Name: 박테리아 젤라티나제의 원스텝 추출 및 자이모그래피 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: 배우세요 Leptospira에서 활성 젤라티나제를 원스텝 추출하고 자이모그래피로 효소 활성을 확인하는 방법입니다. 이 프로토콜은 세균 막 단백질 분리의 어려움을 해결하여 병원성 연구와 바이오마커 발굴에 활용됩니다.

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<ol><li>Yue, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+the+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Biology of the extracellular matrix.</a> J Glaucoma. 23 (8 Suppl 1), S20-S23 (2014).</li>
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<li>Ambili, M., Jayasree, K., Sudhakaran, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((60K+gelatinase+involved+in+mammary+gland+involution+is+regulated+by+%CE%B2-oestradiol%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">60K gelatinase involved in mammary gland involution is regulated by β-oestradiol.</a> Biochim Biophys Acta. 1403 (3), 219-231 (1998).</li>
<li>Zhang, Y. -Z., Ran, L. -Y., Li, C. -Y., Chen, X. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity%2C+structures%2C+and+collagen-degrading+mechanisms+of+bacterial+collagenolytic+proteases%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Diversity, structures, and collagen-degrading mechanisms of bacterial collagenolytic proteases.</a> Appl Environ Microbiol. 81 (18), 6098-6107 (2015).</li>
<li>Duarte, A. S., Correia, A., Esteves, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+collagenases+-+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacterial collagenases - A review.</a> Crit Rev Microbiol. 42 (1), 106-126 (2016).</li>
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<li>Kum, S. L., Ho, J. C. S., Parikh, A. N., Liedberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphiphilic+membrane+environments+regulate+enzymatic+behaviors+of+Salmonella+outer+membrane+protease%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Bio+Med+Chem+Au%22%5BJournal%5D)">Amphiphilic membrane environments regulate enzymatic behaviors of Salmonella outer membrane protease.</a> ACS Bio Med Chem Au. 2 (1), 73-83 (2022).</li>
<li>Sarma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+proteome+analysis+shows+the+abundance+of+histidine+kinase+sensor+protein%2C+DNA+helicase%2C+putative+lipoprotein+containing+peptidase+M75+domain+and+peptidase+C39+domain+protein+in+Leptospira+interrogans+grown+in+EMJH+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Extracellular proteome analysis shows the abundance of histidine kinase sensor protein, DNA helicase, putative lipoprotein containing peptidase M75 domain and peptidase C39 domain protein in Leptospira interrogans grown in EMJH medium.</a> Pathogens. 10 (7), 852(2021).</li>
<li>Seddon, A. M., Curnow, P., Booth, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins%2C+lipids+and+detergents%3A+not+just+a+soap+opera%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins, lipids and detergents: not just a soap opera.</a> Biochim Biophys Acta. 1666 (1-2), 105-117 (2004).</li>
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<li>Lichtenberg, D., Ahyayauch, H., Alonso, A., Goñi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detergent+solubilization+of+lipid+bilayers%3A+a+balance+of+driving+forces%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Detergent solubilization of lipid bilayers: a balance of driving forces.</a> Trends Biochem Sci. 38 (2), 85-93 (2013).</li>
<li>Schägger, H., Cramer, W. A., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+molecular+masses+and+oligomeric+states+of+protein+complexes+by+blue+native+electrophoresis+and+isolation+of+membrane+protein+complexes+by+two-dimensional+native+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Analysis of molecular masses and oligomeric states of protein complexes by blue native electrophoresis and isolation of membrane protein complexes by two-dimensional native electrophoresis.</a> Anal Biochem. 217 (2), 220-230 (1994).</li>
<li>Schägger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+native+electrophoresis+for+isolation+of+membrane+protein+complexes+in+enzymatically+active+form%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Blue native electrophoresis for isolation of membrane protein complexes in enzymatically active form.</a> Anal Biochem. 199 (2), 223-231 (1991).</li>
<li>Zeug, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+microscopic+methods+for+the+neural+ECM+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Current microscopic methods for the neural ECM analysis.</a> Prog Brain Res. 214, 287-312 (2014).</li>
<li>Madathiparambil, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zymography+analysis+of+proteinase+activity+present+in+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A zymography analysis of proteinase activity present in Leptospira.</a> Curr Microbiol. 62 (3), 917-922 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>6-아미노카프로산드</td><td>머 크</td><td>A2504</td><td></td></tr><tr><td>아세트산</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 695092</td><td></td></tr><tr><td>아세톤</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 32201</td><td></td></tr><tr><td>아크릴아미드</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; A-3553</td><td></td></tr><tr><td>과황산암모늄</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; A-3678</td><td></td></tr><tr><td>비스 아크릴아미드</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; M7279</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 분획 V(BSA)</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; A-8022</td><td></td></tr><tr><td>브로모페놀 블루</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; B-8026</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>머 크</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>쿠마시 브릴리언트 블루</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>1.12553</td><td></td></tr><tr><td>데옥시콜레이트</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마-알드리치</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>엘링하우젠&ndash; 맥컬로&ndash; 존슨&ndash; 해리스(EMJH) 미디엄, 디프코</td><td>&nbsp; 디프코</td><td>&nbsp; 279410</td><td></td></tr><tr><td>젤라틴</td><td>머 크</td><td>지9382</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>머 크</td><td>지5516</td><td></td></tr><tr><td>글리신 G8790</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 지-8898</td><td></td></tr><tr><td>렙토스피라 인터로건스 혈청형 코펜하겐 균주 Fiocruz L1-130(ATCC BAA-1198)&nbsp;, ICMR-RMRC Portblair의 생물 저장소에서 유지 관리</td><td>ICMR-RMRC Port Blair의 생물 저장소에서 유지 관리</td><td></td><td>최적 성장 온도 30 &deg; C</td></tr><tr><td>염화마그네슘 M8266</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; M8266</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 17995-7</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>P4417&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 분리 도구</td><td>원더 웨들</td><td></td><td></td></tr><tr><td>회전자</td><td>열과학</td><td>파이버라이트 F15 8x50 사이</td><td></td></tr><tr><td>도데실 황산나트륨(SDS)</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; L-4396</td><td></td></tr><tr><td>테메드</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; T-9281</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마-알드리치</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>트리즈마 베이스(TRIS)&nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 티6066</td><td></td></tr></tbody></table>

