Name: 키토산/dsRNA 나노입자 전달을 통한 누에 Bombyx mori 의 유충 RNA 간섭 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 36 s
Description: 학습하세요 누에 유충에서 키토산/dsRNA 나노입자를 이용한 RNA 간섭 기법을. Bombyx mori를 대상으로 한 이 방법은 유전자 발현 조절 연구와 고효율 유전자 스크리닝에 활용됩니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>누에 유충의 유전자 침묵을 위한 나노입자 매개 dsRNA 섭식

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</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 원심분리 튜브</td><td>dsRNA 또는 나노 입자 반응을위한</td><td>Sangon</td><td>F601620</td></tr><tr><td>10 &mu; l 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>P13473G</td><td>액체</td></tr><tr><td>100 &mu를 흡입하거나 재현탁시킵니다. l 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>Q12115G</td><td>액체</td></tr><tr>2.5를 흡입하거나 재현탁시킵니다<td>. l 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>P20777G</td><td>액체를 흡입하거나 재현탁시키는</td></tr><tr><td>20 &mu; l 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>H19229E</td><td>액체를 흡입하거나 재현탁시키는</td></tr><tr><td>200 &mu; l 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>H20588E</td><td>액체를 흡인하거나 재현탁</td></tr><tr><td>6-well Clear TC 처리 다중 웰 플레이트</td><td>누에 사육을 위한</td><td>Costar</td><td>3516</td> 개별</tr><tr><td>아세트산</td><td>알라딘</td><td>A116165 TAE</td><td></td></tr><tr><td>Agarose M</td><td>BBI Life Sciences</td><td>A610013</td><td>아가로스 젤 전기영동</td></tr><tr><td>분석 저울</td><td>Sartorius</td><td>BSA224S</td><td>성분 무게를 줄이기 위해</td></tr><tr><td>원심분리기&nbsp;</td><td>Sartorius</td><td>Centrisart A-14C</td><td>는 dsRNA 또는 나노 입자를 형성하기 위해 원심 분리</td></tr>하고, <tr><td>키토산</td><td>시그마-알드리치</td><td>C3646</td>은 <td>나노 입자를 준비하기 위해 dsRNA와 결합하고</td></tr>, <tr><td>EDTA</td><td>상곤</td><td>A500895</td>는 <td>TAE를 만들기 위해</td></tr><tr><td>에탄올</td>을 만들거나, <td>알라딘을</td><td>TAE</td><td>를 만들기 위해 E130059하거나, dsRNA 침전</td></tr><tr><td>냉각기</td><td>지멘스</td><td>iQ300</td>은 <td>dsRNA를 저장하거나, 나노 입자</td></tr><tr><td>GoTaq Green Master Mix</td><td>Promega</td><td>M712</td><td>PCR</td></tr><tr><td>반응 GoTaq qPCR 마스터 믹스</td><td>Promega</td><td>A6002</td><td>qRT-PCR 반응</td></tr><tr><td>이소프로판올;</td>알라<td>딘</td><td>I112011</td><td>dsRNA 침전을 위한</td></tr><tr><td>NanoDrop 마이크로볼륨 UV-Vis 분광광도계</td><td>ThermoFisher</td><td>One</td><td>은 dsRNA pH 미터의 농도를 결정하기 위해</td></tr><tr><td></td><td>Sartorius</td><td>&nbsp; PB-10</td>은 <td>완충액을 준비합니다.</td></tr><tr><td>SanPrep Column PCR 제품 정제 키트</td><td>Sangon</td><td>B518141</td><td>PCR 제품 정제를 위한</td>아</tr>세트<tr><td>산 나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td>는 100 mM 아세테이트 나트륨 버퍼를 만듭니다</td></tr>. 황<tr><td>산나트륨</td>;<td>Sigma-Aldrich</td>는 <td>100 mM 황산나트륨 완충액</td>T7을 만드는 <td>데 239313</td></tr>. <tr><td>RiboMAX Express RNAi 시스템을</td> 만드는 데 도움이 되는 <td>시스템 Promega</td><td>P1700</td><td>은 dsRNA 합성을 위한</td></tr><tr><td>것이고, ThermoMixer</td><td>Eppendorf</td><td>C</td><td>는 dsRNA 생성 또는 나노 입자를 가열하는 데 사용</td></tr>하며<tr><td>, Tris</td><td>Sangon은</td><td>TAE</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td>를 만드는 데 A501492;<td>키토산/dsRNA 나노입자를 제조하기 위한</td> <td>IKA</td><td>Vortex 3</td></tr></tbody></table>

