인간의 손에 Culex tarsalis 모기의 프로빙 및 섭취 행동 연구를 위한 AC-DC 전기 침투 검사

우리 그룹은 EPG를 사용하여 많은 병원체가 전염을 강화하기 위해 매개체 행동을 조작하기 때문에 아르보바이러스 및 기타 요인이 혈액 공급 중에 발생하는 프로빙 및 섭취 행동에 어떤 영향을 미치는지 연구하고 있습니다. 기본적으로 우리는 모기에 물렸을 때 어떤 일이 일어나는지, 그리고 이러한 행동이 병원체 전파 및 질병 병리학에 어떤 영향을 미치는지 연구하고 있습니다. 역사적으로 EPG는 주로 식물 먹이 곤충을 연구하는 데 사용되었습니다.

최근 혈액 공급 절지동물에 대한 AC-DC EPG 절차의 개발로 인해 침습적 절차 없이 혈액 공급 중에 발생하는 프로브 및 섭취 행동을 전례 없이 자세히 연구할 수 있게 되어 새로운 관리 전략을 개발할 수 있습니다. 혈액을 섭취하는 절지동물에 EPG를 사용할 때 가장 큰 과제는 파형을 타액 분비 및 병원체 전달과 같은 생물학적 활동과 연관시키는 것입니다. 우리는 파형의 전기적 기원과 문헌을 기반으로 한 강력한 가설을 가지고 있지만 여전히 경험적 증거가 필요합니다.

시작하려면 유리 목초지 피펫의 끝을 화염에 통과시켜 피펫을 약간 회전시킵니다. 직경을 검사하고 이 과정을 반복하여 피펫을 원하는 크기로 가져옵니다. 곤충 흡입기를 만들려면 변형 된 목초지 피펫의 큰 끝을 모기장으로 덮고 전기 테이프로 접합부를 고정하는 실험실 흡입기에 연결된 실리콘 튜브에 삽입하십시오.

기록 전극의 경우 준비된 곤충 그루터기와 유선 모기를 담을 수 있는 새 플라스틱 랩으로 폼 블록을 감쌉니다. 구리선의 상단 1cm를 면도날로 모든 면이 광택이 날 때까지 긁어냅니다. 그런 다음 0.025mm 직경의 금선을 4-5cm 길이로 자릅니다.

와이어가 찌그러지지 않도록 테이프로 마스킹된 자동 폐쇄 집게로 와이어를 잡고 구리선의 깨끗한 끝을 따라 시작하여 곤충 스터브의 구리선 주위에 금선을 부드럽게 세 번 감습니다. 해부 프로브를 사용하여 은색 접착제를 바르고 금선을 제자리에 고정합니다. 느슨한 끝이 없는지 확인한 후 접착제가 마를 때까지 곤충 스텁을 폼에 넣습니다.

그런 다음 곤충 그루터기에 부착된 금선을 부드럽게 쓰다듬어 길고 부드러운 호 모양으로 만들고 와이어를 약 2.5-3cm 길이로 자릅니다. 해부 현미경으로 작업하면서 금선이 해부 현미경 무대에 닿는 동안 주로 사용하지 않는 손으로 놋쇠 못으로 곤충 스터브를 잡고 주로 사용하는 손을 사용하여 가는 점 집게로 금선의 맨 끝을 잡고 가는 점 집게를 사용하여 접착된 영역 근처의 곤충 스텁의 구리선 위로 금선 끝을 교차합니다. 그런 다음 금선이 가는 집게 주위에 작은 금색 고리를 형성할 때까지 곤충 스터브를 부드럽게 당깁니다.

금선을 풀고 집게를 조심스럽게 제거합니다. 주로 사용하지 않는 손에 곤충 스터브를 잡고 가는 끝 집게로 금 고리를 잡습니다. 루프가 와이어 목에 대해 90도 각도로 구부러질 때까지 집게를 스텁에서 멀리 가볍게 회전하면서 곤충 스텁을 당깁니다.

곤충 스터브를 폼 블록에 다시 넣기 전에 금 고리가 완전히 닫혔는지 확인하십시오. 시작하려면 모기 배선을 위한 곤충 흡인기와 기록 전극을 준비하십시오. 마취된 모기를 마취 패드에 등을 대고 복부가 연구원을 향하도록 놓습니다.

실험실 테이프를 붙인 후 테이프에 갓 혼합한 은색 접착제를 0.5cm 방울 떨어뜨립니다. 그런 다음 마취된 모기의 복부를 흡인기로 흡인합니다. 복부를 제자리에 앉히고 흡인기기를 사용하여 은 접착제 위의 해부 스코프 아래에 모기를 고정할 수 있을 만큼만 흡입을 사용합니다.

은색 접착제에 미누친 핀을 담근 후 모기의 앞가슴에 얇은 층을 바릅니다. 녹음 전극 끝에 있는 금 고리를 은색 접착제에 빠르게 담그십시오. 모기의 앞가슴에 있는 은색 접착제 반점에 놓고 고리를 앞뒤로 흔들어 평평하게 놓이도록 합니다.

다음으로, 와이어 모기가 깨어났을 때 편안하게 서 있을 수 있도록 폼의 곤충 스텁을 비스듬히 교체합니다. 원하는 수의 모기가 배선되면 폼 블록을 보관 상자에 넣고 유지 관리하십시오. 시작하려면 전기 전자조영술 또는 EPG 실험일에 모기에 기록 전극을 부착하십시오.

호스트가 제자리에 있으면 헤드 앰프를 옆으로 돌립니다. 유선 모기를 제거한 후 곤충 스터브의 황동 핀을 헤드 증폭기의 포트에 삽입합니다. 하드웨어 관리 소프트웨어를 사용하여 녹음을 시작합니다.

머리 배치 amp모기가 편안하게 서서 탐색할 수 있도록 손 위의 liifier. 헤드 전환 amp접지된 상태에서 liifier를 켭니다. 프로빙 성공을 돕기 위해 필요에 따라 호스트 손 위치를 조정합니다.

하드웨어 관리 소프트웨어를 사용하여 기록 중 숙주 응답, 모기 행동, 게인 변경 및 기타 관련 이벤트에 대한 타임스탬프가 지정된 관찰을 수행합니다. 하드웨어 관리 소프트웨어를 사용하여 화면의 신호 위치와 소프트웨어 게인을 조정하여 두 신호를 명확하게 볼 수 있도록 합니다. 하드웨어 게인을 조정하려면 채널 1 범위와 승수 스위치를 뒤집습니다.

이러한 조정이 충분하지 않은 경우 채널 1의 게인 다이얼을 오른쪽이나 왼쪽으로 돌려 게인을 각각 높이거나 낮추어 피크가 피크아웃되거나 불분명해지는 것을 방지하십시오. 오프셋을 조정하려면 컨트롤 박스의 채널 1 오프셋 스위치를 neg로 뒤집습니다. 그런 다음 사전 및 사후 신호의 피크가 컴퓨터 화면에서 같은 방향으로 발생할 때까지 채널 1 오프셋 다이얼을 돌립니다.

모기가 프로브의 중간에 있으면 끝날 때까지 기다립니다. 10분 이내에 프로브하지 않으면 헤드 amp리퍼를 끕니다. 숙주가 조심스럽게 손을 떼게 한 다음 곤충 그루터기가 부착된 모기를 제거합니다.

마지막으로 보관 상자에 있는 모기를 교체하십시오. 사람의 손을 먹고 사는 Culex tarsalis 모기의 AC-DC EPG 녹음은 과, 유형 및 하위 유형으로 분류하기에 적합한 해석 가능한 파형을 생성했습니다.