박테리아 젤라티나제의 원스텝 추출 및 자이모그래피 분석

One-step Extraction and Zymographic Analysis of Bacterial Gelatinases

결과는 인간 혈청에서 렙토스피럴 단백질과 젤라티나제의 자이모그램을 보여줍니다. 그림 1에 표시된 결과는 프로테아제를 파란색 배경에 흰색 투명 밴드로 나타냅니다. 밴드는 공중합된 젤라틴이 분해되어 염색되지 않는 영역을 나타내는 반면, 전체 젤의 다른 영역은 젤라틴의 존재로 인해 파란색으로 염색됩니다. 또한, 젤라틴도 단백질임에도 불구하고 아크릴아미드와의 공중합으로 인해 전기영동에서 용출되지 않는다는 것을 보여준다. 이것은 공중합과 올바른 조성 및 중합을 위한 충분한 시간의 중요성을 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67291/67291fig01.jpg"> 
그림 1: 젤라티나제 활성을 보여주는 자이...

Proteinases of pathogenic bacteria contribute to invasion and pathogenesis by actively degrading the host's extracellular matrix (ECM) components and ...

one-step-extraction-and-zymographic-analysis-of-bacterial-gelatinases

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

우리는 2 차원 아가로 오스 겔 - 분석 UV 방사선 다음 발생하는 복제 중간체의 구조를 식별하는 데 사용될 수있는 절차를 제시한다.

에서 UV - 유도 복제 중간체의 시각화 E. 대장균 2 차원 아가로 오스 겔 - 분석을 사용하여

이 프로토콜은 문화 supernatants이나 체액의 매트릭스 metalloproteinases 검출을위한 활동 기반의 분석을 설명합니다.

Zymography의 기능 매트릭스 Metalloproteinases의 감지

분리 및 골격 근육 표현이 가장 풍부한 단백질의 신원을 확인하는 방법을 똑바로 앞으로 설정할 수 있습니다. 약 800 곳 10 MG 근육에서 2 차원 겔에 분별되며 이것은 성별 특정 단백질 표현의 결정을 허용합니다. 이러한 방법은 대부분의 조직에 상응하는 결과를 제공합니다.

