를 관리합니다.<ol><li>페트리 접시를 mMS-1 영양 용액으로만 수화하십시오.</li>
		<li>평균 체중을 참조로 사용하십시오. 페트리 접시가 5-6g 가벼워지면 mMS-1 영양 용액을 추가하여 원래 무게로 되돌립니다. 질석과 SAP가 수분을 유지하되 침수되지 않도록 하십시오. 뿌리는 산소에 접근할 수 있어야 합니다.</li>
		<li>묘목과 곰팡이 파트너가 발달함에 따라 더 자주 관개하십시오. 두 구획에 동시에 물을 줄 필요는 없습니다. 관개 요구 사항은 묘목 개발에 따라 다르지만 SAP-AS가 배양되는 환경 조건에 따라 다릅니다.</li>
		<li>식물에 건강한 잎이 3개 이상인 경우 오래된 잎을 제거하여 관개 요구 사항을 줄입니다. 죽은 잎을 제거하십시오. 참고: mMS-1 영양 용액에 K+, Mg2+ 및 Ca2+ 와 같은 양이온의 존재는 시간이 지남에 따라 SAP 네트워크(13 )의 팽창을 감소시키는 경향이 있습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>6. 단일 포자에 대한 SAP-AS 접종
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>단일 포자로 접종하십시오.<ol><li>화염 양초 또는 분젠 버너로 유리 피펫을 가열합니다. 유리가 녹을 때 당겨 유리관이 분리될 때까지 늘립니다.</li>
		<li>실체현미경에서 유리 피펫의 끝을 부러뜨려 내경(일반적으로 100-300μm)을 줄입니다. 이것은 개별 포자의 조작을 크게 용이하게 합니다.</li>
		<li>페트리 접시를 열고 포자가 놓일 위치를 찾은 다음 나일론 메쉬 필터 멤브레인을 따라 수화된 SAP 5g 사이의 공간을 확보하여 뿌리 부분을 노출시킵니다.</li>
		<li>해부 현미경 아래에서 돌출된 피펫으로 포자를 집습니다. 포자를 피펫팅하기 전에 약간의 액체를 피펫팅합니다. 포자를 채취한 후에는 액체를 피펫팅하지 마십시오.</li>
		<li>해부 현미경으로 뿌리에 포자를 조심스럽게 침착시킵니다. 포자를 피펫팅하기 전에 피펫팅한 액체는 포자를 배출하는 데 도움이 됩니다. 포자가 최적의 위치에 침착되지 않은 경우 침을 사용하거나 머리카락을 빗어 포자가 뿌리에 다시 닿도록 합니다. 필요한 경우 참조를 위해 뿌리에 침착된 포자의 사진을 찍고 마커를 사용하여 접종 부위를 찾습니다.</li>
		<li>뿌리 조각 위에 SAP를 교체하여 뿌리와 포자에 습한 미세 환경을 제공합니다. 뿌리 구획을 관개하기 전에 최소 24시간 동안 기다렸다가 뿌리에서 포자를 씻어내지 않도록 주의하십시오.</li>
		<li>페트리 접시를 뚜껑으로 닫기 전에 뚜껑의 측면 노치와 페트리 접시의 바닥이 묘목의 줄기가 손상되지 않도록 정렬되어 있는지 확인하십시오. 참고: SAP-AS는 뿌리가 나일론 메쉬 필터 멤브레인에 도달하면, 이상적으로는 관개 후 몇 일 후에 접종할 준비가 되어 있으므로 유리 액체가 없습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>7. SAP에서 포자 발아 (선택 사항)
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>포자의 발아.<ol><li>부드러운 질감을 얻기 위해 수화된 수액을 블렌딩합니다(3.3.1단계 참조). 기포는 일반적으로 24시간 이내에 또는 혼합된 SAP를 고압멸균(선택 사항)하여 사라집니다.</li>
		<li>바늘 없이 20mL 주사기를 사용하여 약 2g(2mL에 해당)의 혼합 SAP를 12웰 플레이트의 각 웰에 피펫팅합니다.</li>
		<li>해부 현미경 아래에서 포자를 선택하고 섹션 6에 설명된 대로 압출된 피펫을 사용합니다.</li>
		<li>해부 현미경 아래에서 각 웰의 중앙에 포자를 놓습니다.</li>
