Name: Triton X-114 기반 분획 접근법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질 농축 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: 배우세요 Triton X-114 기반 분획법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질을 분리하고 고속 질량분석으로 바이러스 인자를 식별하는 방법입니다. 이 기술은 병원성 세균의 단백질 구조를 정밀하게 분석하여 신약 및 백신 개발에 활용됩니다.

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<li>Madathiparambil, M. G., Cattavarayane, S., Perumana, S. R., Manickam, G. D., Sehgal, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+46+kDa+gelatinase+on+the+outer+membrane+of+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Presence of 46 kDa gelatinase on the outer membrane of Leptospira.</a> Curr Microbiol. 62 (5), 1478-1482 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>아세트산</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 695092</td><td></td></tr><tr><td>아세톤</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 32201</td><td></td></tr><tr><td>아크릴아미드</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; A-3553</td><td></td></tr><tr><td>과황산암모늄</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; A-3678</td><td></td></tr><tr><td>저울</td><td>&nbsp; 시마두즈</td><td>&nbsp; Z741079</td><td></td></tr><tr><td>비스 아크릴아미드</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; M7279</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 분획 V(BSA)</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; A-8022</td><td></td></tr><tr><td>브로모페놀 블루</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; B-8026</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브(50mL)</td><td>타슨스</td><td>500020</td><td></td></tr><tr><td>캡이 있는 원뿔형 플라스크(150mL)</td><td>타슨스</td><td>431030</td><td></td></tr><tr><td>냉각 원심분리기</td><td>&nbsp; 에펜도르프</td><td>&nbsp; 5355316200</td><td></td></tr><tr><td>쿠마시 브릴리언트 블루</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>1.12553</td><td></td></tr><tr><td>암시야 현미경</td><td>&nbsp; 자이스</td><td>&nbsp; GmbH37081</td><td></td></tr><tr><td>섬세한 작업 와이프</td><td>김텍사이언스</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>건식 목욕</td><td>&nbsp; 에펜도르프</td><td>&nbsp; 535531620</td><td></td></tr><tr><td>엘링하우젠&ndash; 맥컬로&ndash; 존슨&ndash; 해리스(EMJH) 미디엄, 디프코</td><td>&nbsp; 디프코</td><td>&nbsp; 279410</td><td></td></tr><tr><td>젤 트레이: 젤 트레이는 치수가 최소 2cm 더 넓어야 하며 뚜껑이 있는 표면이 매끄럽고 평평해야 합니다.&nbsp;</td><td>&nbsp; 호퍼</td><td>&nbsp; 해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>유리 비크 (150mL)</td><td>타슨스</td><td>421030</td><td></td></tr><tr><td>글리신 G8790</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 지-8898</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon 블로팅 여과지</td><td>밀리포어</td><td>IBFP0813C</td><td></td></tr><tr><td>면역블롯 세미 드라이 셋업</td><td>&nbsp; 아타</td><td>&nbsp; AE-6675</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터 - 젤 트레이를 37°C에서 18시간 동안 배양합니다.</td><td>&nbsp; 아일라</td><td>&nbsp; SLI-700 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>층류 공기 흐름</td><td>&nbsp; 해당 없음</td><td>&nbsp; 해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>루미놀</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 09253</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 M8266</td><td>&nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; M8266</td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 교반기</td><td>&nbsp; 타슨스</td><td>&nbsp; 6040</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 17995-7</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 팁(10 & micro; L&ndash; 10 mL)</td><td>액시젠</td><td>T-10, T-200-C, T-1000-C, T-10ML-C</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫</td><td>&nbsp; 에펜도르프</td><td>&nbsp; EP2231300010</td><td></td></tr><tr><td>마이크로튜브(1.5mL Safe-Lock)</td><td>에펜도르프</td><td>EP022363212</td><td></td></tr><tr><td>미니 스핀</td><td>&nbsp; 제낙시</td><td>&nbsp; GEN-MINI-6K</td><td></td></tr><tr><td>다중 모드 리더</td><td>BMG 랩텍</td><td>&nbsp; S/N 413-3877</td><td></td></tr><tr><td>무지방 건조 우유, 소</td><td>시그마-알드리치</td><td>M7409</td><td></td></tr><tr><td>P-쿠마르산</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; C9008</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>P4417&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>냉장고</td><td>&nbsp; Lg 전자</td><td>&nbsp; GC-B217BLJ2</td><td></td></tr><tr><td>로커 - 젤을 염색하기 위한 저속의 로킹 또는 로터리 셰이커.</td><td>&nbsp; 타슨스</td><td>&nbsp; 4080</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE SETUP- 전기영동 장치</td><td>&nbsp; 호퍼, Inc.</td><td>&nbsp; SE300-10A-1.0</td><td>&nbsp; Hoefer 모델 ' 미니VE' 두께 1mm의 10cm x 8cm 크기의 젤을 주조할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>소금</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 5886</td><td></td></tr><tr><td>도데실 황산나트륨(SDS)</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; L-4396</td><td></td></tr><tr><td>테메드</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; T-9281</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-114</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>648468</td><td></td></tr><tr><td>트리즈마 베이스(TRIS) T6066</td><td>&nbsp; &nbsp; 시그마</td><td>&nbsp; 티6066</td><td></td></tr><tr><td>소용돌이</td><td>&nbsp; 타슨스</td><td>&nbsp; 3020</td><td></td></tr></tbody></table>

