Name: Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow(갈바리골수에서 혈관 역학의 생체 내 종단 영상) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 학습하세요 갈바리골수 혈관 역학의 생체 내 종단 영상법으로 정상 및 병리적 조혈 과정에서 혈관 반응을 관찰하는 방법입니다. 이 기술은 암 생물학 및 재생의학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
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<li>Horton, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia+induced+by+MLL-ENL+is+cured+by+oncogene+ablation+despite+acquisition+of+complex+genetic+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia induced by MLL-ENL is cured by oncogene ablation despite acquisition of complex genetic abnormalities.</a> Blood. 113 (20), 4922-4929 (2009).</li>
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<li>Rosenhain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+micro-computed+tomography+database+including+3D+whole+body+organ+segmentations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">A preclinical micro-computed tomography database including 3D whole body organ segmentations.</a> Sci Data. 5, 180294(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>아미라</td><td>써모 사이언티픽TM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취</td><td></td><td></td><td>이소플루란 2% 내지 3%</td></tr><tr><td>마취 마스크(동물 감지)</td><td>미네르브</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취 장치</td><td>미네르브</td><td></td><td></td></tr><tr><td>나6. Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze</td><td>잭슨 연구소</td><td>MGI:3809523</td><td></td></tr><tr><td>칼바리아뷰</td><td>Ymetry</td><td>https://ymetry.com/site/head-fixation-implants/44-mouse-head-fixation-implant-for-calvaria.html</td><td></td></tr><tr><td>치과용 시멘트</td><td>켐덴트</td><td>선527</td><td></td></tr><tr><td>덱스트란 500 kDa-Cy5&nbsp;</td><td>테부바이오</td><td>DX500-S5-1 시리즈</td><td>3 mg/마우스</td></tr><tr><td>덱스트란 70 kDa-TRITC</td><td>시그마</td><td>티1162</td><td>3 mg/마우스</td></tr><tr><td>살균제</td><td>MP-라보</td><td>데르미딘-60ml</td><td></td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>에스큘라</td><td>이시스</td><td></td></tr><tr><td>아이젤</td><td>오크리젤</td><td>10g</td><td></td></tr><tr><td>피지&nbsp;</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>v 17 5월 30</td><td></td></tr><tr><td>Imaris와 연결되는 피지 연결</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>Imaris_Bridge96.jar ; ImarisBridgeUtils.jar</td><td></td></tr><tr><td>난방 상자&nbsp;</td><td>Dates및</td><td>서르마카지</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가열 패드</td><td>미네르브</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이미징 가열 패드 및 직장 탐침</td><td>F. 하어</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이마리스 v9.6.0</td><td>옥스포드 악기</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인트라사이트 젤</td><td>치녹시아</td><td>2390766</td><td></td></tr><tr><td>LAS AF 소프트웨어</td><td>라이카</td><td>라스 엑스 3.5.7.23225</td><td></td></tr><tr><td>약물 치료</td><td></td><td></td><td>부프리케어, 0.01 mg/kg</td></tr><tr><td>대물렌즈 HCX IRAPO L 25x/0.95 물</td><td>라이카</td><td>506374</td><td></td></tr><tr><td>식염수 완충액(PBS 1x)</td><td>시그마</td><td>P4417</td><td>오토클레이브로 멸균</td></tr><tr><td>SP8 다이브 팔콘 다광자 현미경&nbsp;</td><td>라이카</td><td></td><td></td></tr><tr><td>입체독성 마스크</td><td>미네르브</td><td>1201261</td><td></td></tr><tr><td>살균기 구슬</td><td>시그마</td><td>Z742555</td><td></td></tr><tr><td>수술 도구</td><td>모리아</td><td>4877ᅡ; 2183</td><td></td></tr><tr><td>생존 담요</td><td>보안 보호</td><td>11006</td><td></td></tr><tr><td>면봉 / 티슈</td><td></td><td></td><td>오토클레이브로 멸균</td></tr><tr><td>주사기 1mL 26g</td><td>BD Plastipak</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>온도 조절기</td><td>F. 하어</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Nes-EGFP)33Enik 마우스&nbsp;</td><td>잭슨 연구소</td><td>MGI:5523870</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Frut 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>MGI:3793852</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rha 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>MGI:3848982</td><td></td></tr><tr><td>초음파 젤&nbsp;</td><td>파커 연구소</td><td>아쿠아소닉 100</td><td></td></tr></tbody></table>

intravital longitudinal imaging of vascular dynamics in the calvarial bone marrow(갈바리골수에서 혈관 역학의 생체 내 종단 영상)

