Name: 칼슘 이온 채널의 활성화를 연구하기 위한 Single-cell Calcium Imaging (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-13T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: 배우세요 단세포 칼슘 이미징 기법으로 Fura-2/AM 염료를 사용하여 실시간으로 세포 내 칼슘 이온 농도를 정량 모니터링하는 방법을 익히세요. 이 기술은 온도 및 통각 채널 연구에 효과적입니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>채널 활성화 연구를 위한 단세포 칼슘 이미징

<ol><li>Murthy, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+for+contraction+and+relaxation+in+smooth+muscle+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signaling for contraction and relaxation in smooth muscle of the gut.</a> Annu Rev Physiol. 68, 345-374 (2006).</li>
<li>Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+extracellular+fields+and+currents--eeg%2C+ecog%2C+lfp+and+spikes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The origin of extracellular fields and currents--eeg, ecog, lfp and spikes.</a> Nat Rev Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).</li>
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<li>Landstrom, A. P., Dobrev, D., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+cardiac+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and cardiac arrhythmias.</a> Circ Res. 120 (12), 1969-1993 (2017).</li>
<li>Zheng, C., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+deficiency+of+coagulation+factors+v+and+viii%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Combined deficiency of coagulation factors v and viii: An update.</a> Semin Thromb Hemost. 39 (6), 613-620 (2013).</li>
<li>Ahmadian Elmi, M., Motamed, N., Picard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analyses+of+the+g+protein-coupled+estrogen+receptor+gper1+reveal+constitutive+links+to+endoplasmic+reticulum%2C+glycosylation%2C+trafficking%2C+and+calcium+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Proteomic analyses of the g protein-coupled estrogen receptor gper1 reveal constitutive links to endoplasmic reticulum, glycosylation, trafficking, and calcium signaling.</a> Cells. 12 (21), 2571(2023).</li>
<li>Prakriya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orai1+is+an+essential+pore+subunit+of+the+crac+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Orai1 is an essential pore subunit of the crac channel.</a> Nature. 443 (7108), 230-233 (2006).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+A+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: A heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stim1+thermosensitivity+defines+the+optimal+preference+temperature+for+warm+sensation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Stim1 thermosensitivity defines the optimal preference temperature for warm sensation in mice.</a> Cell Res. 29 (2), 95-109 (2019).</li>
<li>Bharate, S. S., Bharate, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+thermoreceptor+trpm8+by+cooling+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modulation of thermoreceptor trpm8 by cooling compounds.</a> ACS Chem Neurosci. 3 (4), 248-267 (2012).</li>
<li>Coste, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo+proteins+are+pore-forming+subunits+of+mechanically+activated+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Piezo proteins are pore-forming subunits of mechanically activated channels.</a> Nature. 483 (7388), 176-181 (2012).</li>
<li>Behera, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+Ca2%2B+dynamics+using+a+ubiquitin-10+promoter-driven+yellow+cameleon+3.6+indicator+reveal+reliable+transgene+expression+and+differences+in+cytoplasmic+Ca2%2B+responses+in+arabidopsis+and+rice+%28oryza+sativa%29+roots%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Analyses of Ca2+ dynamics using a ubiquitin-10 promoter-driven yellow cameleon 3.6 indicator reveal reliable transgene expression and differences in cytoplasmic Ca2+ responses in arabidopsis and rice (oryza sativa) roots.</a> New Phytol. 206 (2), 751-760 (2015).</li>
<li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+ca%282%2B%29+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+analysis+of+stim1+thermal+sensation%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism analysis of stim1 thermal sensation.</a> Cells. 12 (22), 2613(2023).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATF6+safeguards+organelle+homeostasis+and+cellular+aging+in+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">ATF6 safeguards organelle homeostasis and cellular aging in human mesenchymal stem cells.</a> Cell Discov. 4, 2(2018).</li>
<li>Jiang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanosensitive+piezo1+channel+mediates+heart+mechano-chemo+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The mechanosensitive piezo1 channel mediates heart mechano-chemo transduction.</a> Nat Commun. 12 (1), 869(2021).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Orai1-mediated+store-operated+Ca%282%2B%29+channel%2Fcalpain+signaling+contributes+to+high+glucose-induced+podocyte+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced Orai1-mediated store-operated Ca(2+) channel/calpain signaling contributes to high glucose-induced podocyte injury.</a> J Biol Chem. 298 (6), 101990(2022).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+er+ion+homeostasis+maintained+by+an+er+anion+channel+clcc1+contributes+to+als-like+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Disruption of er ion homeostasis maintained by an er anion channel clcc1 contributes to als-like pathologies.</a> Cell Res. 33 (7), 497-515 (2023).</li>
<li>Gouin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trpv1+and+trpa1+in+cutaneous+neurogenic+and+chronic+inflammation%3A+Pro-inflammatory+response+induced+by+their+activation+and+their+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Trpv1 and trpa1 in cutaneous neurogenic and chronic inflammation: Pro-inflammatory response induced by their activation and their sensitization.</a> Protein Cell. 8 (9), 644-661 (2017).</li>
<li>Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+imaging+of+cortical+neurons+using+fura-2+am%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am.</a> J Vis Exp. (23), e1067(2009).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lever-like+transduction+pathway+for+long-distance+chemical-+and+mechano-gating+of+the+mechanosensitive+piezo1+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A lever-like transduction pathway for long-distance chemical- and mechano-gating of the mechanosensitive piezo1 channel.</a> Nat Commun. 9 (1), 1300(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>카메라</td><td>니콘</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Capsaicine</td><td>시그마</td><td>211275</td><td></td></tr><tr><td>CL-100 온도 컨트롤러</td><td>워너 인스트루먼트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>사이클로피아존산 (CPA)</td><td>시그마</td><td>C1530</td><td></td></tr><tr><td>DG-4 라이트</td><td>셔터 인스트루먼트 컴퍼니 디</td><td></td><td></td></tr><tr><td>메틸 설폭사이드 (DMSO)&nbsp;</td><td>Amresco</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermofisher 14190144</td><td></td><td></td></tr><tr><td>형광 이미징 소프트웨어(MetaFluor, 유료 소프트웨어)&nbsp;</td><td>분자 장치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fura-2/AM</td><td>Invitrogen</td><td>F1201</td><td></td></tr><tr><td>HBSS 버퍼</td><td>Gibco</td><td>14175103</td><td></td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 3000</td><td>Invitrogen</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>&nbsp; Beyotime</td><td>ST501</td><td></td></tr><tr><td>폴리-D-라이신</td><td>&nbsp; Beyotime</td><td>ST508</td><td></td></tr><tr><td>SC-20 액체 순환 가열/냉각 장치&nbsp;</td><td>하버드 장치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>백색광 소스</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

