Name: 아데노 관련 바이러스 혈청형 8(AAV8)로 전달되는 작은 헤어핀 RNA의 비장내 주입을 통한 간의 효율적인 유전자 녹다운 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: 배우세요 비장내 주사를 이용한 AAV8 매개 shRNA 전달로 간에서 효율적인 유전자 녹다운을 수행하는 방법을. 이 기술은 문맥 정맥 주사와 동등한 효율성을 보이면서도 합병증이 적고 절차가 간단합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>효율적이고 안전한 간 유전자 knockdown을 위한 Intrasplenic AAV8-shRNA 주입

<ol><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenome-wide+analysis+of+aging+effects+on+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Epigenome-wide analysis of aging effects on liver regeneration.</a> BMC Biol. 21 (1), 30(2023).</li>
<li>Jindal, A., Jagdish, R. K., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+regeneration+in+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Exp+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatic regeneration in cirrhosis.</a> J Clin Exp Hepatol. 12 (2), 603-616 (2022).</li>
<li>Meng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+deletion+reveals+an+essential+mechanism+that+maintains+the+genomic+stability+of+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin deletion reveals an essential mechanism that maintains the genomic stability of stem and progenitor cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (28), 11415-11420 (2013).</li>
<li>Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aav-mediated+liver-directed+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Aav-mediated liver-directed gene therapy.</a> Methods Mol Biol. 807, 141-157 (2011).</li>
<li>Tenney, R. M., Bell, C. L., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV8+capsid+variable+regions+at+the+two-fold+symmetry+axis+contribute+to+high+liver+transduction+by+mediating+nuclear+entry+and+capsid+uncoating%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">AAV8 capsid variable regions at the two-fold symmetry axis contribute to high liver transduction by mediating nuclear entry and capsid uncoating.</a> Virology. 454-455, 227-236 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y., Mckay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nucleolar+mechanism+controlling+cell+proliferation+in+stem+cells+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A nucleolar mechanism controlling cell proliferation in stem cells and cancer cells.</a> Genes Dev. 16 (23), 2991-3003 (2002).</li>
<li>Tsai, R. Y., Meng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin%3A+A+latecomer+with+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin: A latecomer with new tricks.</a> Int J Biochem Cell Biol. 41 (11), 2122-2124 (2009).</li>
<li>Zhu, Q., Yasumoto, H., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+delays+cellular+senescence+and+negatively+regulates+trf1+protein+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin delays cellular senescence and negatively regulates trf1 protein stability.</a> Mol Cell Biol. 26 (24), 9279-9290 (2006).</li>
<li>Qu, J., Bishop, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+maintains+self-renewal+of+embryonic+stem+cells+and+promotes+reprogramming+of+somatic+cells+to+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin maintains self-renewal of embryonic stem cells and promotes reprogramming of somatic cells to pluripotency.</a> J Cell Biol. 197 (6), 731-745 (2012).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Li, Y., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-initiating+function+of+nucleostemin-enriched+mammary+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor-initiating function of nucleostemin-enriched mammary tumor cells.</a> Cancer Res. 70 (22), 9444-9452 (2010).</li>
<li>Maki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+accumulation+of+nucleostemin+in+nucleolus+during+newt+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Rapid accumulation of nucleostemin in nucleolus during newt regeneration.</a> Dev Dyn. 236 (4), 941-950 (2007).</li>
<li>Siddiqi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+induction+of+nucleostemin+in+response+to+postnatal+growth+and+pathological+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Myocardial induction of nucleostemin in response to postnatal growth and pathological challenge.</a> Circ Res. 103 (1), 89-97 (2008).</li>