키토산/dsrna 나노입자 전달을 통한 누에 bombyx mori 의 유충 rna 간섭

Larval RNA Interference in Silkworm Bombyx mori through Chitosan/dsRNA Nanoparticle Delivery

RNAi 효율성을 평가하기 위해 BmToll9-2 를 표적으로 하는 면역 유전자를 분석 대상으로 선택했습니다. BmToll9-2 유전자는 실험실에서 잘 규명되어 있으며, dsRNA 주입에 의한 유전자 침묵은 최근 간행물20에서 더 가볍고 작은 유충을 생성합니다. 키토산/dsRNA 나노입자를 통한 섭취에 의한 RNAi 효능을 확인하기 위해 키토산 나노입자를 대조군으로 사용하고 naked dsRNA를 동시에 비교했습니다.
대조군과 비교하여 dsRNA가 없는 키토산 나노입자, BmToll9-2 유전자를 표적으로 하는 naked dsRNA는 침묵 효과가 나타나지 않습니다. 누에에 키토산/dsRNA 나노입자를 공급하면 79%의 녹다운으로 전사체를 크게 억제합니다(그림 1). 상대적 전사체의 억제는 BmToll9-2 유전자가 키토산/dsRNA 섭취를 통해 성공적으로 침묵되었음을 나타냅니다.
BmToll9-2 유전자의 녹다운은 누에의 성장에 큰 영향을 미칩니다. 유충을 관찰할 때 BmToll9-2-silenced 유충은 대조군 유충보다 작습니다(그림 2A). 누에고치를 비교할 때 BmToll9-2-silenced 누에고치도 더 작습니다(그림 2B). 키토산/dsRNA 나노입자는 누에의 전사체와 표현형 모두에서 성공적인 RNAi 효과를 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67360/67360fig01v2.jpg"> 그림 1: B. mori 5번째 인스타 유충에서 키토산/dsBmToll9-2 나노입자 섭취 후 BmToll9-2의 상대적 전사체.키토산 나노입자를 대조군으로 공급한 유충에서 BmToll9-2의 상대적 mRNA 수준, naked dsRNA 및 키토산/dsRNA 나노입자. 데이터는 세 가지 생물학적 복제의 표준 편차 ± 의미로 표시되었습니다. 각 생물학적 복제에는 세 가지 기술적 복제가 있었습니다. 막대의 다른 문자는 일원 분산 분석을 기반으로 하는 유의한 차이를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67360/67360fig01largev2.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67360/67360fig02v2.jpg"> 그림 2: 키토산/dsBmToll9-2 나노입자로 공급한 후 표현형 관찰. 키토산 나노 입자는 대조군으로 사용됩니다. (A) 나노 입자 섭취 후 누에 유충의 모습. (B) 나노 입자 섭취 후 누에 고치의 모습. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67360/67360fig02largev2.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

키토산/dsRNA 나노입자 전달을 통한 누에 Bombyx mori 의 유충 RNA 간섭

The silkworm, Bombyx mori, is an important economic insect with thousands of years of history in China. Meanwhile, the silkworm is the model insect of ...

larval-rna-interference-silkworm-bombyx-mori-through-chitosandsrna

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

RNA 간섭 (RNAi의) 기반의 유전자 녹다운 기술은 Tribolium 연구의 핵심이다. 여기서 우리는 Tribolium의 castaneum 우리의 애벌레의 RNAi 기술에 대한 개요를 제공합니다. 애벌레의 RNAi 연구자들이 다양한 상황에서 유전자의 기능을 연구 할 수 있도록, 기능 상실 표현형에 대한 빠른 액세스를 제공하는 간단하지만 강력한 기술이다.

