Name: DNA 손상 부위의 단백질을 국소화하기 위한 Proximity Ligand Assay (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-02T14:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 배우세요 DNA 손상 부위에서 단백질 상호작용을 검출하는 근접 리간드 분석법을 U2OS 세포주와 Gamma-H2AX 염색을 활용하여. 이 방법은 유전체 안정성 연구와 치료 표적 발굴에 중요한 정보를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>DNA 손상에서 단백질 상호 작용 및 국소화 평가

<ol><li>Xiao, W., Samson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evidence+for+endogenous+DNA+alkylation+damage+as+a+source+of+spontaneous+mutation+in+eukaryotic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo evidence for endogenous DNA alkylation damage as a source of spontaneous mutation in eukaryotic cells.</a> Proc Nat Acad Sci U S A. 90 (6), 2117-2121 (1993).</li>
<li>Lindahl, T., Barnes, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+endogenous+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Symp+Quant+Biol%22%5BJournal%5D)">Repair of endogenous DNA damage.</a> Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 65, 127-134 (2000).</li>
<li>DNA damage, aging, and cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22N+Engl+J+Med%22">N Engl J Med</a>. Hoeijmakers Jan, H. J. 361 (15), 1475-1485 (2009).</li>
<li>Giglia-Mari, G., Zotter, A., Vermeulen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+damage+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">DNA damage response.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 3 (1), a000745(2011).</li>
<li>Ciccia, A., Elledge, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA+damage+response%3A+Making+it+safe+to+play+with+knives%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">The DNA damage response: Making it safe to play with knives.</a> Mol Cell. 40 (2), 179-204 (2010).</li>
<li>Chatterjee, N., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+DNA+damage%2C+repair+and+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22EnvironMol+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of DNA damage, repair and mutagenesis.</a> EnvironMol Mutagen. 58 (5), 235-263 (2017).</li>
<li>Mah, L. J., El-Osta, A., Karagiannis, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GammaH2AX%3A+a+sensitive+molecular+marker+of+DNA+damage+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">GammaH2AX: a sensitive molecular marker of DNA damage and repair.</a> Leukemia. 24 (4), 679-686 (2010).</li>
<li>Paull, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+histone+H2AX+in+recruitment+of+repair+factors+to+nuclear+foci+after+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A critical role for histone H2AX in recruitment of repair factors to nuclear foci after DNA damage.</a> Curr Biol. 10 (15), 886-895 (2000).</li>
<li>Nakamura, A. J., Rao, V. A., Pommier, Y., Bonner, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complexity+of+phosphorylated+H2AX+foci+formation+and+DNA+repair+assembly+at+DNA+double-strand+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+cycle+%28Georgetown%2C+Tex%29%22%5BJournal%5D)">The complexity of phosphorylated H2AX foci formation and DNA repair assembly at DNA double-strand breaks.</a> Cell cycle (Georgetown, Tex). 9 (2), 389-397 (2010).</li>
<li>Karchugina, S., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+heterodimerization+of+protein+isoforms+using+an+in+situ+proximity+ligation+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Detection of heterodimerization of protein isoforms using an in situ proximity ligation assay.</a> J Vis Exp. (140), (2018).</li>
<li>Tubbs, E., Rieusset, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+endoplasmic+reticulum+and+mitochondria+interactions+by+in+situ+proximity+ligation+assay+in+fixed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Study of endoplasmic reticulum and mitochondria interactions by in situ proximity ligation assay in fixed cells.</a> J Vis Exp. (118), (2016).</li>
<li>Nguyen, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nek4+regulates+entry+into+replicative+senescence+and+the+response+to+DNA+damage+in+human+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+CellBiol%22%5BJournal%5D)">Nek4 regulates entry into replicative senescence and the response to DNA damage in human fibroblasts.</a> Mol CellBiol. 32 (19), 3963-3977 (2012).</li>
