Name: α-Synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: 학습하세요 α-synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법으로 파킨슨병에서 후각 상피에서 후각 구로의 병리 전파를 연구하는 방법을 마우스 모델을 통해 확인하세요.

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<meta charset="utf8"></head><body>α-Synuclein 증식: 파킨슨병의 비강 내 투여

<ol><li>Tysnes, O. B., Storstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).</li>
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<li>Conway, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+oligomerization%2C+not+fibrillization%2C+is+a+shared+property+of+both+alpha-synuclein+mutations+linked+to+early-onset+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).</li>
<li>Braak, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+brain+pathology+related+to+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).</li>
<li>Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Parkinson%27s+disease%3A+possible+routes+by+which+vulnerable+neuronal+types+may+be+subject+to+neuroinvasion+by+an+unknown+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen.</a> J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).</li>
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<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+%CE%B1-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338, 949-953 (2012).</li>
<li>Desplats, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+disease+primate+model+with+%CE%B1-Synuclein+propagation+from+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb.</a> Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+into+the+mouse+gastrointestinal+tract+induces+Lewy+body-like+aggregates+in+the+brainstem+via+the+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+transneuronal+propagation+of+alpha-synucleinopathy+triggered+in+olfactory+bulb+mimics+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease.</a> J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+aggregates+after+olfactory+bulb+injection+of+%CE%B1-synuclein+fibrils+is+associated+with+early+neuronal+loss+and+is+reduced+long+term%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term.</a> Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+spread+from+olfactory+bulb+causes+hyposmia%2C+anxiety%2C+and+memory+loss+in+BAC-SNCA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice.</a> Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).</li>
<li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+pathology+involves+the+olfactory+cells+in+Parkinson%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders.</a> Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>De Luca, C. M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+RT-QuIC+seeding+activity+for+%CE%B1-synuclein+in+olfactory+mucosa+samples+of+patients+with+Parkinson%27s+disease+and+multiple+system+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy.</a> Transl Neurodegener. 8, 24(2019).</li>
<li>Stefani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+seeds+in+olfactory+mucosa+of+patients+with+isolated+REM+sleep+behaviour+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder.</a> Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).</li>
<li>Ucciferri, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+central+nervous+system+inflammation%2C+demyelination%2C+and+axon+injury+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (204), e65738(2024).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+%CE%B1-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-dose+intranasal+administration+of+%CE%B1-syn+PFFs+induce+lewy+neurite-like+pathology+in+olfactory+bulbs%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsonism+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs.</a> Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).</li>
<li>Guo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+administration+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+triggers+microglial+iron+deposition+in+the+substantia+nigra+of+Macaca+fascicularis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis.</a> Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).</li>