triton x-114 기반 분획 접근법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질 농축

Enriching Subcellular Proteins in Leptospira Using a Triton X-114-Based Fractionation Approach

이 실험에서 우리는 세포 내 구획을 추출하기 위해 스피로헤타 렙토스피라를 모델 유기체로 사용했습니다. 우리는 비이온성 세제인 Triton X-114의 효과를 활용하여 운점 및 임계 균사체 농도(CMC)에 고정된 전략적 방법론을 사용했습니다(그림 1). 더 진행하기 전에 단일 생물학적 복제에 대한 각 분획의 농도를 평가하기 위해 단백질 추정을 수행했습니다. 우리는 수성(A): 세제(D): 펠릿(P) 분획에서 3:1:1.3의 농도 비율을 관찰했으며, 이는 생물학적 복제의 각 배치에서 일관되게 관찰되었습니다. 각 Triton X-114 분획에서 추출한 단백질 샘플을 SDS-PAGE 분석에 적용한 후 면역블로팅을 수행하여 품질을 평가했습니다(그림 2). 우리는 면역블롯 분석에서 렙토스피라 의 LipL41 및 FlaB 단백질을 사용하여 다양한 세포 내 구획에 걸친 발현을 조사했습니다<sup class...

Triton X-114 기반 분획 접근법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질 농축

Prokaryotes lack precise subcellular organelles but exhibit distinct regions such as cytoplasm, inner membrane, periplasm, and outer membrane, where most ...

enriching-subcellular-proteins-leptospira-using-triton-x-114-based

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

질량 분석법 (APMS)와 함께 태그 단백질의 친 화성 정화는 단백질 상호 작용 네트워크의 체계적인지도 및 생물학적 과정의 기계론의 기초를 조사하기위한 강력한 방법입니다. 여기, 우리는 세균 용으로 개발 된 최적화 된 연속 펩타이드 친 화성 (SPA) APMS 절차를...

의 단백질 단지의 식별<em&gt; 대장균</em&gt; 직렬 질량 분석법과 함께 순차적 펩타이드의 동질 정화를 사용하여

우리는 TRUE와 FALSE 단백질 단백질 상호 작용을 구별하기 이전에 도입 된 QUICK (최저과 결합하여 정량 Immunoprecipitation) 접근 방식의 변화를 제시한다. 우리 접근 방식은...

을 바탕으로 단백질 - 단백질 상호 작용의 확인에 프로토콜<sup&gt; 15</sup&gt; N 신진 대사 라벨링, Immunoprecipitation, 수량 질량 분석법 및 선호도 변조

출처: Armbruster, KM, Meredith, TC 질량 분석법에 의한 구조 결정을 위한 박테리아 지단백질의 농축 및 N-말단 리포펩티드의 제조. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 온열 시 상 분리를 거치는 비이온성 세제를 사용하여 박테리아 지단백질을 농축하는 방법을 보여줍니다. 순차적인 온도 변화와 원심분리 단계를 통해 지단백질은 세제 상으로 선택적으로 분할되는 반면 비지단백질 오염 물질은 제거됩니다. 그런 다음 농축된 지단백질을 침전, 세척 및 다운스트림 응용 분야를 위해 재현탁됩니다.