레드 밀가루 딱정벌레의 애벌레 RNA 간섭, Tribolium castaneum

여기서 우리는 유충 섭취 RNA 나노 입자 / 키토산의 사용을 통해 질병 벡터 모기 유전자 기능을 억제 간섭하는 절차를 설명한다.

질병 벡터 모기 유충의 키토산 / 간섭 RNA 나노 입자 중재 유전자 음소거

이 원고는의 리에 이중 가닥 RNA의 구강 섭취를 통해 독일 바퀴벌레는 midgut에 유전자 발현의 고갈 보여 줍니다.

RNA 방해의 실용적인 사용: Liposome 캐리어 바퀴벌레에 대 한 이중 가닥 RNA의 구두 납품

이 문서에는 RNA 간섭 (RNAi) 곤충 먹이 체 관 부 수액에 대 한 식물의 혈관 조직을 통해 이중 가닥 RNA (dsRNA)의 구두 납품을 위해 개발 된 새로운 기술을 보여 줍니다.

체 관 부 식물 수액 공급 Hemipteran 곤충에 RNA 간섭을 유도 하 이중 가닥 RNA 구두 전달 방법

RNA 간섭은 특정 발달 단계에서 유전자 발현을 조작하기 위한 널리 적용가능하고 강력한 기술입니다. 여기서, 우리는 수중 다이빙 딱정벌레 Thermonectus marmoratus에서이 기술을 구현하기 위한 필요한 단계를 기술합니다, 구조 또는 행동에 영향을 미치는 유전자의 녹다운에 유전자 의 취득에서.

특정 발달 시점에서 유전자 발현을 조작하기 위한 강력한 도구로 수생 딱정벌레의 RNA 간섭

이 프로토콜은 여러 리간드를 추적할 수 있는 다중화된 시험관 내 바이오센서로서 견고하고 생체적합성 DNA가 함유된 마이크로캡슐의 형성을 설명합니다.

RNA 압타머 및 리보스위치를 인코딩하는 DNA 플라스미드가 로딩된 다기능 실크 기반 마이크로캡슐의 제조

여기에서는 유전자 기능 연구를 용이하게하기 위해 Bursaphelenchus xylophilus 에서 RNA 간섭에 대한 상세한 담그는 방법을 소개합니다.

파인우드 선충류에서의 RNA 간섭의 적용, Bursaphelenchus xylophilus

RNA 간섭(RNAi)의 조작은 Trichogramma 말벌과 같이 크기가 작은 많은 기생충 종에서 만만치 않은 도전을 제시합니다. 이 연구는 Trichogramma denrolimi에서 효율적인 RNAi 방법을 설명했습니다. 본 방법론은 Trichogramma 말벌의 유전자 조절을 조사하기 위한 강력한 모델을 제공합니다.

계란 기생충의 RNA 간섭, Trichogramma dendrolimi Matsumura

이 문서에서 우리는 세번째 instar Drosophila의 유충에서 중추 신경계를 해부하다하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila Melanogaster에서 애벌레 CNS의 해부

이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.

Drosophila 애벌레 NMJ Immunohistochemistry

학습하세요 누에 유충에서 키토산/dsRNA 나노입자를 이용한 RNA 간섭 기법을. Bombyx mori를 대상으로 한 이 방법은 유전자 발현 조절 연구와 고효율 유전자 스크리닝에 활용됩니다.

키토산/dsRNA 나노입자 전달을 통한 누에 Bombyx mori 의 유충 RNA 간섭

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