Name: 아가로 오스 겔 기반 Microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포의 운동성 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-11T02:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: 배우세요 아가로 오스 겔 기반 마이크로플루이딕 장치를 사용하여 EGF가 신경 줄기 세포 운동성에 미치는 영향을 연구하는 방법을. 이 기술은 재생 의학 연구에 활용될 수 있습니다.

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이 작품은 뉴욕주 과학의 사무실, 기술 및 학술 연구 (NYSTAR) (고급 기술 부여를위한 센터의 형태로)에 의해 및 Nanobiotechnology 센터 (NBTC), 국민의 STC 프로그램에서 교부금에 의해 지원됩니다 계약 번호 항법 - 9876771하에 과학 재단과 미국의 뇌종양 협회와 의학의 뉴욕 아카데미 (잽).

절차 fibronectin과 코팅 슬라이드 이전 microfluidic 장치의 조립에, fibronectin과 유리 슬라이드를 소독. 코트 biohood에서 슬라이드 불임을 유지합니다. 슬라이드의 가장자리를 따라 멸균 PDMS 스페이서를 정렬하고 영구 마커와 직면하고있는 측면을 표시합니다. 유리 슬라이드의 전체에 걸쳐 PDMS 스페이서 내부 fibronectin의 5 μg / ML 솔루션 (시그마)의 피펫 1 ML. 시간 동안 그대로 슬라이드를 남겨 후, 완전히 N 2 총을 사용하여 건조. 슬라이드는 나중에 실험 4 O C에서 저장할 수 있습니다. 장치를 조립 전체 장치 조립 프로토콜은 다음 절차를 사용하여 무균 조건 하에서 biohood에서 이루어집니다 : <ol><li> 70 % 에탄올로 닦고와 N 2 총을 들고 건조하여 그 위에 패턴 microchannels와 실리콘 마스터를 청소합니다. 마스터의 구제 기능 주변 집게를 사용하여 1mm 높이의 살균 PDMS 스페이서를 놓습니다. </li><li> 아가로 오스 분말 0.3 g (피셔 과학)와 CO의 10 ML 무게에 의해 장치에 사용되는 아가로 오스 겔의 준비 2 독립 미디어 (Invitrogen) 50 ML의 비커 인치 높이 20 초 동안 전자 레인지에 주걱 및 열로 혼합물을 저어. 소화 되 다만 과립이있는 경우, 또 다시 10 초 소용돌이 마지막으로 남아있는 과립을 없애기 위해 가열 혼합물에 대한 혼합물을 가열. 8초의 가열 시간과 과정을 반복한 다음 오초. </li><li> 신속 PDMS 스페이서 둘러싸인 실리콘 마스터에 아가로 오스 솔루션을 부어 즉시 멸균 유리 슬라이드와 아가로 오스의 혼합물을 커버. 보장하기 위해 약 2 분 동안 슬라이드 지속, 부드러운 압력을 적용하는 아가로 오스 PDMS 스페이서와 같은 상수 1mm 높이로 젤 것입니다. </li><li> 아가로 오스 젤 후, 실리콘 마스터와 슬라이드를 마주 아가로 오스 겔에서 microchannels과 fibronectin 코팅 유리 슬라이드로 전송에서 PDMS 스페이서와 패턴 아가로 오스 겔에서 껍질. 입구와 출구의 액세스에 대한 microchannels의 저수지 지역에 구멍을 펀치를 16 게이지 주사기의 끝부분을 사용합니다. microchannels의 건조를 방지하기 위해 슬라이드에있는 패턴 아가로 오스 겔에 CO 2 - 독립 미디어 500 μl를 추가합니다. </li><li> 70 % 에탄올로 장치에 사용되는 아크릴 매니폴드를 씻고 디 물로 헹굼. microchannels와 아가로 오스 겔에 펀치 구멍과 매니폴드에있는 구멍을 맞춥니다. 그런 다음, 젤, PDMS 스페이서 및 장치의 금속 프레임과 fibronectin 슬라이드와 매니폴드를 맞춥니다. 장치에 나사를 삽입하고 드라이버를 사용하여 저항의 지점으로 조입니다. 이것은 장치가 아가로 오스의 microchannels를 deforming의 범위 이상으로 강화되지 않도록하기위한 것입니다. 장치 내부의 젤 이동하지 않도록하기 위해 시계 방향으로 순서대로 나사를 조이십시오. 1ml 주사기를 사용하여 microchannels의 누출 및 폐색 장치를 테스트합니다. 주사기는 microchannels에서 CO 2 - 독립 미디어를 삽입하는 튜브의 끝에 젤 - 로딩 피펫 팁과 Tygon 튜빙가 장착되어 있습니다. microchannel은 미디어가 미디어가 해당 입구에 주입되었을 때에만 microchannel의 콘센트에서 종료 관찰되었을 때 성공적으로 형성 것으로 간주됩니다. 이제 장치를 사용할 준비가되었습니다. </li></ol> 장치에있는 세포를 준비하고 심는 세포 (100000 셀 / ML 주변의 세포 밀도) 70% confluency에 도달하면, 이들은 장치에 씨앗을 할 준비가되어 있습니다. 이 DPBS에 세포 제목 것은 (Invitrogen) 씻는다. 세포를 분리하는 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) (Invitrogen) 200 μl를 추가합니다. 트립신을 inactivate하는 혈청을 포함하는 M2 미디어 5ml를 포함한 15 ML의 원심 튜브에 세포를 전송합니다. 5 분 1,000 RPM에서 세포로 성장 미디어를 Centrifuged. 뜨는 떨어져 Aspirated 및 세포 펠릿 DPBS 5 ML을 resuspend. 