<li>Lin, T., Ibrahim, W., Peng, C. -Y., Finegold, M. J., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+of+nucleostemin+in+maintaining+the+genome+integrity+of+dividing+hepatocytes+during+mouse+liver+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A novel role of nucleostemin in maintaining the genome integrity of dividing hepatocytes during mouse liver development and regeneration.</a> Hepatology. 58 (6), 2176-2187 (2013).</li>
<li>Shugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+in+injury-induced+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin in injury-induced liver regeneration.</a> Stem Cells Dev. 21 (16), 3044-3054 (2012).</li>
<li>Lin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+reveals+a+dichotomous+nature+of+genome+maintenance+in+mammary+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin reveals a dichotomous nature of genome maintenance in mammary tumor progression.</a> Oncogene. 38 (20), 3919-3931 (2019).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+modulates+outcomes+of+hepatocellular+carcinoma+via+a+tumor+adaptive+mechanism+to+genomic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin modulates outcomes of hepatocellular carcinoma via a tumor adaptive mechanism to genomic stress.</a> Mol Cancer Res. 18 (5), 723-734 (2020).</li>
<li>Crawford, M., Liu, X., Cheng, Y. L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+upregulation+and+stat3+activation+as+early+events+in+oral+epithelial+dysplasia+progression+to+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin upregulation and stat3 activation as early events in oral epithelial dysplasia progression to squamous cell carcinoma.</a> Neoplasia. 23 (12), 1289-1299 (2021).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Wu, L. J., Pederson, T., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+and+gnl3l+exercise+distinct+functions+in+genome+protection+and+ribosome+synthesis%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin and gnl3l exercise distinct functions in genome protection and ribosome synthesis, respectively.</a> J Cell Sci. 127 (10), 2302-2312 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+self-renewal+against+genome+preservation+in+stem+cells%3A+How+do+they+manage+to+have+the+cake+and+eat+it+too%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Balancing self-renewal against genome preservation in stem cells: How do they manage to have the cake and eat it too.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (9), 1803-1823 (2016).</li>
<li>Meng, L., Hsu, J. K., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gnl3l+depletion+destabilizes+mdm2+and+induces+p53-dependent+G2%2Fm+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gnl3l depletion destabilizes mdm2 and induces p53-dependent G2/m arrest.</a> Oncogene. 30 (14), 1716-1726 (2011).</li>
<li>Huang, G., Meng, L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+configures+the+G2%2Fm+arrest+response+of+nucleostemin-deficient+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">P53 configures the G2/m arrest response of nucleostemin-deficient cells.</a> Cell Death Discov. 1, e15060(2015).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Wu, L. J., Trinh, B., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IMPDH+inhibition+decreases+TERT+expression+and+synergizes+the+cytotoxic+effect+of+chemotherapeutic+agents+in+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">IMPDH inhibition decreases TERT expression and synergizes the cytotoxic effect of chemotherapeutic agents in glioblastoma cells.</a> Int J Mol Sci. 25 (11), 5992(2024).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Li, F., Timchenko, N., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+a+stem+cell+factor+nucleostemin+in+liver+regeneration+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of a stem cell factor nucleostemin in liver regeneration and aging.</a> PLoS One. 19 (9), e0310219(2024).</li>
<li>Mayra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+AAV9-shRNA+inhibits+target+expression+in+neonatal+skeletal+and+cardiac+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal AAV9-shRNA inhibits target expression in neonatal skeletal and cardiac muscles.</a> Biochem Biophys Res Commun. 405 (2), 204-209 (2011).</li>
