Name: Treponema pallidum, Syphilis Spirochete의 시험관 내 배양 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: 배우세요 Treponema pallidum의 시험관 내 배양 방법으로 포유류 세포와 공배양하여 매독 병원체를 대량 생산하고 유전자 조작 및 항생제 선별 연구를 지원하는 체계를 구축합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>포유류 세포 공동 배양을 사용한 T. pallidum 의 확장 가능한 시험관 내 배양

<ol><li>Implementing the global health sector strategies on HIV, viral hepatitis and sexually transmitted infections, 2022-2030: Report on progress and gaps. World Health Organization. , Available from: 
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<li>Cox, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Culture of Treponema pallidum.</a> Meth Enzymol. 236, 390-405 (1994).</li>
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<li>Edmondson, D. G., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cultivation+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro cultivation of the syphilis spirochete Treponema pallidum.</a> Curr Protoc. 1 (2), e44(2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Wormser, G. P., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+to+doxycycline%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro susceptibility of Treponema pallidum subsp. pallidum to doxycycline.</a> Antimicrob Agents Chemother. 64 (10), e00979-e01020 (2020).</li>
<li>Leimer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+antibiotic+for+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A selective antibiotic for Lyme disease.</a> Cell. 184 (21), 5405-5418 (2021).</li>
<li>Haynes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+linezolid+on+Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+agent%3A+A+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of linezolid on Treponema pallidum, the syphilis agent: A preclinical study.</a> EBioMedicine. 65, 103281(2021).</li>
<li>Houston, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+characterization+of+peptides+with+antimicrobial+activity+From+the+syphilis+spirochete%2C+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and functional characterization of peptides with antimicrobial activity From the syphilis spirochete, Treponema pallidum.</a> Front Microbiol. 13, 888525(2022).</li>
<li>Tantalo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subspecies+pallidum%3A+an+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility of Treponema pallidum subspecies pallidum: an in-vitro study.</a> Lancet Microbe. 4 (12), e994-e1004 (2023).</li>
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<li>Tantalo, L. C., Molini, B. J., Bose, M., Klausner, J. D., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+isolation+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+from+fresh+and+frozen+needle+aspirates+of+primary+experimental+syphilis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">In vitro isolation of Treponema pallidum subsp. pallidum from fresh and frozen needle aspirates of primary experimental syphilis lesions.</a> Sex Transm Dis. 50 (3), 180-183 (2023).</li>
<li>Edmondson, D. G., De Lay, B. D., Hanson, B. M., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolates+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+Nichols+provide+evidence+for+the+occurrence+of+microevolution+during+experimental+rabbit+infection+and+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clonal isolates of Treponema pallidum subsp. pallidum Nichols provide evidence for the occurrence of microevolution during experimental rabbit infection and in vitro culture.</a> PLoS One. 18 (3), e0281187(2023).</li>
<li>Lin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+TprK+profiling+of+in+vivo+and+in+vitro-propagated+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+reveals+accumulation+of+antigenic+variants+in+absence+of+immune+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal TprK profiling of in vivo and in vitro-propagated Treponema pallidum subsp. pallidum reveals accumulation of antigenic variants in absence of immune pressure.</a> PLoS Negl Trop Dis. 15 (9), e0009753(2021).</li>
<li>De Lay, B. D., Cameron, T. A., De Lay, N. R., Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptional+profiles+of+Treponema+pallidum+during+experimental+infection+of+rabbits+and+in+vitro+culture%3A+Highly+similar%2C+yet+different%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptional profiles of Treponema pallidum during experimental infection of rabbits and in vitro culture: Highly similar, yet different.</a> PLoS Pathog. 17 (9), e1009949(2021).</li>
