Name: 망막 혈관 구조에서 당뇨병 유발 부착 백혈구의 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: 학습하세요 당뇨병성 망막병증에서 백혈구 과잉 축적을 형광 현미경으로 정량화하는 방법을. 이 기술은 망막 혈관의 염증을 평가하고 치료 효과를 검증하는 데 활용됩니다.

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<ol><li>Swystun, L. L., Liaw, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+leukocytes+in+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The role of leukocytes in thrombosis.</a> Blood. 128 (6), 753-762 (2016).</li>
<li>Barouch, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrin-mediated+neutrophil+adhesion+and+retinal+leukostasis+in+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Integrin-mediated neutrophil adhesion and retinal leukostasis in diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 41 (5), 1153-1158 (2000).</li>
<li>Macaron, W., Sargsyan, Z., Short, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperleukocytosis+and+leukostasis+in+acute+and+chronic+leukemias%5BTitle%5D)+AND+%22Leuk+Lymphoma%22%5BJournal%5D)">Hyperleukocytosis and leukostasis in acute and chronic leukemias.</a> Leuk Lymphoma. 63 (8), 1780-1791 (2022).</li>
<li>Kempen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+diabetic+retinopathy+among+adults+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The prevalence of diabetic retinopathy among adults in the United States.</a> Arch Ophthalmol. 122 (4), 552-563 (2004).</li>
<li>Kohner, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Br Med Bull. 45 (1), 148-173 (1989).</li>
<li>Aouiss, A., Anka Idrissi, D., Kabine, M., Zaid, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+inflammatory+proliferative+retinopathy%3A+Ischemia%2C+hypoxia+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Res+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Update of inflammatory proliferative retinopathy: Ischemia, hypoxia and angiogenesis.</a> Curr Res Transl Med. 67 (2), 62-71 (2019).</li>
<li>Tsalamandris, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+inflammation+in+diabetes%3A+Current+concepts+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The role of inflammation in diabetes: Current concepts and future perspectives.</a> Eur Cardiol. 14 (1), 50-59 (2019).</li>
<li>Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+diabetic+retinopathy+an+inflammatory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Is diabetic retinopathy an inflammatory disease.</a> Br J Ophthalmol. 86 (4), 363-365 (2002).</li>
<li>Joussen, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+inflammation+in+the+pathogenesis+of+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">A central role for inflammation in the pathogenesis of diabetic retinopathy.</a> FASEB J. 18 (12), 1450-1452 (2004).</li>
<li>Serra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD11b%2B+bone+marrow-derived+monocytes+are+the+major+leukocyte+subset+responsible+for+retinal+capillary+leukostasis+in+experimental+diabetes+in+mouse+and+express+high+levels+of+CCR5+in+the+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">CD11b+ bone marrow-derived monocytes are the major leukocyte subset responsible for retinal capillary leukostasis in experimental diabetes in mouse and express high levels of CCR5 in the circulation.</a> Am J Pathol. 181 (2), 719-727 (2012).</li>
<li>Kinukawa, Y., Shimura, M., Tamai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+leukocyte+dynamics+and+plugging+in+retinal+microcirculation+of+streptozotosin-induced+diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Quantifying leukocyte dynamics and plugging in retinal microcirculation of streptozotosin-induced diabetic rats.</a> Curr Eye Res. 18 (1), 49-55 (1999).</li>
<li>Linsenmeier, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+hypoxia+in+long-term+diabetic+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Retinal hypoxia in long-term diabetic cats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 39 (9), 1647-1657 (1998).</li>
<li>Herdade, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diabetes+on+microcirculation+and+leukostasis+in+retinal+and+non-ocular+tissues%3A+Implications+for+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Effects of diabetes on microcirculation and leukostasis in retinal and non-ocular tissues: Implications for diabetic retinopathy.</a> Biomolecules. 10 (11), 1583(2020).</li>
<li>Oakley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporating+hemoglobin+levels+to+map+leukostasis+risk+in+acute+leukemia+using+microvasculature-on-chip+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Incorporating hemoglobin levels to map leukostasis risk in acute leukemia using microvasculature-on-chip technologies.</a> Blood. 136 (Suppl 1), 9-10 (2020).</li>
<li>Miyamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+leukostasis+and+vascular+leakage+in+streptozotocin-induced+diabetic+retinopathy+via+intercellular+adhesion+molecule-1+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Prevention of leukostasis and vascular leakage in streptozotocin-induced diabetic retinopathy via intercellular adhesion molecule-1 inhibition.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (19), 10836-10841 (1999).</li>
<li>Veenstra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%3A+Retina-specific+methods+for+maintenance+of+diabetic+rodents+and+evaluation+of+vascular+histopathology+and+molecular+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy: Retina-specific methods for maintenance of diabetic rodents and evaluation of vascular histopathology and molecular abnormalities.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 5 (3), 247-270 (2015).</li>
<li>Lester, T. J., Johnson, J. W., Cuttner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+leukostasis+as+the+single+worst+prognostic+factor+in+patients+with+acute+myelocytic+leukemia+and+hyperleukocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary leukostasis as the single worst prognostic factor in patients with acute myelocytic leukemia and hyperleukocytosis.</a> Am J Med. 79 (1), 43-48 (1985).</li>
