Name: 뉴캐슬 질병 바이러스 혈청학의 혈구 응집 억제 분석을 위한 항원 준비의 최적화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 배우세요 뉴캐슬 질병 바이러스 혈구 응집 억제 분석을 위한 4-HAU 항원 준비 최적화 방법입니다. 역가역적정법과 자동화 시스템을 활용하여 항체 검출 정확도를 높이고 가금류 질병 감시를 개선합니다.

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프로토콜에 대한 승인은 지역 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 부여되었습니다. 살아있는 바이러스 항원 및 임상 혈청 샘플과 관련된 모든 절차는 확립된 안전 프로토콜에 따라 생물안전 레벨 2 실험실에서 수행되었습니다.
1. 1% 닭 RBC 현탁액의 준비
<ol>
	<li>Alserver의 용액(항응고제) 3mL를 멸균된 15mL 원추형 원심분리 튜브에 추가합니다.</li>
	<li>면역이 없는 닭 3마리(NDV 항체가 없음) 각각의 날개 정맥에서 혈액 1mL를 수집합니다. 즉시 항응고제가 들어 있는 튜브에 혈액을 옮기고 부드럽게 섞습니다.</li>
	<li>튜브에 멸균 1x 인산염 완충 식염수(PBS, pH 7.2-7.4)를 총 부피 12mL까지 채우고 부드럽게 혼합합니다. 수평 로터를 사용하여 500 × g 에서 10분 동안 원심분리기를 합니다.</li>
	<li>상층액과 백혈구층을 조심스럽게 제거합니다. 1.3 및 1.4 2x 단계를 반복하여 RBC 펠릿을 얻습니다.</li>
	<li>1mL의 RBC 펠릿을 99mL의 멸균 PBS로 역피펫팅하여 1% RBC 현탁액을 준비합니다. 참고: 1% 닭 RBC 현탁액의 필요한 부피는 3mL/플레이트(25μL/웰 x 96웰 x 1.25 = 3.0mL, 여기서 1.25는 충분한 부피를 보장하기 위한 피펫팅 낭비를 고려함)로 추정됩니다.</li>
</ol>
2. 동결건조된 항원 또는 혈청의 재구성
<ol>
	<li>동결건조된 항원 또는 혈청이 들어 있는 앰플에 멸균 PBS 2mL를 추가합니다. 앰플을 부드럽게 흔들고 거품을 최소화하고 완전히 용해되도록 2-3분 동안 그대로 두십시오. 참고: 이 연구에서는 다양한 유형의 동결 건조 물질이 비교되지 않았으므로 특정 제조업체의 지침을 따르십시오.</li>
	<li>재구성된 용액을 1.5mL 원심분리 튜브에 분취하고 사용할 때까지 -20°C에서 동결합니다. 참고: 항원을 해동하여 사용할 때마다 또는 새로운 RBC 현탁액을 준비할 때마다 HA 역가를 다시 측정합니다.</li>
</ol>
3. 항원의 HA 적정
<ol>
	<li>일회용 96웰 V-바닥 마이크로타이터 플레이트의 인접한 웰 4개에 각각 40, 80, 120, 160μL의 PBS를 분주한 다음 각 웰에 20μL의 항원을 첨가하고 10배 위아래로 피펫팅하여 혼합하여 각각 1:3, 1:5, 1:7 및 1:9의 희석을 달성합니다. 희석 작업의 개략도는 그림 1에 나와 있습니다.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig1.jpg"> 
그림 1: 적혈구 응집 분석에서 항원 용액을 희석하는 절차를 보여주는 개략도. 항원 용액은 PBS에서 각각 1:3, 1:5, 1:7 및 1:9의 비율로 희석됩니다. 웰 또는 원심분리기 튜브의 PBS는 파란색으로 표시되고 항원은 녹색으로 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<ol start="2">
	<li>새 마이크로타이터 플레이트에 라벨을 붙입니다. 25μL의 PBS를 1-5열의 각 웰에 추가합니다.</li>
	<li>다채널 피펫을 사용하여 25μL의 희석된 항원 용액을 1-5열의 첫 번째 웰에 넣고 최소 5회 위아래로 피펫팅하여 혼합합니다.</li>
	<li>각 행의 첫 번째 웰에서 두 번째 웰로 25μL를 완전히 혼합하여 이동합니다. 한 웰에서 다음 웰로, 11번째 열로 계속 이동시켜 2배 연속 희석액(1:2 - 1:2048)을 생성합니다. 11번째 열 뒤에 25μL를 버립니다.</li>
	<li>항원 농도가 가장 낮은 웰부터 시작하여 각 웰에 25μL의 PBS를 추가합니다.</li>
	<li>항원 농도가 가장 낮은 웰부터 시작하여 각 웰에 25μL의 1% 닭 RBC 현탁액을 추가합니다.</li>
	<li>마이크로플레이트 셰이커에서 플레이트를 ~20초 동안 흔들어 완전히 섞습니다.</li>
	<li>12번째 기둥의 적혈구가 완전히 가라앉을 때까지 20-25°C의 실온(20-25°C)에서 ~30분 동안 벤치탑에 그대로 두십시오. 플레이트 레이아웃은 그림 2를 참조하십시오.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig2.jpg"> 
그림 2: 혈응집 분석에 사용된 마이크로플레이트의 개략적 레이아웃. 1-5행의 첫 번째 열에는 항원 용액의 희석되지 않은 다양한 초기 희석액이 포함된 후 11열까지 왼쪽에서 오른쪽으로 2배 연속 희석이 포함됩니다. PBS 컨트롤은 마지막 열에 배치됩니다. 어두운 곳에서 밝은 곳으로 구배가 있으면 항원 농도가 감소함을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<ol start="9">
	<li>결과를 읽고 기록합니다. HA는 플레이트를 ~25초 동안 90° 기울이고 적혈구의 눈물 모양 흐름의 유무를 관찰하여 결정됩니다. 완전한 혈구응집(스트리밍 없음)을 나타내는 가장 높은 희석은 1HA 단위를 나타냅니다. 12번째 열의 웰은 RBC(음수) 대조군 역할을 합니다.</li>