<li>Cohen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus-mediated+shRNA+knockdown+of+prodynorphin+in+the+rat+nucleus+accumbens+attenuates+depression-like+behavior+and+cocaine+locomotor+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Virus-mediated shRNA knockdown of prodynorphin in the rat nucleus accumbens attenuates depression-like behavior and cocaine locomotor sensitization.</a> PLoS One. 9 (5), e97216(2014).</li>
<li>Jeon, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topbp1+deficiency+causes+early+embryonic+lethality+and+induces+cellular+senescence+in+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Topbp1 deficiency causes early embryonic lethality and induces cellular senescence in primary cells.</a> J Biol Chem. 286 (7), 5414-5422 (2011).</li>
<li>Smith, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+expression+of+therapeutic+plasma+levels+of+human+factor+IX+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated expression of therapeutic plasma levels of human factor IX in mice.</a> Nat Genet. 5 (4), 397-402 (1993).</li>
<li>Nakai, H., Iwaki, Y., Kay, M. A., Couto, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+recombinant+adeno-associated+virus+vector-cellular+DNA+junctions+from+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of recombinant adeno-associated virus vector-cellular DNA junctions from mouse liver.</a> J Virol. 73 (7), 5438-5447 (1999).</li>
<li>Jung, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viral+vector-mediated+gene+transfer+results+in+long-term+enzymatic+and+functional+correction+in+multiple+organs+of+Fabry+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viral vector-mediated gene transfer results in long-term enzymatic and functional correction in multiple organs of Fabry mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (5), 2676-2681 (2001).</li>
<li>Hurford, R. K., Dranoff, G., Mulligan, R. C., Tepper, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+metastatic+cancer+by+in+vivo+retroviral+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of metastatic cancer by in vivo retroviral gene targeting.</a> Nat Genet. 10 (4), 430-435 (1995).</li>
<li>Sarkar, R., Xiao, W., Kazazian, H. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+adeno-associated+virus+%28AAV%29-murine+factor+viii+vector+partially+corrects+the+hemophilia+a+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">A single adeno-associated virus (AAV)-murine factor viii vector partially corrects the hemophilia a phenotype.</a> J Thromb Haemost. 1 (2), 220-226 (2003).</li>
<li>Czekaj, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+intrasplenic+administration+of+human+amniotic+epithelial+cells+in+order+to+perform+safe+and+effective+cell-based+therapy+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for intrasplenic administration of human amniotic epithelial cells in order to perform safe and effective cell-based therapy for liver diseases.</a> Stem Cell Rev Rep. 20 (6), 1599-1617 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amicon 필터 원심분리 장치</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>빠른 한외여과</td></tr><tr><td>AV5-siRNA-GFP&nbsp;</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#124972</td><td>플라스미드</td></tr><tr><td>유능한 DH5&알파; 박테리아&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>#18265-017</td><td>클로닝을 위한 화학적으로 유능한 균주&nbsp;</td></tr><tr><td>HpaI&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>R0105</td><td>제한 효소</td></tr><tr><td>iMFectin 형질감염 시약&nbsp;</td><td>GenDepot</td><td>I7100-101</td><td></td></tr><tr><td>M-MLV 역전사 효소&nbsp;</td><td>Promega</td><td>M1708</td><td>RNA 의존성 DNA 중합효소&nbsp;</td></tr><tr><td>MyiQ 단색 실시간 PCR 검출 시스템&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>BUN9740RAD</td><td>qRT-PCR</td></tr><tr><td>오메가 내독소 프리 키트&nbsp;</td><td>Bioteck</td><td>D6915-03</td><td>플라스미드 DNA 미디 준비&nbsp;</td></tr><tr><td>무작위 육량체&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>48190-011</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼믹스 SYBR 녹색 시약&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1708882</td><td>실시간 PCR 응용 분야</td></tr><tr><td>T4 DNA 리가제</td><td>Promega</td><td>M1801</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol 시약&nbsp;</td>Life <td>Technologies</td><td>15596-018</td><td>고품질 총 RNA</td></tr><tr><td>XhoI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0146</td><td>제한 효소</td></tr></tbody></table> 분리

