Name: 946;-1,3-Glucanase 및 Peroxidase Physicochemical 특성 Diuraphis noxia 감염에 대한 밀 세포벽 방어 메커니즘 설명 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-26T14:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: 배우세요 밀 세포벽 방어 메커니즘에서 β-1,3-glucanase와 peroxidase의 생화학적 기능을 탐구하는 방법을. Diuraphis noxia 감염 시 효소 활성 분석을 통해 저항성 품종 육성에 필요한 통찰을 얻습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

M. Mafa는 NRF-Thuthuka (참조 번호 : TTK2204102938)로부터 자금을 지원받았습니다. S.N. Zondo는 석사 학위로 National Research Foundation 대학원 장학금을 받았습니다. 저자들은 이 연구에 사용된 씨앗을 제공한 ARC-SG(Agricultural Research Council - Small Grain) 연구소에 감사를 표합니다. 이 자료에 표현된 모든 의견, 결과 및 권장 사항은 저자의 것이므로 자금 제공자는 이와 관련하여 어떠한 책임도 지지 않습니다.

RWA에 감염된 밀 품종의 세포벽 관련 효소 특성 분석

<ol><li>Mohase, L., Vander Westhuizen, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salicylic+acid+is+involved+in+resistance+responses+in+the+Russian+wheat+aphid-wheat+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Salicylic acid is involved in resistance responses in the Russian wheat aphid-wheat interaction.</a> J Plant Physiol. 159 (6), 585-590 (2002).</li>
<li>Mohase, L., Vander Westhuizen, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoproteins+from+Russian+wheat+aphid-infested+wheat+induce+defense+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Z+Naturforsch+C+J+Biosci%22%5BJournal%5D)">Glycoproteins from Russian wheat aphid-infested wheat induce defense responses.</a> Z Naturforsch C J Biosci. 57 (9-10), 867-873 (2002).</li>
<li>Moloi, M. J., Vander Westhuizen, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reactive+oxygen+species+are+involved+in+resistance+responses+of+wheat+to+the+Russian+wheat+aphid%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">The reactive oxygen species are involved in resistance responses of wheat to the Russian wheat aphid.</a> J Plant Physiol. 163 (11), 1118-1125 (2005).</li>
<li>Manghwar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+analysis+of+defense-related+genes+in+wheat+and+maize+against+Bipolaris+sorokiniana%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression analysis of defense-related genes in wheat and maize against Bipolaris sorokiniana.</a> Physiol Mol Plant Pathol. 103, 36-46 (2018).</li>
<li>Botha, C. E., Matsiliza, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+transport+in+wheat+%28Triticum+aestivum%29+is+caused+by+sustained+phloem+feeding+by+the+Russian+wheat+aphid+%28Diuraphis+noxia%29%5BTitle%5D)+AND+%22S+Afr+J+Bot%22%5BJournal%5D)">Reduction in transport in wheat (Triticum aestivum) is caused by sustained phloem feeding by the Russian wheat aphid (Diuraphis noxia).</a> S Afr J Bot. 70 (2), 249-254 (2004).</li>
<li>Mafa, M. S., Rufetu, E., Alexander, O., Kemp, G., Mohase, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-wall+structural+carbohydrates+reinforcements+are+part+of+the+defense+mechanisms+of+wheat+against+Russian+wheat+aphid+%28Diuraphis+noxia%29+infestation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Cell-wall structural carbohydrates reinforcements are part of the defense mechanisms of wheat against Russian wheat aphid (Diuraphis noxia) infestation.</a> Plant Physiol Biochem. 179, 168-178 (2022).</li>
<li>Walker, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sieve+element+occlusion%3A+Interaction+with+phloem+sap-feeding+insects+-+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sieve element occlusion: Interaction with phloem sap-feeding insects - A review.</a> J Plant Physiol. 269, 153582(2022).</li>
<li>Botha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+developing+Russian+wheat+aphid+biotypes+remains+an+unsolved+enigma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Fast developing Russian wheat aphid biotypes remains an unsolved enigma.</a> Curr Opin Insect Sci. 45, 1-11 (2020).</li>
<li>Saheed, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stronger+induction+of+callose+deposition+in+barley+by+Russian+wheat+aphid+than+bird+cherry-oat+aphid+is+not+associated+with+differences+in+callose+synthase+or+%CE%B2-1%2C3-glucanase+transcript+abundance%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Plant%22%5BJournal%5D)">Stronger induction of callose deposition in barley by Russian wheat aphid than bird cherry-oat aphid is not associated with differences in callose synthase or β-1,3-glucanase transcript abundance.</a> Physiol Plant. 135 (2), 150-161 (2009).</li>
<li>Zondo, S. N. N., Mohase, L., Tolmay, V., Mafa, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+cell+wall-associated+%CE%B2-1%2C3-glucanase+and+peroxidase+induced+during+wheat-Diuraphis+noxia+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Research+Square%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of cell wall-associated β-1,3-glucanase and peroxidase induced during wheat-Diuraphis noxia interactions.</a> Research Square. , (2024).</li>
<li>Jimoh, M. A., Saheed, S. A., Botha, C. E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+damage+in+the+vascular+tissues+of+resistant+and+non-resistant+barley+%28Hordeum+Vulgare+L.%29+by+two+South+African+biotypes+of+the+Russian+wheat+aphid%5BTitle%5D)+AND+%22NISEB+J%22%5BJournal%5D)">Structural damage in the vascular tissues of resistant and non-resistant barley (Hordeum Vulgare L.) by two South African biotypes of the Russian wheat aphid.</a> NISEB J. 14 (1), 1-5 (2018).</li>
<li>Mohase, L., Taiwe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saliva+fractions+from+South+African+Russian+wheat+aphid+biotypes+induce+differential+defense+responses+in+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22S+Afri+J+Plant+Soil%22%5BJournal%5D)">Saliva fractions from South African Russian wheat aphid biotypes induce differential defense responses in wheat.</a> S Afri J Plant Soil. 32 (4), 235-240 (2015).</li>