	<li>표 1을 사용하여 각 행의 HA 역가를 계산하며, 그 최대값은 4-HAU 항원 용액의 준비에 사용됩니다. 예를 들어, a, b, c, d 및 e가 각각 9, 8, 7, 6, 6과 같으면 3 x 28 = 768이 최대값이고 는 항원 스톡의 HA 역가입니다.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>항</td>
			<td>완전한 HA의 최고 희석 컬럼</td>
			<td>희석되지 않은 원유의 HA 역가</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>원액</td>
			<td>a</td>
			<td>2암페어</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3배 희석</td>
			<td>b</td>
			<td>3 x 2b</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5배 희석</td>
			<td>c</td>
			<td>5 엑스 2C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7배 희석</td>
			<td>d</td>
			<td>7 엑스 2d</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9배 희석</td>
			<td>e</td>
			<td>9 엑스 2전자</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: HA 분석 결과 및 원액의 HA 역가 계산.
4. 4-HAU 항원 용액의 제조
<ol>
	<li>4-HAU 항원 용액 준비를 위한 희석 계수를 계산합니다. <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq3.jpg"> 필요한 총 4-HAU 부피 결정: V = 3mL x 마이크로플레이트 수. 그런 다음 항원 원액의 필요한 부피를 계산합니다 : <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq5.jpg">, 및 PBS : Vp = V-Va. 참고: 부피는 밀리리터 단위로 측정됩니다. 4-HAU의 마이크로타이터 플레이트당 3mL를 추정합니다(25μL/웰 x 96웰 x 1.25 = 3mL).</li>
	<li>계산된 부피의 PBS를 용기에 피펫팅한 다음 해당 부피의 항원 원액을 넣고 잘 섞어 4-HAU 항원 용액을 얻습니다. 알림: 4-HAU 항원 용액은 가능한 한 빨리 사용해야 합니다.</li>
</ol>
5. 4-HAU 항원 용액의 역적정
<ol>
	<li>25, 50, 75, 100, 125 및 150 μL의 PBS를 마이크로타이터 플레이트의 인접한 6개의 웰에 분주한 다음 각 웰에 25μL의 4-HAU 항원 용액을 추가하고 10배 위아래로 피펫팅하여 혼합합니다. 참고: 4-HAU 항원 용액을 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 및 1:7의 희석으로 PBS로 희석합니다. 희석 작업의 개략도는 그림 3에 나와 있습니다.</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig3.jpg"> 
그림 3: 역적정에서 4개의 적혈구 단위 용액의 희석 절차의 개략도. 4-HAU 작업 용액은 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 및 1:7의 비율로 PBS로 희석됩니다. PBS는 파란색으로, 항원은 녹색으로 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<ol start="2">
	<li>멀티채널 피펫을 사용하여 25μL의 각 희석된 항원 용액을 다른 열의 well로 옮깁니다. 25μL의 PBS를 음성 대조군으로 추가 웰에 추가합니다.</li>
	<li>각 웰에 PBS 25μL를 추가한 다음 각 웰에 25μL의 1% 닭 RBC를 추가합니다.</li>
	<li>마이크로플레이트 셰이커에서 플레이트를 ~20초 동안 흔들어 섞습니다.</li>
	<li>네거티브 대조군의 적혈구가 완전히 가라앉을 때까지 실온(20-25 °C)에서 ~30분 동안 벤치탑에 그대로 두십시오.</li>
	<li>결과를 읽고 기록합니다. 알림: 네거티브 컨트롤 웰에는 HA가 표시되지 않아야 합니다. 이상적으로는 1:4 희석이 완전 HA에서 가장 높은 희석입니다. 4-HAU 용액의 역가가 4 이상인 경우 최대 희석은 1:5, 1:6 또는 1:7일 수 있습니다. 더 작으면 1:2 또는 1:3일 수 있습니다. 역적정과 대표적인 결과의 개략도는 그림 4에 나와 있습니다.</li>
</ol>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig4.jpg"> 
그림 4: 역적정을 위한 well의 개략적 레이아웃과 대표 결과. 희석된 4-HAU 작업 솔루션은 PBS 제어 기능이 추가된 새 행으로 이전됩니다. 짙은 녹색에서 연한 녹색으로의 구배는 항원 농도가 높은 것에서 낮은 것까지 나타냅니다. 대표적인 결과는 1:4 희석이 완전한 혈구응집화를 보여주는 가장 높은 희석임을 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<ol start="7">