동일한 조건에서 다시 DPBS 세포를 원심 분리기. 다시 뜨는에서 Aspirated 및 CO 500 μl 2 독립 매체 세포의 펠렛을 resuspend. 중력 중심 흐름을 통해 장치의 microchannel 센터에 씨앗 세포의 결과 정지합니다. 각각의 세포 현탁액의 60 μl와 CO 2 - 독립 매체 20 μl로 microchannel 중심의 입구와 콘센트를 추가합니다. 세포 점착 찾아 브라이트 현미경 아래 microchannel 센터를 관찰합니다. 세포는 보통 10 분 후에 준수. 세포는 적절한 밀도의 채널 하단을 준수 입구에 남아있는 세포 현탁액 및 콘센트에서 미디어를 pipeted. 후 센터 채널의 입구와 콘센트 모두 CO 장소 60 μl 2 - 독립 미디어. 장소 PDMS는 일 이상 커버E 센터 입구와 콘센트는 센터 채널에서 미디어의 증발을 최소화합니다. 이미징 장치에있는 세포 이전 장치의 조립, 현미경의 날씨 스테이션 (올림푸스 X81)을 통해 멸균 연동 튜브를 스레드와 연동 펌프 (왓슨 - 말로 205U/CA)와 연결합니다. 4 RPM의 속도로 튜브를 통해 PBS를 플러시. 장치의 조립 후 15 ML의 원심 분리기 튜브의 CO 2 - 독립 미디어에 표피 성장 인자 (EGF) (시그마) 솔루션의 적절한 농도를 준비합니다. 소용돌이 EGF 5 초 동안 솔루션과 튜브로 연결합니다. 장치에 해당하는 EGF의 농도로 표시된 tubings를 연결합니다. EGF는 채널 산등성이에 걸쳐 확산과 지속적인 화학적 기울기를 설정하는 것은 시간 정도 걸립니다. 이미징 소프트웨어, Slidebook는 실험 실행에 약 5 시간 10 분 간격에서 이미지의 설정을하는 데 사용됩니다. XY 자동 단계는 프로그래밍하는 것과 동일한 중심 채널, 3 채널 센터 총 두 개의 하위 영역 (400μm의 x400μm의 면적 각) 특정 시점에 몇 군데 있다고 이러한. 다른 센터 채널 (일반적으로 3 일 실행)에있는 세포로 튜브에 표시된 다른 EGF의 농도를했습니다. 재료 및 장비 셀 라인 : C17.2 세포는 출생 후의 마우스 소뇌 6, 7의 외부 새싹 계층에서 파생 NSCs 있습니다. 이 세포주를 사용하여, 우리는 레트로 바이러스의 transfection 방법을 사용하여 두 개의 다른 murine 줄기 세포 라인을 개발했습니다. 이 두 안정 transfected 세포 라인 (1) wtEGFR 있습니다 - 인간의 야생 유형 EGFR을 통해 - 표현되는, 그리고 (2) ΔEGFR - 그게 constitutively 적극적인 EGFR의 돌연변이이다. 검색의 용이성을 위해, retroviruses는 ribosomal 바인딩 (IRES)와 녹색 형광 단백질 (GFP)의 내부 사이트 다음의 이익을 유전자와 기개를 가지고 다니십시오. 세포 배양 : 마우스 C17.2 NSCs과 변종은 M2 미디어에 6 잘 플레이트 (10 % 태아 소 혈청 (FBS) (Invitrogen) 5 % 말 혈청 (HS) (Invitrogen과 DMEM (Invitrogen)에 성장했다 ), 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신 (Invitrogen).) 전지는 80 %를 공기와 5% CO 2 37 O C에서 유지되었다. Microfluidic 장치 : 플라스틱 매니폴드, PDMS 스페이서, 장소에 장치를 개최 스테인레스 프레임. 이미징 거꾸로 형광 현미경 (올림푸스 IX - 81)을 강화 CCD 카메라 (오카 하마 마츠)와 관련하여 사용됩니다. microfluidic 장치는 자동 XYZ 무대에 탑재되며, 무대는 37 O C의 온도를 유지 환경 챔버가 포함되어 있습니다 자동 XYZ 단계를 사용하여 같은 시점에서 촬영된 것입니다 동일한 칩에 3-4 장치는 일반적으로있다. 유지 흐름 8 병렬 라인 (왓슨 - 말로 205U/CA) 자동과 연동 펌프는 싱크 및 소스 채널의 모든 흐름을 유지하는 데 사용됩니다. <img src="/files/ftp_upload/old/674_2008_9_29_6/674_Figure-01.jpg" alt="그림 1" width="573" height="414" /> 그림. 다양한 EGF의 농도 세 NSC의 종자 1 운동성이 (친권, wtEGFR, 그리고 D EGFR) 모든 궤도 5 시간의 동영상 (wtEGF 100ng/ml, 사시간 제외) 추적에서 찍은, 모든 트랙의 기원이되었다 아르 비교 목적으로 (0,0)에서 치워버 렸어요. <img src="/files/ftp_upload/old/674_2008_9_29_7/674_Figure-02.jpg" alt="그림 2" width="576" height="546" /> 그림. EGFR의 발현 수준과 운동성 (A) 100ng/ml EGF와 microfluidic 채널의 표면에 wtEGF의 NSCs의 두 이미지 2 상관. 왼쪽 이미지는 형광 이미지이고, 오른쪽은 전송 명시야 이미지입니다. 스케일 바 100μm이며, 채널 폭 400 μm의 수 있습니다. 세포 표현 GFP의 밝기하여 두 집단으로 구분됩니다. 셀 파란 동그라미가 주차 아르에 따라서 적은 EGFR 표현 수준을 가지고, 그리고 빨간 동그라미에있는 세포 brigher 있으며, 따라서 높은 EGFR 발현 수준을합니다. 낮은 높은 EGFR 발현 레벨 셀 (B) 궤도. 이 궤도는 4 1 시간 동안 영화에서 가져옵니다.