<li>Vander Westhuizen, A. J., Qian, X. M., Botha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-1%2C3-glucanases+in+wheat+and+resistance+to+the+Russian+wheat+aphid%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Plant%22%5BJournal%5D)">β-1,3-glucanases in wheat and resistance to the Russian wheat aphid.</a> Physiol Plant. 103 (1), 125-131 (1998).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantification+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72 (1-2), 248-254 (1976).</li>
<li>Miller, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+dinitrosalicylic+acid+reagent+for+determination+of+reducing+sugar%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar.</a> Anal Chem. 31 (3), 426-428 (1959).</li>
<li>Zieslin, N., Ben-Zaken, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxidases%2C+phenylalanine+ammonia-lyase+and+lignification+in+peduncles+of+rose+flowers%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol+Biochem+%28Paris%29%22%5BJournal%5D)">Peroxidases, phenylalanine ammonia-lyase and lignification in peduncles of rose flowers.</a> Plant Physiol Biochem (Paris). 29 (2), 147-151 (1991).</li>
<li>Damager, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+principles+insight+into+the+%CE%B1-glucan+structures+of+starch%3A+Their+synthesis%2C+conformation%2C+and+hydration%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Rev%22%5BJournal%5D)">First principles insight into the α-glucan structures of starch: Their synthesis, conformation, and hydration.</a> Chemical Rev. 110 (4), 2049-2080 (2010).</li>
<li>Nakashima, J., Laosinchai, W., Cui, X., Brown Jr, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insight+into+the+mechanism+and+biosynthesis%3A+proteases+may+regulate+callose+biosynthesis+upon+wounding%5BTitle%5D)+AND+%22Cellulose%22%5BJournal%5D)">New insight into the mechanism and biosynthesis: proteases may regulate callose biosynthesis upon wounding.</a> Cellulose. 10, 269-289 (2003).</li>
<li>Cierlik, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+callose+and+%CE%B2-1%2C3-glucanases+during+aphid+infestation+on+barley+cv.+Clipper%5BTitle%5D)+AND+%22Master+thesis+in+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Regulation of callose and β-1,3-glucanases during aphid infestation on barley cv. Clipper.</a> Master thesis in Molecular Cell Biology. , Sodertorn University College. Stockholm. (2008).</li>
<li>Rahar, S., Swami, G., Nagpal, N., Nagpal, M. A., Singh, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation%2C+characterization%2C+and+biological+properties+of+%CE%B2-glucans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Adv+Pharm+Technol+Res%22%5BJournal%5D)">Preparation, characterization, and biological properties of β-glucans.</a> J Adv Pharm Technol Res. 2 (2), 94(2011).</li>
<li>Mafa, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+complex+oligosaccharides+and+CAZymes+activity+under+acid+conditions+constitute+the+Thatcher+%2B+Lr9+defense+responses+to+Puccinia+triticina%5BTitle%5D)+AND+%22Biologia%22%5BJournal%5D)">Accumulation of complex oligosaccharides and CAZymes activity under acid conditions constitute the Thatcher + Lr9 defense responses to Puccinia triticina.</a> Biologia. 78, 1929-1941 (2023).</li>
<li>Megazyme. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GOPOD+reagent+enzymes%3A+Assay+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Megazyme%22%5BJournal%5D)">GOPOD reagent enzymes: Assay procedure.</a> Megazyme. , 1-4 (2019).</li>
<li>Hlahla, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+photosynthetic+efficiency+and+carbohydrates+responses+of+six+edamame+%28Glycine+max.+L.+Merrill%29+cultivars+under+draught+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">The photosynthetic efficiency and carbohydrates responses of six edamame (Glycine max. L. Merrill) cultivars under draught stress.</a> Plants. 11 (3), 394(2022).</li>
<li>Botha, A. M., Li, Y., Lapitan, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cereal+host+interactions+with+Russian+wheat+aphid%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plant+Interact%22%5BJournal%5D)">Cereal host interactions with Russian wheat aphid: A review.</a> J Plant Interact. 1 (4), 211-222 (2005).</li>
<li>Forslund, K., Pettersson, J., Bryngelsson, T., Jonsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aphid+infestation+induces+PR-proteins+differently+in+barley+susceptible+or+resistant+to+the+birdcherry-oat+aphid+%28Rhopalosiphum+padi%29%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Plant%22%5BJournal%5D)">Aphid infestation induces PR-proteins differently in barley susceptible or resistant to the birdcherry-oat aphid (Rhopalosiphum padi).</a> Physiol Plant. 110 (4), 496-502 (2000).</li>
<li>Miedes, E., Vanholme, R., Boerjan, W., Molina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+secondary+cell+wall+in+plant+resistance+to+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of the secondary cell wall in plant resistance to pathogens.</a> Front Plant Sci. 5, 358(2014).</li>
<li>Rajninec, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+%CE%B2-1%2C3-glucanse+from+Drosera+binate+exhibits+antifungal+potential+in+transgenic+tobacco+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">Basic β-1,3-glucanse from Drosera binate exhibits antifungal potential in transgenic tobacco plants.</a> Plants. 10 (8), 1747(2021).</li>
<li>Vander Westhuizen, A. J., Qian, X. M., Wilding, M., Botha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+immunocytochemical+localization+of+wheat+%CE%B2-1%2C3-glucanase+induced+by+Russian+wheat+aphid+infestation%5BTitle%5D)+AND+%22S+Afri+J+Sci%22%5BJournal%5D)">Purification and immunocytochemical localization of wheat β-1,3-glucanase induced by Russian wheat aphid infestation.</a> S Afri J Sci. 98, 197-202 (2002).</li>
<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loosening+of+plant+cell+walls+by+expansins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loosening of plant cell walls by expansins.</a> Nature. 407 (6802), 321-326 (2000).</li>
</ol>

저자는 이 작업에 관련된 이해 상충이 없음을 선언합니다.

