망막 혈관 구조에서 당뇨병 유발 부착 백혈구의 정량화

우리 연구실의 연구 초점은 당뇨병에서 망막병증의 원인과 예방 방법을 배우는 것입니다. 여러 실험실에서 눈의 작은 혈관에 백혈구가 과도하게 축적되는 백혈구 정체가 당뇨병을 증가시키는 것으로 나타났습니다. 그리고 이것은 당뇨병에서 망막 혈관의 폐색 및 변성에 기여할 수 있습니다. 이 기술을 사용하면 망막 맥관 구조에서 백혈구 정체의 중증도를 시각화하고 정량화할 수 있습니다. 그리고 약물을 포함한 다양한 치료법의 효능을 평가하려는 연구에 사용할 수 있습니다.

[강사] 압력 주입기를 설정하려면 0.9% 식염수 백을 직렬로 연결하십시오. 정맥 카테터 세트, 4방향 마개 밸브 및 위관 바늘. 관류 시스템을 열고 분당 18-20밀리리터의 유속으로 2분 동안 식염수로 라인과 포트를 세척하여 기포를 제거합니다. 마취된 마우스를 관류 단계에 바로 누운 상태로 눕힙니다. 검상돌기를 육안으로 식별합니다. 주로 사용하는 손에 지혈제를 사용하여 피부를 고정하고 잠급니다. 그런 다음 지혈제를 주로 사용하지 않는 손으로 옮기고 피부를 들어 올립니다. 그런 다음 가위를 사용하여 척추에 대해 90도 각도로 피부 패치를 잘라 바깥쪽 복벽을 노출시킵니다. 검상돌기와 흉곽이 보이는 상태에서 장기나 주요 혈관을 조심스럽게 피하면서 복벽을 통해 양측으로 해부합니다. 이제 횡격막을 통해 심실과 폐를 시각화하십시오. 가위 끝을 사용하여 척추 근처 한쪽 횡격막을 절개합니다. 흉골을 이등분한 후 흉강에서 심장을 노출시킵니다. 주로 사용하지 않는 손에 집게를 사용하여 심장을 정점 근처에서 잡습니다. 주로 사용하는 손을 사용하여 정맥 카테터에 부착된 위관 바늘을 잡고 심장 정점을 뚫습니다. 좌심실에 완전히 구멍이 뚫리거나 폐 맥관 구조에 들어가는 것을 방지하기 위해 위관 바늘의 볼 끝이 천자 부위에서 약간 돌출되어 있는지 확인하십시오. 그런 다음 마개를 열어 0.9% 식염수가 흐르도록 합니다. 동시에 가위를 사용하여 오른쪽 심방을 자릅니다. 2-3분 동안 관류를 계속하면서 바늘을 좌우, 위아래로 부드럽게 움직여 맥관 구조의 꼬임을 방지하고 심장의 혈액 배출을 증가시킵니다. 관류 후 마개 손잡이를 돌려 식염수 흐름을 차단하고 주사기에서 위관 바늘로 흐르도록 합니다. 그런 다음 30-35초 이내에 10밀리리터의 콘카나발린 A 용액을 수동으로 관류합니다. 마취된 마우스의 심장에 콩카나발린 A 용액을 관류한 후 마우스를 옆으로 돌립니다. 주로 사용하지 않는 손의 검지를 위 눈꺼풀에, 엄지손가락을 아래 눈꺼풀에 놓습니다. 눈꺼풀과 주변 피부를 부드럽게 집어넣어 눈을 돌출시켜 눈구멍에서 부분적으로 부풀어 오를 수 있도록 합니다. 그런 다음 주로 사용하는 손의 구부러진 가위를 사용하여 눈 아래를 45도 각도로 퍼냅니다. 근육 부착물과 시신경을 절단합니다. 가위를 주걱으로 사용하여 눈을 작은 용기로 옮깁니다. 글로브 개방을 준비하기 위해 치과용 왁스 위에 눈을 놓습니다. 해부 현미경으로 미세 겸자를 사용하여 눈 뒤쪽에 부착된 공막 주름 또는 근육 잔여물을 잡고 각막이 한쪽을 향하도록 눈의 방향을 잡습니다. 윤부 뒤쪽과 평행하게 절개합니다. 마이크로 가위를 사용하여 아이컵 둘레의 수정체를 포함하여 눈의 앞부분을 분리하여 망막이 공막에서 완전히 분리되도록 합니다. 마이크로 주걱으로 공막에서 망막을 퍼냅니다. 망막이 여전히 시신경에 붙어 있는 경우 망막과 공막 사이에 마이크로 가위를 삽입하여 시신경을 절단합니다. 고정되지 않은 망막을 PBS 한 방울이 있는 슬라이드 위에 놓습니다. 망막에 4-5개의 방사형 절단을 하여 클로버 잎 패턴을 만들어 평평하게 눕힙니다. 10x 대물렌즈를 사용하여 현미경 아래에서 100x 배율로 평면 장착 망막을 관찰합니다. 망막 맥관 구조의 형광 현미경 검사에서 당뇨병성 망막은 비당뇨병 대조군의 1-3개에 비해 망막당 일반적으로 3-12개의 백혈구로 경미한 백혈구 정체를 나타내는 것으로 나타났습니다. 당뇨병 샘플의 경미한 클러스터링과 달리 지질다당류 도전 염증 모델에서 상당한 백혈구 클러스터가 관찰되었습니다.