2025년 1월 24일
이 프로토콜은 포유류 세포와 공동 배양하는 매독 병원균 Treponema pallidum subsp. pallidum의 시험관 내 배양을 설명합니다. 이 방법은 확장 가능합니다. T. pallidum을 대량으로 생산하고 클론 배양을 생성하는 데 사용할 수 있습니다.
우리 연구의 대부분은 T.pallidum 대사에 대한 더 나은 이해를 얻기 위한 것입니다. 매독의 성장 요구 사항을 이해하면 매독 연구의 많은 측면을 촉진할 수 있습니다. T.pallidum 생리학, 구조, 숙주 면역, 항균제 감수성, 그리고 아마도 궁극적으로는 매독 통제의 새로운 방법으로 이어질 수 있습니다.
우리의 가장 큰 과제 중 하나는 배양 시스템에 포유류 세포가 존재한다는 것입니다. 세포가 어떤 영양소를 제공하는지 확인할 수 있다면 시스템에서 세포를 제거할 수 있고 이는 세포를 단순화할 것입니다. 그렇게 하면 오염된 포유류 세포 DNA나 단백질을 얻을 수 없어 실험 분석이 더 쉬워질 것입니다.
초기 격리 후 100년 이상 동안 T.pallidum은 토끼 감염을 통해 전파되었습니다. 체외 배양 시스템을 사용하면 동물의 사용을 피할 수 있으며 비용 효율성이 더 높습니다. 또한 동물 모델에서는 불가능한 유전 공학과 같은 기술을 허용합니다.
체외 배양 방법의 가용성은 이미 Treponema pallidum을 연구하는 그룹의 수를 크게 확장했습니다. 또한 유기체의 첫 번째 돌연변이 유발과 같은 발전뿐만 아니라 매독 치료에 유용한 항생제의 고처리량 스크리닝으로 이어졌습니다. 체외 배양은 T.pallidum 성장 요구 사항, 유전자 기능 및 면역 표적에 대한 상세한 분석을 위한 길을 열었습니다.
이러한 질문은 토끼 모델만으로는 효과적으로 해결하기가 불가능하지는 않더라도 어렵습니다. 우리는 이러한 접근 방식이 매독의 진단, 치료 및 예방을 개선하는 데 도움이 되기를 바랍니다. in vitro 배양 시스템을 개선하기 위한 노력 외에도 transposon mutagenesis를 통한 T.pallidum의 유전자 조작에 중점을 둘 것입니다.
우리는 T.pallidum 발병기전에서 중요한 유전자를 식별하기 위해 대규모 기능 검사를 수행하기를 희망합니다.
본 프로토콜은 포유류 세포와의 공배양을 통한 매독 병원체 Treponema pallidum subsp. pallidum의 인비트로(in vitro) 배양 방법을 설명합니다. 이 확장 가능한 방법은 대량의 T. pallidum 생산과 클론 배양 생성물을 얻을 수 있게 합니다.
Treponema pallidum의 인비트로(in vitro) 배양을 통해 동물 모델에 의존하지 않고 매독의 병원성, 항생제 감수성 및 유전자 기능을 직접 연구할 수 있습니다. 이러한 발전은 초기 단계의 감염병 연구에서 예측 신뢰도를 높이며, 병원체 중심의 파이프라인에서 표적 검증 및 기전적 리스크 감소를 위한 툴킷을 확장합니다. 이 방법의 확장성과 재현성은 중개 미생물학 및 항감염제 포트폴리오 개발을 위한 기초 역량으로서의 가치를 지닙니다.
이 인비트로(in vitro) 시스템은 매독 및 관련 스피로헤타 병원체에 대한 초기 발견, 스크리닝 및 중개 연구를 연결합니다.