밀과 보리는 러시아 밀 진딧물(Diuraphis noxia)을 포함한 진딧물 종에 자주 감염되는 곡물 작물입니다.7,24. 저항성 밀 식물은 감염 기간 동안 방어 반응으로 POD 및 β-1,3-glucanase 활성의 상향 조절을 유도하여 callose 및 lignin 축적을 조절함으로써 세포벽을 수정합니다 6,25,26,27. 대부분의 연구에서 아포플라스트 3,12,28에서 POD와 β-1,3-glucanase 효소를 추출했기 때문에 세포벽 기능이 매우 추측적이라는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 이번 연구는 세포벽에 묶인 β-1,3-glucanase, MLG-specific β-glucanase, POD를 전체 단백질의 일부로 추출하는 방법을 개발했다. 이러한 효소는 대조군에 비해 저항성 밀 품종에서 매우 활성이 높았지만, 감수성이 있는 품종에서는 활성이 지연되었습니다. 실험에서 대조군을 사용하면 벽 결합 효소의 활성 수준에 대한 감염의 영향을 이해하는 데 도움이 되었습니다. 감염된 검체 또는 대조군 검체를 찾기 위해 세 번째와 두 번째 잎 조직을 채취하는 것은 일관성을 유지하기 때문에 중요합니다. 또한 POD, β-1,3-glucanase 및 MLG 특이적 β-glucanase 활성이 밀 묘목의 성장을 증가시키기 때문에 감염된 것과 대조군을 동일한 기간으로 샘플링합니다.
이 연구에 사용된 커드란 기질은 밀-RWA 상호 작용 동안 세포벽 영역에 증착된 폴리머인 칼로스와 유사한 화학 구조를 가지고 있습니다 7,24. 보리 MLG 기질은 대부분의 외떡잎식물에서 자일란에 비해 낮은 비율로 존재하는 세포벽 헤미셀룰로오스의 일부를 나타냅니다. 기질을 구연산나트륨 pH 5 완충액에 용해시켜 식물 세포벽 영역(29)의 산성 조건을 모방하였다. β-1,3-glucanase 및 MLG-specific β-glucanase를 IWF와 함께 제거한 경우, 남은 잎 조직에서 추출된 총 단백질은 MLG 및 curdlan 기질에서 활성을 갖지 않습니다. 또한 단백질 추출물이 세포질 영역에서 공급된 경우 중성 pH 범위에서 활성을 나타냅니다. 흥미롭게도, 두 효소 모두 MLG와 커드란 기질을 성공적으로 가수분해했기 때문에 총 단백질 추출물에 존재했습니다. 각각의 효소에 의한 MLG 및 커드란의 가수분해는 환원당을 생성하였으며, 이는 Mafa et al.6에 의해 수정된 방법에 따라 DNS 시약에 의해 검출되었습니다. 샘플의 총 환원 당 농도가 더 높으면 환원 당 농도가 낮을 때 DNS 시약 색상이 노란색에서 짙은 갈색으로 변하거나 색상이 노란색에서 밝은 갈색(짙은 주황색으로 보임)으로 변경됩니다.
Guaiacol 기질은 POD 활성을 측정하는 데 사용되었습니다. POD의 높은 촉매 효율로 인해 분광 광도계의 운동 모드를 사용하여 활성을 측정했습니다. POD는 기판 (Guaiacol)의 존재 하에서 H2O2 의 낮은 농도에 의해 활성화된다. 이 효소의 활성은 구아이아콜을 갈색-주황색 화합물인 테트라-구아이아콜로 변환합니다. 테트라-구아이아콜의 생산은 POD가 페놀 화합물을 가교 결합하여 올리고머를 생성하거나 페놀 화합물을 리그닌에 통합한다는 것을 확인합니다. POD는 대조군에 비해 RWASA2에 감염된 내성 Tugela-Dn5에서 더 높은 활성 수준을 보였으며, 그 다음으로 중간 정도의 내성 Tugela-Dn1이 그 뒤를 이었습니다. 그러나 POD 활동 수준은 감염되기 쉬운 Tugela에서 시간이 지남에 따라 현저히 감소했습니다. 이 연구의 결과는 RWASA2에 감염된 저항성 밀 품종이 POD를 사용하여 리그닌 또는 리그닌-헤미셀룰로오스 연결을 가교하여 세포벽을 강화한다는 주장에 의해 뒷받침되었습니다6. POD는 기능을 하기 위해H2O2가 필요했는데, 이는 세포벽 영역에서 H2O2의 수준을 조절함으로써 세포벽 구조 탄수화물의 산화 또는 표백을 감소시켰음을 나타냅니다.
이러한 세포벽 결합 효소에 대한 생화학적 최적 조건을 결정하기 위해 다양한 pH 및 온도 조건을 사용했습니다. 최적의 조건은 효소가 산성 pH 범위(pH 5)에서 최적의 활성을 갖는 것으로 나타났으며, 이는 효소가 세포벽 영역과 관련이 있음을 시사합니다. β-1,3-글루카나제에 대한 최적 온도는 β-1,3-1,4-글루칸 및 β-1,3-글루칸 기질을 각각 가수분해할 때 25°C 및 40°C에서 얻어졌다. 이 관찰은 β-1,3-glucanase와 MLG-specific β-glucanase가 RWASA2 감염 동안 저항성 밀 품종의 세포벽 영역에서 유도된 두 가지 다른 효소임을 확인했습니다. 생화학적 특성 분석은 유사한 기질을 가진 다른 효소를 발견하거나 식별하기 위한 유망한 방법이지만, 웨스턴 블로팅 및 자이모그램 분석을 포함하여 힘들지만 정확한 다른 방법을 사용하는 것이 여전히 권장됩니다. 마지막으로, MLG-올리고당의 부족으로 인해 MLG-특이적 β-glucanase에 대한 효소 활성 모드를 정량화할 수 없었습니다. 그러나 RWASA2에 감염된 투겔라-Dn5 및 투겔라-Dn1 에서 추출한 β-1,3-글루카나제는 LAM5, LAM4 및 LAM3에서 더 높은 활성을 보인 반면, 감수성 투겔라에서 추출한 것은 LAM5 및 LAM4에서 더 높은 활성을 보였다. 이는 효소 활성 모드를 연구하면 RWA에 감염된 저항성 및 감수성 품종에서 유도된 β-1,3-glucanase 간의 미묘한 차이도 포착할 수 있음을 확인합니다.
현재 연구는 밀 잎 조직에서 세포벽 결합 효소를 추출하는 자세한 절차를 제공합니다. 추출 후 β-1,3-glucanase, MLG-specific β-glucanase 및 POD의 3가지 세포벽 결합 효소를 확인했습니다. 이러한 효소의 활성 수준은 RWASA2에 감염된 중간 정도의 저항성 Tugela-Dn1 및 저항성 Tugela-Dn5 품종에서 대조군보다 유의하게 높았습니다. 이를 통해 세포벽 결합 효소가 저항성 품종의 방어 반응에 기여한다는 것을 확인했습니다. 특성화 결과는 세포벽 POD와 β-1,3-glucanase가 동일한 조건에서 기능한다는 통찰력을 제공하며, 이는 밀-RWASA2 상호 작용 중에 세포벽을 시너지 효과로 강화한다는 것을 시사합니다.
논의된 현재 프로토콜을 방해하는 몇 가지 제한 사항이 확인되었습니다. 밀 식물의 부족은 효소 샘플을 추출하는 데 사용할 수 있는 잎 물질을 제한할 수 있습니다. 세포벽 효소를 추출하기 전에 잎 샘플에서 아포플라스트의 IWF를 성공적으로 추출하지 못하면 아포플라스트와 세포벽 효소의 조합이 발생할 수 있습니다. IWF와 세포벽 영역 효소의 조합은 세포벽에 결합된 세포벽 결합 효소를 연구하기 어렵게 만듭니다. 현재 프로토콜에서 다른 제한 사항은 확인되지 않았습니다.