<li>Basei, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+interaction+partners+for+Nek4.1+and+Nek4.2+isoforms%3A+from+the+DNA+damage+response+to+RNA+splicing%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Sci%22%5BJournal%5D)">New interaction partners for Nek4.1 and Nek4.2 isoforms: from the DNA damage response to RNA splicing.</a> Proteome Sci. 13 (1), 11(2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Animal+Cell+Culture+Guide%22">Animal Cell Culture Guide</a>. , https://www.atcc.org/resources/culture-guides/animal-cell-culture-guide (2024).</li>
<li>Soubeyrand, S., Pope, L., Haché, R. J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topoisomerase+II%CE%B1-dependent+induction+of+a+persistent+DNA+damage+response+in+response+to+transient+etoposide+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22MolOncol%22%5BJournal%5D)">Topoisomerase IIα-dependent induction of a persistent DNA damage response in response to transient etoposide exposure.</a> MolOncol. 4 (1), 38-51 (2010).</li>
<li>Wei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Etoposide-induced+DNA+damage+affects+multiple+cellular+pathways+in+addition+to+DNA+damage+response%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Etoposide-induced DNA damage affects multiple cellular pathways in addition to DNA damage response.</a> Oncotarget. 9 (35), 24122-24139 (2018).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Melo-Hanchuk, T. D., Slepicka, P. F., Pelegrini, A. L., Menck, C. F. M., Kobarg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NEK5+interacts+with+topoisomerase+II%CE%B2+and+is+involved+in+the+DNA+damage+response+induced+by+etoposide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">NEK5 interacts with topoisomerase IIβ and is involved in the DNA damage response induced by etoposide.</a> J Cell Biochem. 120 (10), 16853-16866 (2019).</li>
<li>George, J., Mittal, S., Kadamberi, I. P., Pradeep, S., Chaluvally-Raghavan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+proximity+ligation+assay+%28PLA%29+for+detection+of+RNA-protein+complex+interactions+in+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Optimized proximity ligation assay (PLA) for detection of RNA-protein complex interactions in cell lines.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101340(2022).</li>
<li>Zhang, W., Xie, M., Shu, M. D., Steitz, J. A., DiMaio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+proximity-dependent+assay+for+specific+RNA-protein+interactions+in+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">A proximity-dependent assay for specific RNA-protein interactions in intact cells.</a> RNA. 22 (11), 1785-1792 (2016).</li>
<li>Hegazy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+ligation+assay+for+detecting+protein-protein+interactions+and+protein+modifications+in+cells+and+tissues+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Proximity ligation assay for detecting protein-protein interactions and protein modifications in cells and tissues in situ.</a> Curr Protoc Cell Biol. 89 (1), e115(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>검은색 384웰 플레이트</td><td>Perkin Elmer 세포 캐리어 플레이트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>동키&nbsp; 안티 래빗 Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>1:300</td></tr><tr><td>듀오 링크 당나귀 안티 마우스 마이너스</td><td>시그마</td><td>DUO92004</td><td></td></tr><tr><td>듀올링크 항체 희석제</td><td>시그마</td><td>DUO82008</td><td></td></tr><tr><td>듀올링크 차단 솔루션 1X</td><td>시그마</td><td>DUO82007</td><td></td></tr><tr><td>Duolink 검출 시약 원적DUO92013</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Duolink 당나귀 안티 염소 플러스</td><td>시그마</td><td>DUO92003</td><td></td></tr><tr><td>듀올링크 당나귀 안티 토끼 플러스</td><td>시그마</td><td>DUO92002</td><td></td></tr><tr><td>에토포사이드</td><td>시그마</td><td>E1383</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 Nek4</td><td>산타크루즈 생명공학</td><td>SC-5517</td><td>염소 안티 Nek4를 1:50 희석으로 사용했습니다</td></tr>.<tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo</td><td>H1399</td><td>0.6 &마이크로; g/mL</td></tr><tr><td>Leica DMI 현미경</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마우스 안티 Ku70</td><td>Thermo</td><td>MA5-13110</td><td>마우스 안티 Ku70은 1:100 희석</td></tr><tr><td>마우스 안티 TOPII&beta</td>에서 사용되었습니다.<td>산타크루즈 생명공학</td><td>SC-365071</td><td>1:25</td></tr><tr><td>토끼 안티 Nek5</td><td>산타크루즈 생명공학</td><td>SC-84527</td><td>1:25</td></tr><tr><td>토끼 안티 Y H2AX</td><td>세포 신호</td><td>9718S</td><td>1:100 희석</td></tr><tr><td>U2OS 세포주</td><td>ATCC</td><td>HTB-96&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