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<li>Hanff, P. A., Norris, S. J., Lovett, M. A., Miller, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum%2C+Nichols+strain%2C+by+Percoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum, Nichols strain, by Percoll density gradient centrifugation.</a> Sex Transm Dis. 11, 275-286 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 M EDTA, pH 8.0</td><td>시그마&nbsp;</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>10x 얼 s Balanced Salts, w/o Mg2+, Ca2+</td><td>Gibco</td><td>14155063</td><td></td></tr><tr><td>15 및 50 mL 원추형 멸균 일회용 원심분리기 튜브&nbsp;</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td></td></tr><tr><td>2 mL 극저온 바이알&nbsp;</td><td><</td><td></td>em>T. pallidum 재배를 위한 Corning 430659 <td></td></tr> 6<tr><td>웰 세포 배양 플레이트&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td>플레이트는 증발 뚜껑이 낮아야 합니다.</td></tr><tr><td>70% 에탄</td><td>올 N</td><td>/A</td><td></td></tr><tr><td>75cm2 조직 배양 플라스크(벤트 캡 포함</td>) <td>Corning</td><td>43061U</td><td></td></tr><tr><td>배지 및 배양 사전 평형을 위한 93.5% 질소, 5% CO2 및 1.5% 산소 배지 및 배양 전 평</td>형을 위한 <td></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>95% 질소 및 5% CO2</td><td>N/A</td> N<td>/A</td><td></td></tr><tr><td>96-웰 저증발 투명, 평평한 바닥 조직 배양 처리된 마이크로플레이트</td><td>Corning Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>조절 가능한 다채널 피펫, 200 ul 용량&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td> 선택적이지만 L-글루타민이나 페놀 없이 세포 배양 등급 물 Sigma W3500 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CMRL 1066</td>을 복제하는 데 매우 도움이 됩니다. 레드 <td>US Biological</td><td>C5900-03A</td><td></td></tr><tr><td>CO2 tri-gas 및 조직 배양 인큐베이터용&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>극저온 액체 질소 세포 배양 저장 탱크</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>D-포도</td>당 <td>Sigma-Aldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>일회용 필터 장치, 0.2 & 마이크로; m , > 100 mL 용량</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>일회용 피펫: 25 mL, 10 mL, 5 mL, 흡입</td><td>N/A</td> N<td>/A</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>M1902</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (멸균 세포 배양 등급)</td><td>시그마-알드리치</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>이글' s MEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청, 열 비활성화&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>F4135</td><td>이 제품을 적극 권장합니다. 다른 브랜드 또는 카탈로그 번호를 사용하는 경우 T. pallidum 배양 호환성을 위해 사전 스크리닝해야 합니다.</td></tr><tr><td>-70 &deg를 유지할 수 있는 냉동고; C 또는 -80 &deg; C</td><td>N/</td><td>A 해당 없음</td><td>T. pallidum 저장의 경우; 액체 질소 저장 대신 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>냉동 매체 (Sf1Ep medium + 10% [v/v] DMSO)</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>적절한 피팅이 있는 가스 실린더</td><td>N/A</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>GasPak 150 통기형 혐기성 용기 (Brewer Jar)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-816</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>해당 없음</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thoma 판결이 있는 Helber 계수실</td><td>Hawksley Medical and Laboratory Equipment</td><td></td><td>T. pallidum</td></tr><tr><td>Hemocytometer</td> 정량화 <td>N/A</td><td>N/A</td><td>&NBSP; Sf1Ep 세포 정량 분석</td></tr><tr><td>인큐베이터 탱크 스위치</td>용 <td>NuAire&nbsp;</td><td>NU-1550 TankGuard 자동 CO2 인큐베이터 탱크 스위치는</td><td>선택 사항이지만 적절한 O2 조건을 유지하는 데 매우 유용합니다.</td></tr><tr><td>위상 대조 광학이 있는 반전 현미경</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Sf1Ep 세포 배양 관찰용</td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>L-Histidine&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>MEM Non-Essential Amino Acids</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>암시야 응축기가 있는 현미경</td><td>N/A</td> 해당 <td>없음</td><td>현미경에는 40x 대물렌즈와 15x 접안렌즈가 있어야 합니다.</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>다중 채널 어댑터, 흡인기용&nbsp;</td><td>Integra</td><td>155520</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3(7.5%)</td> 복제에 유용 <td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>트라이 가스 인큐베이터용 질소</td><td>N/A</td> 해당 <td>없음</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>Sf1Ep (NBL-11) 세포</td><td>American Type Culture Collection</td><td>CCL-68</td><td></td></tr><tr><td>피루브산</td> <td>나트륨Sigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>멸균 PBS (염화칼슘과 염화마그네슘 없음)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>멸균 시약 저장고, 50 또는 100 mL 크기</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>T. pallidum sample, 냉동 또는 신선&nbsp;</td><td></td><td></td><td>토끼 감염 또는 체외 배양으로 인한</td></tr><tr><td>조직 배양 인큐베이터는 37 &deg로 유지됩니다. C, 5% CO2</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>34°C로 유지되는 트라이 가스 조직 배양 인큐베이터; C, 5% CO2, 1.5% O2</td><td>Thermofisher</td><td>Heracell&trade; VIOS 160i Tri-Gas CO2 Incubator</td><td>옵션; 혐기성 용기를 대신 사용할 수 있습니다(Ref. 17 참조)</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA solution&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>진공 소스(예: 실내 진공), 진공 튜브, 진공 게이지 및 커넥터</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>물, 세포 배양에 적합, 필터 멸균, 정제</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td>배지 준비에 권장, 배양 변동성 감소</td></tr></tbody></table>

treponema pallidum, syphilis spirochete의 시험관 내 배양 절차

Procedures for In Vitro Cultivation of Treponema pallidum, the Syphilis Spirochete