아데노 관련 바이러스 혈청형 8(aav8)로 전달되는 작은 헤어핀 rna의 비장내 주입을 통한 간의 효율적인 유전자 녹다운

Efficient Gene Knockdown in the Liver via Intrasplenic Injection of Adeno-Associated Virus Serotype 8 (AAV8)-Delivered Small Hairpin RNA

intrasplenic vs. AAV8-shRNA의 문맥 주입 AAV8 바이러스 스톡을 밀리리터(gc/mL)당 2E+12 게놈 복제(gc)의 작업 농도로 희석했습니다. 개별 마우스에 1E+11 gc의 AAV8-shNS1 또는 AAV8-shScr(50 μL)을 비장 내 또는 문맥 주사를 통해 주입했습니다. 주사 2주 후, RNA 분리, 1st strand cDNA 합성 및 qPCR 분석을 위해 간 조직을 채취했습니다. 그 결과, 비장내 주입 방법은 Rsp3 및 Rplp0를 내부 기준으로 사용하여 문맥 주입 방법(16.3% ± 3.6%)과 통계적으로 동일한 NSKD 효율(20.8% ± 4.4%)을 달성한 것으로 나타났습니다(그림 2). 특히 비장내 주사 시술은 15분 이내에 완료되어 시술로 인한 사망이 거의 없는 반면, 문맥 주사 방법은 일반적으로 많은 연습으로 25-30분이 소요되며 더 높은 사망률(~25%-30% 사망률)과 관련이 있었습니다.
조직 염증 반응 AAV8-shScr(그림 3A) 또는 AAV8-shNS1(그림 3B)의 문맥 주사 또는 비장내 주사를 받은 마우스에서 간 조직을 수집하여 대조군 마우스(그림 3C)의 조직과 비교했습니다. 염증 반응은 H&amp;E 염색으로 검사했습니다4. 그 결과, AAV8-shScr과 AAV8-shNS1 모두 비장내 주사(Spl) 또는 문맥 주사(PV) 방법으로 주입된 PBS에 비해 간 실질에서 주목할 만한 염증 반응을 유발하지 않는 것으로 나타났습니다(그림 3A-C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig01.jpg"> 
그림 1: AAV8-shRNA 설계 및 비장내 주입 절차의 그림. (A) (위) in vivo knockdown 실험을 위해 아데노 관련 바이러스 혈청형 8(AAV8)을 만들도록 설계된 AV5-siRNA-GFP 플라스미드의 다이어그램. AV5-siRNA-GFP는 CMV promoter-driven shRNA sequence와 EGFP를 포함하고 있습니다. (아래) 마우스 NS(shNS1) 또는 스크램블된 21-뉴클레오티드 염기서열(Scr)에서 21-뉴클레오티드 염기서열을 표적화하도록 설계된 소형 헤어핀 RNAi 구조체입니다. (B) 비장내 AAV8 주입 절차의 개략적인 워크플로우 다이어그램. (C) 수술 절차의 단계적 견해. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig02.jpg"> 
그림 2: 비장내 주사와 문맥 주사를 통한 간에서 AAV8-shRNA 매개 뉴클레오스테민(NS)의 녹다운(knockdown)의 효율성. AAV8-shScr 또는 AAV8-shNS1(1E+11 gc)의 비장내(Spl) 또는 문맥(PV) 주사를 받은 후 2주에 마우스에서 채취한 간 샘플에서 NS 발현에 대한 qRT-PCR 분석. 그래프는 두 개의 내부 대조군 Rps3(A) 및 Rplp0(B)에 대한 결과를 보여줍니다. 막대는 4개의 생물학적 복제물의 평균 ± SEM을 보여주며, 각 복제에는 3개의 PCR 기술 반복이 있습니다. *P &lt; 0.01; **p &lt; 0.001; 피 &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig03.jpg"> 
그림 3: PBS, AAV8-shScr 또는 AAV8-shNS1의 비장내 주사 또는 문맥 주사 후 간 조직의 조직학. AAV8-shScr (A) 또는 AAV8-shNS1 (B)의 비장 내 주사 (Spl) 또는 문맥 주사 (PV) 후 2 주째에 간 조직의 H &amp; E 염색, 대조군 비 AAV8 주입 샘플 (C)과 비교. 눈금 막대 : 100 μm. 오른쪽 패널에는 왼쪽 패널에 있는 삽입의 확대 보기가 표시됩니다. 눈금 막대 : 50μm. 두 개의 다른 동물에서 6-9개의 섹션을 각 그룹에서 검사했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

아데노 관련 바이러스 혈청형 8(AAV8)로 전달되는 작은 헤어핀 RNA의 비장내 주입을 통한 간의 효율적인 유전자 녹다운

The liver is a major organ that performs essential metabolic functions. Developing an efficient and safe method to knock down gene expression in the liver ...

efficient-gene-knockdown-liver-via-intrasplenic-injection-adeno

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 문서에서는, 우리는 인간 간암 세포를 타겟팅하는 가장 효율적인 벡터로 adeno - 관련 바이러스 혈청형 3 (AAV3)의 신분증을 설명합니다.

재조합 Adeno - 관련 바이러스 혈청형 3 벡터에 의해 간암 세포의 고효율 전달

우리는 molecularly 유전자 가족 걸어갔다 통해 합성 Adeno-관련 바이러스 (AAV) 유전자 치료 벡터를 엔지니어이며 진화하는 기본적인 기법을 보여줍니다. 더욱이, 우리는 선택과 문화 혹은 생쥐의 표적 세포에 대한 향상된 특성을 가진 각각의 키메라 capsids의 분석을위한 일반 지침 및 대표 예제를 제공합니다.