dna 손상 부위의 단백질을 국소화하기 위한 proximity ligand assay

Proximity Ligand Assay to Localize Proteins in DNA Damage Sites

우리는 etoposide 처리가없는 상태에서 Nek4-Ku70 상호 작용을 관찰했습니다. 그러나 이러한 상호 작용은 핵 외부에서 발생할 수 있습니다(그림 1A). Nek4-Ku70 상호 작용은 DNA 손상 후 증가하며 핵에 집중됩니다(그림 1A). 문헌 결과18에 근거한 양성 대조군으로 이 분석에서 사용된 Nek5-Topoisomerase II β(TOPIIβ) 상호 작용의 경우, 상호 작용은 에토포시드 처리에 의해 크게 증가합니다(그림 1B).
에토포시드 처리는 거의 40%의 증가를 촉진합니다(차량 처리된 세포에서는 평균 9개의 점/핵, 에토포시드 처리된 세포에서는 12 - 14개의 점/핵). Nek4와 Ku70의 상호 작용은 DNA 손상 조건에만 국한되지 않습니다. 실제로, 응우옌(Nguyen) 등[12 ]은 이러한 단백질이 세포의 손상이 없을 때도 상호작용할 수 있고, DNA에 의존하지 않는다는 것을 보여주었는데, 이는 상호작용이 항상 DNA 손상 부위에서 일어나는 것은 아니라는 것을 의미한다.
γ-H2AX 염색은 대조군 조건에서는 나타나지 않지만 에토포시드 처리 20분 후에 증가하고 처리 3시간까지 지속됩니다(그림 1C). 일부 상호 작용 점은 γ-H2AX 염색에 가깝습니다(그림 1C). 처리 1시간 후 대부분의 Nek4-Ku70 상호 작용 점은 DNA 손상 병소에 집중됩니다(그림 1C).
Nek4의 녹다운은 약 70%(데이터가 표시되지 않음)이며, 이는 신호가 완전히 제거되지 않음을 의미합니다. 우리는 점/핵 수의 차이가 단백질 고갈과 동일하지 않다고 믿는데, 그 이유는 회상 단백질이 DNA 손상 반응에 전념한 다음 Ku70과 상호 작용하기 때문입니다. 에토포사이드로 3시간 동안 처리된 Nek4 knockdown 세포에서 발견되는 점/핵의 평균은 10이며, 이는 동일한 조건의 대조군 PLKO 세포에 비해 약 30% 감소를 의미합니다. etoposide가 차량 처리 세포와 관련하여 Nek4-Ku 상호 작용을 40% 증가시키고 Nek4 knockdown의 70%를 가지고 있다고 가정하면 knockdown 세포는 약 10개의 점/핵을 존재하게 됩니다. Nek4와 Ku70의 상호 작용은 DNA 손상 반응에만 국한되지 않으며, DNA 손상 후 증가하지만 주요 변화는 상호 작용의 국소화에 있습니다.
여기에 표시된 결과는 DNA 손상 반응의 맥락에서 단백질의 상호 작용을 국소화하는 중요한 도구를 제시합니다. Nek4 및 Ku70은 이미 DDR에 연루되어 있으며, Nek4는 Ku70/Ku80이 DNA 손상 중소12에 모집하는 데 중요한 것으로 보입니다. 그러나 이러한 상호 작용의 공간적 및 시간적 특성은 γ-H2AX 염색과 함께 PLA를 사용하여 탐색할 수 있습니다.
co-immunoprecipitation 및 immunofluorescence와 같은 다른 기술도 유사한 정보를 제공할 수 있지만 별도로 제공할 수 있습니다. γ-H2AX 마커를 참조로 사용하면 상호 작용의 시간적, 공간적 모니터링이 가능합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67072/67072fig01v4.jpg"> 그림 1: DNA 손상 조건에서의 Nek4 - Ku70 상호 작용. (A) U2OS 세포는 에토포사이드(25μM)로 20분, 1시간 및 3시간 동안 배양하고, DMSO(3시간 동안 0.05%)를 매개체로 사용했습니다. 처리 후, 세포를 얼음처럼 차가운 메탄올로 고정하고, 염소 anti-Nek4 및 mouse anti-Ku70을 1차 항체로 사용하여 PLA를 수행하였다. 핵은 Hoechst 33342로 염색되었으며 파란색으로 표시됩니다. PLA 점은 빨간색으로 표시됩니다. 대조 세포는 1시간 동안 에토포사이드로 처리된 세포였으며 하나의 1차 항체(goat anti-Nek4)와 두 개의 2차 항체로만 배양했습니다. 생물학적 대조군은 Etoposide로 3시간 동안 처리된 Nek4 knockdown 세포(shRNA Nek4)였습니다. (B) 문헌 결과에 근거한 분석의 양성 대조군: U2OS 세포를 25μM의 에토포사이드로 1시간 동안 배양하고 PLA를 마우스 항-Nek5 및 토끼 항-TOPIIβ로 수행했습니다. 그래프는 하나의 실험을 대표하며 최소 4개의 서로 다른 필드(대조군의 경우 최소 35개 셀, 기타 모든 조건의 경우 최소 50개 셀)로 구성된 모든 셀의 평균 및 표준 오차 평균(SEM)을 나타냅니다. 유의성은 t-검정 및 *: p&lt;0.05, **p&lt;0,01 및 *** p&lt;0,001을 사용하여 DMSO 차량에 비해 구했습니다. (C) PLA 후, (A)에 제시된 세포를 PBS로 세척하고 토끼 항-γ-H2AX 항체로 배양하였다. 배양 1시간 후, 토끼에 대한 2차 항체를 DNA 손상 병소 검출에 사용하였으며 녹색으로 표시하였다. PLA 및 γ-H2AX의 동시 염색을 포함하는 영역이 확대됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67072/67072fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 1: 폴더 구조. Nucleus와 PLA의 이미지는 다음과 같이 서로 다른 폴더에 배치해야 합니다. 파일 이름은 특정 접두사(예: DAPI, PLA)로 시작해야 하며 각 폴더에 해당 이미지(예: DAPI_control1.tif 및 PLA_control1.tif)가 있어야 합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67072/Supplementary%20figure%201_RE.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 2: 매크로 매개변수 창. ImageJ/FIJI에서 매크로를 열거나 실행한 후 데이터 폴더를 선택하고 매개변수를 입력하라는 메시지가 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67072/Supplementary%20figure%202_RE.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 코딩 파일 1: ImageJ용으로 생성된 매크로 파일입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67072/pla_dots_per_nucleus_basei_et_al_2024.zip" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

