얇은 자궁내막의 마우스 모델 구축

얇은 자궁내막은 불임의 중요한 원인으로 널리 알려져 있습니다. 얇은 자궁내막의 발병 기전에 대한 연구는 동물 모델에 의존하기 때문에 적절한 모델을 선택하는 것이 중요합니다. 여기에서는 마우스에서 신뢰할 수 있고 재현 가능한 얇은 자궁내막 모델을 생성하는 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

이 수술은 쥐를 해부하고 쥐의 자궁 뿔을 노출시켜 조작해야 하기 때문에 충격적입니다. 부적절한 작동은 감염을 일으키거나 쥐를 죽일 수도 있습니다. 실제로, 실험 작업을 수행하기 전에 신중한 훈련과 경험이 필요합니다.

우리는 임상 사례에서 관찰되는 다양한 정도의 얇은 자궁내막 증상을 재현하기 위해 주입 시간이 1분에서 3분에 이르는 자궁내막 모델을 성공적으로 개발했습니다. 이를 통해 연구의 특정 요구 사항에 따라 다양한 수준의 손상을 가진 모델을 만들 수 있습니다. 당사 프로토콜에 사용된 방법은 저렴한 비용, 적합성 및 실험 기간의 이점을 제공합니다.

병리학적 메커니즘과 치료법을 다른 기술과 비교하여 세 가지 초기 연구합니다. 먼저 마취된 마우스를 예열된 수술대에 누운 자세로 놓고 의료용 테이프를 사용하여 마우스의 팔다리를 고정합니다. 멸균 가위와 집게를 사용하여 요도 구멍에서 약 1cm 떨어진 복부를 1cm 절개하여 복막강까지 연장합니다.

멸균 집게로 내장을 부드럽게 옆으로 움직여 자궁의 위치를 파악합니다. 오른쪽 자궁 뿔을 노출시키고 자궁 경부 근처의 근위부와 난소 근처의 원위부에 지혈 클램프를 적용합니다. 25게이지 주사기로 약 50마이크로리터의 95% 에탄올을 자궁강에 주입하고 바늘을 자궁 뿔과 평행하게 유지합니다.

주사기를 적절하게 1분에서 5분 동안 유지하십시오. 그런 다음 자궁강에서 에탄올을 빼내고 멸균 식염수로 자궁강을 5회 세척하여 남아 있는 에탄올을 제거합니다. 이제 지혈 클램프를 제거하고 자궁과 내장을 원래 위치로 되돌립니다.

5/0 흡수성 수술 봉합사를 사용하여 복막을 봉합한 다음 표피를 봉합합니다. 먼저 안락사된 얇은 자궁내막 마우스 모델을 해부 테이블에 놓고 수술용 가위로 봉합사를 잘라 자궁을 노출시킵니다. 그런 다음 수술용 겸자를 사용하여 자궁 전체를 조심스럽게 추출하고 자궁을 주변 내장에서 분리합니다.

즉시 양쪽 자궁 뿔을 제거하고 각 뿔을 3-4개의 작은 부분으로 나눕니다. 1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브에 4%파라포름알데히드 1ml에 자궁 조직을 넣습니다. 포르말린으로 고정된 샘플을 조직 카세트에 넣고 조직 카세트를 일련의 에탄올 농도를 통해 전달한 다음 자일렌과 파라핀을 투입합니다.

섭씨 55도로 가열된 용융 파라핀 왁스로 왁스 틀을 채웁니다. 가열된 집게를 사용하여 임베딩 카세트에서 침투된 조직 세그먼트를 왁스 몰드로 빠르게 옮깁니다. 조직 세그먼트가 적절하게 배치되면 임베딩 카세트의 바닥을 조직학 주형 위에 놓습니다.

다음으로, 파라핀이 응고되도록 최소 20분 동안 섭씨 4도로 설정된 냉각판에 금형을 직접 놓습니다. 그런 다음 금형에서 샘플을 제거하고 파라핀 트리머를 사용하여 주변의 과도한 왁스를 다듬습니다. 자궁내막의 두께와 자궁내막샘의 수는 대조군에 비해 1분, 2분, 3분 그룹에서 유의하게 감소했다.

4분 및 5분 그룹에서 심각한 자궁 유착과 거의 보이지 않는 자궁강이 관찰되었으며, 자궁내막샘은 발견되지 않았다. 자궁내막 섬유증은 에탄올 주입 기간에 따라 증가했는데, 이는 대조군에 비해 1-5분 그룹에서 과도한 염색이 나타나는 것으로 나타났다.