		<li>RT의 어두운 곳에서 12웰 플레이트를 배양하고 주기적으로 발아를 모니터링합니다.</li>
		<li>해부 현미경에서 균사가 자라는 포자(길이가 최소 몇 밀리미터)인 포자를 선택합니다.</li>
		<li>웰에 mMS-1 영양 용액 1mL를 추가하고 배지가 더 유동적이 될 때까지 몇 분 동안 기다립니다.</li>
		<li>필요한 경우 침을 사용하여 기질에서 포자와 균사를 부드럽게 제거합니다.</li>
		<li>포자와 균사를 뿌리에 붙이기 위해 피펫으로 또는 묘목의 뿌리를 배지 표면으로 가져와 포자를 수집합니다. 그런 다음 5.1.3단계에 설명된 대로 묘목을 페트리 접시에 넣습니다. 알림: 포자 발아와 묘목 성장을 조정합니다. 이 방법은 R. irregularis 포자에 대해서만 테스트되었습니다.</li>
	</ol></li>
</ol>8. 공생 발달의 실시간 모니터링
참고: 이 단계에 필요한 재료는 재료 목차에 나열되어 있습니다.
<ol><li>해부, 수직 또는 도립 현미경으로 정기적으로 관찰하십시오.<ol><li>백색 조명과 암시야가 있는 해부 현미경을 사용하여 각 구획의 상단을 20x – 40x에서 관찰합니다.</li>
		<li>도립 현미경을 사용할 수 없는 경우 Petri 접시를 뒤집어 해부 또는 정립 현미경으로 각 구획의 바닥을 관찰합니다. 페트리 접시를 뒤집기 전에 SAP-AS가 페트리 접시 바닥에 약간 달라붙도록 SAP-AS를 2일 동안 건조시킵니다.</li>
		<li>페트리 접시 바닥을 통해 40배, 커버슬립을 통해 최대 100배(오일 이멀젼)까지 자세히 관찰합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>포자와 균사 네트워크를 관찰합니다. 참고: SAP 입자 내부에서 발생하는 곰팡이 구조가 염색될 수 있습니다.<ol><li>Vierheilig et al. (1998)15에 따라 잉크 및 식초 용액을 준비합니다. 가열하지 마십시오.</li>
		<li>균사와 포자가 포함 된 SAP 곡물을 추출하여 RT의 잉크에 넣습니다. 잉크는 SAP 곡물에 침투하여 몇 분 안에 균사와 포자를 염색합니다.</li>
		<li>수액 곡물을 제거하고 mMS-1 영양 용액 또는 수돗물에 넣으십시오. 잉크는 12시간 이내에 곡물에서 나오지만 포자와 균사는 얼룩진 상태로 유지됩니다.</li>
		<li>두 개의 현미경 슬라이드 사이에 있는 SAP 입자를 눌러 사진 촬영 및 포자 계수를 위해 평평하게 만듭니다.</li>
	</ol></li>
	<li>arbuscules를 관찰하십시오.<ol><li>Vierheilig et al. (1998)15에 따라 잉크 및 식초 프로토콜을 사용하여 뿌리 구획에서 몇 개의 뿌리를 추출하고 염색합니다. 뿌리를 KOH 용액에 2-3분 이상 담그지 않도록 주의하십시오. 그렇지 않으면 뿌리가 다음 단계를 수행하기에 너무 약해지고 사용할 수 없는 파편으로 분해됩니다.</li>
		<li>해부 현미경에서 arbuscules를 포함할 수 있는 약 5mm 길이의 뿌리 조각을 선택하여 물 한 방울의 슬라이드에 놓습니다.</li>
		<li>침이나 매우 얇은 핀셋을 사용하여 몇 세포 두께의 층으로 뿌리를 떼어냅니다.</li>
		<li>물을 흡수하고 현미경으로 arbuscules가 있는 세그먼트가 여전히 존재하고 만족스러운 품질이며 슬라이드에 올바르게 배치되었는지 확인합니다. 이 시점에서, arbuscules는 뿌리 세포 층 내에서 쉽게 볼 수 있어야 합니다.</li>
		<li>뿌리 층이 슬라이드에 달라붙도록 2-3분 동안 건조시킵니다. 폴리비닐 알코올-젖산 글리세롤(PVLG) 완충액 한 방울을 넣고 커버슬립을 추가합니다. 표준 현미경 방법으로 관찰합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