러시아 밀 진딧물(RWA)은 밀과 보리를 감염시켜 상당한 수확량 손실이나 곡물 품질 저하를 일으킵니다. 밀은 저항성 품종에서 β-1,3-glucanase 및 peroxidase 활성 수준을 증가시키는 것을 포함하여 여러 방어 반응을 유도하여 감염에 반응하는 반면, 감수성 품종은 초기 감염 기간 1,2,3,4에서 이러한 효소의 활성을 감소시킵니다. 밀 식물에서 β-1,3-glucanase 및 POD의 주요 기능에는 저항성 품종의 callose 축적을 조절하고 RWA 감염 1,3,5,6,7 동안 세포벽 및 아포플라스틱 영역에서 활성산소종(ROS)을 담금질하는 것이 포함되었습니다. Mafa et al.6은 RWASA2 감염 시 저항성 밀 품종에서 증가된 POD 활성과 증가된 리그닌 함량 사이에 강한 상관관계가 있음을 보여주었습니다. 또한, 리그닌 함량이 증가하면 감염된 저항성 밀 품종의 세포벽이 강화되어 RWA 수유량이 감소했음을 나타냅니다.
대부분의 연구자 그룹은 밀/보리-RWA 상호 작용 동안 아포플라스틱 β-1,3-glucanase 및 POD를 추출하고 연구했습니다. 또한, 이러한 연구의 대부분은 이러한 효소가 세포벽 영역의 효소 존재를 측정하지 않고 RWA에 감염된 밀 식물의 세포벽에 영향을 미친다고 주장했습니다. β-1,3-glucanase 활성 수준이 callose regulation 7,8,9와 관련이 있음을 보여주기 위해 현미경 기술을 사용한 연구는 소수에 불과하며, 저항 성 6,10에서 POD 활성과 세포벽 변형 사이의 상관 관계를 입증하기 위해 주요 세포벽 구성 요소를 추출했습니다. β-1,3-glucanase 및 POD와 세포벽의 연관성을 조사하지 않았다는 것은 연구자들이 세포벽 결합 효소를 직접 측정할 수 있는 방법을 개발할 필요가 있음을 나타냅니다.
현재의 방법은 세포벽에 결합된 효소를 추출하기 전에 잎 조직에서 아포소성 액체를 제거하는 것이 필요하다고 제안합니다. 아포플라스틱 유체의 추출 절차는 세포벽 결합 효소를 추출하는 데 사용되는 잎 조직에서 두 번 수행해야 합니다. 이 과정은 세포벽 영역에서 발견되는 효소와 아포플라스틱 효소의 오염 및 혼동을 줄입니다. 따라서 본 연구에서는 세포벽 결합 POD, β-1,3-글루카나아제, MLG 특이적 β-글루카나아제를 추출하여 이들의 생화학적 특성 분석을 수행하였다.