설명된 조건을 사용하여 T. pallidum 은 일반적으로 &gt;90%의 운동성을 유지하고 고정상에 진입하기 전에 약 7일 동안 33시간에서 45시간의 배가로 대수적으로 곱합니다(그림 3). 1주일 동안 스피로헤테스는 약 4-5배의 배가(doublering)를 겪습니다(그림 4). ). 또한, T. pallidum 의 다른 균주는 다른 속도로 성장할 수 있습니다. T. pallidum 의 SS14 그룹의 균주는 Nichols그룹 17의 균주보다 배가시간이 느린 경향이 있습니다.
배양액을 공급하면 배양 시간이 며칠 연장될 수 있지만 Sf1Ep 세포층은 배양 일주일 후에 실패하는 경우가 많습니다. 또한, 트레포네메는 약 5 x 107/mL의 유기체의 상한에 도달합니다. 7일 간격으로 전송된 배양권은 일반적으로 지연 단계가 거의 또는 전혀 없이 로그 곱셈을 계속합니다. 정지 상태에 있는 유기체는 종종 통과하기 어려워집니다.
대부분의 T. pallidum 은 Sf1Ep 세포에 부착되어 있습니다. 그러나 충분한 T. pallidum 이 상층액에 남아 있어 생존력과 증식을 확인하기 위해 배지 샘플을 주기적으로 제거할 수 있습니다. 신중한 정량 분석이 필요한 경우, 제거된 배지의 부피를 측정하고, 정량화된 T. pallidum 의 수를 측정하고, 제거된 총 유기체 수를 수확 시 최종 계수에 추가해야 합니다.
이전 연구에서, 클로닝 효율(접종된 유기체당 양성 배양물의 수)은 웰당 접종된 2 T. pallidum 에 대해 12.5%, 웰당 접종된 0.5 T. pallidum 에 대해 6.7%였다27. 따라서, 어떠한 양성 우물도 이들 접종물 중 어느 하나에서 단일 유기체의 성장을 나타낼 가능성이 높다. 그러나 결과 모집단의 클론성은 부모 배양에서 이질적인 사이트에서 균질성을 위해 배양을 검사하여 확인해야 합니다. 배양이 동원성임을 입증하는 가장 확실한 방법은 전체 게놈 시퀀싱27을 사용하는 것입니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig01.jpg"> 그림 1: T. pallidumin vitro 배양 절차의 흐름도. 이 그림은 Edmondson and Norris (2021)19의 허가를 받아 재인쇄되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig02.jpg"> 그림 2: T. pallidum 배양 시약을 저산소 환경과 평형화하기 위한 시스템 다이어그램. Brewer jar vent는 T- 조인트를 통해 진공 소스 (예 : 집 진공)와 맞춤형 가스 혼합물 (5 % CO2 , 균형 질소 및 1.5 % O2 , 5 % CO2 , 균형 질소)이 들어있는 가스 실린더에 연결됩니다. 인라인 진공 게이지는 용기에서 흡입된 진공을 측정합니다. 진공은 용기에서 약 -58kPa까지 흡입됩니다. 그런 다음 비워진 항아리는 가스 혼합물로 천천히 다시 채워집니다. 브루어 항아리는 5 % CO2 로 세 번 리필되고 최종 배출 전에 질소의 균형을 맞추고 95 % N2 , 5 % CO2 , 1.5 % O2 로 다시 채워집니다. 그런 다음 배양액 또는 배지를 용기에서 제거하고 저산소 인큐베이터로 신속하게 옮깁니다. 또는 Brewer jar와 첫 번째 T 조인트 사이의 튜브를 단단히 고정하고 튜브를 T- 조인트에서 분리 한 다음 전체 Brewer jar를 34 ° C 인큐베이터로 옮길 수 있습니다. 이 그림은 Edmondson and Norris (2021)19의 허가를 받아 재인쇄되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig03.jpg"> 그림 3: TpCM-2 배지를 사용하여 Sf1Ep 세포로 배양한 T. pallidum 의 성장 곡선. 평행한 삼중 배양은 T. pallidum으로 파종되었다. 반복실험은 각 시점에서 수집되었습니다. 결과는 이러한 문화권에 대한 평균 + SEM을 나타냅니다. (A) 배양에 따른 T. pallidum 의 변화와 (B) 운동성 퍼센트가 표시됩니다. 이 그림은 Edmondson et al.18의 허가를 받아 각색되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig04.jpg"> 그림 4: T. pallidum, Nichols 균주의 시험관 내 배양 통과 예. 병렬 삼중 배양에 T. pallidum을 파종하고 1:20 희석을 사용하여 매주 통과시켰습니다. 톱니 그림은 배양당 T. pallidum의 수와 각 시점에서 새로운 배양으로 이동된 수를 보여줍니다. 결과는 3개의 생물학적 복제에 대한 SEM± 평균을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 1: 배양 용기의 중간 부피 및 시딩 비율. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%201.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 2: T. pallidum 배양용 배지. 모든 매체는 준비 후 필터 멸균해야 합니다. Sf1Ep 배지는 4°C에서 최대 2개월 동안 보관할 수 있습니다. TpCM-2는 일반적으로 사용 하루 전에 만들어집니다. 해리 매체는 분주되고 동결되어야 합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%202.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Treponema pallidum, Syphilis Spirochete의 시험관 내 배양 절차