<li>Macdonald, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+%CE%B1-synuclein+and+neurodegeneration+in+the+central+nervous+system+of+heterozygous+M83+mice+following+the+peripheral+administration+of+%CE%B1-synuclein+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds.</a> Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).</li>
<li>Abdelmotilib, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+fibril-induced+inclusion+spread+in+rats+and+mice+correlates+with+dopaminergic+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).</li>
<li>Tarutani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fragmented+pathogenic+%CE%B1-Synuclein+seeds+on+prion-like+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation.</a> J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).</li>
<li>Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal model for prodromal Parkinson's disease.</a> Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).</li>
<li>Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+removal+and+inactivation+of+alpha-Synuclein+assemblies+from+laboratory+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials.</a> J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).</li>
<li>Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+efficacy+of+different+procedures+that+remove+and+disassemble+alpha-synuclein%2C+tau+and+A-beta+fibrils+from+laboratory+material+and+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces.</a> Sci Rep. 8, 10788(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>일체형 형광 현미경 BZ-X710</td><td>KEYENCE</td><td>N/A</td><td>일체형 현미경</td></tr><tr><td>암피실린 나트륨 염</td><td>Nacalai tesque</td><td>02739-32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor II</td><td>Sonicbio</td><td>BR2006A</td><td>수조 유형 초음파 발생기.</td></tr><tr><td>Butorphanol 주석산 Meiji</td><td>Seika Pharma</td><td>WAK-52850</td><td></td></tr><tr><td>셀룰로오스 튜브</td><td>MISUMI</td><td>UC20-32-100</td><td></td></tr><tr><td>DeepWellMaximizer</td><td>TAITEC</td><td>MBR-022UP</td><td>Shaker</td></tr><tr><td>DynaCompetent Cells Zip BL21 (DE3)</td> <td>BioDynamics Laboratory Inc.</td><td>DS255</td><td>유능한 셀</td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107961</td><td>현미경 검사용 빠른 설치 매체</td></tr><tr><td>Graefe Extra Fine Forceps Curved Serrated</td><td>FST</td><td>11152-10&nbsp;</td><td>집게</td></tr><tr><td>경화 파인 가위</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>가위</td></tr><tr><td>Histofine Simple stain mouse MAX-PO (R)</td><td>Nichirei Bioscience</td><td>414341</td><td>Universal Immuno-peroxidase Polymer, anti-Rabbit</td></tr><tr><td>ImageJ ver 1.52p</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://imagej.net/</td></tr> <tr><td>innova4200</td><td>New Brunswick scientific</td><td>9105085</td><td>Incubator shaker</td></tr><tr><td>Isopropyl-&beta;- D-thiogalactopyranoside</td><td>Nacalai tesque</td><td>19742-94</td><td></td></tr><tr><td>LB broth, Lennox</td><td>Nacalai tesque</td><td>20066-24</td><td></td></tr><tr><td>Leica EG 1150 H</td><td>Leica</td><td>14 0388 86 108</td><td>모듈식 조직 임베딩 센터</td></tr><tr><td>Leica TP 1020</td><td>Leica</td><td>14 0422 85108</td><td>자동 조직 처리기&nbsp;</td></tr><tr><td>메데토미딘</td><td>후지 필름</td><td>135-17473</td><td></td></tr><tr><td>Microm HM325 로터리 마이크로톰</td><td>Thermo Scientific</td><td>902100</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Seiyaku</td><td>4987-211-76210-0</td><td></td></tr><tr><td>새로운 헤마톡실린 G형</td><td>Muto</td><td>65-9197-38</td><td>헤마톡실린 용액</td></tr><tr><td>정맥 D형용 일반 날개 바늘, 25G</td><td>테루모</td><td>NN2332R</td><td>25G 바늘</td></tr><tr><td>Optima TLX 초원심분리기</td><td>Beckman Couler</td><td>8043-30-1197</td><td>초원심분리기</td></tr><tr><td>P10 피펫</td><td>Gilson</td><td>FA10002P</td><td></td></tr><tr><td>파라핀</td><td>Leica</td><td>39601095</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>Nacalai tesque</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>Peroxidase Stain DAB Kit</td><td>Nacalai tesque</td><td>25985-50</td><td></td></tr><tr><td>Pirece BCA 단백질 분석 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>BCA 분석</td></tr><tr><td>pRK172</td><td>Addgene</td><td>#134504</td><td>플라스미드</td></tr><tr><td>Q-세파로스 빠른 흐름.&nbsp;</td><td>cytiva</td><td>17051001</td><td>이온 교환 수지</td></tr></tbody></table>

