Name: 쥐 당뇨병성 심근병증 모델의 모델링 및 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: 학습하세요 고지방식이와 스트렙토조토신 주사를 병용하여 쥐에서 당뇨병성 심근병증을 유도하는 비용 효율적인 방법을. 이 프로토콜은 심장 기능 저하와 심근세포 구조 변화를 유발하여 질병 기전 연구와 임상 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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모든 절차는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)에서 제시한 실험 동물의 관리 및 사용 가이드(NIH 간행물 번호 85-23, 1996년 개정)에 따라 동물 연구에 대한 제도적 지침을 따랐습니다. 모든 동물 실험은 쓰촨 대학교 동물 관리 윤리 위원회와 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 수컷 C57BL/6J 마우스는 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co.(중국)에서 구입했습니다. 실험 기간 동안 생쥐는 24°C의 통제된 조건과 12시간의 규정된 명암 주기에서 사육되었으며 음식과 물에 대한 자유로움을 얻었습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67189/67189fig01.jpg"> 
그림 1: 개략적 실험 타임라인. HFD/STZ 및 ND 그룹에 사용된 마우스는 모두 약 7-8주령이었습니다. 각 마우스의 체중과 무작위 혈당 수치를 매주 기록했습니다. 12주 및 24주 섭식 간격에서 마우스의 대사 표현형은 경구 포도당 내성 검사(OGTT) 및 혈청 인슐린 수치 측정으로 평가되었습니다. 또한 심장초음파검사는 기준선(0주), 12주 및 24주에서 평가되었습니다. 24주간의 먹이 기간이 지난 후, 생쥐는 안락사되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67189/67189fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
1. HFD 먹이기
<ol>
	<li>수컷 C57BL/6J 마우스(7-8주령)에게 24주 동안 일반 식단(ND) 또는 HFD(60% kcal 지방)를 먹이십시오.</li>
	<li>4주마다 각 마우스의 체중을 기록합니다. 체중 곡선이 12주 이전에 유사한 상향 패턴을 보이는지 확인하고 HFD 그룹에서 더 가파른 경사가 관찰되는지 확인합니다.</li>
</ol>
2. STZ 용액 준비 및 주입
알림: STZ는 실온(RT)에서 높은 불안정성으로 인한 성능 저하를 방지하기 위해 -20°C에서 보관하십시오. 주입 5분 이내에 STZ와 구연산염 완충액을 즉시 혼합하십시오.
<ol>
	<li>구연산염 완충액을 준비합니다. 구연산 2.1g(상대 분자량: 210.14)의 무게를 달고 증류수 100mL에 완전히 용해시켜 용액 A를 준비합니다. 2.94g의 구연산나트륨 (상대 분자량 : 294.10)의 무게를 측정하고 증류수 100mL에 완전히 용해시켜 용액 B를 제조합니다.용액 A와 B를 1 : 1.32 비율로 혼합하여 구연산 작동 용액을 얻는다. 0.45μm 필터 멤브레인을 사용하여 불순물을 걸러냅니다.</li>
	<li>STZ 1g의 무게를 측정하고 준비된 혼합 구연산 작업 용액 100mL에 완전히 용해시킵니다. 생성된 STZ 용액을 4°C에서 보관합니다. 가능할 때마다 STZ 용액의 주입이 30분 이내에 발생하는지 확인하십시오.</li>
	<li>1mL 주사기를 사용하여 HFD/STZ 그룹의 마우스에게 7일 연속으로 30mg/kg의 STZ가 포함된 용액을 복강내 주사하는 동시에 ND 그룹의 마우스에는 동일한 양의 구연산염 완충액(0.1mmol/L, pH = 4.5)을 제공합니다.</li>
	<li>최종 주사 후 1주일 후 혈당 수치를 분석합니다. 16.7mmol/L를 초과하는 무작위 혈당 농도를 보이는 마우스를 T2DM 마우스로 분류합니다.<ol>
		<li>마우스를 고정 장치에 조심스럽게 놓고 꼬리가 완전히 바깥쪽으로 뻗어 있도록 합니다.</li>
		<li>채혈하기 전에 꼬리의 채혈 부위를 70% 알코올 면봉으로 철저히 소독하여 살균과 청결을 유지하십시오.</li>
		<li>끝이 뾰족한 바늘로 꼬리 정맥에 삽입하여 끝에서 바닥으로 3-4mm 깊이로 전진합니다. 바늘이 제자리에 단단히 고정되면 꼬리 윗부분을 부드럽게 짜서 혈류를 촉진합니다.</li>
		<li>마우스에서 약 10μL의 혈액을 채취하고 수집된 혈액을 전용 테스트 스트립에 조심스럽게 바릅니다. 혈액이 흡수되면 혈당 측정기는 즉시 혈당 판독값을 표시합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 경구용 포도당 내성 검사(OGTT)14
<ol>
	<li>OGTT 이전에는 각 마우스가 물에 제한 없이 접근할 수 있는 동안 14시간 동안 밤새 금식합니다.</li>