관찰 강화를 위해 SAP-AS를 사용한 arbuscular mycorrhizal fungi 배양

<ol><li>Dotzler, N., Krings, M., Taylor, T. N., Agerer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germination+shields+in+Scutellospora+%28Glomeromycota%3A+Diversisporales%2C+Gigasporaceae%29+from+the+400+million-year-old+Rhynie+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Mycol+Prog%22%5BJournal%5D)">Germination shields in Scutellospora (Glomeromycota: Diversisporales, Gigasporaceae) from the 400 million-year-old Rhynie chert.</a> Mycol Prog. 5 (3), 178-184 (2006).</li>
<li>Redecker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomalean+fungi+from+the+ordovician%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glomalean fungi from the ordovician.</a> Science. 289 (5486), 1920-1921 (2000).</li>
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<li>Vierheilig, H., Coughlan, A. P., Wyss, U., Piché, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ink+and+vinegar%2C+a+simple+staining+technique+for+arbuscular-mycorrhizal+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Ink and vinegar, a simple staining technique for arbuscular-mycorrhizal fungi.</a> Appl Environ Microbiol. 64 (12), 5004-5007 (1998).</li>
</ol>

저자는 밝힐 것이 없습니다.

접종은 프로토콜에서 가장 중요한 단계이며, 압출 유리 파스퇴르 피펫은 무결성을 유지하면서 AM 곰팡이의 단일 포자를 정확하게 조작할 수 있는 탁월한 도구임이 입증되었습니다. 압출 유리 파스퇴르 피펫은 양초 또는 분젠 버너의 불꽃을 사용하여 쉽게 성형할 수 있으며, 피펫팅되는 포자의 크기에 맞게 실체현미경으로 개구부를 조정할 수 있습니다. AM 곰팡이 포자의 크기에 맞게 조정된 도구로 포자를 조작하고(보충 그림 1) 숙주 식물 뿌리가 포자가 침착된 Nitex 막에 도달할 수 있을 만큼 충분히 길면 SAP-AS를 접종하는 것이 중요합니다.
SAP-AS는 실험 요구사항에 쉽게 적응할 수 있습니다. 예를 들어, 밀접하게 관련된 균주 간의 상호 작용 또는 다른 종의 AMF 간의 상호 작용을 모니터링하거나 화학적 (pH) 또는 생물학적 환경 (선충, 박테리아, 곰팡이 도입)을 수정하기 위해 다중 구획과 함께 더 큰 페트리 접시를 사용할 수 있습니다. 다양한 진균 영양 숙주 식물을 사용하여 AM 곰팡이에 광합성을 제공 할 수 있습니다. 영양 용액 mMS-1은 Bécard and Fortin (1988)15 에 의해 기술된 최소(M) 배지 레시피에서 자당, 비타민 및 박토 한천을 뺀 탄소원을 제한하기 위해 파생되었습니다. 그러나 SAP-AS는 실험 목표에 따라 다양한 영양 용액으로 보충될 수 있습니다.
SAP-AS에서 AM 곰팡이가 번식하려면 정기적으로 물을 주어야 합니다. 질석과 SAP의 제한된 부피는 뿌리와 AM 곰팡이를 습도 변동에 노출시키며, 특히 표준 2칸 페트리 접시(직경 10cm)에서 그렇습니다. 확장 할 수있는 능력과 따라서 SAP 조직의 투명성은 시간이 지남에 따라 감소합니다. 실제로, 영양 용액에서 양이온의 존재는 아크릴레이트 네트워크의 확장을 점진적으로 제한하고 몇 달 후에 SAP를 교체해야 합니다. 또한 페트리 접시가 빛으로부터 제대로 보호되지 않거나 물을 과도하게 주면 시간이 지남에 따라 녹조류와 곰팡이가 자랄 수 있습니다.
현재까지 SAP-AS에서 7종의 AM 곰팡이가 성공적으로 배양되었는데, 이는 화분 배양에서 번식할 수 있는 AM 곰팡이 종의 수에 훨씬 못 미치는 수치입니다. 그러나 SAP-AS의 생물 및 비생물 조건은 모두 냄비 배양과 매우 유사하며 다른 AM 곰팡이 종도 SAP-AS에서 번식할 수 있어야 합니다. SAP-AS에서 포자를 직접 접종하면 비멸균 포자/씨앗을 접종에 사용하는 경우 뿌리 삼출물 및/또는 박테리아의 존재로 인해 자연 토양의 뿌리권에 더 가까운 환경 조건을 제공할 수 있습니다. 이것은 발아된 포자로 접종하는 것보다 선호되어야 합니다. 또한 AMF 내에서 포자 발아를 유발하는 조건은 여전히 잘 이해되지 않았으므로 mMS-1 영양 용액으로 수화된 SAP는 다른 AM 곰팡이 종의 포자를 발아하는 데 적합하지 않을 수 있습니다. mMS-1 영양 용액으로 수화된 SAP에서의 포자 발아는 R. irregularis inoculum만을 사용하여 접종 단계를 위한 생존 가능한 포자를 특이적으로 선택하기 위해 테스트되었습니다.
AM 공생의 발달에 대한 접종 및 모니터링은 SAP-AS에서 쉽게 수행할 수 있습니다. 수정 된 2 구획 페트리 접시는 다양한 AM 곰팡이 종의 재배를 허용합니다. Paré et al.12 는 6개 속과 3개 과에서 7개의 서로 다른 AMF 종을 번식시켰습니다. 2 칸 페트리 접시의 수정은 저렴한 도구로 쉽게 수행 할 수 있습니다. SAP-AS의 제조 및 유지보수에 필요한 재료(질석, SAP, 파스퇴르 피펫 등) 및 시약(mMS-1)의 비용과 수량이 제한되어 있어 최소한의 비용으로 많은 수의 SAP-AS를 관리할 수 있습니다. 또한 SAP-AS를 적층할 수 있어 냄비 배양에 비해 AM 진균 배양물의 발자국을 크게 줄일 수 있습니다. 예를 들어, 50개의 SAP-AS(10개씩 5개의 스택)가 1m 길이의 선반에 들어갈 수 있습니다(보충 그림 2). 이러한 기능 덕분에 SAP-AS는 고등학교 실험실 과정이나 대학의 학부 수준에서 AM 공생을 가르치는 데 적합한 간단하고 저렴한 기술입니다. 집락화된 SAP 곡물은 새로운 SAP-AS 또는 냄비 배양물을 접종하는 데 사용할 수 있습니다.
Petri 접시 바닥 뒷면에 커버슬립이 있으면 라디칼 이상의 곰팡이 구조에 대한 고해상도 사진 및 비디오가 가능합니다. 세포질 흐름은 자연 조건에 매우 가까운 생활 조건에서 쉽게 연구할 수 있습니다. 이는 균사체와 관련된 AM 곰팡이 기능(영양분, 물 수송, 토양 구조 등)에 대한 연구와 균사 형태 형성 연구에 매우 중요합니다.
AMF는 식물 뿌리와 뿌리권 내에서 생물학적 주기를 완료합니다. 토양 미생물에 대한 연구는 토양 환경을 관찰하는 데 내재된 어려움으로 인해 복잡합니다. SAP-AS의 주요 목표는 AM 곰팡이의 발달을 매우 자세히 관찰할 수 있는 기능을 유지하면서 AM 곰팡이의 번식을 위해 뿌리권과 가능한 한 유사한 환경을 재현하는 것입니다. 이는 멸균되지 않은 조건을 의미하기 때문에 부영양 미생물의 증식을 피하기 위해 사용 가능한 탄소의 양을 제한해야 합니다. 근권에서 AM 곰팡이의 행동에 대한 지식은 여전히 극히 제한적이며, SAP-AS는 급진적 외 환경에서 먹이를 찾는 능력, 포자 생산 및 뿌리 군집화와 관련하여 종 간의 자세한 비교를 할 수 있는 가능성을 제공합니다. 이는 박테리아, 선충류, 원생생물 및 뿌리 곰팡이 병원체와 같은 다른 토양 종과의 상호 작용을 추가하여 더욱 복잡해질 수 있으며, SAP-AS 덕분에 토양 미생물군 상호 작용에 대한 지식을 향상시킬 수 있습니다.