<li>Porcu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperleukocytic+leukemias+and+leukostasis%3A+a+review+of+pathophysiology%2C+clinical+presentation+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Leuk+Lymphoma%22%5BJournal%5D)">Hyperleukocytic leukemias and leukostasis: a review of pathophysiology, clinical presentation and management.</a> Leuk Lymphoma. 39 (1-2), 1-18 (2000).</li>
<li>Giammarco, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperleukocytosis+and+leukostasis%3A+management+of+a+medical+emergency%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Hematol%22%5BJournal%5D)">Hyperleukocytosis and leukostasis: management of a medical emergency.</a> Expert Rev Hematol. 10 (2), 147-154 (2017).</li>
<li>Mank, V., Azhar, W., Brown, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Leukocytosis.</a> StatPearls. , StatPearls Publishing. Treasure Island (FL). (2024).</li>
<li>Bernhard, W., Avrameas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+visualization+of+cellular+carbohydrate+components+by+means+of+concanavalin+A%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural visualization of cellular carbohydrate components by means of concanavalin A.</a> Exp Cell Res. 64 (1), 232-236 (1971).</li>
<li>Oliver, J. M., Zurier, R. B., Berlin, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concanavalin+a+cap+formation+on+polymorphonuclear+leukocytes+of+normal+and+beige+%28chediak-higashi%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Concanavalin a cap formation on polymorphonuclear leukocytes of normal and beige (chediak-higashi) mice.</a> Nature. 253 (5491), 471-473 (1975).</li>
<li>Pink, J. R., Hoessli, D., Tartakoff, A., Hooghe, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+Concanavalin+A-binding+glycoproteins+from+mouse+splenic+leukocytes+by+two-dimensional+electrophoresis%3A+preferential+binding+of+incompletely+glycosylated+forms+of+H-2+antigen+to+the+lectin%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterisation of Concanavalin A-binding glycoproteins from mouse splenic leukocytes by two-dimensional electrophoresis: preferential binding of incompletely glycosylated forms of H-2 antigen to the lectin.</a> Mol Immunol. 20 (4), 491-497 (1983).</li>
<li>Janssen, B., Debets, J., Leenders, P., Smits, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+measurement+of+cardiac+output+in+conscious+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Chronic measurement of cardiac output in conscious mice.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 282 (3), R928-R935 (2002).</li>
<li>Flecknell, P. A. Anaesthesia of common laboratory species: Special considerations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFlecknell%2C+PA+%22Laboratory+Animal+Anaesthesia%22">Laboratory Animal Anaesthesia</a>. Flecknell, P. A. , 3rd Edition, Academic Press. 181-241 (2009).</li>
<li>Seemann, S., Zohles, F., Lupp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+of+three+different+animal+models+for+systemic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison of three different animal models for systemic inflammation.</a> J Biomed Sci. 24 (1), 60(2017).</li>
<li>Lessieur, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ICAM-1+on+the+luminal+surface+of+endothelial+cells+is+induced+to+a+greater+extent+in+mouse+retina+than+in+other+tissues+in+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">ICAM-1 on the luminal surface of endothelial cells is induced to a greater extent in mouse retina than in other tissues in diabetes.</a> Diabetologia. 65 (10), 1734-1744 (2022).</li>
<li>Kuwabara, T., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+retinal+vascular+patterns%3A+I.+Normal+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Studies of retinal vascular patterns: I. Normal architecture.</a> Arch Ophthalmol. 64, 904-911 (1960).</li>
<li>Tigner, A., Ibrahim, S. A., Murray, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology%2C+white+blood+cell%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Histology, white blood cell.</a> StatPearls. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 mL 주사기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4방향 마개, 루어 잠금 I.V. 라인 밸브</td>, <td>Baxter</td><td>2C6204</td><td></td></tr>, <tr><td>Concanavalin A 용액</td><td>, 벡터&nbsp;</td><td>FL-1001</td><td>PBS로 준비 1 mg/mL</td></tr><tr><td>해부 도구 세트</td><td></td><td></td> 지<td>혈제, 가위 및 겸자 포함</td></tr><tr><td>이미지 처리용</td><td>FIJI</td><td></td><td></td> 소프트웨어</tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ni</td><td></td></tr><tr><td>겸자, Dumont #5, 생물학적 등급 팁</td><td>전자 현미경 과학(EMS)</td><td>72700-D</td><td></td></tr><tr><td>위관 바늘 1.25 mm OD 배럴 팁 x 30mm</td><td>Fine Science</td><td>18060-20</td><td></td></tr><tr><td>Halstead 모기 겸자</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-10</td><td></td></tr><tr><td>조절 클램프가 있는 I.V. 카테터 세트 70인치</td><td>Baxter</td><td>2C5417s</td><td></td></tr><tr><td>I.V. 폴</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>보푸라기 프리 티슈</td><td></td><td></td><td>Kimpwipes는 옵션입니다</td></tr>. 마이크로 <tr><td>해부 스프링 가위, Vannas, 3mm 스트레이트</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5620</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 주걱</td><td>정밀 과학 도구(FST)</td><td>10091-12</td><td></td></tr><tr><td>Nikon</td><td></td><td>NIS-Elements(AR 5.30.03 64비트)</td><td>이미지 획득용 소프트웨어</td></tr><tr><td>페트리 접시(100mmx15mm)</td><td>Corning</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate 완충 식염수(PBS)핑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>크 치과용 왁스</td><td>전자 현미경 과학( EMS)</td><td>72670</td><td></td></tr><tr><td>압력 주입기</td><td>Infusurge</td><td>4010</td><td></td></tr><tr><td>면도날, GEM 싱글 에지 스테인리스 스틸, 테프론 코팅</td><td>전자 현미경 과학(EMS)</td><td>71970</td><td></td></tr><tr><td>식염수 0.9%, 수의학 등급, 1000mL</td><td>Baxter</td><td>04925-04-10</td><td></td></tr><tr><td>소형 해부 가위, 곡선 뭉툭한 끝 22mm</td><td>ROBOZ</td><td>RS 5983</td><td></td></tr></tbody></table>