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow

그림 1과 그림 2에서 CAD 모델은 스캔한 쥐 두개골에 배치된 티타늄 머리 고정 임플란트의 모습을 보여주며, 이 임플란트는 두개골의 해부학적 구조를 따르도록 설계되었으며 현미경 스테이지에 단단히 고정할 수 있는 가볍고 생체 적합성 장치를 제공하여 세포 수준의 안정성을 보장합니다. 이 단계별 프로토콜을 따르면 임플란트가 마우스의 두개골에 안정적으로 부착되고 더브테일로 현미경 홀더에 단단히 고정될 수 있으므로 시간이 지남에 따라 액체 체류 및 생체 내 관찰을 위한 평평한 이미징 영역이 가능합니다. 상처의 손상이나 감염을 최소화하기 위해 덮개로 닫을 수 있어 몇 주에 걸쳐 동일한 조직 영역을 반복적으로 이미징할 수 있습니다. 머리 임플란트를 착용한 쥐는 깨어나면 자유롭게 돌아다니고, 먹이를 먹고, 규칙적인 일상을 보낼 수 있습니다.
그림 3은 세동맥, 전이 모세혈관 및 정현파를 포함한 이질적인 모세혈관으로 만들어진 갈바리 BM 혈관구조의 타일 스캔 보기를 보여줍니다. 혈관은 뼈 표면 및 혈관 주위 중간엽 세포와 밀접하게 접촉하는 복잡한 조직 미세환경에 내장되어 있습니다. 백혈병이 발병하는 동안, 혈관과 가까운 BM 미세환경 내에서 단일의 고립된 백혈병 세포를 검출할 수 있으며, 시간이 지남에 따라 생착이 증가하여 질병의 말기에 칼바리아를 채웁니다.
그림 4는 이 프로토콜로 얻은 이미지가 통계적 방법으로 분석할 수 있는 정량적 데이터를 제공하는 방법을 보여줍니다. IMARIS 필라멘트 도구로 혈관을 분할하고 혈관 조각의 길이와 직경, 직진도를 측정하는 방법을 보여줍니다. 이러한 매개변수의 상관 관계도 평가할 수 있습니다.
그림 5는 4일, 7일, 10일째에 AML 진행 중 골관절 BM의 두 가지 다른 위치에 대한 종단 이미징 획득을 보여주며, 10일째는 유세포 분석법을 통해 측정된 바와 같이 백혈병 세포와 BM의 ~50% 생착과 관련이 있습니다(표시되지 않음). 우리는 기존 혈관의 크기에 대한 중요한 리모델링뿐만 아니라 국소 뼈 손실과 관련된 특정 영역에서 새로운 혈관의 형성을 관찰할 수 있습니다.
마지막으로, 그림 6에서는 시간이 지남에 따라 다양한 혈관 장벽이 형광 염료를 유지하는 능력을 보여주는 타임 랩스 이미징을 통해 혈관 투과성을 동적 매개변수로 측정하는 방법을 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig01.jpg"> 
그림 1: 티타늄 기반 생체 적합성 헤드 홀더의 설계 및 생산. (A) 임플란트 현장 부품: 관찰 링 1개, 접합 기능 2개, 안정화 앵커 3개, 꼬리 4개, 더브테일 5개, 나사 구멍 6개, 브레그마 7개. (B) 헤드 임플란트와 홀더의 연결: 8 고정 본체, 9 클램프, 10 편심 레버, 11 구조, 12 현미경 대물렌즈. (C) 최대 변위가 0.04N 힘에 대해 0.23μm인 FEM 시뮬레이션에 의한 하중에 대한 임플란트의 변형. (D) 덮개와 그 나사를 보호합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig02.jpg"> 
그림 2: 생체 내 이미징을 위한 마우스 준비. (A) 이미징 전에 수술로 노출된 머리 임플란트와 이미징 영역의 모습. (B) 마우스의 두개골에 단단히 부착된 머리 임플란트. (C) 머리 임플란트의 덮개가 닫힌 회복 케이지에서 깨어 있는 쥐. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig03.jpg"> 
그림 3: 칼바리아 혈관 구조의 생체 내 이미징.(A) cdh5-DSRED로 표지된 칼바리아 혈관 구조의 타일 스캔 보기의 z-투영. (B) 그림으로 표시된 영역을 확대하여 화살표로, 세동맥은 빨간색 화살표로, 전이 모세혈관은 주황색 화살표로, 정현파는 노란색 화살표로 표시된 다양한 유형의 혈관을 설명합니다. (i) 및 (ii) X μm 조직의 z-돌기; (iii) 단일 조각. (C) 뼈 표면(SHG), 혈관 주위 세포(nes-GFP+) 및 혈관 내강(dextran-TRITC)을 보여주는 BM 혈관의 여러 시야의 단일 슬라이스. (D) AML 진행과 관련된 혈관 틈새. AML 개발의 초기(위) 및 후기(아래) 시점의 대표적인 조각입니다. MLL-AF9 백혈병은 tdTOMATO(빨간색 화살표)로 표시되며, 혈관은 pdgfb-GFP(녹색 화살표), 뼈 표면은 SHG, 대식세포는 노란색(자가형광, 노란색 별표)으로 표시됩니다. 스케일 바 = 200μm(A), 40μm(B, D-하단 패널), 50μm(C). 약어: BM = 골수; GFP = 녹색 형광 단백질; AML = 급성 골수성 백혈병; EC= 내피 세포. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig04.jpg"> 