Arbuscular mycorrhizal (AM) 곰팡이 (Glomeromycotina)는 고대 식물 뿌리 공생체 (~ 500 Ma 1,2)로, 기관 식물에 의한 육상 토양의 식민지화에 필수적인 역할을 했을 수 있습니다. AM 균류와 기관 식물 사이의 이러한 오랜 공진화는 arbuscular mycorrhiza를 왕국 간 상호주의의 걸작으로 자리 매김합니다. AM 곰팡이 균사는 균근 네트워크를 통해 새로운 숙주로의 영양분 전달을 포함하여 토양 영양분을 찾는 숙주의 능력을 크게 증가시킨다4. 균사 네트워크는 토양 구조를 개선하고 글로말린의 생산은 토양 침식을 줄일 수 있습니다5. 대기 중 탄소의 일부가 곰팡이 뿌리 공생체로 전달되면 토양 탄소 격리가 증가합니다6. 전반적으로, AM 균류는 비생물적 및 생물학적 스트레스에 대한 식물의 회복력을 향상시키기 때문에 농생태학에서 상당한 주목을 받고 있다7. 실제로, AM 곰팡이 친화적인 농업 관리 관행은 작물 생산을 위한 화학 투입물 사용을 줄이고 토양 유기 탄소 함량을 개선할 수 있는 잠재력을 가지고 있으며, 이는 농부들이 지속 가능한 농업 관행으로의 전환과 기후 변화와의 싸움에 관한 국내 및 국제 약속을 준수하기 위해 관리 관행에 통합해야 하는 중요한 목표입니다.
그러나 AM 곰팡이는 토양 미세한 곰팡이이며, 그들의 의무적 인 생물 영양 및 뿌리권 분포로 인해 연구가 어렵습니다. 토양은 불투명도, 틈새의 엄청난 다양성 및 모든 규모의 다중 영양 상호 작용으로 인해 연구하기 가장 어려운 비오톱 중 하나입니다. 따라서 AM 곰팡이의 분리, 증식 및 특성화가 어렵습니다. 20세기 중반까지만 해도 포자(sporocarps)를 형성하는 AM 곰팡이 종만이 특징지어졌다8. 그러나 대부분의 AM 곰팡이 종은 직경이 ~ 20 μm에서 ~ 500 μm에 이르는 비 포자형 포자를 생산합니다. 토양 습식 체질 기술(wet sherving tech)9에 대한 설명은 이러한 AM 곰팡이 종을 설명할 수 있는 길을 열었고, 그 이후로 종 설명의 비율이 증가했다. 그럼에도 불구하고 AM 곰팡이는 Dikarya에 비해 작은 종의 그룹을 나타냅니다.
트랩 배양, 즉 포자 또는 터페이스 및 질석과 같은 고압멸균 물질로 채워진 냄비의 AM 곰팡이 포자와 숙주의 멸균된 종자(부추, 질경이)가 포함된 환경 토양 샘플로 접종하는 것은 통제된 조건에서 AM 곰팡이를 번식시키는 한 가지 방법이다10. 그러나 접종의 성공 여부는 염색 후 뿌리 조각에서 수목의 존재를 찾거나 포자를 분리하기 위해 하위 샘플 또는 전체 냄비를 습식 체로 걸러냄으로써만 평가할 수 있습니다. 일반적으로 냄비 배양을 분석하기 전에 최소 6-12주 동안 시스템을 방해하지 않는 것이 좋습니다. 이 배양 기술은 가장 잘 알려진 AM 진균 종을 증식하는 데 적합하지만 진균 공생체의 실시간 관찰은 불가능하며 특히 단일 포자 배양을 시도하는 경우 접종 성공 여부가 불확실합니다.
반대로, AM 진균의 시험관 내 증식은 배양 배지(11)의 투명성 덕분에 실시간으로 모니터링할 수 있지만, 이 배양 기술은 멸균 환경에서 작동하기 위해 형질전환된 뿌리의 가용성과 배양 배지 내 탄소의 존재를 필요로 한다. 포자는 멸균되어야 하며, 종속영양 숙주와의 결합과 함께 알려진 대부분의 AM 곰팡이 종은 이 기술을 사용하여 성공적으로 번식되지 않습니다.
따라서 현재 기술을 사용하여 AM 곰팡이를 번식시키는 것은 대부분의 실험실에서 확립되고 널리 사용되지만 AM 곰팡이 연구에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. Paré et al. (2022)12 는 AM 곰팡이를 증식시키기 위해 전체 식물과 함께 투명 초흡수성 폴리머(SAP)를 사용하는 생체 내 기술을 개발했습니다. SAP 기반 독립영양 시스템(SAP-AS)으로 설계된 이 기술은 간단하고 저렴하며 냄비 배양(독립영양 숙주와의 연관성, 비멸균 조건)과 체외 배양(투명 배지, 공생 발달의 실시간 모니터링)의 장점을 결합합니다. 여기에서는 단일 포자 접종으로 배양을 설정하고 라디칼 외 균사체의 고배율 관찰을 위해 SAP-AS를 사용하는 방법을 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 구체적으로, 두 칸 페트리 접시를 수정하고, 영양 용액을 준비하고, 고흡수성 폴리머(SAP)를 준비하고, 묘목을 준비하고, SAP-AS를 조립하고, 단일 포자를 접종하고, 포자를 발아하고, 공생의 발달을 실시간으로 모니터링하는 방법을 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>100 x 15 mm 스택 가능한 바이-플레이트</td><td>코드 발마크</td><td>1204U09</td><td>https://www.thomassci.com/Laboratory-Supplies/Petri-Dishes/_/100-x-15-mm-Stackable-Bi-Plate</td></tr><tr><td>12-웰 플레이트&nbsp;</td><td>Greiner Bio-one</td><td>665180</td><td>https://shop.gbo.com/en/row/products/bioscience/cell-culture-products/cellstar-cell-culture-multiwell-plates/665180.html</td></tr><tr><td>18mm 원형 유리 커버슬립</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-100</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-cover-glasses-circles-11/12545100#?keyword=12-545-100</td></tr><tr><td>20mL 주사기 PP/PE 바늘 없음</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z683620-100EA</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/CA/en/product/aldrich/z683620?utm_source=google&utm_medium= CPC& utm_campaign=20674735406 & utm_content=157607444391& gc 뚜껑=Cj0KCQiA5rGuBhCnARIsAN11 vgQOT_WPRg9WFyBEyoO4b0x1 -F7Tks4houU7VTRS5EiYM9l0F-B oL7saAmFoEALw_wcB</td></tr><tr><td>침술 바늘&nbsp;</td><td>리에르</td><td>A143-LP1-3075</td><td>https://www.lierre.ca/products/lierre-plus-acupuncture-needles-100pcs?gad _source=1& gclid=Cj0KCQiA5rGuBh CnARIsAN11vgTwupmw51UTdR k9cKr4ewi12W3dyVikenzH3sjdUB4 g41G-_KnvppoaAkbTEALw_wcB& utm_campaign=PMax-needles& utm_content=shopify_CA_ 5213169090694_35001500991622 & utm_medium=CPC& utm_source= google& variant=35001500991622</td></tr><tr><td>블로팅 페이</td><td>퍼 FLINN&nbsp;</td><td>FB0678</td><td>https://www.flinnsci.ca/blotting-paper-12-x-19-pkg.