	<li>약 10mL의 20% 포도당 용액을 준비합니다. OGTT 동안 각 마우스에 구강 배당을 통해 1g/kg 포도당을 투여합니다.</li>
	<li>투여 즉시 (0 분), 15 분, 30 분, 60 분 및 투여 후 120 분의 여러 시점에서 혈당 수치를 모니터링합니다.</li>
</ol>
4. 심장 기능의 심장 초음파 평가
<ol>
	<li>HFD 또는 ND를 수유한 후 기준선(0주), 12주 및 24주에 각 마우스에 대해 심장초음파를 실시합니다.</li>
	<li>심장초음파검사를 하기 전에 마취기를 사용하여 100% 산소가 투여되는 3% 이소플루란을 흡입하여 마우스를 마취합니다. 마우스가 톱니 핀셋을 사용하여 피부를 꼬집거나 발가락과 꼬리를 자극하는 데 반응을 보이지 않는지 확인합니다. 마취 중 건조를 방지하기 위해 눈에 동물용 연고를 바르십시오.</li>
	<li>체온을 유지하기 위해 마우스를 가열 패드에 놓고 발톱을 전극에 고정하여 안정적인 누운 자세를 보장합니다. 목표 심박수를 분당 약 450회씩 유지하기 위해 유지 마취를 위해 이소플루란 농도를 1%-2% 사이로 조정합니다.</li>
	<li>제모 크림을 사용하여 쥐의 털을 제거하고 가슴에 초음파 젤을 바릅니다. 심장초음파검사 후 멸균 식염수가 함유된 제모 크림과 초음파 젤을 제거합니다.</li>
	<li>50MHz 프로브로 심장 기능 및 구조적 매개변수를 평가합니다.<ol>
		<li>최적의 좌심실(LV) 장축 view, 프로브를 동물의 가슴 왼쪽에 배치하십시오.</li>
		<li>개별 해부학적 구조에 따라 노치가 오른쪽 어깨를 향하도록 하여 왼쪽 흉골 선을 기준으로 15°에서 45° 사이에서 프로브를 시계 반대 방향으로 회전합니다. B 모드15에서 x축과 y축을 조정합니다. 참고: 적절한 LV 장축 보기에는 (i) 대동맥 판막과 대동맥근; (ii) LV 챔버가 뷰의 중앙에 위치하는 경우; (iii) 베이스-에이펙스 축은 트랜스듀서(16)와 평행해야 합니다.</li>
		<li>M 모드 2x를 눌러 측정 라인을 표시합니다. 이 선을 유두 근육 수준에 위치시킵니다. 그런 다음 정확성을 보장하기 위해 최소 3개의 연속 심장 박동을 측정합니다. Save Clip 을 눌러 시리즈의 시네 루프를 저장합니다.</li>
		<li>수축기 말 차원을 ECG T파와 일치하는 위상으로 확인하고, 이완기 말 차원을 ECG R파에 해당하는 위상으로 결정합니다.</li>
		<li>작동 패드를 기울여 왼쪽 상단 모서리가 가장 낮고 오른쪽 하단 모서리가 가장 높은지 확인합니다. 심장의 장축과 평행하게 마우스의 심장 정점 방향을 따라 관통하도록 프로브를 조정하여 경정점 4챔버 view.</li>
		<li>C(컬러 도플러) 및 PW(PW 도플러) 모드를 연속적으로 선택하고, 샘플 볼륨을 가장 높은 속도 지점에 배치하고, 혈류 방향과 일치하도록 샘플링 방향을 조정하고, 승모판 혈역학 정보(E 및 A파)를 기록합니다16. Save Clip을 눌러 시리즈의 시네 루프를 저장합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>쥐가 의식을 되찾을 수 있도록 이소플루란 흡입을 중지합니다. 동물을 0주와 12주 표시에서 12시간 명/암 주기로 통제된 환경에 수용된 우리로 되돌립니다. 24주 심초음파 평가 후, 이소플루란 흡입 후 경추 탈구를 통해 생쥐를 인도적으로 안락사시킵니다.</li>
	<li>워크스테이션 동글을 사용하여 박출률(EF), 분획 단축(FS), 좌심실 후벽(LVPW), 좌심실 내경(LVID), 심실 중격(IVS) 및 E/A 비율을 분석합니다.</li>
</ol>
5. 조직학적 염색
<ol>
	<li>24주 표시에서 심초음파 분석을 완료한 후 이소플루란 흡입 후 척수 탈구로 마우스를 안락사시킵니다.</li>
	<li>안과 가위와 핀셋을 사용하여 마우스를 해부합니다. 심장이 완전히 노출되도록 갈비뼈를 조심스럽게 절단하십시오.</li>
	<li>간이 창백해질 때까지 식염수로 정점을 통해 심장을 관류하면 성공적인 관류를 나타냅니다. 심장을 제거하고 식염수로 철저히 헹구어 혈액을 완전히 제거하십시오.</li>
	<li>파라핀 임베딩수행 17.<ol>
		<li>최소 24시간 동안 RT에서 4% 포르말린으로 심장을 고정합니다.</li>
		<li>심장이 들어있는 탈수 상자를 탈수기에 넣고 65 ° C에서 그라디언트 알코올과 왁스 침출을 포함한 점진적인 탈수 과정을 거칩니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>조직 절편을 준비합니다17.<ol>
		<li>유두근이 포함된 트리밍된 왁스 블록을 4μm 두께로 슬라이스하기 위해 마이크로톰에 넣고 병리학적 염색을 위해 RT에 보관합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Masson의 trichrome18 및 밀 배아 응집소(WGA)19 염색을 사용하여 염색을 수행합니다.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>고지방 다이어트와 STZ 주사를 통한 당뇨병성 심근병증에 대한 쥐 모델