그림 4: 혈관 매개변수 정량화. (A) TRITC-dextran으로 표지된 골수 혈관의 대표적인 z-투영에서 IMARIS 필라멘트 도구를 통한 혈관 매개변수 측정. 선과 원뿔 표현이 표시됩니다. (B) A에 표시된 이미지에서 용기 매개변수의 정량화. (C) 혈관 직진도와 길이 사이에 반대 상관관계를 보이는 혈관 매개변수 간의 상관관계(음수, Spearman r = -3523; p &lt; 0.0001; R2 = 0.2102) 대 직경(양수; 창병 r = 0.4110; 피 &lt; 0.0001; R2 = 0.1299)입니다. 스케일 바 = 100μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig05.jpg"> 
그림 5: AML 발달에 대한 칼바리아 BM의 두 가지 다른 위치에 대한 종단 영상. 혈관 내벽의 내피 세포는 cdh5-GFP, 뼈 표면은 SHG, 대식세포는 노란색(자가형광)으로 표지됩니다. 기존 선박의 개조 (빨간색 화살표) 및 새로운 선박의 형성 (노란색 화살표)이 표시됩니다. 스케일 바 = 100μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig06.jpg"> 
그림 6: 혈관 투과성. (A) IMARIS 표면 도구를 통한 혈관 투과성 측정 개략도. (B) 1시간 동안 세로로 이미지화된 동일한 영역의 Z-투영. (C) A에 표시된 면적 내 혈관 투과성의 정량화. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 S1: 준비된 두개골. 중앙분리대에서 calvaria에 접하는 축을 만든 다음 준비된 두개골을 저장합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_1_JoVE67332R1_screenfile5_prepared_skull.jpg" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 S2: 2mm 간격을 계획합니다. 두개골을 가로질러 균일한 간격(2mm 간격)의 평면 세트를 만드는 방법. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_2_JoVE67332R1_screenfile4_plans_2mm_spaced.jpg" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 S3: 관찰 가능한 표면 윤곽. calvarial plane에 스케치를 작성하고 AP +6.5에서 -2, AP 0.0에서 6mm 폭의 배 모양 스플라인을 작성합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_3_JoVE67332R1_screenfile3_Observable_Surface_Contour.jpg" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 S4: 관찰 빈도우. calvarial plane에 스케치를 작성하고 관찰 창에 연결되는 0.5mm 두께의 C 쉐이프를 그립니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_4_JoVE67332R1_screenfile1_1.4.1.jpg" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 S5: 새 연구를 클릭합니다. Simulation 탭(보이는 경우)으로 이동하거나 Simulation(시뮬레이션) | 공부하다. 스터디(Study) 대화 상자에서 스터디 유형으로 정적(Static)을 선택합니다. 확인을 클릭하여 새 검토를 작성합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_5_JoVE67332R1_screenfile2_clic_new_study.jpg" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 그림 S6: 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하여 메시를 생성합니다. 높은 응력 또는 변형이 예상되는 영역에서 메쉬를 미세 조정합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_6_JoVE67332R1_screenfile6_right_clic_create_mesh.jpg" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow(갈바리골수에서 혈관 역학의 생체 내 종단 영상)