<table><tbody><tr><td>10 kDa 원심분리기 집광막 장치</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R1NB84206</td><td>연구용으로만 사용됩니다. 진단 절차에는 사용할 수 없습니다. 생물학적 용액의 농축 및 정제를 위해.</td></tr><tr><td>2 g Laminaribiose</td><td>Megazyme (Wicklow, Ireland)</td> <td>O-LAM2</td><td>연구, 생화학 효소 분석 및 체외 진단 분석에 사용하기위한 고순도 laminaribiose.</td></tr><tr><td>3 g Laminaritriose</td><td>Megazyme (Wicklow, Ireland)</td><td>O-LAM3</td><td>연구, 생화학 효소 분석 및 체외 진단 분석에 사용되는 고순도 laminaritriose.</td></tr><tr><td>3,5 Dinitro salicylic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0550</td><td>환원당의 발색 측정에 사용되는</td></tr><tr><td>4 g Laminaritetraose&nbsp;</td><td>Megazyme (Wicklow, Ireland)</td><td>O-LAM4</td><td>연구, 생화학 효소 분석 및 체외 진단 분석에 사용되는 고순도 laminaritetraose.</td></tr><tr><td>5 g Laminaripentaose</td><td>Megazyme (Wicklow, Ireland)</td> <td>O-LAM5</td><td>고순도 laminaripentaose는 연구, 생화학 효소 분석 및 체외 진단 분석에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>95% 절대 에탄올</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107017</td><td>분석을 위한 에탄올 절대</td></tr><tr><td>아세트산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B00063</td><td>아케치산 빙하 100% 분석(아세트산 함유)</td></tr><tr><td>Azo-CM-셀룰로오스</td><td>메가자임(Wicklow, Ireland)</td><td>S-ACMC</td><td>다당류는 Remazolbrilliant Blue R로 약 20개의 설탕 잔류물당 1개의 염료 분자 정도로 염색됩니다.</td></tr><tr><td>베타글루칸(보리)&nbsp;</td><td>Megazyme (Wicklow, Ireland)</td><td>G6513</td><td>물에 덜 용해되는 분말 기질. &beta;-1,3-glucanase 활성을 결정하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Bio-Rad 단백질 분석 염료</td><td>Bio-Rad Laboratories, 남아프리카 공화국</td><td>500-0006</td><td>비색 분석 염료, 농축액, Bio-Rad 단백질 분석 키트 I 및 II와 함께 사용&nbsp;</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td> <td>Gibco Europe</td><td>810-1018</td><td>실험실 전용</td></tr><tr><td>구연산염 산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0759</td><td>생명 과학 연구 전용. 진단 절차에는 사용하지 마십시오.</td></tr><tr><td>CM-커들란&nbsp;</td><td>Megazyme (Wicklow, Ireland)</td><td>P-CMCUR</td><td>&beta;-1,3-glucanase 활성을 결정하기 위한 분말 기질. 물에 불용성.</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td>생명 과학 연구 전용. 진단 절차에는 사용하지 마십시오.</td></tr><tr><td>Guaiacol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5502</td><td>산화 지표. 과산화효소 활성을 측정하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>BDH 실험실 용품, 영국</td><td>10366</td><td>강력한 산화제.</td></tr><tr><td>Mikskaar Professional Substarte</td><td>Mikskaar (에스토니아)</td><td>NI</td><td>이탄 이끼 기반 묘목 기질.</td></tr><tr><td>Multifeed fertiliser (5.2.4 (43))</td><td>Multifeed Classic</td><td>B1908248</td><td>최적의 뿌리 발달을 보장하기 위해 인(P)이 많이 필요한 어린 발달 식물 및 묘목을 위한 수용성 비료입니다.</td></tr><tr><td>Naphthol</td><td>Merck, 독일</td><td>N2780</td>은 <td>촉매가 있는 상태에서 수소화를 거칩니다.</td></tr><tr><td>Phenol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>33517</td><td>빛에 민감합니다. R&의 경우 D 전용입니다. 약물, 가정용 또는 기타 용도로 사용하지 마십시오. SDS 사용 가능</td></tr><tr><td>칼륨 타르타르산 나트륨 사수화물 (Rochelle salt)</td> 환<td>원당 측정에 사용되는 3,5- 디 니트로 살리실산 용액의 제조에 사용되는</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S2377</td>.</tr><tr><td>실리카 플레이트 (TLC 실리카겔 60 F254)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60778-25EA</td><td>실리카겔 매트릭스, 형광 표시기 포함 254nm</td></tr><tr><td>수산화나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8045</td><td>R& D 전용입니다. 약물, 가정용 또는 기타 용도로 사용하지 마십시오.</td></tr><tr><td>나트륨 메타 중아황산염</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>31448</td><td>3,5- 디 니트로 살리실산 용액을 준비하는 동안 항산화 제로 추가되었습니다.</td></tr><tr><td>인산나트륨 이염기성 헵타하이드레이트</td><td>시그마-알드리치</td><td>S9390</td><td>pH를 일정하게 유지하기 위해 생물학 연구에서 완충 용액으로 사용됩니다.</td></tr><tr><td>인산나트륨 일염기성 헵타하이드레이트</td><td>시그마-알드리치</td><td>71500</td><td>물에 용해되는 무기 화합물. 규산염 기반 그라우트 개발에 시약으로 사용됩니다.</td></tr><tr><td>통계 분석 소프트웨어</td><td>TIBCO Statistica</td><td>버전 13.1</td><td></td></tr><tr><td>황산</td><td>Merck, Darmstadt, Germany</td><td>30743</td><td>Hg, ACS 시약 분석을 위한 황산 95-97%.</td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10812846001</td><td>배양 혼합물의 완충제.&nbsp; 또한 용해 및 TE (Tris-EDTA) 완충액의 구성 요소로 사용되었습니다. 생명 과학 연구 전용입니다. 진단 절차에는 사용하지 마십시오.</td></tr><tr><td>UV&ndash; 가시광선 분광 광도계</td><td>GENESYS 120&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; NI = 확인되지 않음.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