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</ol>

<table><tbody><tr><td>동물 종양 측정 시스템</td><td>Fujifilm Visual Sonics</td><td>VEVO 3100</td><td>심초음파 검사</td></tr><tr><td>혈당계</td><td>Yuwell</td><td>GU100</td><td>혈당 수치 평가</td></tr><tr><td>구연산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD 생명 과학</td><td>R510-22</td><td>마취</td></tr><tr><td>Isoflurane 기화기</td><td>RWD 생명 과학</td><td>R500</td><td>마취</td></tr><tr><td>마우스 인슐린 (INS) ELISA 키트</td><td>Wuhan Feiyue Biotechnology Co., Ltd</td><td>FY-EM14029</td><td>혈청 인슐린 수치 평가</td></tr><tr><td>Nair 제모 크림</td><td>Nair</td><td>255g</td><td></td></tr><tr><td>60 % kcal 지방으로 쥐 설치류 다이어트</td>의 털 제거 <td>Research Diets Inc</td><td>D12492</td><td>고지방 다이어트 피드</td></tr><tr><td>구연산 나트륨</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>멸균 필터</td><td>Merck Millipore</td><td>SLHV033N</td><td></td></tr><tr><td>Streptozocin</td><td>Solarbio</td><td>S8050</td><td></td></tr><tr><td>초음파 젤</td><td>Keppler</td><td>KL-250</td><td>심초음파</td></tr><tr><td>워크스테이션 동글</td><td>Fujifilm Visual Sonics</td><td>Vevo LAB</td><td>심초음파 데이터 분석</td></tr></tbody></table>

쥐 당뇨병성 심근병증 모델의 모델링 및 평가

Modeling and Evaluation of Murine Diabetic Cardiomyopathy Model

이 연구는 마우스를 ND 그룹과 HFD/STZ 그룹의 두 그룹으로 무작위로 할당하는 것을 포함했으며, 각 그룹에는 6마리의 마우스가 있었습니다. 먹이를 먹은 지 24주 후에 최종 심장초음파검사와 OGTT 검사를 실시한 후, 생쥐는 조직학적 평가를 위해 심장 조직을 적출하기 위해 안락사되었습니다.
HFD/STZ는 명백한 체중 증가를 일으켜 12주 만에 최고조에 달했으며, ND 그룹에 비해 유의하게 높았습니다. STZ 투여 후, HFD/STZ 그룹의 마우스에서 체중의 현저한 감소가 관찰되었습니다. 대조적으로, ND 그룹의 마우스는 이후 12주 동안 체중이 꾸준히 증가했습니다(그림 2A). HFD/STZ 그룹의 무작위 혈당 수치는 전체 수유 시간 동안 ND 그룹보다 항상 유의하게 높았습니다(그림 2B). HFD/STZ 그룹의 OGTT 곡선은 ND 그룹보다 유의하게 높았습니다. 두...