Intravital longitudinal fluorescence microscopy imaging has emerged as a crucial technique for studying dynamic biological processes, notably in the ...

intravital-longitudinal-imaging-vascular-dynamics-calvarial-bone

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

pial 엑기스의 시간적 및 공간적 hemodynamic 및 염증성 이벤트를 따라 Intravital 현미경.

휴일 두개골 윈도우를 사용하여 마우스 뇌 엑기스의 Intravital 현미경

이 문서에서는, 우리는 수행하기 쉽고 이미지가 성인 마우스 뇌의 혈관 트리를 활용할 수 뇌혈관 캐스팅에 대한 간단한 실용적인 기술을 제시한다.

3D 이미징 및 형태학의 분석을위한 성인 마우스 뇌혈관 캐스팅

조혈 줄기 및 전구 세포 (HSPCs) 및 골수 틈새 시장 사이의 상호 작용의 본질은 제대로 이해된다. 맞춤형 하드웨어 변형 및 다단계 획득 프로토콜은 생체 화상 골수 영역 내에 홈 표지 HSPCs 추적 상호 작용과 움직임 이광자 및 공 초점 현미경의 사용을 허용한다.

성인 마우스 두개골 골수에서 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 4 차원 추적에서

단핵구는 선천성 면역의 핵심 조절자이며 말초 단핵 식세포 시스템의 재생과 염증의 경우에 중요한 역할을 합니다. 이 원고는 단핵구 동원 메커니즘을 연구하기 위해 마우스 칼바리아 골수를 실시간으로 이미징하는 절차를 설명합니다.

마우스 골수 단핵구를 추적<em&gt; 생체</em

자가 및 동종 골 이식의 주입은 주요 두개 안면 뼈 손실을 치료하는 방법을 받아 구성한다. 그러나 혈관 신생, 세포 분화 및 골 형성 간의 상호 작용에 그래프트 조성물의 효과는 불분명하다. 우리는 이식 근접에서 혈관 신생 골 형성의 상호 의존성을 규명하는 것을 목표로 멀티 모달 이미징 프로토콜을 제시한다.

컴퓨터 단층 촬영 및 골 형성 - 혈관 신생 커플 링의 광학 이미징 두개골 뼈자가 이식과 동종 이식 통합을 평가하기 위해

이 논문은 in vivo 및 ex vivo 이광자 현미경을 사용하여 뇌의 혈관 구조를 정량화할 수 있는 방법을 설명합니다.

HIV 유도 된 신경 염증의 마우스 모델에서 이광자 현미경을 사용하여 뇌 혈관 구조의 정량

이 원고는 세로 두 광자 현미경을 사용하여 생체 내에서 아밀로이드 플라크 축적 동안 cerebrovasculature의 리모델링을 추적하는 절차를 설명합니다. 얇아진 두개골 제제는 알츠하이머 질환의 마우스 모델에서 뇌 손상의 진행을 평가하기 위해, 형광 염료의 시각화를 가능하게한다.

종<em&gt; 생체</em&gt;은 Cerebrovasculature의 이미징 : CNS 질환에 관련성

이 기사의 목적은 마이크로 계산 된 단층 촬영 및 전체 선박 세그먼트에 대뇌 vasospasm을 계량 하는 데 사용할 수 있는 볼륨의 결정 후 마우스에서 뇌혈관 나무의 3 차원 재구성을 허용 하는 방법을 제시 하는 것입니다. 거미 막 밑 출혈의 murine 모델입니다.

거미 막 밑 출혈의 Murine 모델에 대뇌 Vasospasm의 정량화에 대 한 체적 메서드

우리는 여기에서 2개의 광자 현미경 검사를 사용하여 살아있는 마우스의 두개골 뼈의 골수에 있는 거대 karyocytes 및 proplatelet를 화상 진찰하는 방법을 설명합니다.

인 비보 마우스 두개골 골수에 있는 메가카르요세포와 프로플라틀의 2광화상

이 프로토콜은 마취마우스에 있는 가까운 혈관에서 백혈구 및 혈류 데이터를 심신하는 두뇌에서 형광 칼슘 심상을 취득하고 분석하는 단계를 제시합니다. 이러한 기술은 벽화 세포 생리학의 연구에 유용하며 모든 세포 유형의 칼슘 과도를 조사하기 위해 적응 할 수 있습니다.

생체 내 트랜스제닉 마우스의 뇌 성 구체 칼슘 및 혈역학 이미징

백혈구와 혈소판의 모집은 동맥 형성 동안 측부 동맥의 효과적인 성장에 필요한 필수 구성 요소를 구성합니다. 다광자 현미경은 동맥 형성 중 백혈구 모집 및 유출을 연구하기 위해 생체 내에서 높은 시공간 분해능과 더 적은 광독성으로 세포 역학을 추적하는 효율적인 도구입니다.

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징

학습하세요 갈바리골수 혈관 역학의 생체 내 종단 영상법으로 정상 및 병리적 조혈 과정에서 혈관 반응을 관찰하는 방법입니다. 이 기술은 암 생물학 및 재생의학 연구에 활용됩니다.

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow(갈바리골수에서 혈관 역학의 생체 내 종단 영상)

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