DNA 손상 부위의 단백질을 국소화하기 위한 Proximity Ligand Assay

The DNA damage response is a genetic information safeguard that protects cells from perpetuating damaged DNA. The characterization of the proteins that ...

proximity-ligand-assay-to-localize-proteins-in-dna-damage-sites

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 선충 세포에서 현장 단백질-단백질 상호 작용을 연구하기 위한 근접 결찰 분석에 대해 설명합니다. 관심 단백질의 근접성은 2차 항체에 부착된 PLA 프로브의 도움으로 원형 DNA 템플릿을 생성합니다. 프로브는 긴 단일 가닥 DNA를 생성한 후 검출기 프로브의 혼성화를 생성하는 증폭 용액을 사용하여 추가로 증폭되어 세포 내 단백질-단백질 상호 작용의 국소화를 가능하게 합니다.

In Situ 단백질-단백질 상호 작용을 연구하기 위한 근접 결찰 분석(Proximity Ligation Assay)

레이저는 자주 DNA 손상에 대한 세포 반응의 연구에 사용된다. 그러나, 이들은 그 공간, 주파수 및 복제 충돌 포크 거의없는 것을 특징으로 병변을 생성한다. 여기서, 우리는 레이저의 국소 interstrand 가교 이러한 매개 변수의 결정을 가능하게하는 방법을 설명한다.

레이저 지역화 소라렌 부가 물의 단일 분자 분석

여기에서는 유전 독성 스트레스에 노출 된 현탁 세포 배양 물에서 ATM과 p53 사이의 직접적인 단백질 - 단백질 상호 작용을 검출하고 시각화하기 위해 현장에서의 근접 연결 분석 (PLA)이 어떻게 사용될 수 있는지 보여줍니다.