	<li>필요한 경우 4-HAU 항원 용액을 조정하거나 다시 공식화합니다. 참고: 역적정에 사용된 4-HAU 항원 용액의 부피가 총 부피의 ≤1%(4-HAU 항원 용액의 부피 ≥ 15mL)인 경우 구체적인 조정은 표 2를 참조하십시오. 예를 들어, 완전 HA에서 가장 높은 희석률이 1:2인 경우 4-HAU 항원 용액의 역가는 이제 2가 되며, 이전에 4-HAU 항원 용액을 준비할 때와 동일한 부피의 항원을 추가해야 합니다. 반대로, 완전 HA의 최대 희석이 1:6인 경우 역가는 이제 6이고 PBS 부피의 절반이 보충되어야 합니다. 역적정에 사용된 부피가 전체의 1%(4-HAU 항원 용액의 부피 &lt; 15mL)를 초과하는 경우, 보정된 희석 계수를 사용하여 4-HAU 항원 용액을 다시 제형화합니다. 구체적인 수정 사항은 표 3 을 참조하십시오. 예를 들어, 완전 HA의 최대 희석률이 1:2인 경우 4-HAU 항원 용액의 역가는 이제 2이고 희석 계수는 원래의 1/2로 조정해야 합니다. 반대로, 완전 HA의 최대 희석률이 1:6인 경우 4-HAU 항원 용액의 역가는 이제 6이 되고 희석 계수는 원래의 3/2로 조정됩니다.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>역적정의 HA 역가</td>
			<td>항원 또는 PBS 보충</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>버지니아</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>VA/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>부통령/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>부사장/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>3VP/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 2: 역적정 결과를 기반으로 4-HAU 농도를 조정하기 위한 참조 표. Va와 Vp는 각각 4-HAU 항원 용액의 제형에 사용되는 항원 및 PBS의 부피를 나타냅니다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>역적정의 HA 역가</td>
			<td>희석 계수 보정</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>3D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>5차원/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>3D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>7D/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 3: 4-HAU 항원의 재준비를 위한 희석 계수 보정의 참조 표. D는 이전에 4-HAU 항원 준비에 사용된 희석 계수를 나타냅니다.
6. 세럼의 준비
<ol>
	<li>항응고제를 사용하지 않고 닭 날개에서 ~1mL의 혈액을 모으십시오.</li>
	<li>혈액을 1.5mL 원심분리 튜브로 옮기고 37°C에서 ~2시간 동안 배양합니다. 3,000 x g에서 10분 동안 원심분리기를 진행하고 상층액을 새 튜브에 조심스럽게 흡입합니다.</li>
</ol>
7. 안녕 분석실험
<ol>
	<li>분석 레이아웃에 따라 마이크로타이터 플레이트에 라벨을 부착합니다. 멀티채널 피펫을 사용하여 25μL의 PBS를 1-11열의 각 웰에 추가하고 50μL를 12열의 웰에 추가합니다.</li>
	<li>양성 및 음성 혈청 대조군 열을 포함하여 각 열의 첫 번째 well에 25μL의 혈청을 추가합니다. 최소 5회 이상 위아래로 피펫팅하여 철저히 혼합합니다.</li>
	<li>각 행의 첫 번째 웰에서 두 번째 웰로 25μL를 옮기고 철저히 혼합합니다. 두 번째 웰에서 세 번째 웰로 10번째 열까지 계속 옮기고 믹싱합니다. 혼합 후 10번째 컬럼의 웰에서 25μL의 액체를 버립니다.</li>
	<li>25μL의 4-HAU 항원을 컬럼 1-11의 각 웰에 혈청 농도가 낮거나 높은 방향으로 첨가합니다.</li>
	<li>마이크로플레이트 셰이커에서 플레이트를 ~20초 동안 흔듭니다. ~30분 동안 벤치탑에 방해받지 않고 그대로 두십시오.</li>
	<li>25μL의 1% 닭 적혈구를 혈청 농도가 낮거나 높은 방향으로 각 웰에 추가합니다.</li>
	<li>마이크로플레이트 셰이커에서 플레이트를 ~20초 동안 흔들어 완전히 섞습니다. PBS 제어 우물의 적혈구가 완전히 가라앉을 때까지 ~30분 동안 벤치탑에 그대로 두십시오.</li>
	<li>결과를 읽고 기록합니다. 참고: HI 역가는 4-HAU 항원의 혈응집화를 완전히 억제하는 가장 높은 혈청 희석액입니다. 적혈구의 눈물 모양 흐름은 플레이트를 25초 동안 90° 기울이면 각 열의 마지막 열에서 관찰할 수 있습니다. 전체 HA(스트리밍 없음)는 각 행의 끝에서 두 번째 마지막 웰에서 관찰할 수 있습니다. 유효한 검사 결과는 양성 혈청 대조군의 HI 역가가 알려진 HI 역가의 1회 희석 이내여야 합니다. 음성 혈청 대조군의 HI 역가는 ≤ 2 log2이고; 및 RBC 제어의 자체 HA가 없습니다. HA 분석 워크플로우의 개략도는 그림 5를 참조하십시오.</li>
</ol>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig5.jpg"> 
그림 5: hemagglutination assay workflow의 개략도. PBS는 파란색, 혈청은 노란색, 4-HAU 항원 용액은 녹색, 1% 닭 RBC 현탁액은 빨간색으로 표시됩니다. 화살표는 액체 분배의 순서를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<meta charset="utf8"></head><body>정확한 NDV 항체 검출을 위한 간소화된 4-HAU 항원 준비