#946;-1,3-glucanase 및 peroxidase physicochemical 특성 diuraphis noxia 감염에 대한 밀 세포벽 방어 메커니즘 설명

Elucidating &#946;-1,3-Glucanase and Peroxidase Physicochemical Properties of Wheat Cell Wall Defense Mechanism Against Diuraphis noxia Infestation

러시아 밀 진딧물(RWA)에 감염된 밀 식물은 과민 반응(HR) 및 β-1,3-glucanase 및 peroxidase(POD)와 같은 발병 관련(PR) 단백질의 유도를 포함한 일련의 방어 반응을 유발합니다. 이 연구는 세포벽 관련 POD와 β-1,3-glucanase의 물리화학적 특성을 특성화하고 RWASA2-wheat 상호 작용 중 세포벽 변형에 대한 시너지 효과를 결정하는 것을 목표로 합니다. 감수성이 있는 투겔라(Tugela), 적당히 저항성이 있는 투겔라-Dn1(Tugela-Dn1) 및 저항성이 있는 투겔라-Dn5(Tugela-Dn5) 품종을 온실 조건에서 미리 발아시키고 심었으며, 심은 후 14일 후에 비료를 주고 3일마다 관개했습니다. 식물은 3 잎 단계에서 동일한 RWASA2 클론의 20 개의 parthenogenetic 개체로 감염되었으며, 잎은 감염 후 1 일에서 14 일에 수확되었습니다. 세포간 세척액(IWF)을 진공 여과를 사용하여 추출하고 -20°C에서 보관했습니다. 잎 잔류물을 분말로 분쇄하여 세포벽 구성 요소에 사용했습니다. POD 활성 및 특성 분석은 5mM guaiacol 기질 및H2O2를 사용하여 측정하고 470nm에서 흡광도 변화를 모니터링했습니다. β-1,3-글루카나제 활성도, pH 및 온도 최적 조건은 β-1,3-글루칸 및 β-1,3-1,4-글루칸 기질을 사용하여 DNS 시약으로 가수분해물 내 총 환원당을 측정하고, 540nm에서 흡광도를 측정하고, 포도당 표준 곡선을 사용하여 입증되었습니다. pH 최적은 pH 4 내지 9 사이에서, 온도 최적은 25 내지 50°C, 열 안정성은 30°C 내지 70°C 사이에서 결정하였다. β-1,3-글루카나제 기질 특이성은 25°C 및 40°C에서 커드란 및 보리 β-1,3-1,4-글루칸 기질을 사용하여 결정하였다. 또한, β-1,3-글루카나제 작용 모드는 라미나리바이오오스 대 라미나리펜타오스를 사용하여 측정하였다. 올리고당 가수분해 산물 패턴은 박층 크로마토그래피(TLC)로 정성적으로 분석하고 HPLC로 정량적으로 분석했습니다. 이 연구에서 제시된 방법은 밀에 RWA를 감염시키고 세포벽 영역에서 과산화효소 및 β-1,3-글루카나아제를 추출하고 포괄적인 생화학적 특성을 분석하기 위한 강력한 접근 방식을 보여줍니다.