<ol><li>Blow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics%3A+in+search+of+a+killer+application%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Microfluidics: in search of a killer application.</a> Nature Methods. 4, 665-670 (2007).</li>
<li>Shing-Yi Cheng, S. H., Wassweman, M. ax, Archer, S. hivaun, Shuler, M. ichael L., Wu, M. ingming <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hydrogel-based+microfluidic+device+for+the+studies+of+directed+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Lab-on-a-chip%22%5BJournal%5D)">A hydrogel-based microfluidic device for the studies of directed cell migration.</a> Lab-on-a-chip. 7, 763-769 (2007).</li>
<li>Pedersen, M. W., Tkach, V., Pedersen, N., Berezin, V., Poulsen, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+a+naturally+occurring+constitutively+active+variant+of+the+epidermal+growth+factor+receptor+in+mouse+fibroblasts+increases+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Expression of a naturally occurring constitutively active variant of the epidermal growth factor receptor in mouse fibroblasts increases motility.</a> Int J Cancer. 108, 643-653 (2004).</li>
<li>Ayuso-Sacido, A., Graham, C., Greenfield, J. P., Boockvar, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+duality+of+EGFR+signaling+and+neural+stem+cell+phenotype%3A+Cell+enhancer+or+cell+transformer%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Stem+Cell+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">The duality of EGFR signaling and neural stem cell phenotype: Cell enhancer or cell transformer.</a> Current Stem Cell Research and Therapy. 1, 231-238 (2006).</li>
<li>Eisenbach, M., Constantinou, C., Aloni, H., Shinitzky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repellents+for+Escherichia+coli+operate+neither+by+changing+membrane+fluidity+nor+by+being+sensed+by+periplasmic+receptors+during+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Repellents for Escherichia coli operate neither by changing membrane fluidity nor by being sensed by periplasmic receptors during chemotaxis.</a> J Bacteriol. 172, 5218-5224 (1990).</li>
<li>Snyder, E. Y., Deitcher, D. L., Walsh, C., Arnold-Aldea, S., Hartwieg, E. A., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+neural+cell+lines+can+engraft+and+participate+in+development+of+mouse+cerebellum%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multipotent neural cell lines can engraft and participate in development of mouse cerebellum.</a> Cell. 68, 33-51 (1992).</li>
<li>Snyder, E. Y., Yoon, C., Flax, J. D., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+neural+precursors+can+differentiate+toward+replacement+of+neurons+undergoing+targeted+apoptotic+degeneration+in+adult+mouse+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Multipotent neural precursors can differentiate toward replacement of neurons undergoing targeted apoptotic degeneration in adult mouse neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94, 11663-11668 (1997).</li>
</ol>