α-synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법

Technique for Intranasal Administration of &#945;-Synuclein Aggregates

그림 3은 OB에서 α-Syn 응집체의 몇 가지 예를 보여줍니다. 본 연구에서는 α-Syn 응집체를 편측 콧구멍에 투여했습니다. 두 개의 비강은 비중격에 의해 분리되어 있으며, 각 산부인과는 후각 감각 뉴런을 각 비강에 개별적으로 투영합니다. 따라서 반대쪽 OB를 대조군으로 사용할 수 있습니다.
P-α-Syn 병리는 1개월 및 3개월 후 치료 측의 산부인과에서 관찰되지 않았습니다(그림 3A, B). Lewy neurite-like p-α-Syn 응집체는 6개월 및 12개월 후에 처리된 측의 사구체에서 관찰되었습니다. (그림 3C, D, F, G). 이러한 응집체는 대조군 측의 OB에서 관찰되지 않았습니다(그림 3E).
α-Syn 응집체를 계산하거나 ImageJ(Table of Materials)를 사용하여 크기 등을 검사하여 α-Syn 병리학을 추정할 수 있습니다. 예를 들어, 이전에 이 모델20에서 α-Syn 응집체의 수를 계산하고 보고했습니다. 치료된 쪽의 산부인과에서, 산부인과 내 루이 중성석 유사 응집체는 12개월에 걸쳐 유의하게 증가했다(일원 분산 분석, Dunnett의 검정, p &lt; 0.01; 그림 3H). 제어 측의 OB에는 α-Syn 응집체가 거의 없습니다.
이전 연구에서는 쥐의 뇌에 주입된 PFF가 일주일 이내에 분해되고 내인성 마우스 α-Syn이 α-Syn 응집체로 전환되는 것으로 나타났습니다19. 본 연구에서 시간 경과에 따른 α-Syn 병리학의 증가는 내인성 마우스 α-Syn이 PFF의 단일 용량 비강 내 투여에 의해 α-Syn 응집체로 전환되었음을 나타냅니다. 이러한 결과는 α-Syn 병리학이 후각 점막에서 산부인과로 퍼질 수 있음을 시사했습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig01.jpg"> 
그림 1: 마우스의 비강 투여 방법. (A) 마우스는 머리가 약간 아래쪽으로 기울어진 상태에서 앙와위 위치에 있습니다. (B) 마우스의 콧구멍은 노란색 화살촉으로 표시됩니다. (C, D) α-Syn 피브릴 용액을 마우스의 콧구멍에 떨어뜨리고(C, 빨간색 화살표) 빠르게 흡입합니다(D, 빨간색 화살표). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig02.jpg"> 
그림 2: 온전한 후각구를 얻기 위한 단계의 개요. (A) 가위를 사용하여 두개골 뼈를 궁수 및 측면으로 절개합니다(노란색 점선). (B) 후각구(OB)의 두개골 뼈를 완전히 제거합니다. (C) 머리를 뒤집어 조심스럽게 뇌를 제거합니다. 뇌 신경을 절단하십시오. (D) 두개골에 붙어있는 후각 신경을 절단한다. (E) 온전한 OB가 있는 전체 뇌. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig03.jpg"> 
그림 3: P-α-Syn은 후각구의 사구체에서 응집됩니다. (A-G) P-α-Syn (EP1536Y) 비강 투여 후 처리측 1, 3, 6, 12개월(각각 1m, 3m, 6m, 12m)에 대한 산부인과의 면역조직화학과 (E) 비강 투여 후 12개월 후 대조군. (C, D) 루이소, 중성석, 실과 같은 α-Syn 응집체가 사구체 주위에 나타납니다. (여, 지) 확대 이미지는 비강 투여 후 12개월 후의 Lewy neurite-like p-α-Syn 6의 고배율 이미지입니다. (H) 처리 및 대조 측의 OB에서 Lewy neurite-like p-α-Syn 침전의 양(n = 4-5). 그래프는 평균 ± SEM을 보여줍니다. 일원 분산 분석에 이어 Dunnett의 검정이 뒤따릅니다. **&lt;0.01. 이 수치는 이전 보고서(20)에서 수정되었다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

α-Synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by the presence of Lewy bodies, which are aggregates of &#945;-synuclein ...

technique-for-intranasal-administration-of-synuclein-aggregates

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

파킨슨병은 살충제에 대한 노출과 관련된되었습니다. 여기서 우리는 원하는 농도와 장용 신경계의 알파 synuclein의 축적에서 효과를 분석하는 방법에 위장 튜브를 사용하는 살충제를 전달하는 방법을 보여줍니다.

장용 신경계의 알파 synuclein의 흠도의 Gavage 및 이미지 분석을 사용하여 Rotenone의 구강 관리

intranasally 뇌를 타겟팅의 목적을 위해 깨어 마우스로 약물을 투여하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 긴 마취없이 약물의 비강 관리를 사용하는 기간, 그리고 최소한의 전신 노출과 코 - 투 - 뇌 전달을 통해 주입 반복 할 수 있습니다.

깨어 마우스로 CNS의 치료학의 비강 관리

이 비디오는 알파-시누클레인(αS) 응집체로 처리된 뉴런의 면역 염색을 보여줍니다. 뉴런은 먼저 αS 응집체로 처리됩니다. 그런 다음 고정, 투과화 및 차단 용액으로 처리됩니다. 1차 항체가 추가되고, 그 다음에 형광 표지된 2차 항체와 핵 염색이 추가됩니다. 그런 다음 샘플을 장착하고 현미경으로 관찰합니다.

Alpha-Synuclein 응집체로 처리된 뉴런의 면역염색

이 비디오는 신경 염증을 유도하기 위해 알파-시누클레인 피브릴을 마우스에 주입하는 방법을 보여줍니다. 원섬유는 돌연변이된 알파-시누클레인 단백질을 발현하는 형질전환 마우스에 복강내로 주입됩니다. 중추신경계에 도달하면, 원섬유는 뉴런으로 들어가 돌연변이된 단백질의 응집을 유도합니다. 응집체는 인접한 뉴런, 미세아교세포 및 성상세포로 퍼집니다. 응집체의 인식은 미세아교세포를 유발하여 신경 염증을 유발하여 뉴런을 손상시킵니다.