-of-10/fb0678/</td></tr> <tr><td>상업용 또는 과학용 블렌더 또는 주방 핸드 블렌더</td><td>키친에이</td><td></td>드 <td>KHBV53DG https://www.kitchenaid.ca/en_ca/countertop-appliances/hand-blenders/hand-blender-products/p.variable-speed-corded-hand-blender.khbv53dg.html&nbsp;</td></tr><tr><td>Dremel 199 조각 비트</td><td>Dremel</td><td>2615000199</td><td></td></tr><tr><td>https://www.dremel.com/ca/en/p/199-2615000199 건조 SAP 중간 입자계 1&ndash; 2mm</td><td>HORTA-SORB MD</td><td></td> 00810085242789 <td>https://www.horticulturalalliance.com/product/horta-sorb-md-granule/</td></tr> <tr><td>Feather 스테인리스 스틸 블레이드, 나이프 핸들 해부용&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-916-5B</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.ca/shop/products/graham-field-stainless-steel-blades-dissecting-knife-handles-8/089165b 유리 파스퇴르 피펫 230 mm</td><td>Kimble</td><td>RK-25554-14</td><td>https://www.coleparmer.ca/i/dwk-life-sciences-kimble-disposable-pasteur-pipettes-plugged-end-borosilicate-glass-230-mm-1000-cs/2555414</td></tr><tr><td>잉크</td><td>Sheaffer</td><td>94321</td><td>https://www.amazon.com/Sheaffer-Skrip-Bottled-Black-94231/dp/B002IKKKUU</td></tr><tr><td>용융 가이드: 수정된 페인트 스크레이퍼, 2인치</td><td>Mastercraft</td><td>#049-7335-8</td><td></td></tr><tr><td>https://www.canadiantire.ca/en/pdp/mastercraft-carbon-steel-flexible-spackling-putty-knife-wall-paint-scraper-2-in-0497335p.0497335.html?loc=plp 현미경 유리 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-552-5</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/125525</td></tr><tr><td>Nitex 나일론 메쉬 필터 스크린&nbsp;</td><td>다이나믹 아쿠아 서플라이 (Dynamic Aqua-Supply Ltd.)</td><td>NTX30-108</td><td>https://dynamicaquasupply.com/products/nitex-screen?_pos=1&_sid=ffc105328&_ss=r&amp; variant=6945749106731</td></tr><tr><td>종이 클립</td><td>Makanu</td><td>&lrm; Clips-BK-41mm-24</td><td></td></tr><tr><td>https://www.amazon.ca/classeur-standard-grandes-trombones-excellentes Parafilm</td><td>Avantor/vwr</td><td>470201-930</td><td>https://www.avantorsciences.com/ca/en/product/8882964/parafilm</td></tr><tr><td>Plantago lanceolata seeds</td><td>ecoumene</td><td>NA</td><td>https://www.ecoumene.com/produit/semences/herbacees/plantain-lanceole-bio/</td></tr> <tr><td>폴리비닐 알코올-젖산-글리세롤(PVLG).</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://invam.ku.edu/recipes</td></tr><tr><td>파인 팁이 있는 파이로그래피 키트</td><td>월넛 할로우</td><td>483103</td><td>https://www.walnuthollow.com/collections/creative-wood-burning/products/walnut-hollow-creative-versa-tool</td></tr><tr><td>실리콘 실란트</td><td>Aqueon</td><td>100165003</td><td>https://www.aqueon.com/products/aquariums/silicone-sealant</td></tr><tr><td>외과 의사 메스 핸들</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-079657</td><td>https://www.fishersci.ca/shop/products/surgical-design-scalpel-handles-blades/22079657#?keyword=scalpel</td></tr><tr><td>2단 회전 도구 키트</td><td>Dremel</td><td>200-1/21</td><td>https://www.dremel.com/ca/en/p/200-1-21-f0130200ah</td></tr><tr><td>Vermiculite</td><td>PRO-MIX</td><td>4981110</td><td>https://www.canadiantire.ca/fr/pdp/vermiculite-pro-mix-9-l-0597936p.0597936.html</td></tr><tr><td>X1000 라운드 커버슬립 직경 30mm #1 (0.13&ndash; 0.16 mm)</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>12164692</td><td>https://www.fishersci.fi/shop/products/x1000-cover-slip-diam-30-mm-n-1-1/12164692</td></tr></tbody></table>