For over a century, Treponema pallidum subsp. pallidum, the spiral-shaped bacterium that causes syphilis, could only be propagated by inoculation and ...

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: Eggers, CH 라임병 스피로헤타 보 렐리아 부르크도르페리의 파지 매개 유전자 조작. J. Vis. 경험. (2022년)이 비디오는 항생제 내성 유전자를 운반하는 휴면 박테리오파지 DNA로 조작된 유전자 변형 보렐리아 부르그도르페리 배양의 준비를 보여줍니다. 항생제 선택 및 배양 후 화학적 유도제는 DNA 손상을 유발하여 내성 유전자를 포함하는 새로운 비리온의 절제, 복제 및 조립을 유도합니다. 두 번째 원심분리 및 재현탁 후, 성숙한 바이러스 입자를 포함하는 박테리아 세포는 다운스트림 적용을 위한 준비가 됩니다.

바이러스 입자 생산을 위한 Borrelia burgdorferi 배양의 준비 및 유도

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

세포 내 M. 결핵 성장의 신속하고 효율적인 정량화는 결핵(TB)에 대한 개선된 치료법을 추구하는 데 중요합니다 . 이 프로토콜은 후보 숙주 지시 요법으로 처리된 대식세포에서 Mtb 성장을 정량화하기 위해 자동화된 액체 배양 시스템을 사용하는 브로스 기반 비색 검출 분석을 설명합니다.

결핵에 대한 숙주 유도 요법의 전임상 테스트에 사용하기 위한 자동화된 배양 시스템

토양의 불투명도로 인해 구성 미생물 간의 상호 작용은 세포 분해능으로 쉽게 시각화 될 수 없습니다. 여기에서는 곰팡이 - 미생물 상호 작용을 조사하기위한 새로운 기회를 제공하는 두 가지 미세 유체 도구가 제시됩니다. 이 장치는 다재다능하고 사용하기 쉬우므로 세포 수준에서 높은 시공간 제어 및 고해상도 이미징이 가능합니다.

세포 수준에서 곰팡이 - 미생물 상호 작용을 조사하기위한 미세 유체 도구

박테리아 세포 사이에서 DNA를 이동하는 박테리오파지의 능력은 박테리아 숙주의 유전자 조작에 효과적인 도구입니다. 여기에 제시된 것은 보렐리아 부르그도르페리의 박테리오파지인 φBB-1을 유도, 회수 및 사용하여 라임병 스피로체의 다른 균주 사이에서 이종 DNA를 형질도입하는 방법론입니다.

라임병 스피로체테 보렐리아 부르그도르페리의 파지 매개 유전자 조작

시험관 내 배양은 살아있는 박테리아의 존재에 대한 직접적인 검출 방법입니다. 이 프로토콜은 Borrelia burgdorferi sensu lato complex, 재발 열 Borrelia 종 및 Borrelia miyamotoi를 포함하여 다양한 Borrelia spirochetes의  배양 방법을 설명합니다. 이 종은 까다 롭고 느리게 자라지 만 배양 할 수 있습니다.

Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex 및 재발 발열 Borrelia의 Spirochetes 재배 방법

전기 천공은 Rickettsia 속에 외인성 DNA를 도입하기 위해 빠르고 광범위하게 채택 된 방법입니다. 이 프로토콜은 Rickettsia 속의 절대 세포 내 박테리아의 형질 전환에 유용한 전기 천공 방법을 제공합니다.

Rickettsia spp.를 Tick 세포주에서 형광 단백질 발현 셔틀 벡터로 형질전환하기 위한 전기천공 방법

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Ultrastructural Expansion Microscopy in Three In Vitro Life Cycle Stages of Trypanosoma cruzi(트리파노소마 크루즈 의 3가지 체외 수명 주기 단계에서의 초구조 확장 현미경)

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