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<li>Chumbe, A., Izquierdo-Lara, R., Calderón, K., Fernández-Díaz, M., Vakharia, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+Newcastle+disease+virus+%28NDV%29+neutralization+test+based+on+recombinant+NDV+expressing+enhanced+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Development of a novel Newcastle disease virus (NDV) neutralization test based on recombinant NDV expressing enhanced green fluorescent protein.</a> Virol J. 14 (1), 232(2017).</li>
<li>Webster, R., Cox, N., Stöhr, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WHO+animal+influenza+manual%5BTitle%5D)+AND+%22WHO%2FCDS%2FCSR%2FNCS%22%5BJournal%5D)">WHO animal influenza manual.</a> WHO/CDS/CSR/NCS. 2002.5, 1-99 (2002).</li>
</ol>

이 기사에서 제안하는 최적화된 방법은 4-HAU 항원 용액을 정확하게 준비하기 위한 접근 방식을 제시합니다. OIE와 EU 가이드라인은 HA 적정을 위한 초기 희석을 제안하지만, 사용되는 희석 비율에 대한 정확한 세부 정보를 제공하거나 특정 방법론을 제공하지 않습니다11,12. 또한, FAO와 OIE는 4-HAU의 정확도를 높이기 위한 수단으로 역적정을 권장하지만, 명확한 프로토콜이 없습니다11,13. 이 논문은 항원의 HA 적정에서 정확한 희석 비율(1:3, 1:5, 1:7, 1:9)을 사용하여 프로토콜을 설명하고 4-HAU 준비를 위한 최대값을 선택하여 이러한 단점을 해결합니다. 또한, 이 프로토콜은 역적정 공정에서 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 및 1:7의 희석 비율을 통합합니다. 또한 분석의 타당성을 향상시키기 위해 포괄적인 조정 또는 재...