망막 혈관 구조에서 당뇨병 유발 부착 백혈구의 정량화

Quantification of Diabetes-induced Adherent Leukocytes in Retinal Vasculature

잘 실행된 관류 및 염색 프로토콜은 concanavalin A로 묘사된 완전한 망막 혈관 구조를 보여줍니다(그림 1). 마우스의 관류가 불량하면 전체 혈관 트리의 라벨링과 내강에 부착된 백혈구의 후속 분석을 방해하는 반면(그림 2), 주사기를 빠르게 짜는 과도한 압력(30-35초 미만)은 혈관 투과성과 혈관 파열을 유발할 수 있습니다(그림 3). 유출된 콘카나발린 A는 외부 구조의 잘못된 표지를 유발하여 부착된 백혈구의 정량화를 혼란스럽게 할 수 있습니다.
형광 현미경 검사에 의한 망막 혈관 구조의 평가 및 부착된 백혈구의 정량화는 망막 장착 직후에 이루어져야 합니다(그림 4). 고배율에서 망막을 볼 때는 모세혈관의 굴곡이 혈관 구조에 부착된 백혈구로 분류될 수 있으므...

Leukostasis refers to the attachment of leukocytes to the luminal wall of the vasculature. This interaction of leukocytes with the wall of blood vessels ...

quantification-diabetes-induced-adherent-leukocytes-retinal

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Lani-Louzada, R., et al. 설치류에서 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 변지 혈관 신경총의 전원형 소작. J. Vis. 특급 (2022). 이 비디오는 윤부 혈관 신경총의 완전한 원형 소작술을 받은 화학적으로 고정된 쥐 망막에서 망막 신경절 세포의 정량화를 보여줍니다. 이 과정에는 투과화(pereabilization), 항체 염색(antibody staining), 핵 대조염색(nuclear counterstaining)이 포함되며, 이어서 상형(epifluorescence) 현미경으로 시각화하여 안압 상승이 망막 신경절 세포 생존력에 미치는 영향을 평가합니다.