칼슘 이온 채널의 활성화를 연구하기 위한 single-cell calcium imaging

Single-Cell Calcium Imaging for Studying the Activation of Calcium Ion Channels

온도 반응 감지 
원발성 각질세포 1차 각질세포는 신생아에서 분리하고 확립된 프로토콜10에 따라 준비되었습니다. 이 세포는 유리 슬라이드를 포함하는 24웰 플레이트에 파종되었습니다. Fura-2 프로브를 로드한 후 그림 2A와 같이 세포 형태를 명확하게 시각화하기 위해 380nm 파장에서 현미경으로 초점을 조정했습니다. 프로세스 중에 프로브가 성공적으로 로드되지 않으면 셀이 표시되지 않습니다. 챔버 내의 세포외 완충액은 관류 시스템을 통해 지속적으로 교체되어 세포를 위한 최적의 조건을 보장했습니다. 온도 제어 시스템은 관류 시스템에 연결되어 세포 외 완충액의 온도 변화를 제어하여 세포 열 반응을 감지할 수 있었습니다. 이 과정에는 세포 외 완충액을 점차적으로 가열한 다음 점차적으로 냉각하는 작업이 포함되었습니다.
단일 세포 Ca2+ 이미징 시스템은 다양한 실험 조건에서 세포 내 Ca2+ 농도의 변화를 모니터링하는 데 사용되었습니다. 그림 2B에서 볼 수 있듯이, 각질 세포는 가열을 받았을 때 뚜렷한 열 반응을 보였을 뿐만 아니라 냉각 단계에서 눈에 띄는 반응을 보였습니다. 특히, 이 온도 반응은 주로 이 반응을 담당하는 STIM1 유전자가 삭제되었을 때 사라졌습니다(그림 2C)10. 단일 세포 Ca2+ 이미징을 통해 다양한 외부 자극에 대한 반응으로 세포 내 Ca2+ 농도의 변화를 실시간으로 관찰할 수 있어 세포 거동 및 신호 전달을 자세히 분석할 수 있습니다.
표적 플라스미드를 과발현하는 HEK293T세포 HEK293T 세포를 실험 방법에 따라 유리 슬라이드를 포함하는 24웰 플레이트에 파종했습니다. 그런 다음 세포를 STIM1/Orai1로 과발현하고 일차 세포에 대해 위에서 설명한 것과 동일한 방법을 사용하여 매개된 열 반응을 검출했습니다. 타겟 플라스미드를 과발현하는 세포의 경우, TRITC 또는 FITC 파장 하에서 플라스미드가 운반하는 적색 또는 녹색 형광 단백질에 의해 나타난 바와 같이 해당 플라스미드를 발현하는 세포를 선택하여 성공적인 transfection을 확인했습니다. 이 실험을 위해 STIM1-GFP/Orai1-DsRed 플라스미드를 사용했으며, GFP는 FITC에서 감지되어 녹색 형광을 방출하고, DsRed는 TRITC에서 감지되어 적색 형광을 방출했습니다. 빈 mCherry(TRITC)를 과발현하는 세포를 음성 대조군으로 사용했습니다. 그림 3A에서 볼 수 있듯이, FITC에서 관찰된 형광 세포는 STIM1의 성공적인 발현을 나타내어 가열 및 냉각 공정 중에 열 반응을 선택하고 기록할 수 있었습니다. 형질 주입되지 않은 세포는 음성 대조군 역할을 했습니다. 그림 3B 는 STIM1/Orai1이 그림 3C에 표시된 음의 대조군과 대조적으로 냉각 과정에서 상당한 열 반응을 보였음을 보여줍니다.
약물 반응 검출 Single-cell Ca2+ 이미징 기술을 사용하여 화합물에 대한 세포 반응을 검출할 수도 있습니다. 열 반응 검출을 위한 세포 준비는 전술한 것과 동일합니다. 약물 반응과 열 반응의 차이점은 열 반응은 일반적으로 관류 시스템을 통해 세포 외 완충액의 온도를 변화시켜 세포를 활성화해야 하는 반면, 화합물은 관류를 통해 또는 피펫을 사용하여 직접 첨가하여 투여할 수 있다는 사실에 있습니다. 피펫으로 직접 첨가하면 사용되는 화합물의 양을 효과적으로 절약 할 수 있습니다. 그러나 결과 곡선이 관류를 통해 얻은 곡선만큼 시각적으로 항상 매력적이지는 않을 수 있습니다.