The underlying pathophysiological mechanisms of diabetic cardiomyopathy (DbCM), a leading cause of mortality among patients with type 2 diabetes mellitus ...

modeling-and-evaluation-of-murine-diabetic-cardiomyopathy-model

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

설명된 것은 독소루비신의 장기 내류 주사를 통해 마우스에서 독소루비신 유도된 확장된 심근병증(DCM) 모델을 확립하는 프로토콜이다.

비보에서 확장 된 심근병증의 독소루비신 유도 뮤린 모델

본 프로토콜은 심부전의 마우스 모델에서 이완기 기능을 평가하는 데 유용한 도구 역할을 하는 경식도 페이싱을 통해 압력-부피 관계를 얻는 방법을 설명합니다.

쥐 심부전 모델에서 심박수 의존적 이완기 기능 평가를 위한 속도 제어 절차

이 프로토콜은 박출률(HFpEF)이 보존된 고지혈증 유발 심부전의 쥐 모델을 복제하기 위한 자세한 접근 방식을 제시합니다. 이 설계는 아데노 관련 바이러스 9-심장 트로포닌 T-저밀도 지단백질 수용체(AAV9-cTnT-LDLR)와 폴록사머-407(P-407)의 투여를 결합합니다.

박출률이 보존된 고지혈증 유발 심부전의 쥐 모델

여기에서는 당뇨병성 심근병증의 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜과 치료 중 마우스를 보다 부드럽게 고정할 수 있는 마우스의 전기침술을 사용하기 위한 마우스 전기침 고정 장치를 제시합니다.

마우스 전기 침술 고정 장치 제작 당뇨병성 심근병증 마우스 모델에서 전기 침술 전처리

윌리스 천공의 관내 서클 지주막 하 출혈의 표준화 된 마우스 모델을 설명한다. 선박 천공 및 지주막 하 출혈은 두개 내 압력 모니터링에 의해 모니터링된다. 또 각종 중요한 파라미터는 기록 및 생리적 조건을 유지하도록 제어된다.

지주막 하 출혈의 생쥐 모델

지방 유래 줄기 세포 (ASCs) 쉽게 격리 하 고 정상 쥐의 지방에서 수확. ASC 시트 셀 시트 엔지니어링을 사용 하 여 만들 수 있습니다 하 고 주 커 전체 두께 전시 하는 당뇨 지방 쥐 결함 노출 된 뼈와 피부와 다음 인공 피부의 bilayer 덮여에 이식 될 수 있다.

생성 및 당뇨병 치유 하는 부상을 모델에서 줄기 세포 지방이 많은 파생 (ASC) 시트의 이식

이 원고는 마모 입자 및 무 균 완화에 다양 한 세포 간의 상호 작용을 평가 하기 위한 이상적인 동물 모델을 구성 하는 CoCrMo 입자에 노출에 의해 calvarial osteolysis murine 모델을 설명 합니다.

건설 및 무 균 완화에 CoCrMo 입자에 노출에 의해 Calvarial Osteolysis Murine 모델의 평가

여기, 선물이 tachycardia 유발 심근 돼지에서 생산 하는 프로토콜. 이 모델은 진보적인 만성 심장 마비의 hemodynamics 및 적용 된 치료의 효과 공부 하는 강력한 방법을 나타냅니다.

돼지에서 만성 심장 마비 모델로 tachycardia 유발 심근

성인 zebrafish (Danio rerio)에서 독 소 루비 유발 심근 모델을 생성 하는 메서드는 여기에 설명 되어 있습니다. 복 주입의 2 개의 다른 방법을 제시 하 고 다른 실험적인 그룹 사이 변이 줄이기 위해 조건을 설명.

성인 제 브라에서 독 소 루비 유발 심근 모델

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

학습하세요 고지방식이와 스트렙토조토신 주사를 병용하여 쥐에서 당뇨병성 심근병증을 유도하는 비용 효율적인 방법을. 이 프로토콜은 심장 기능 저하와 심근세포 구조 변화를 유발하여 질병 기전 연구와 임상 치료 전략 개발에 활용됩니다.

쥐 당뇨병성 심근병증 모델의 모델링 및 평가

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