그림. 1 세 NSC의 변종, 부모 세포, wtEGFR 및 ΔEGFR (제어)의 탄도를 보여줍니다. 궤도의 각 세트는 5 시간 동안 영화에서 얻은되었습니다. EGF 농도가 ~ 10ng/ml 때 부모의 세포, 세포 운동성는 만족, wtEGFR 세포에 대해, 세포 운동성 피크가 100ng/ml 이상으로 이동, 예상대로 ΔEGFR 세포에서, 세포 운동성는 EGF 농도의 독립했다. 100ng/ml로 wtEGF 세포가 가장 운동성이있는 세포를했다, 그들은 빠르게 10ng/ml과 부모의 전지보다 약 1.5 시간을 옮겼습니다. 이것은 (1) EGFR의 표현을 통해 세포의 운동성 향상을 나타냅니다 (2) EGF 리간드 - 수용체 기다리는 이벤트의 숫자는 세포 운동성에 직접적인 영향을 미치고 있습니다. ΔEGFR 세포 라인 constitutively 적극적인 EGFR의 돌연변이이다. 이 돌연변이 인간 glioblastoma의 ~ 60 %에 나타납니다. 그것은 제정 활성 리간드 독립적인 키나제되고 잘립니다 세포외 도메인을했다. autophosphorylation의 강...