그림 4를 예로 들면, 그림 4A는 STIM1/Orai1의 저장 작동 칼슘 진입(SOCE) 반응을 보여주며, 여기서 세포 외 Ca2+ 농도 및 시클로피아존산(CPA) 함량이 SOCE를 유도하기 위해 관류 시스템을 통해 순차적으로 변경됩니다. 그림 4B에서, TRPV1 작용제 캡사이신은 TRPV1 플라스미드를 과발현하는 세포에 피펫을 사용하여 직접 첨가됩니다. 캡사이신은 TRPV1을 활성화하고 세포외 Ca2+ 유입을 유도할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig01.jpg">
그림 1: Fura-2 AM의 개략도. Fura-2는 세포 생물학에서 일반적으로 사용되는 Ca2+ 형광 프로브로 Ca2+ 에 1:1 비율로 선택적으로 결합하여 형광을 방출합니다. 산성 화합물로서 극성이 높기 때문에 Fura-2는 세포에 들어갈 수 없습니다. 세포 투과성을 향상시키기 위해 음성 그룹에 아세톡시메틸(AM)과 결합하여 Fura-2/AM을 형성합니다. 이 변형은 에스테르 용해도를 증가시키고 음전하를 제거합니다. 세포 내부에서 Fura-2/AM은 에스테라아제에 의해 Fura-2로 가수분해되며, 이는 유리 세포질 Ca2+와 가역적으로 결합할 수 있습니다. 결합 시 최대 여기 파장은 380nm에서 340nm로 이동합니다(Ca2+로 포화된 경우). 방출된 형광 강도는 결합된 Ca2+의 농도와 정량적으로 관련됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig02.jpg"> 
그림 2: 원발성 각질세포의 온도 반응 감지. (A) 20x 대물렌즈에서 관찰된 신생아 마우스의 각질세포의 Fura-2 염색. (B,C) 단일 세포 Ca2+ 이미징 시스템을 사용한 WT 각질 세포(B) 및 STIM1 녹아웃 각질 세포(C)의 온도 반응. 배율: 20배. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig03.jpg"> 
그림 3: HEK293T 세포에서 과발현된 STIM1-GFP/Orai1-Dsred의 온도 반응 검출. (A) FITC하에서 STIM1-GFP를 발현하는 양성 세포를 보여주는 대표 그림. (B,C) 단일 세포 Ca2+ 이미징 시스템에 의해 검출된 각 플라스미드를 발현하는 HEK293T 세포의 온도 반응. 배율: 20배. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig04.jpg"> 
그림 4: 단일 세포 Ca2+ 이미징을 사용한 약물 반응 검출. (A) STIM1/Orai1을 과발현하는 HEK293T 세포의 SOCE 반응. 관류 시스템을 사용하여 세포외 완충액을 Ca2+ 함유에서 Ca2+ 함유로 변경합니다. Ca2+가 없는 경우 CPA를 추가하여 소포체에서 Ca2+ 를 고갈시킵니다. 그런 다음 세포외 완충액을 Ca2+ 함유 완충액으로 대체하여 세포 외 Ca2+ 유입을 유도하며, 이는 저장 작동 Ca2+ 진입을 나타냅니다. 단일 세포 Ca2+ 이미징은 이러한 과정에 의해 유도된 세포질 Ca2+ 농도의 변화를 동적으로 기록하는 데 사용됩니다. (B) TRPV1-mRuby를 과발현하는 HEK293T 세포(mRuby는 TRPV1 단백질의 형질주입 상태를 확인하는 데 사용되는 형광 단백질)입니다. Capsaicin은 피펫을 사용하여 첨가하고 Ca2+ 유입은 단일 세포 Ca2+ 이미징에 의해 기록됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