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 멸균 원심분리기 튜브(15mL)&nbsp;</td><td>Labshark</td><td>130201030</td><td></td></tr><tr><td>공랭식 저속 탁상용 원심분리기&nbsp;</td><td>Titan</td><td>LDC-5</td><td></td></tr><tr><td>Alserve의 솔루션</td><td>Sangon Biotech</td><td>E607058</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>DLAB</td><td>9032002121</td><td></td></tr><tr><td>일회용 파스퇴르 피펫</td><td>Titan</td><td>SWXG-004</td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 주사기(1mL)</td><td>Beyotime</td><td>FS801-30PCS</td><td></td></tr><tr><td>일회용 V-bottom Microtiter 플레이트(96-well)Labshark</td><td></td><td></td><td></td>130207001</tr><tr><td>Microplate Shaker</td><td>Jiangsu Xinkang Medical Equipment Co., Ltd</td><td>XK96-3</td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Negative Sera</td><td>Qingdao Regen Diagnostics Development Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Positive Sera</td><td>Qingdao Regen Diagnostics Development Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Test Antigen</td><td>Qingdao Regen Diagnostics Development Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS 솔루션 (1x)&nbsp;</td><td>Adamas Life</td><td>C8020</td><td></td></tr><tr><td>멸균 원심분리기 튜브 (1.5 mL)</td><td>Labshark</td><td>130201012</td><td></td></tr></tbody></table>

뉴캐슬 질병 바이러스 혈청학의 혈구 응집 억제 분석을 위한 항원 준비의 최적화

Optimization of Antigen Preparation for Hemagglutination Inhibition Assay of Newcastle Disease Virus Serology

최적화된 방법을 사용하여 제조된 4-HAU 항원 용액의 역가 검증 이 연구는 HA 역가를 정확하게 측정하기 위해 항원 원액의 다양한 희석액을 사용하여 4-HAU 항원 용액을 준비하기 위한 희석 계수 계산을 용이하게 했습니다. 그 결과, 최적화된 분석법이 효율적이고 정밀하여 반복적인 역적정 및 조정 절차의 횟수를 줄일 수 있는 것으로 나타났습니다. 첫 번째 시나리오에서 ~512의 초기 HA 역가는 4-HAU 항원 용액에 대한 요구 사항에 따라 768의 최종 역가를 산출했습니다(그림 6). 마찬가지로, 두 번째 사례에서는 ~256의 초기 역가가 변하지 않아 준비된 4-HAU 항원 용액이 실험 기준을 충족했습니다(그림 7). 마지막으로, ~128의 초기 역가에서 결정된 정확한 역가 144는 실험 사양과의 호환성을 유지했습니다(그림 8). 이...

Accurate assessment of Newcastle disease virus (NDV) antibody titers is crucial for effective poultry disease control and surveillance. This article ...

optimization-antigen-preparation-for-hemagglutination-inhibition

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 특정 항원에 대한 혈청 항체를 검출하기 위한 혈응집 억제 분석을 보여줍니다. 테스트 웰에서의 적혈구 응집 억제 및 대조군 웰에서의 적혈구 응집의 확인은 뚜렷한 시각적 패턴을 통해 달성됩니다. 이 분석은 면역 반응, 백신 효과를 평가하고 바이러스학 및 면역학에서 바이러스 감염을 연구하는 데 중요한 역할을 합니다.

표적 항원에 대한 혈청 항체를 검출하기 위한 Hemagglutination Inhibition Assay

이 비디오는 인간 혈청에서 α2,6 연결된 시알산을 과발현하는 Madin-Darby Canine Kidney cell을 사용하여 중화 항체를 측정하는 Microneutralization 분석을 보여줍니다. 이 분석법은 종종 인플루엔자 인간 혈청학에...

