In Situ Fiber Bundle Surface Grafting을 위한 Artificial Lung Device Priming

중환자 치료에 필수적인 혈액 장벽 의료기기는 종종 혈전이 형성되고, 기능이 저하되며, 전신 혈전증 위험이 증가합니다. 임상적 항응고제는 혈전증을 완화시키지만 출혈 위험을 높입니다. 생체 재료 표면의 단백질 흡수는 응고와 염증을 유발합니다.

zoura 폴리머 세척 스루 코팅이 ECMO 회로 단백질 흡수에 미치는 영향을 조사했습니다. 현재 환자에게 영향을 주지 않고 의료기기의 혈전증을 선택적이고 효과적으로 억제하는 상업용 항응고제는 없습니다. 또한 다양한 의료 기기에 대해 며칠에서 몇 주, 심지어 몇 달에 이르는 기간에 걸쳐 표면 코팅 및 엔지니어링의 효과를 최적화하고 입증하는 것이 중요합니다.

당사의 새로운 과학적 목표에는 코팅 적용에 대한 다양한 전처리 접근 방식의 영향 평가, 세척 스루 코팅 용액의 처리 방법이 코팅 균일성에 미치는 영향 평가, 비특이적 단백질 오염에 대한 대체 방오 폴리머 이식편의 효과 조사, 생체 내 혈전증을 제한하는 최적화된 코팅의 능력 결정이 포함됩니다. 폐 회로를 청소하려면 30% 메탄올을 탈이온수에 20분 동안 재순환시킵니다. 그런 다음 탈이온수에 10% 메탄올을 재순환시킨 다음 탈이온수만 20분 더 재순환합니다.

여과된 집 공기로 폐 회로를 건조시키고 2시간 동안 낮은 유량으로 설정합니다. 세척 및 건조된 폐 회로를 자외선 오존 분해 플라즈마 발생기에 넣습니다. 발전기를 닫고 기기를 켜서 20분 동안 플라즈마 노출을 시작합니다.

플라즈마 노출을 완료한 후 코팅 단계로 바로 진행하여 표면 사슬 재배열 및 플라즈마 상호 작용에 의해 생성된 반응성 부위의 손실을 방지합니다. 장치가 표면 변형을 겪는 동안 유리 비커에 1.2ml의 트리스 버퍼에 600g의 도파민 염산염을 용해시킵니다. 그 후, 설포베타인 메타크릴레이트 단량체를 1:15 도파민 염산염과 설포베타인 메타크릴레이트의 비율로 용해시킵니다.

그런 다음 5 밀리몰의 요오드산나트륨을 코팅 용액에 작은 방울로 첨가합니다. 마그네틱 교반 막대와 150RPM으로 설정된 교반 플레이트를 사용하여 용액을 완전히 혼합합니다. 다음으로, 큰 주사기를 사용하여 폐 장치에 코팅 용액을 프라이밍하여 회로를 끌어내고 채웁니다.

회로의 한쪽 끝을 고정하고 다른 쪽 끝에서 프라이밍하는 동안 기포를 회로 액세스 커넥터를 통해 밖으로 내보내십시오. 회로가 완전히 프라이밍되면 장치를 자외선 광원 아래에 2시간 동안 두십시오. 10분마다 프라임 장치의 끝 방향을 위아래로 변경하여 용액을 교반합니다.

광 처리 후 회로를 완전히 배수하십시오. 헹굼 폐수가 깨끗해질 때까지 60입방센티미터 주사기를 사용하여 프라이밍과 배수를 반복하여 모든 샘플을 탈이온수로 부드럽게 헹굽니다. 마지막으로, 부검 및 표면 분석을 위해 탈이온수로 채워진 장치를 섭씨 4도로 설정된 냉장고에 보관하십시오.

피브리노겐 흡수 테스트를 수행하려면 섬유 매트 샘플을 웰 플레이트에 1ml당 3mg의 피브리노겐 용액으로 옮기고 플레이트를 섭씨 37도에서 60RPM으로 90분 동안 배양합니다. PBS로 샘플을 세척합니다. 이를 새 웰로 옮기고 각 웰에 밀리리터당 1밀리그램 BSA 용액 1밀리리터를 추가합니다.