칼슘 이온 채널의 활성화를 연구하기 위한 Single-cell Calcium Imaging

Single cell Ca2+ imaging is essential for the study of Ca2+ channels activated by various stimulations like temperature, voltage, native compound and ...

single-cell-calcium-imaging-for-studying-activation-calcium-ion

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

의 연결을 네트워크를 개발 자발적인 활동은 칼슘에 민감한 지표 염료의 AM - 에스테르 양식을 사용하여 측정할 수 있습니다. 의 연결을 활성화를 나타내는 세포 내 칼슘의 변화는 하나 또는 두 개의 광자 이미징과 형광 표시기에 일시적 변화로 감지됩니다. 이 프로토콜은 발달 종속의 연결 네트워크의 범위에 대해 적용할 수...

두피 네트워크 개발에 기능성 칼슘 이미징

이 동영상은 칼슘 이미징의 개념을 소개하고 성형된 아가로스 웰에 포함된 벌레의 타임 랩스 이미징을 위한 예제 프로토콜을 포함합니다.

칼슘 이미징: 살아있는 예쁜꼬마선충의 신경 활동을 시각화하는 방법

작은 투명 몸, 잘 문서화 neuroanatomy 및 의무 유전자 기술과 시약의...

C.의 생체 Neuronal 칼슘 이미징에서 elegans

여기에서는 Ca2+ 지표가 로드된 온전한 포유류 세포에서 형광 현미경을 사용하여 로컬 IP3 매개 Ca2+ 이벤트를 이미징하는 기술과 이러한 이벤트의 식별 및 분석을 자동화하는 알고리즘을 제시합니다.

이미징 로컬 CA<sup&gt; 2 +</sup&gt; 배양 된 포유 동물 세포에서 신호

우리는 전체 셀 패치 클램프 기록 및 2 광자 이미징 급성 뇌 조각에 신경 모 수석에 캘리포니아2 + 과도 기록 하는 방법 제시.

두뇌 조각에서 신경 모 수석에서 2 광자 칼슘 이미지

여기 이미지 칼슘 murine neuromuscular 접속점에 개별 셀 종류의 인구에 있는 신호 프로토콜 선물이.

전 비보 마우스 다이어 프 램의 같은 시 냅 스에서 신호 세포 특정 칼슘의 이미징

세포 칼슘 이미징은 독특한 기능적 시그니처를 제공하는 칼슘 투과성 채널 / 수용체의 발현을 기반으로 개별 세포, 배양 또는 각성 동물의 혼합 집단에서 동적 신호 전달을 연구하는 다목적 방법론입니다.

칼슘 이미징 기술로 뉴런-글리아 회로의 변화 시각화

현재 방법은 쉽게 사용할 수 있는 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 사용하여 예쁜꼬마선충에서 생체 내 고해상도 하위 구획 칼슘 이미징을 위한 비비율계량 접근 방식을 설명합니다.

생체 내에서 처리되는 신경 칼슘의 세포 내 이미징

유전적으로 인코딩된 칼슘 지표(GECI)는 감각 뉴런 신호에 대한 강력한 집단 수준 분석을 가능하게 합니다. 여기에서 우리는 쥐의 삼차신경절 뉴런 활동의 생체 내 GECI 시각화를 가능하게 하는 새로운 접근 방식을 개발했습니다.

생체 내 쥐 삼차신경절(Rat Trigeminal Ganglion)의 감각 뉴런의 칼슘 이미징

여기에서는 형광 현미경을 사용하여 원발성 쥐 및 인간 T 세포에서 Ca2+ 마이크로도메인으로 알려진 초기 국소 Ca2+ 신호를 분석하기 위한 포괄적인 프로토콜을 제공합니다. 이 프로토콜은 면역 세포 내의 Ca2+ 신호 경로를 조사하고 그 기능을 더 자세히 밝히는 데 귀중한 리소스 역할을 합니다.

일차 T 세포에서 초기 Ca2+ 마이크로도메인 이미징

배우세요 단세포 칼슘 이미징 기법으로 Fura-2/AM 염료를 사용하여 실시간으로 세포 내 칼슘 이온 농도를 정량 모니터링하는 방법을 익히세요. 이 기술은 온도 및 통각 채널 연구에 효과적입니다.

칼슘 이온 채널의 활성화를 연구하기 위한 Single-cell Calcium Imaging

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