알파 Synuclein 섬유의 주입을 통해 쥐에 있는 neuroinflammation의 감응작용

출처: Ullah, I., et.al. 중추신경계에 비강내 siRNA를 전달하는 동안 마우스를 배치하기 위한 포지셔닝 장치. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 특수 포지셔닝 장치를 사용하여 뉴런 표적 펩타이드-siRNA 복합체를 마우스 뇌에 전달하기 위한 정밀한 비강내 투여 기술을 보여줍니다. 마취된 마우스는 폐 배액을 방지하면서 siRNA 흡입을 최적화하기 위해 머리를 아래로 향하게 하고 앞으로 고정합니다. 표적 펩타이드는 뉴런에서 수용체 매개 흡수를 촉진하여 뇌에서 표적 siRNA 전달 및 유전자 침묵을 가능하게 합니다.

포지셔닝 장치를 사용하여 마우스 뇌에 siRNA의 비강내 전달

출처: Kanazawa, T., et al. 코에서 뇌로 약물 전달을 평가하기 위한 흡입 마취 하에 비강내 투여를 위한 새로운 방법. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 코에서 뇌로 약물 전달을 달성하기 위해 마취된 마우스에 방사성 표지 약물을 비강내 투여하는 방법을 보여줍니다. 약물이 비강 상피를 통과하고 신경 경로를 통해 뇌에 도달하는 방법과 모양체 운동이 약물 보유 및 제거에 어떤 영향을 미치는지 설명합니다. 또한 비디오에서는 식도를 통해 캐뉼라를 삽입하여 모양체 운동에 반대하여 약물을 전달하고 유지력을 높이고 수송 효율성을 향상시키는 대체 역 캐뉼라 삽입 방법에 대해 설명합니다.

코에서 뇌로 약물 전달을 위한 피펫 및 역캐뉼라 삽입을 통한 마우스의 비강내 약물 투여

(+/- M83 : GFAP의 -luc +/-)의 Tg는 복막 내로 또는 혀의 α- 시누 클레인 브릴의 말초 주입 가족적 A53T 돌연변이와 반딧불이 루시퍼 라제와 인간의 α- 시누 클레인 표현 마우스, 신경 염증을 포함한 신경 병리학을 유도 할 그들의 중추 신경계한다.

알파 - 시누 클레인 브릴의 주변 접종 후 형질 전환 마우스의 신경 염증의 생물 발광 영상

이 프로토콜의 목표는 vivo에서집계 하는 알파 synuclein의 형성을 복제 하는 셀 기반 시스템을 제공 하는입니다. 세포내 알파 synuclein 포함은 국제화에 의해 주 뉴런에 시드는 고 세의 전파 관리 네이티브 microsomes 관련 알파 synuclein 집계 병 알파 synuclein 유전자 변형 쥐에서 분리.

소 대형의 강력한 셀 모델로 기본 신경 하 Microsomes 관련 알파 synuclein 집계의 외 인 관리

여기서, 우리는 중추 신경계에서 효과적인 유전자 침묵이 가능하게 하는 뇌 표적화 펩티드-siRNA 제제의 비강 내 투여를 위한 마우스의 적절한 배치를 가능하게 하는 마우스 포지셔닝 장치를 이용한 프로토콜을 제시한다.

중추 신경계에 비강 siRNA 전달 하는 동안 마우스의 배치에 대 한 위치 장치

이 기사의 목표는 단량체 성 알파-sy뉴 클레 인, 후속 품질 관리 및 생체 내에서 미리 형성 된 섬유 소의 사용 으로부터 피 브 릴의 생성에 필요한 단계를 간략하게 설명 하는 것입니다.

모노 머 로부터 미리 형성 된 섬유 소의 알파-시 뉴 클레 인 생성 및 생체 내 사용

이 프로토콜은 Rayleigh 분해를 비바이러스성 mRNA 벡터의 에어로졸라이징을 위한 가벼운 과정으로 제시합니다. 에어로졸화된 mRNA 벡터의 지역적 침착은 앨버타 이상화된 비강 입구(AINI) 모델로 평가됩니다. 인간 폐세포 내 녹색 형광 단백질(GFP) 발현은 에어로졸화 후 mRNA 벡터의 물리화학적 및 생물학적 기능 유지를 나타냅니다.

레이리 분해 에어로졸을 통한 mRNA 폴리플렉스의 비강 전달: 비강 증착 및 기능 검사를 위한 시험 관 내 방법

학습하세요 α-synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법으로 파킨슨병에서 후각 상피에서 후각 구로의 병리 전파를 연구하는 방법을 마우스 모델을 통해 확인하세요.

α-Synuclein 응집체의 비강 내 투여 기법

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