superabsorbent polymer-based autotrophic systems에서 arbuscular mycorrhizal cultures 접종 및 관찰

Inoculating and Observing Arbuscular Mycorrhizal Cultures on Superabsorbent Polymer-Based Autotrophic Systems

Arbuscular mycorrhizal (AM) 곰팡이는 식물 뿌리 및 뿌리권에서의 번식과의 영구적 인 연관성으로 인해 조작 및 관찰이 어렵습니다. 전형적으로, AM 진균류는 독립영양 숙주를 이용한 냄비 배양에서 in vivo 조건 하에서 배양하거나 페트리 접시에서 Ri Transfer-DNA 형질전환 뿌리(종속영양 숙주)를 이용한 시험관 내 조건에서 배양한다. 또한 화분 배양에서 AM 곰팡이의 배양은 불투명하고 멸균되지 않은 환경에서 발생합니다. 대조적으로, 체외 배양은 멸균되고 투명한 환경에서 AM 곰팡이의 증식을 포함합니다. 최근 초흡수성 고분자 기반 독립영양 시스템(SAP-AS)이 개발되어 각각의 한계(불투명도 및 종속영양 숙주, 무균성)를 피하면서 두 방법의 장점을 결합하는 것으로 나타났습니다. 여기에서는 간편한 준비, 단일 포자 접종 및 SAP-AS에서 AM 곰팡이 관찰을 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 페트리 접시를 수정함으로써 살아있는 표본에 대한 고해상도 사진 및 비디오 관찰이 가능했는데, 이는 현재의 생체 내 및 체외 기술로는 어렵거나 불가능했을 것입니다.