밀 품종의 4가지 생물학적 복제물(Tugela, Tugela-Dn1 및 Tugela-Dn5)은 3잎 성장 단계에서 RWASA2에 감염되었습니다. 감염 후 잎은 1, 2, 3, 7 및 14dpi로 수확했습니다. 대조군 처리는 RWASA2에 감염되지 않아 실험 결과를 스트레스에 노출되지 않은 밀 식물과 비교할 수 있도록 했습니다. 실험은 4배로 진행되었으며 결과는 평균값으로 제시되었습니다.
RWASA2-inpeded 추출물과 대조군 추출물 모두의 단백질 농도는 BSA를 단백질 표준물질로 사용하여 정량화했습니다. 이는 β-1,3-glucanase 및 POD에 대한 효소 활성을 측정하고 모든 반응에 사용된 단백질 농도가 모든 샘플에 대해 알려져 있는지 확인하는 데 유용했습니다. 그 차이는 무시할 수 있을 정도였습니다. 데이터는 그래프 또는 표 형식으로 표시할 수 있습니다. 첫 번째 그래프 형식은 효소 활성 및 특성화 분석 결과 모두에 대해 감염 후 일수(x축)에 대해 표시된 효소 특이적 활성(y축)을 표현하는 데 사용되었습니다. RWASA2에 감염된 내성 Tugela-Dn5 샘플에서 β-1,3-glucanase, MLG-specific β-glucanase 및 POD의 특이적 활성이 증가하면 효소가 방어 반응에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났습니다(그림 1 및 그림 2). 또한, 두 효소 모두 RWASA2에 감염된 감수성 투겔라(Tugela)에서 시간이 지남에 따라 활성을 크게 잃었습니다.
세포벽 관련 β-1,3-glucanase 및 POD의 생화학적 특성은 각각 선 및 막대 그래프로 표시된 상대 활성 또는 특정 효소 활성의 백분율로 활성을 표현하여 측정했습니다(그림 3). 그 결과 β-1,3-glucanase와 POD 모두 산성 세포벽 조건에 해당하는 pH와 유사한 최적 조건(pH 5)을 갖는 것으로 나타났습니다(그림 3). MLG 특이적 β-glucanase도 pH 5에서 특정 활성을 보였다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 그러나 동일한 조건에서 최대 80%의 상대 활성을 잃은 β-1,3-glucanase보다 기본 조건에서 더 안정적이었습니다. 그 결과, MLG 및 β-1,3-글루칸 기질을 촉매하는 두 가지 효소가 pH 최적에 따라 세포벽 영역에서 성공적으로 추출되었음을 확인했습니다. 이 주장은 β-1,3-glucanase가 최대 50°C의 온도만 견딜 수 있고 70°C에서 80% 이상의 상대 활성을 잃는다는 것을 확인한 열안정성 분석 결과(그림 4)에 의해 검증되었습니다(POD는 동일한 프로필을 가짐). 대조적으로, MLG 특이적 β-글루카나제 효소는 25°C에서 가장 높은 활성을 보인 후 점차 활성이 감소했지만, 이 효소는 50°C 및 70°C에서 50% 이상의 상대 활성을 유지했습니다. 관찰 결과, MLG 특이적 β-글루카나아제는 투겔라, 투겔라-Dn1 및 투겔라-Dn5에서 추출한 β-1,3-글루카나아제 및 POD에 비해 독특한 생화학적 특성을 나타냈다.
β-1,3-글루카나제 작용 모드는 DP가 5와 2 사이인 라미나린-올리고당(LAM5 내지 LAM2라고 함)으로 입증되었습니다. TLC 결과는 감염된 Tugela, Tugela-Dn1 및 Tugela-Dn5가 β-1,3-glucanase 효소를 가지고 있으며, 짧은 올리고당(LAM3)에 비해 긴 올리고당(LAM5 및 LAM4)을 주로 가수분해하는 것으로 나타났습니다. TLC 플레이트에 시각화된 청자색 반점의 강도는 LAM5와 LAM4가 덜 강렬한 밴드를 가지고 있음을 보여주었고, 그 다음으로 저항성 및 적등히 저항성이 있는 품종에서 LAM3가 그 뒤를 이었습니다(그림 5). 감수성이 있는 투겔라 품종은 β-1,3-글루카나아제가 더 높은 강렬한 밴드를 보인 다른 올리고당(LAM4-LAM2)보다 LAM5를 더 잘 가수분해하는 것으로 나타났습니다. 작용 모드는 또한 가수분해물의 농도로 표현되며, 더 짧은 올리고당(LAM3 및 LAM2)의 가수분해 동안 더 높은 DP와 중간 활성을 가진 라미나린 올리고당의 효율적인 가수분해를 보여주는 히트맵이 있는 표에 제시되어 있습니다(표 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66903/66903fig01.jpg"> 그림 1: RWASA2에 감염된 Tugela(A), Tugela-Dn1(B) 및 Tugela-Dn5(C)에서 추출한 감염 14일 후 과산화효소의 특이적 활성. 실험은 4 배로 수행되었습니다. 값과 오차 막대는 각각 평균 ± SD를 나타냅니다. U/mg 단백질의 U는 μmol 테트라-구아이아콜/분을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66903/66903fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66903/66903fig02.jpg"> 그림 2: RWASA2에 감염된 Tugela, Tugela-Dn1 및 Tugela-Dn5 품종에서 측정된 β-1,3-glucanase 특이적 활성. 효소 활성은 화학적으로 구별되는 두 개의 글루칸 기질, 즉 혼합 결합 β-1,3-1,4-글루칸(A-C) 및 응고(D-F)를 사용하여 수행되었습니다. 실험은 4 배로 수행되었습니다. 값과 오차 막대는 각각 평균 ± SD를 나타냅니다. U/mg 단백질의 U는 μmol/h를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66903/66903fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66903/66903fig03.jpg"> 그림 3: RWASA2에 감염된 Tugela, Tugela-Dn1 및 Tugela-Dn5에서 추출한 β-1,3-glucanase 효소의 pH 최적 분석은 감염 후 3일 후입니다. 실험은 혼합 결합 β-1,3-1,4-글루칸(A-C) 및 커드란(D-F) 기질을 사용하여 수행되었습니다. 실험은 4 배로 수행되었습니다. 값과 오차 막대는 각각 평균 ± SD를 나타냅니다. U/mg 단백질의 U는 μmol/h를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66903/66903fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66903/66903fig04.jpg"> 그림 4: 열안정성 분석. RWASA2에 감염된 투겔라, 투겔라-Dn1 및 투겔라-Dn5에서 추출한 β-1,3-글루카나제의 열안정성 분석은 감염 3일 후 β-1,3-1,4-글루칸(A-C) 및 β-1,3-글루칸(D-F)에서 조사했습니다. 실험은 4 배로 수행되었습니다. 값과 오차 막대는 각각 평균 ± SD를 나타냅니다. U/mg 단백질의 U는 μmol/h를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66903/66903fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66903/66903fig05.jpg"> 그림 5: 라미나린 올리고당에 대한 β-1,3-글루카나아제 작용 모드 분석. 라미나린 올리고당은 L5, L4, L3 및 L2로 나타났으며, 이들은 각각 라미나리펜타오스(LAM5), 라미나리트라오스(LAM4), 라미나리트리오스(LAM3) 및 라미나리비오스(LAM2)와 동일했다. 빨간색 화살표는 포도당(GLU)을 나타내고 파란색 화살표는 올리고당이 없는 효소의 프로필을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66903/66903fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
표 1: RWASA2에 감염된 밀 품종에서 추출한 농축된 β-1,3-glucanase로 3일 동안 생산된 Laminarin-oligosaccharides. 가수분해물 내 올리고당의 농도는 LC-MS로 측정하였다. LAM5, LAM4, LAM3, LAM2 및 GLU는 각각 laminaripentaose, laminaritetraose, laminaritriose, laminaribiose 및 glucose를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66903/Table%201.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

본 프로토콜은 밀 식물에서 주로 β-1,3-glucanase 및 peroxidase와 같은 세포벽 관련 효소를 연구하고 특성화하는 데 사용되는 절차를 설명합니다. 그들의 활동 수준은 밀-RWA 상호 작용 중에 증가하며 세포벽 강화를 통해 식물 방어 반응에 관여하여 진딧물 먹이를 억제합니다.