인간 혈청에서 중화 항체 역가를 측정하기 위한 미세중화 분석

이 동영상은 혈청 샘플에서 인플루엔자 뉴라미니다아제(NA) 억제 항체 역가를 측정하는 분석을 보여줍니다. NA에 대한 항체를 포함하는 혈청 샘플을 페투인(fetuin)으로 코팅된 마이크로웰 플레이트에 첨가합니다. 바이러스를 추가하면 항체가 바이러스 NA가 fetuin을 쪼개고 갈락토오스 부분을 노출시키는 것을 방지합니다. 그런 다음 과산화효소(peroxidase-conjugated lectin)가 첨가되어 노출된 갈락토스에 결합합니다. NA 억제 항체 역가는 비색 테스트를 사용하여 측정되며, 여기서 과산화효소 기질은 고정된 렉틴 접합 과산화효소에 의해 절단되어 색상을 생성합니다.

인플루엔자 뉴라미니다아제 억제 항체 역가를 측정하기 위한 분석

뉴캐슬 질병 바이러스 (NDV)는 광범위 중에서도, 백신 및 치료를위한 새로운 벡터를 개발하기 위해 지난 몇 년 동안 연구되어왔다. 이 연구로 인해 이러한 우리가 여기에서 설명하는 것과의 cDNA에서 재조합 바이러스를 구출하는 기술로 가능했습니다.

의 cDNA에서 재조합 뉴캐슬 질병 바이러스의 구조

여기서는 원리 증명 가의 아데노 바이러스 타입 5 (의 Ad5) 벡터를 생성하는 프로토콜을 제시의 Ad5 / H5-HVR1-KWAS HVR5-6-그의 항원 캡시드 혼입 전략을 이용하여. 이 벡터는 성적 체력을 나타내는 것으로 입증되었다, 기능은 통합 항원의 Ad5 양성 시험관 내에서 혈청 및 항원뿐만 아니라 면역 원성을 탈출.

아데노 바이러스 혈청 형 5 된 벡터 백신 접근 방법의 개발을위한 항원 캡시드-설립 전략을 활용

혈청에서 인플루엔자 뉴라미니다아제(NA) 억제 항체 역가를 측정하기 위한 효소 결합 렉틴 분석법(ELLA)을 설명합니다. 이 분석은 땅콩 응집소를 사용하여 NA가 fetuin으로 코팅된 96웰 플레이트에서 시알산을 제거할 때 접근할 수 있는 갈락토오스 잔류물을 정량화합니다.

효소 결합 렉틴 분석에 의해 인플루엔자 뉴 라미니다 아제 억제 항체가를 측정

이 연구는 설명   영상 기반의 마이크로 중화 분석은 바이러스의 항원 성 관계를 분석합니다. 이 프로토콜은 평판 스캐너를 사용하고 적정, 적정 정량, 중화, 중화 정량 등 4 단계가있다. 분석은 현재 순환 인플루엔자 A (H1N1) pdm09, A (H3N2)와 B 바이러스와 함께 잘 작동합니다.

정량적 마이크로 중화 분석의 최적화

제시 프로토콜 인플루엔자 백신 받는 사람 혈 청 샘플에서 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 hemagglutination 억제 시험을 수행 하는 방법을 설명 합니다. 첫 번째 분석 결과 hemagglutination에 의해 최적의 바이러스 성 항 원 농도를 결정합니다. 두 번째 분석 결과 hemagglutination 저해 하 여 인플루엔자-특정 항 체 titers 단정.

인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과

여기에서 우리는 고역가 재조합 뉴캐슬병 바이러스의 생산, 정제 및 정량화를 위한 상세한 절차를 제공한다. 이 프로토콜은 지속적으로 &gt; 6 × 10,9 플라크 형성 단위 / mL를 산출하여 생체 내 동물 연구에 적합한 바이러스 양을 제공합니다. 생체내 안전성을 보장하기 위한 추가의 품질 관리 분석법이 기재되어 있다.

Allantoic Fluid로부터의 고역가 재조합 뉴캐슬병 바이러스의 생산

우리는 처리 방법을 설명하고 화면의 필드 수집 베로 세포 배양 분석에 의해 바이러스의 다양성을 위해 모기. 이 기술을 채용함으로써, 우리는 코네티컷에서 수집한 모기 4 taxonomic 가정에서 9 가지 바이러스를 감지했습니다.

베로 세포 배양 분석하여 필드 수집 모기에서 감염성 바이러스의 검출

배우세요 뉴캐슬 질병 바이러스 혈구 응집 억제 분석을 위한 4-HAU 항원 준비 최적화 방법입니다. 역가역적정법과 자동화 시스템을 활용하여 항체 검출 정확도를 높이고 가금류 질병 감시를 개선합니다.

뉴캐슬 질병 바이러스 혈청학의 혈구 응집 억제 분석을 위한 항원 준비의 최적화

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