SAP-AS는 AM 진균을 배양하고 라디칼 내 및 라디칼 외 진균 구조의 발달을 관찰하기 위한 간단하고 저렴한 기술입니다. 여기에서는 사용자가 SAP-AS를 설정하는 데 도움이 되는 자세한 프로토콜을 제공하고 SAP-AS에 대한 원래 설명과 비교하여 두 가지 수정 사항을 도입했습니다.
첫째, Nitex 멤브레인을 따라 루트 컴파트먼트에 SAP가 있으면 단일 포자로 시스템을 쉽게 접종할 수 있습니다(그림 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig01.jpg"> 그림 1: SAP-AS의 단일 포자 접종. (A) Rhizophagus irregularis 의 단일 포자에 대한 접종. (B) Funneliformis mosseae의 단일 포자를 사용한 접종. 흰색 화살표는 접종 지점을 나타냅니다. 스케일 바: 500 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
포자가 쌓일 수 있는 뿌리가 몇 개 있는 영역을 쉽게 식별할 수 있습니다. 포자의 정확한 위치는 페트리 접시 뚜껑 표면에 표시하고 뿌리의 발아 및 식민지화를 주기적으로 확인할 수 있습니다. 수화 된 SAP 입자의 존재는 포자 발아에 도움이되는 습한 환경을 제공합니다. Nitex 멤브레인 옆의 뿌리에 접종하면 라디칼 외 균사체와의 공생이 빠르게 발달하여 균사 구획에 빠르게 접근하고 영양분을 찾을 수 있습니다(그림 2). 접종 지점에 놓인 단일 포자가 발아 여부를 관찰할 수 있는 능력은 또한 실패한 배양을 식별 및 제거하고 교체할 수 있게 해줍니다.
둘째, 페트리 접시 하단의 커버슬립을 통해 AM-곰팡이 공생(그림 2B,C)과 특히 라디칼 외 균사체(그림 2D) 내의 세포질 흐름에 대한 고해상도 실시간 이미징을 수행할 수 있습니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig02.jpg"> 그림 2: 접종된 SAP-AS. (A) Rhizophagus irregularis (DAOM 197198)의 단일 포자를 접종한 SAP-AS. 숙주 식물은 Plantago lanceolata입니다. (B) 실체현미경 아래의 균사 구획의 coverslip을 통해 관찰된 포자 클러스터. 스케일 바: 500 μm. (C) 10x 배율로 광학 현미경으로 커버슬립을 통해 관찰된 포자 클러스터의 고해상도 사진. 척도 막대: 100 μm (D) 100x 배율로 광학 현미경으로 커버슬립을 통해 관찰한 균사의 고해상도 사진. 눈금 막대: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
사용자는 mMS-1 영양 용액으로 수화된 SAP에서 AM 곰팡이 포자를 발아시켜 SAP-AS가 생존 가능한 포자로만 접종되도록 보장할 수 있습니다(그림 3). 그러나 이것은 R. irregularis의 상업용 포자에 대해서만 테스트되었으며 mMS-1 영양 용액으로 수화 된 SAP에서 포자 발아의 성공 여부는 다른 AM 곰팡이 종과 크게 다를 수 있습니다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig03.jpg"> 그림 3 : 12 웰 플레이트에서 R. irregularis 포자의 발아. 스케일 바: 500 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
마지막으로, SAP-AS는 AMF 증식을 위한 생체 내 비멸균 기술이기 때문에 페트리 접시를 벤치에서 조작하고 열어 집락화된 뿌리, 유리 포자 또는 집락화된 SAP 입자를 샘플링할 수 있습니다(그림 4). 라디칼 내 및 라디칼 외 진균 구조는 냄비 또는 뿌리 장기 배양에서 증식되는 AMF와 유사한 방식으로 염색할 수 있습니다(그림 4C).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig04.jpg"> 그림 4: SAP-AS에서 추출한 라디칼 외 및 라디칼 내 AM 곰팡이 구조. (A) 뿌리 구획에서 관찰된 R. irregularis 의 유리 포자. 척도 막대: 200 μm. (B) SAP에서 염색된 R. irregularis의 포자. 척도 막대: 500 μm. (C) 라디칼 내 균사와 수목을 보여주는 염색된 뿌리 조각. 스케일 바: 50 μm, 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 1: AM 곰팡이 포자를 조작하는 데 사용할 수 있는 다양한 도구의 두께 비교. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 2: 스택형 SAP-AS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/Supplementary%20Figure%202.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

여기에서는 초흡수성 고분자 기반 독립 영양 시스템에서 arbuscular mycorrhizal fungi를 접종하고 관찰하기 위한 간단하고 저렴한 기술에 대해 설명합니다.

Superabsorbent Polymer-based Autotrophic Systems에서 Arbuscular Mycorrhizal Cultures 접종 및 관찰

Arbuscular mycorrhizal (AM) fungi are difficult to manipulate and observe due to their permanent association with plant roots and propagation in the ...

inoculating-observing-arbuscular-mycorrhizal-cultures-on

Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

이 동영상은 호기성 곰팡이로 리그노셀룰로오스성 식물 조직의 저하를 연구하기위한 통제된 환경의 접근 방식을 보여줍니다. 영양 소스 및 습기를 제어하는​​ 능력은 한천 블록 microcosms의 주요 장점이지만, 그 접근 방식은 종종 혼합 성공을 산출. 우리는 재현성, 낮은 다양성의 결과를 얻을 수에 중요한 함정을 해결합니다.