90분 더 배양합니다. 그런 다음 PBS 용액으로 샘플을 세 번 더 세척하고 새 웰로 옮깁니다. 다음으로, PBS 용액에 1-1000 희석된 무 과산화효소 접합 피브리노겐 항체 1ml를 각 웰에 첨가합니다.

샘플을 30분 동안 배양하고 세척한 후 새 웰로 옮깁니다. 새로운 웰에서 500마이크로리터의 오페닐렌디아민을 0.03% 과산화수소가 함유된 시트레이트 인산염 완충액에 추가하고 30초 간격으로 pH 5.0으로 조정합니다. 빛을 피해 30분 동안 샘플을 배양합니다.

과산화효소와 오페닐렌디아민 반응을 중지하려면 각 웰에 하나의 일반 염산 500마이크로리터를 첨가합니다. 각 웰의 상등액을 큐벳으로 옮깁니다. UV 가시광선 분광 광도계를 사용하여 492나노미터에서 상등액의 흡광도를 측정합니다.

젖산 탈수소효소 분석 키트를 20분 동안 해동합니다. 분석 키트가 해동되는 동안 혈소판 풍부 혈장을 얻기 위해 풀링된 성인 인간 혈장을 준비합니다. 혈소판이 풍부한 혈장을 준비하기 위해 원심분리기는 인간 혈장 샘플 튜브를 483G에서 해동하여 혈장을 두 영역으로 분리했습니다.

아래쪽 1/3에는 혈소판 풍부 혈장이 들어 있고 위쪽 2/3에는 혈소판 부족 혈장이 들어 있는지 확인합니다. 튜브 하단의 혈소판 펠릿과 혈소판 불량 혈장이 포함된 위쪽 2/3를 조심스럽게 제거합니다. 튜브를 흔들어 혈소판 펠릿을 상부 혈장으로 부드럽게 분산시킵니다.

테스트하기 전에 혈소판이 풍부한 혈장에 염화칼슘을 첨가하여 구연산염의 효과를 역전시킵니다. 다음으로, 섬유 매트 샘플을 500마이크로리터의 혈소판이 풍부한 혈장에서 섭씨 37도에서 90분 동안 배양합니다. 배양 후 샘플을 새 웰로 옮기고 PBS 용액으로 세 번 헹굽니다.

다시 샘플을 새 웰로 옮깁니다. 각 웰에 300마이크로리터의 PBS 용액과 10마이크로리터의 10X 용해 완충액을 추가합니다. 샘플을 45분 동안 배양한 다음 반응 혼합물 50마이크로리터를 각 웰에 추가하고 빛에서 30분 동안 배양합니다.

각 웰에 50마이크로리터의 염산을 첨가하여 반응을 중지합니다. 흡수된 혈소판의 용해물에서 젖산 탈수소효소 활성을 검출하려면 490나노미터 및 680나노미터에서 개발된 웰 용액의 광 흡수율을 측정합니다. 피브리노겐 오염은 코팅되지 않은 대조군에 비해 코딩된 PP-PDMS 섬유에서 크게 감소했습니다.

유동 조건이 없는 경우 PP-PDMS 섬유의 외부 번들과 내부 번들 사이의 피브리노겐 오염에는 큰 차이가 없었습니다. 24시간 PBS 유량 미만에서, 외부 및 내부 번들의 피브리노겐 오염은 낮게 유지되었으며 유의한 차이를 보이지 않았습니다. 혈소판 오염은 PP-PDMS 섬유의 외부 다발에서 내부 다발보다 더 높았으며 코팅되지 않은 대조군에서도 나타났습니다.

혈소판 오염은 흐름에 노출되지 않은 내부 번들로 인코딩된 PP-PDMS 섬유에 비해 외부 번들에서 훨씬 더 높았습니다. 24시간 PBS 흐름 하에서, 낮은 오염 수준으로 외부 번들과 내부 번들 간에 혈소판 오염에서 유의한 차이가 관찰되지 않았습니다.