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X)</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>11971-025</td><td></td></tr><tr><td>CO2-독립 배지</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>18045-088</td><td>대기 조건에서 다양한 상피, 섬유아세포 및 림프구 세포주-의 성장을 지원하는 데 적합한 비-HEPES 독자적 배지로, L-glutamine을 포함하지 않음</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>14190-144</td><td>칼슘 또는 마그네슘이 포함되지 않은 인산염 완충 식염수</td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td>0.85% 식염수에 penicillin G (sodium salt) 및 streptomycin sulfate를 사용하여 penicillin (base) 10,000 units 및 streptomycin (base) 10,000 g/ml 포함</td></tr><tr><td>FBS</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td>검증된 소 태아 혈청</td></tr><tr><td>말 혈청</td><td>시약</td><td>Invitrogen</td><td>16050-130</td><td>EIA 테스트 완료(음성) 말 혈청</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0895</td><td>인간 혈장 유래 Fibronectin, cold insoluble globulin으로도 불림</td></tr><tr><td>EGF</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4127</td><td>마우스 하악선 유래 표피 성장 인자, 동결 건조물</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>시약</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1356-500</td><td></td></tr></tbody></table>

아가로 오스 겔 기반 microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포의 운동성 평가

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

microfluidic 기술 macromolecular의 assays를위한 성숙의 새로운 수준에 도달하는 동안 셀 기반의 assays은 유아 단계 1 아직 없습니다. 이것은 하나가 기존 microfabrication 기술과 재료를 사용하여 셀 - 호환 꾸준한 microenvironment를 만들 수있는 어려움에 크게 때문입니다. 우리는 microfluidic 장치의 기본 재료로, 소설 microfabrication 소재, 아가로 오스 겔의 도입을 통해이 문제를 해결합니다. 아가로 오스 겔은 셀 기반의 assays를위한 이상적인 소재 때문에 높은 가단, 가스 및 세포 생존에 필요한 영양분을 침투성이며,. 우리는 아가로 오스 겔 기반 장치 세균 및 호중구 세포 이주 2 공부에 성공했는지 이전에 나타났습니다. 이 보고서에서는 세 병렬 microfluidic 채널이 약 1mm 두께의 아가로 오스 겔 막에 패턴입니다. 미디어 / 버퍼 상수 흐름은 연동 펌프를 사용하여 두 개의 사이드 채널 유지하고 있습니다. 세포 관찰을위한 중앙 채널에 유지됩니다. 측면 채널에서 영양분과 화학 물질의 측면에서 중심 채널, 센터 채널의 화학적 환경에 지속적으로 diffusing 있기 때문에 쉽게 한쪽 채널을 따라 흐름을 통해 제어됩니다. 이 장치를 사용하여, 우리는 신경 줄기 세포의 움직임이 다양한 화학 조건 하에서 쉽게 광학 모니터링 수 입증하고, 실험 결과는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 이상의 표현이 신경 줄기 세포의 운동성 향상 것을 보여줍니다. 신경 줄기 세포의 운동성은, 따라서 tumorigenic 요인 3 세포의 공격성을 평가하기위한 중요한 biomarker입니다. NSC의 운동성을 기본 메커니즘을 파악하는 것은 신경 발달의 장애로 모두와 뇌 암 줄기 세포 침공에 대한 통찰력을 얻을 것입니다.

우리는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 이상의 표현은 소설 아가로 오스 겔 기반 microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포 (NSCs)의 운동성 향상 것을 보여줍니다. 이 기술은 인간의 신경 줄기 세포와 같은 세포 소스가 없어서 다른 포유 동물 세포 시스템에 쉽게 적응할 수 있으며, 시간을 주변의 차례가 중요합니다.

아가로 오스 겔 기반 Microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포의 운동성 평가

미세유체 기술이 거대분자 분석법에서는 새로운 수준의 성숙 단계에 도달하고 있는 반면, 세포 기반 분석법은 여전히 초기 단계에 머물러 있습니다1. 이는...