에어로빅 곰팡이에 의해 제어 플랜트 조직 분해에 대한 한천 - 블럭 Microcosms

출처: Nathoo, N., et al. 식물/미생물 분자 상호 작용 및 신호 전달의 동시 및 체계적 분석을 위한 수경 공동 재배 시스템. J. Vis. 경험. (2017).이 비디오는 멸균 조건에서 식물-박테리아 상호 작용을 연구하기 위한 수경 공동 재배 시스템을 보여줍니다. 식물 묘목은 멸균된 산성 성장 배지로 옮겨져 배양되고 Agrobacterium을 접종하기 전에 오염 여부를 검사합니다. 활성화된 박테리아는 식물 뿌리에 부착되어 T-DNA를 식물 세포로 전달하며 박테리아 집락화를 강화하는 분자 변화를 촉진합니다.

식물 숙주와 상호 작용하는 박테리아의 분자 반응을 연구하기 위한 공동 배양 시스템

부르크 홀데 리아의 sartisoli RP037-mChe와 전 세포 bioreporter 분석은 물 불포화 모델 시스템에서 공기로 채워진 모공을 해소 균사체에 의한 능동 수송 후 세균 분해 가능한 유기 오염 물질 (즉, 플루 오렌)의 분수를 감지하기 위해 개발되었다.

전체 셀 Bioreporter 접근 물 불포화 시스템에서 유기 오염 물질의 운송과 생체 이용률을 평가하기 위해

기술 된 수경 공동 배양 시스템은 금속 메쉬 스크린이있는 온전한 식물을지지하고 박테리아와 함께 배양한다. 식물 조직, 박테리아 및 분비 된 분자는 하류 분석을 위해 따로 따로 수확 할 수 있으며 동시에 식물 숙주와 상호 작용하는 미생물 또는 미생물의 분자 반응을 조사 할 수 있습니다.

식물 / 미생물 분자 상호 작용 및 신호의 동시 및 체계적 분석을위한 수경 공동 공동 배양 시스템

가능성이 커뮤니티 내에서 대부분의 식물은 arbuscular 균 류 (오전) mycorrhizal, 연결 되어 있지만 식물 상호 작용 그들에 의해의 중재 없이 mycorrhizas 대와 식물 성장에 의해 주로 조사 되었습니다. 우리는 공장 상호 작용에 대 한 그들의 결과 조사 하는 mycorrhizal 식물 중 일반적인 mycorrhizal 네트워크를 조작 하는 방법을 제시.

회전 된 코어를 사용 하 여 일반적인 Mycorrhizal 네트워크를 통해 상호 작용 식물의 조사

여기에서 우리는 종의 존재를 정량화하고 식물 뿌리의 초기 식민지 동안 다른 성장 환경으로의 전송 후 박테리아의 공간 분포를 시각화하는 수경 식물 성장 분석방법을 설명합니다.

부동 수경 시스템에서 애기장대 뿌리에 세균 식민지화 및 유지 보수 모니터링

이 프로토콜은 식물 뿌리에 토양 매개 미생물을 접종하는 전략에 대한 자세한 요약을 제공합니다. 진균 Verticillium longisporum 및 Verticillium dahliae에 대해 예시된 세 가지 상이한 뿌리 감염 시스템이 기술된다. 잠재적 응용 분야와 가능한 다운스트림 분석이 강조되고 각 시스템에 대한 장단점이 논의됩니다.

식물 뿌리를 토양 매개 미생물로 감염시키는 접종 전략

여기의 프로토콜은 Zea mays 와 Festuca rubra의 두 종에 대한 뿌리의 arbuscular mycorrhizal 식민지화 패턴과 전략을 평가하는 방법을 설명합니다. MycoPatt 방법을 사용하면 매개 변수 계산, 균근 구조를 디지털 데이터로 변환하고 뿌리에서 실제 위치를 매핑 할 수 있습니다.

Festuca rubra와 Zea mays의 뿌리에서 식민지화 패턴과 곰팡이 전략을 탐구하는 도구로서의 균근 지도

이 문서에서는 벼의 AM 강화 염분 스트레스 내성을 조사하기 위해 수목 균근(AM) 곰팡이 접종물을 생성하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

수목 균근(AM) 곰팡이 접종물 생산 및 식염수 조건에서 쌀과 AM 공생의 표현형 평가

Electrical Penetration Graph(EPG)는 탐침 곤충의 섭식 행동을 연구하기 위한 잘 정립된 기술입니다. 여기에서는 식물에서 체관부를 형성하는 세포인 체 요소(SE)의 세포 내 전기생리학 기록을 획득하기 위한 비침습적 도구로서 EPG의 새로운 적용을 보여줍니다.

체관부 체 요소에 전기 신호를 획득 및 측정을위한 전기 침투 그래프 (EPG)의 새로운 응용 프로그램

배우세요 초흡수성 고분자 기반 자양성 시스템에서 균근진균 배양 접종 및 관찰 방법을 통해 실시간 모니터링과 효율적인 균근진균 단일 배양 수립이 가능합니다.

Superabsorbent Polymer-based Autotrophic Systems에서 Arbuscular Mycorrhizal Cultures 접종 및 관찰

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