비이온성 세제 상 분리를 사용한 박테리아 지단백질 농축

막 임베디드 단백질 도메인 간 상호 작용의 Biophysical 및 생화학 연구는 적절한 학습 자료를 얻는 첫 번째있는 많은 기술적 도전을 직면하고 있습니다. 이 문서는 솔루션을 핵 자기 공명 (NMR) 및 기타 분석 응용 프로그램의 구조 분석에 적합 이황화 - 안정화의 transmembrane의 펩타이드 복합체를 생산하고 정화를위한 프로토콜을 설명합니다.

구조 연구 생산 이황화 - 안정화 Transmembrane의 펩타이드 단지

생화학 적 방법은 막 단백질의 생체 내 단백질 - 단백질 상호 작용 (PPI)를 식별하기 위해 설명된다. 이 방법은 단백질 교차 결합, 친화력 정화 및 질량 분석을 결합하여 거의 모든 세포 유형이나 유기체에 적응할 수있다. 이 방법을 과도 프로톤 펌프 억제제의도 식별이 가능하게된다.

막 척추 : 막 단백질의 단백질 - 단백질 상호 작용을 식별 할 수있는 생화학 적 도구 생체

비 이온 계면 활성 제 단계 분할 메서드를 사용 하 여 세균성 단백질의 농축 TLR 분석 실험에 직접 사용 또는 다른 응용 프로그램에 대 한 설명 합니다. 추가 단계 구조 특성에 대 한 N 맨끝 tryptic lipopeptides를 준비 하는 질량 분석에 의해 자세히 나와 있습니다.

세균성 단백질 질량 분석에 의하여 구조 결심에 대 한 N 맨끝 Lipopeptides의 준비의 농축

기본 바인딩 파트너, 컨텍스트 및 x 선 형광 및 radiometal 통풍 관을 제시 하 여 기판 내용물의 생물 특성 periplasmic 전이 금속 보호자의 추출에 대 한 프로토콜.

그램 음성 박테리아에 필수 금속 통풍 관: 형광, Radioisotopes, x 선 및 세포 분별 법

이 프로토콜 cryo 전자 현미경 검사 법, 효율적으로 최소한의 노력 및 독성, 단백질 추출, 정화, 포유류 세포에 있는 유전자를 표현 하는 데 사용 되는 잠재 시스템을 포함 하 여 이온 채널 구조를 결정 하는 데 사용 하는 기법을 설명 합니다. 그리고 품질 검사, 샘플 그리드 준비 및 심사, 뿐만 아니라 데이터 수집 및 처리.

식 및 단일 입자 Cryo 전자 현미경 검사 법에 의하여 구조 결심에 대 한 인간의 지질 민감한 양이온 채널 TRPC3의 정화

여기, 우리는 작은 세포 외 소포 (EVs) 뇌와 종양 견본을 포함 하 여 전체 조직에서 분리 하는 상세한 프로토콜을 제공 합니다. 이 방법은 추가 다운스트림 분석에 대 한 단단한 조직에서 EVs를 추출 하는 재현 기법을 제공 합니다.

전체 조직에서 세포 외 Vesicles의 추출

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마이코박테리움 결핵 크기 배제 크로마토그래피를 통한 세포밖 소포 농축

이 프로토콜은 대장균에서 엘라스틴 유사 폴리펩타이드(ELP)를 정제하기 위한 빠르고 재현 가능한 유기 용매 기반 추출 및 침전 방법을 설명 하며, 기존 ELP 정제 방법에 대한 확장 가능한 대안을 제공합니다.

유기 용매 기반 추출 및 침전법을 이용한 대 장균 에서 엘라스틴 유사 폴리펩타이드(ELP)의 효율적 정제

배우세요 Triton X-114 기반 분획법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질을 분리하고 고속 질량분석으로 바이러스 인자를 식별하는 방법입니다. 이 기술은 병원성 세균의 단백질 구조를 정밀하게 분석하여 신약 및 백신 개발에 활용됩니다.

Triton X-114 기반 분획 접근법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질 농축

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