Proteomics에서 골격근 성별 동종 이형

Google은 최근은 간단 세균 검출을위한 형광 분석 "을 믹스 앤 읽기"를 설정하는 데 적용할 수있는 형광 DNAzyme 프로브를 생성하기위한 새로운 접근 방식을보고했습니다. 이러한 특별한 유전자 프로브는이를 형광 신호 생성에 세균 검출을 번역 특정 세균에 의해 생산되는 원유 세포외 혼합물 (CEM)의 앞에서 발색단 - 수정의 DNA-RNA 키메라 기판의 절단을 catalyze. 이 보고서에서 우리는 "RFD-EC1"표시된 특정 DNAzyme 프로브는 모델 박테리아의 탐지를 위해 고용되는 핵심 실험 절차를...

형광 DNAzymes을 사용하여 박테리아의 탐지

우리는 invadopodia로 인한 매트릭스 저하를 시각화를위한 형광 젤라틴으로 코팅 현미경 coverslips를 생산을위한 원형 방법을 설명합니다. 사용 가능한 소프트웨어를 사용하여 전산 기술이 혼합 된 인구 내에 전체 미세 필드를 포함한 다세포 그룹에 대한 하나의 세포 매트릭스 proteolysis의 결과 수준을 정량화를 위해 제공됩니다.

단일 및 다세포 상황에서 Invadopodia로 인한 세포 외 기질 Proteolysis의 양적 측정

이 비디오에서는 생물학적 샘플 내의 단백질 분해 활성을 분석하기 위해 전기영동 기술인 자이모그래피를 수행합니다.

형광 펩타이드 자이모그래피: 자이모그램 겔에서 형광 기질을 사용하여 프로테아제 활성을 검출하는 수정된 기술

이 동영상은 세포 배양 상등액에 존재하는 기질 금속단백분해효소(MMP)의 활성을 평가하기 위한 자이모그래피 겔 전기영동 기술을 보여줍니다. 활성 MMP는 폴리아크릴아미드 겔에 내장된 MMP 특이적 기질을 분해하며, 이는 염색 후 어두운 염색된 배경에 대해 투명한 띠로 나타납니다.

Zymography Gel Electrophoresis: 효소 활성을 평가하여 기질 금속단백분해효소를 검출하는 전기영동 기법

Burkholderia의 속의 구성원은 임상 중요성 병원균이다. 우리는 기계적 중단하고 후속 단백질체 분석에 2-D 겔 전기 영동을 사용하여, 전체 박테리아 단백질을 추출하는 방법을 설명한다.

총 단백질 추출 및 2-D 겔 전기 영동 방법에 대한<em&gt; Burkholderia의</em&gt; 종

여기, 형광 펩 티 드 대신 네이티브 단백질 분해성 기판으로 사용 되는 수정 된 zymographic 기법에 대 한 자세한 프로토콜 선물이. 전기 이동 법 형광 펩 티 드 zymograms에 생물 학적 샘플의 이전 zymographic 기법 보다는 프로 테아의 광범위의 검색 수 있습니다.

형광 성 펩 티 드 Zymography에 의해 프로 테아 제 활동의 탐지

트레할로스 유사체는 바이오(테크노)논리 및 생물 의학 응용 분야에서 중요한 분자로 부상하고 있습니다. 트레할로스 유사체를 효소로 합성하고 정제하기 위한 최적화된 프로토콜은 간단하고 효율적이며 빠르고 환경 친화적입니다. 마이코박테리아 검출을 위한 프로브의 신속한 생산 및 관리에 대한 적용이 입증되었습니다.

빠른 한 단계 효소 합성 및 트레 할로 오스 유사체의 모든 수계 정화

배우세요 Leptospira에서 활성 젤라티나제를 원스텝 추출하고 자이모그래피로 효소 활성을 확인하는 방법입니다. 이 프로토콜은 세균 막 단백질 분리의 어려움을 해결하여 병원성 연구와 바이오마커 발굴에 활용됩니다.

박테리아 젤라티나제의 원스텝 추출 및 자이모그래피 분석

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