#946;-1,3-Glucanase 및 Peroxidase Physicochemical 특성 Diuraphis noxia 감염에 대한 밀 세포벽 방어 메커니즘 설명

Wheat plants infested by Russian wheat aphids (RWA) induce a cascade of defense responses, including the hypersensitive responses (HR) and induction of ...

elucidating-13-glucanase-peroxidase-physicochemical-properties-wheat

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

빠른 방법은 세포외 기질에서 다당류의 구조에 대한 통찰력을 얻을 수 설명되어 있습니다. 방법은 glycosylhydrolases의 특이성과 물질의 미세한을 분석 수 있도록 질량 분석계의 감도 활용합니다. 이 기술은 조직 자체에서 직접 사용할 수 적용할 수 있습니다.

세포외 다당류의 OLIgo 질량 프로파일 (OLIMP)

Microarrays를 사용하여 식물 세포의 벽 폴리머의 Glycan 프로파일

이 프로토콜은 효소(엔톡실라나아제) 가수분해 전에 RE에 2개의 아미노벤즈아미드를 태그한 다음 질량 분석법(MS) 및 핵 자기 공명(NMR)을 사용하여 결과 올리고당을 분석함으로써 헤테록실란의 말단(RE) 및 내부 영역 글리코실 서열의 구조적 특성화에 사용되는 특정 기술을 설명합니다.

효소 적, 화학 (메틸화) 및 물리 (질량 분석, 핵 자기 공명) 기법을 사용하여 공장 벽 Heteroxylans의 연속

유전자 Ustilago이 maydis 검댕 곰팡이 조작에 우리는 강력한 유전자 교체 전략을 설명합니다. 이 프로토콜은 감염 표현형을 조사하기 위해 삭제 돌연변이를 생성하는 방법에 대해 설명합니다. 형광 표지 단백질을 코딩하는 서열을 추가하여, 예를 들어, 임의의 방법으로 유전자를 수정하도록 확장 될 수있다.

플랜트 병원체의 유전자 조작<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; 곰팡이 생물과 식물 미생물 상호 작용을 연구하는

식물 defensins 병원 균에 대 한 식물 방어에 중요 한 역할을 재생. 대 한 항진균 요원, 액션 (MOA)의 그들의 모드를 이해로 이러한 항진균 펩 티 드의 효과적인 사용이 중요 합니다. 여기, 라이브 세포 이미징 방법 공부 이러한 펩 티이 드의 MOA의 중요 한 측면을 설명 합니다.

조사 항목의 모드와 항진균 공장 Defensins의 Subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징

다 당 류 젤 전기 이동 법 (속도), 예를 들어, mannan를 사용 하 여 구조 분석을 위한 프로토콜을 설명 합니다.

속도 사용 하 여 식물에 Mannan 세포 벽 다 당 류 구조 특성

이 작품 옥수수 조직의 세 가지 유형으로 옥수수 단백질 분 비의 원래의 장소에 배달에 대 한 Ustilago maydis 트로이 목마 스트레인의 복제에 대해 설명 합니다.

원래의 배달 옥수수 단백질에 대 한 Ustilago maydis 트로이 목마 사용 하

이 원고의 목표는 RING 형 E3 유비퀴틴 리가제의 포괄적 인 생화학 및 기능 적 연구에 대한 개요를 제시하는 것입니다. 상세한 프로토콜을 갖춘 이 다단계 파이프라인은 테스트된 단백질의 효소 활성을 검증하고 활성을 작동하도록 연결하는 방법을 보여줍니다.

시험관 내 링 타입 E3 유비퀴틴 리가제의 기능적 특성화

이 프로토콜은 커피-곰팡이 상호작용에서 펙틴을 검출하는 현미경 방법을 기술한다.

식물 - 곰팡이 상호 작용에서 펙틴을 검출하는 이중 염색 방법

이 원고는 곰팡이 식물 병원체와의 옥수수 상호 작용에 대한 재현 가능한 세포학적, 생리학적, 분자적 연구를 위해 분리된 옥수수 잎 덮개를 사용하는 최적화된 접종 프로토콜을 자세히 설명합니다. 잎 덮개는 고정되지 않은 조직에서 살아있는 식물과 곰팡이 사이의 세포 상호 작용을 실시간으로 관찰할 수 있도록 합니다.

곰팡이 잎 옥수수 병원체에 의한 감염의 살아있는 세포 이미징을 위한 분리된 옥수수 덮개

배우세요 밀 세포벽 방어 메커니즘에서 β-1,3-glucanase와 peroxidase의 생화학적 기능을 탐구하는 방법을. Diuraphis noxia 감염 시 효소 활성 분석을 통해 저항성 품종 육성에 필요한 통찰을 얻습니다.

#946;-1,3-Glucanase 및 Peroxidase Physicochemical 특성 Diuraphis noxia 감염에 대한 밀 세포벽 방어 메커니즘 설명

더 많은 동영상 탐색