안녕하세요, 코넬 대학교 Biofluids Lab의 공학 석사 과정생인 Kevin won입니다. 오늘은 agros 기반 마이크로 유체 장치를 사용하여 EGF(상피세포 성장인자)가 Maureen 신경 줄기세포에 미치는 영향을 연구하는 방법에 대해 말씀드리겠습니다.이 장치는 기본적으로 각각 150 microns 너비의 3개 미세유체 채널로 구성됩니다. EGF는 측면 채널 중 하나로 펌핑되고, 버퍼는 다른 쪽 측면 채널로 펌핑됩니다. 이를 통해 중앙 채널을 가로지르는 정적인 선형 화학적 구배가 형성됩니다.EGF가 아가로스 겔을 통해 쉽게 확산되므로, 신경 줄기세포를 중앙 채널에 분주하고 현미경을 통해 세포의 이동 진행 과정을 모니터링합니다. 따라서 해당 장치는 기본적으로 튜빙 연결을 위한 모든 입구와 출구가 있는 플렉시글라스 상층부와, 그 아래에 4개의 패턴 장치가 포함된 아가로스 겔 막으로 구성됩니다.이는 PDMS 스페이서로 둘러싸여 있으며, 이를 통해 장치 전체에 걸쳐 일정한 두께가 유지됩니다. PDMS와 겔은 ect가 코팅된 유리 슬라이드 위에 조립됩니다. 이는 세포가 유리 슬라이드에 부착되도록 돕습니다.또한, 스테인리스강 플레이트는 장치 전체를 고정하는 데 사용되며, 나사를 이용해 장치를 함께 샌드위치 구조로 조립합니다. 야생형 세포주는 야생형 EGF 수용체를 과발현시키기 위해 레트로바이러스 벡터로 형질전환되었으며, 델타 세포주는 EGF 리간드 없이도 항상 활성화 상태를 유지하는 변이된 EGF 수용체 버전으로 형질전환되었습니다. 이제 저희 마이크로 유체 장치의 조립 과정에 대해 먼저 설명하겠습니다.먼저 마스터의 실리콘 마이크로 채널 릴리프 구조 주변에 PDMS 스페이서를 배치했습니다. 이제 agros 0.3 g을 정량하겠습니다. 이어서 CO2 독립 배지 10 mL를 취해 agros에 첨가하겠습니다.이제 파이펫팅을 통해 agros 분말과 CO2 독립 배지를 섞어주겠습니다. 이제 전자레인지에 넣을 준비가 되었습니다. 보시는 것처럼 agros가 액상화되었지만, 아직 몇 개의 알갱이가 남아 있습니다.알갱이를 녹이고 기포를 제거하기 위해 이를 부드럽게 돌려 섞어주겠습니다. 이제 용융된 agarose를 실리콘 마스터의 릴리프 구조 위에 붓고, 멸균된 유리 슬라이드를 가져와 PDMS 스페이서 위에 놓겠습니다. 이때 슬라이드를 비스듬히 놓아 agarose gel 내부의 기포 대부분을 밀어내어 제거합니다.압력을 가했으며, A

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

암 줄기 세포 이주를 조사하기위한 compartmentalizing 마이크로 유체 장치가 설명되어 있습니다. 이 소설 플랫폼은 가능한 세포 microenvironment를 생성 및 라이브 세포 운동의 미세 시각화 할 수 있습니다. 높은 운동성 암 세포는 잠재적으로보다 효과적인 미래의 치료로 이어지는 공격적인 침투 분자 메커니즘을 공부 절연되어 있습니다.

Compartmentalizing 마이크로 유체 장치와 라이브 세포 이미징을 사용하여 암 줄기 세포 마이그레이션 평가

이 프로토콜에서 우리는 galvanotaxis 동안 신경 전구체 세포 translocation을 얻은 성인 뇌의 시간 경과 영상을 사용하려면 직류 전기장의 응용 프로그램을 허용 사용자 정의 챔버를 구성하는 방법을 보여줍니다.