유전자 가족 걸어갔다 통해 공학 및 합성 Adeno-관련 바이러스의 진화 (AAV) 유전자 치료 벡터

RNA 간섭 (RNAi)는 유전자 녹아웃 이상의 많은 장점을 보유하고 광범위하게 유전자 기능 연구의 도구로 사용되었습니다. DNA를 벡터 기반의 RNAi 기술의 발명은 장기적으로 가능한 inducible 유전자 최저했고, 또한 유전자 입을의 가능성을...

암 관련 유전자 기능을 연구하기 DNA를 벡터 기반의 RNA 간섭

이 동영상에서는 shRNA 렌티바이러스 벡터의 transduction을 수행하여 immortalized hematopoietic stem and progenitor cells (iHSPCs)에서 안정적인 knockdown cell line을 얻는 방법을 보여줍니다.

짧은 헤어핀 RNA 매개 유전자 knockdown in iHSPCs In vitro: 특정 유전자 발현의 Knockdown을 위해 iHSPC에 렌티바이러스 기반 shRNA 발현 시스템 전달

이 비디오에서는 새끼 쥐에서 재조합 아데노 관련 바이러스 기반 유전자 전달을 보여줍니다. 이 방법은 표적 세포의 유전자 발현을 연구하는 데 도움이 됩니다.

재조합 아데노 관련 바이러스 기반 유전자 전달: 설치류 모델에서 이식유전자 전달 및 심장 특이적 발현을 위한 기술

이 원고에서는 마우스 심장에서 유전자 발현을 조작하기 위해 재조합 아데노 관련 바이러스 9(rAAV9) 벡터를 준비하는 방법에 대해 설명합니다.

마우스 마음에서 과발현하는 rAAV9의 제조 또는 최저 유전자

여기는 신경 근육 학 질병 마우스 모델에서 재조합 형 adeno 관련 바이러스 serotype 9를 사용 하 여 예측에 관한의 배달에 설명 합니다. 쥐에서 단일 주변 관리 연구 미르 기능과 치료 가능성 비보수 있는 기회를 제공 하는 모터 신경 및 근육에 지속적인된 미르 overexpression 귀착되는.

설치류에 신경 근육 학 질병을 치료 하는 재조합 형 Adeno 관련 바이러스 Serotype 9를 사용 하 여 예측에 관한 체계적 전달

결장직장암(CRC) 오가노이드의 포털 정맥 주사는 스트로마가 풍부한 간 전이를 일으킨다. CRC 간 전이의 이러한 마우스 모델은 종양-스트로마 상호작용을 연구하고 아데노-관련 바이러스-매개 유전자 요법과 같은 신규한 스트로마-지시 치료제를 개발하는데 유용한 도구를 나타낸다.

간 전이 스트로마를 연구하기 위해 대장암 오가노이드의 포털 정맥 주사

여기에서는 성체 마우스에서 아데노 관련 바이러스(AAV)를 체계적으로 투여하기 위해 마우스 측면 꼬리 정맥 주입에 최적화된 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다. 또한 AAV transduction을 평가하기 위해 일반적으로 사용되는 분석 프로토콜에 대해 설명합니다.

성체 마우스에서 측면 꼬리 정맥 주입을 통한 아데노 관련 바이러스의 일관된 전달

이 보고서는 마우스 신장으로의 효과적이고 안전한 유전자 전달을 위해 신우 를 통한 AAV 벡터의 국소 주입 방법을 자세히 설명합니다.

아데노 관련 바이러스 벡터의 느린 역행 신골 주사 를 통한 마우스 신장에 효과적이고 안전한 유전자 전달

배우세요 비장내 주사를 이용한 AAV8 매개 shRNA 전달로 간에서 효율적인 유전자 녹다운을 수행하는 방법을. 이 기술은 문맥 정맥 주사와 동등한 효율성을 보이면서도 합병증이 적고 절차가 간단합니다.

아데노 관련 바이러스 혈청형 8(AAV8)로 전달되는 작은 헤어핀 RNA의 비장내 주입을 통한 간의 효율적인 유전자 녹다운

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