Quantification of Retinal ganglion cell somas following cauterization-induced ocular hypertension(소작 유발 안구 고혈압에 따른 망막 신경절 세포 소마의 정량화) 

Intravital 현미경 검사는 동물에서 망막 혈관 직경, 혈류 속도 및 총 망막 혈류를 시각화하고 측정하는 데 사용할 수 있습니다.

생쥐의 망막 혈류에 대한 Intravital Video Microscopy 측정

우리는 내피 세포 단층 내에서 접착 세포의 실제 수를 정량화할 수 있는 시험관 내 방법을 보고합니다.

내피 세포 접착 정량<em&gt; 체외</em

망막 뇌와 눈에 띄는 유사성을 공유 하 고 따라서 비 접촉 맥 관 구조와 뇌의 신경 구조를 공부 하는 독특한 창을 나타냅니다. 이 프로토콜에는 망막 이미징 기술을 사용 하 여 치 매를 공부 하는 방법을 설명 합니다. 이 방법은 잠재적으로 치 매 진단 및 위험 평가에 도움이 됩니다.

망막 화상 진 찰을 사용 하 여 치 매 공부 하기

여기, 우리는 방법 프로토콜 neoangiogenesis 및 구조적인 변화에 연결 된 장기 혈관 병 리의 설정에서 빠른 읽기로 쉽게 성인 tg(fli:EGFP) zebrafish 망막 맥 관 구조 분석 수 있는 논의.

물고기는 눈을 통해 당뇨병을 공부: 기정, 시각화, 및 성인 tg(fli:EGFP) Zebrafish 망막 맥 관 구조 분석

쥐 망막 microvascular pericytes, 즉, cryo 섹션, 전체 마운트 및 혈관 네트워크의 침투성 절연의 immunohistochemical 시각화를 위한 3 개의 다른 조직 준비 기술을 설명합니다.

망막 Cryo-섹션, Microvascular Pericytes의 Immunohistochemical 시각화에 대 한 전체-마운트 및 소형 고립 된 맥 관 구조

이 연구는 절제 처리 중 망막 무결성을 손상시키는 것을 방지하는 새로운 인간 organotypic 망막 문화 (HORC) 모형을 개발하는 것을 목표로 합니다. 이것은 과대 유리체와 근본적인 망막 안료 상피 코로이드 (RPE-choroid) 및 clera로 망막을 배양해서 달성됩니다.

소설 인간 오르가노피 망막 문화 기술의 특성화

당뇨병성 망막증은 실명의 주요 원인 중 하나입니다. 조직학, 혈액-망막 장벽 파괴 분석, 및 형광 혈관조영술은 망막의 병태생리학을 이해하는 데 유용한 기술이며, 이는 당뇨병성 망막병증에 대한 효율적인 약물 스크리닝을 더욱 향상시킬 수 있다.

쥐 모델에서의 망막 병리생리학적 평가

이 문서에서는 전체 마운트 망막 제제및 증식 및 비증식 망막병에서 자주 변경되는 혈관 매개 변수의 정량적 측정에 필요한 프로토콜에 대해 잘 확립되고 재현 가능한 렉틴 얼룩 분석법에 대해 설명합니다.

비증식 및 증식 망막증을 가진 마우스의 전체 산 망막에 있는 혈관 매개변수의 정량화

수컷 SD 쥐의 스트렙토조토신 유발 당뇨병성 상처 모델은 현재 제1형 당뇨병의 상처 치유를 연구하는 데 가장 널리 사용되는 모델입니다. 이 프로토콜은 이 모델을 생성하는 데 사용되는 방법을 설명합니다. 또한 잠재적인 문제를 제시 및 해결하고 당뇨병성 상처의 진행 및 혈관신생 특성을 검사합니다.

제1형 당뇨병의 쥐 상처 모델을 구축하기 위한 프로토콜

산화 스트레스 및 사이토카인과 같은 당뇨병/당뇨병성 망막병증 관련 모욕으로 인한 사망에 대한 망막 혈관의 복원력을 모니터링하기 위해 보호 분석법이 개발되었습니다.

마우스의 당뇨병 관련 사망으로부터 망막 혈관 보호를 감지하기 위한 분석

학습하세요 당뇨병성 망막병증에서 백혈구 과잉 축적을 형광 현미경으로 정량화하는 방법을. 이 기술은 망막 혈관의 염증을 평가하고 치료 효과를 검증하는 데 활용됩니다.

망막 혈관 구조에서 당뇨병 유발 부착 백혈구의 정량화

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