Proximity Ligation Assay를 이용한 현탁 세포 배양에서의 DNA 손상 유발 단백질 복합체의 검출 및 가시화

레이저 microirradiation는 살아있는 세포에서 DNA 수리의 연구에 대 한 유용한 도구입니다. 다양 한 DNA 병 변 유발 하 UVA 레이저의 사용에 대 한 방법론 접근 표시 됩니다. 우리 지역 microirradiation; 정상적인 세포 주기를 유지 하는 방법을 최적화합니다 따라서, 비친된 세포 유사 분열을 통해 진행합니다.

고급 단백질 단백질 상호 작용 및 DNA 병 변에서 속도 론 연구에 Confocal 현미경 검사 법 기술

DNA 손상 복구 속도 론을 공부 하 고 정의 된 하위 핵 지역에서 병 변 유발 하는 시스템이 필요 합니다. 레이저 검사 confocal 현미경 405 nm 레이저 장비를 사용 하 여 지역화 된 이중 가닥 나누기를 만들고 이러한 병 변에서 수리 요인의 역학을 계량 하는 자동화 된 절차를 제공 하는 방법을 설명 합니다.

단백질 DNA 장애 405 Nm 레이저 마이크로 방사선 조사를 사용 하 여 채용의 조사

이 프로토콜의 목표는 플라스 미드 DNA에 정의 된 DNA-단백질 crosslinks의 수리 계량. Lesioned 플라스 미드는 받는 사람 포유류 세포 선 및 여러 시간 포인트 후 transfection에 수확 하는 저 분자 무게에 페. DNA 복구 속도 스트랜드 특정 뇌관 연장 정량 뒤를 사용 하 여 정량.

간단 하 고 빠른, 양적 분석 결과에 플라스 미드 DNA-단백질 Crosslinks의 측정 수리에 포유류 세포로 페

DNA 손상에 따라 인간 세포는 게놈의 무결성을 회복하기 위해 필수적인 수리 경로를 활성화합니다. 여기서, 우리는 DNA 복구 단백질을 검출하고, 그들의 공간 및 측두모집을 분석하고, DNA 손상의 사이트에서 단백질 단백질 상호 작용을 심문하는 것을 돕는 수단으로 간접적인 면역 형광의 방법을 기술합니다.

면역형광에 의한 DNA 수리 단백질 상호작용의 시각화

DNA 부가물과의 복제 포크 충돌은 이중 가닥 절단을 유발할 수 있지만 리플리솜과 차단 병변 사이의 상호 작용에 대해서는 알려진 바가 적습니다. 우리는 이러한 만남을 시각화하고 반응 구성에 대한 결과를 특성화하기 위해 근접 결찰 분석을 사용했습니다.

항원 태그가 붙은 차단 병변을 사용한 반응체 만남의 시각화

여기에서는 리가아제(ligase), 뉴클레아제(nuclease) 및 중합효소(polymerase enzymes)의 예를 사용하여 핵산 대사 효소를 분석하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 분석은 RNA 및/또는 DNA 손상 또는 경로 중간체를 모방하는 듀플렉스를 형성하기 위해 결합할 수 있는 형광 표지 및 표지되지 않은 올리고뉴클레오티드를 사용하여 효소 행동의 특성을 분석할 수 있습니다.

핵산-대사 효소를 분석하기 위해 변형된 합성 올리고뉴클레오티드를 사용

우리는 ATP - 문이 P2X2 수용체의 전체 길이 C 터미 너스에 바인딩 뇌 단백질을 식별하는 간단한 프로토콜을 설명합니다. 모든 P2X 수용체에 대한 확장 및이 방법의 체계적인 응용 프로그램은 P2X 수용체 신호의 더 나은 이해로 이어질 것으로 예상된다.

P2X2 리간드 - 게이 티드 양이온 채널과 상호 작용하는 단백질을 확인하는 Proteomics

배우세요 DNA 손상 부위에서 단백질 상호작용을 검출하는 근접 리간드 분석법을 U2OS 세포주와 Gamma-H2AX 염색을 활용하여. 이 방법은 유전체 안정성 연구와 치료 표적 발굴에 중요한 정보를 제공합니다.

DNA 손상 부위의 단백질을 국소화하기 위한 Proximity Ligand Assay

더 많은 동영상 탐색