외부 응용 직류 전기 분야에 신경 전구체 세포 마이그레이션 속도론 분석을위한 Galvanotaxis 분석

출처: Scheidweiler, D. 외. 유체 장치와 현미경 및 유동 세포분석을 결합하여 공간적 규모를 넘어 다공성 배지 내 미생물 수송을 연구합니다. J. Vis. 경험 (2020).이 영상은 무작위로 배열된 기둥들로 구성된 다공성 매트릭스를 통해 박테리아의 운동성을 정량화하기 위해 마이크로플루이딕 장치를 사용하는 방법을 시연합니다. 형광 표지된 박테리아를 장치에 투입하고, 다공성 매트릭스를 통과해 관찰 채널로 이동하는 동안 현미경으로 영상화한 후 분석하여 돌파 곡선(BTC)을 생성합니다.

마이크로플루이딕 장치를 이용한 박테리아 운동성 평가

이 비디오는 현미경 분석을 통해 신경 전구체 세포의 이동 반응을 연구하기 위한 체외 분석인 신경 전구체 세포 신경구 이동 분석을 보여줍니다.

NPC Neurosphere Assay: 신경권에서 신경 전구 세포의 이동 반응을 평가하기 위한 In Vitro Assay

우리는 다양한 성장 인자의 존재 하에서 장용성 신경 능선 세포 이동 전위의 정확한 정량을 허용 생체 세포 이동 분석을 제시한다.

쥐과 장내 신경 전구 세포에 대한 양이 세포 이동의 분석

여기, 양적 측정 마이그레이션 및 시간이 지남에 조건 하에서 여러 치료 세포종 뇌 종양 줄기 세포의 내 습을 라이브 세포 이미징 기술을 설명 합니다.

라이브 셀 이미징 분석 실험 연구 세포종 뇌 종양 줄기 세포 이동과 내 습을

기계적 힘은 세포 이동을 제어하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 유리 마이크로파이펫 및 마이크로매니퓰레이터를 사용하여 변형될 수 있는 탄성 하이드로겔의 사용을 입증하여 세포 구조 및 이동의 변화를 유도하기 위해 국소 강성 구배를 가진 세포를 자극한다.

세포 운동 및 관련 신호 이벤트의 기계적 제어를 평가하기위한 단일 세포 Durotaxis 분석

우리는 3개의 간단한 시험관내 분석-장거리 이동 분석, 공동 배양 이동 분석, 및 화학-유도 분석-인간 줄기 세포 유래 의 기능을 집합적으로 평가하는 시험관 내 외 내피 세포 및 그들의 GABAergic 인터 뉴런과 상호 작용.

인간 줄기 세포 유래 내피 세포 및 GABAergic 뉴런에 대한 이동, 화학 적 매력 및 공동 배양 어세포

당사는 인간 원발성 메소포스트 유래 근투와 인간 유도만능 줄기 세포 유래 모터 뉴런을 공동 배양하여 상업적으로 이용 가능한 미세유체 장치에서 인간 모터 유닛을 생성하는 방법을 설명하며, 이로 인해 기능적으로 활성 신경 근육 접합이 형성된다.

미세 유체 장치에서 기능성 신경 근육 접합을 갖춘 인간 모터 유닛 생성

이 연구는 2차원(2D) 스크래치 상처 이동 분석 및 3차원(3D) 스페로이드 발아 분석과 함께 RNA 추출 및 면역세포화학을 포함한 각각의 다운스트림 분석 방법과 함께 in vitro 혈관 신생을 연구하는 데 적합한 분석법으로 제시합니다.

Scratch Wound Migration Assay와 Spheroid Sprouting Assay를 활용하여 기능적, 분자적 수준에서 혈관신생을 조사합니다.

과립 하이드로겔 내부 및 계면으로의 3D 세포 이동에 대한 정량적 평가를 위한 프로토콜이 여기에 제시되어 있습니다.

Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

배우세요 아가로 오스 겔 기반 마이크로플루이딕 장치를 사용하여 EGF가 신경 줄기 세포 운동성에 미치는 영향을 연구하는 방법을. 이 기술은 재생 의학 연구에 활용될 수 있습니다.

아가로 오스 겔 기반 Microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포의 운동성 평가

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