살아있는 세포에서 소포체-미토콘드리아 접촉을 측정하기 위한 Split-Luciferase 재조립 분석

제 연구실에서는 막 접촉의 한 형태를 취하는 장기 간 통신과 세포 건강 유지 및 질병 발병에 대한 역할을 연구합니다. 우리는 특히 미토콘드리아와 소포체 사이의 막 접촉에 관심이 있으며, 이들이 어떻게 조절되고 조절 장애가 어떻게 신경 퇴행으로 이어질 수 있는지 이해하려고 노력하고 있습니다. 우리는 ER 미토콘드리아 접촉이 세포 건강에 중요하고 조절 장애가 많은 질병과 관련이 있다는 것을 알고 있지만 그 수준이 어떻게 조절되는지에 대해서는 많이 알지 못합니다.

이 문제를 해결하기 위한 첫 번째 단계는 세포 내 ER 미토콘드리아 접촉 수준을 측정하기 위한 간단하고 신뢰할 수 있는 프로토콜을 설정하는 것입니다. 당사의 분할 루시페라아제 분석은 대부분의 분석법에 비해 살아있는 세포에서 ER 미토콘드리아 접촉을 정량화하는 더 쉽고 빠른 방법을 제공합니다. 우리는 renilla luciferase의 두 부분으로 나뉘어 있는데, 하나는 ER을 대상으로 하고 다른 하나는 미토콘드리아를 대상으로 합니다.

이들은 ER과 미토콘드리아 막이 밀접하게 접촉하는 경우에만 함께 재조립될 수 있으며, 그 결과 완전한 효소 활성을 가진 재구성된 루시페라아제가 생성됩니다. 이 방법은 간단하고 고처리량 스크리닝에 적합하며 많은 실험실에서 쉽게 접근할 수 있습니다. ER 미토콘드리아 접촉의 분자 및 유전적 조절인자를 규명하여 치료제로 더욱 발전시킬 수 있는 신경퇴행성 질환 분야를 발전시킬 수 있을 것으로 기대하고 있습니다.

우리의 결과는 다양한 약물 또는 약물 조합이 ER 미토콘드리아 접촉에 어떤 영향을 미치는지, 이러한 접촉 뒤에 있는 중요한 분자 플레이어가 무엇인지와 같은 중요한 질문에 대한 길을 열었습니다. 이러한 질문을 통해 ER 미토콘드리아 접촉 메커니즘을 더 잘 이해하고 관련 질병과 싸우는 방법을 찾을 수 있습니다.