Name: Patch Clamp 기술에 의한 갓 분리된 기저 동맥 평활근 세포의 내부 정류 K+ 전류 기록 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: 배우세요 쥐 기저 동맥 평활근 세포 분리 및 전체 세 패치 클램프 기술을 이용한 내부 정류 K+ 전류 기록 방법. 이 기술은 심혈관 전기생리학 연구에 필수적인 이온 채널 활성 분석에 활용됩니다.

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<ol><li>Goins, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+body+functioning+and+correlates+among+older+american+indians%3A+The+cerebrovascular+disease+and+its+consequences+in+american+indians+study%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Geriatrics%22%5BJournal%5D)">Lower body functioning and correlates among older american indians: The cerebrovascular disease and its consequences in american indians study.</a> BMC Geriatrics. 18 (1), 1-9 (2018).</li>
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<li>Morales, A., Parry, P. V., Jadhav, A., Jovin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+route+of+revascularization+in+basilar+artery+occlusion+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Case+Reports%22%5BJournal%5D)">A novel route of revascularization in basilar artery occlusion and review of the literature.</a> BMJ Case Reports. , 1-6 (2015).</li>
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<li>Tykocki, N. R., Boerman, E. M., Jackson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+ion+channels+and+regulation+of+vascular+tone+in+resistance+arteries+and+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Compr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle ion channels and regulation of vascular tone in resistance arteries and arterioles.</a> Compr Physiol. 7 (2), 485-581 (2017).</li>
<li>Wu, B. -N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyposmotic+challenge+inhibits+inward+rectifying+K%2B+channels+in+cerebral+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hyposmotic challenge inhibits inward rectifying K+ channels in cerebral arterial smooth muscle cells.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (2), H1085-H1094 (2007).</li>
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<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luteolin-induced+coronary+arterial+relaxation+involves+activation+of+the+myocyte+voltage-gated+K%2B+channels+and+inward+rectifier+K%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Luteolin-induced coronary arterial relaxation involves activation of the myocyte voltage-gated K+ channels and inward rectifier K+ channels.</a> Life Sci. 221, 233-240 (2019).</li>
<li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+hypercontractility+to+acidosis+owes+to+the+greater+activity+of+tmem16a%2Fano1+in+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Coronary hypercontractility to acidosis owes to the greater activity of tmem16a/ano1 in the arterial smooth muscle cells.</a> Biomed Pharmacother. 139, 1-14 (2021).</li>
<li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apigenin+relaxes+rat+intrarenal+arteries%2C+depresses+Ca2%2B-activated+Cl%E2%88%92+currents+and+augments+voltage-dependent+K%2B+currents+of+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Apigenin relaxes rat intrarenal arteries, depresses Ca2+-activated Cl− currents and augments voltage-dependent K+ currents of the arterial smooth muscle cells.</a> Biomed Pharmacother. 115, 1-9 (2019).</li>
<li>Manz, K. M., Siemann, J. K., Mcmahon, D. G., Grueter, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamp+and+multi-electrode+array+electrophysiological+analysis+in+acute+mouse+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Patch-clamp and multi-electrode array electrophysiological analysis in acute mouse brain slices.</a> STAR Protocols. 2 (2), 1-30 (2021).</li>
<li>Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+patch-clamp+techniques+for+high-resolution+current+recording+from+cells+and+cell-free+membrane+patches%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches.</a> Pflugers Arch. 391 (2), 85-100 (1981).</li>
<li>Langton, P. D., Standen, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+currents+elicited+by+voltage+steps+and+steady+voltages+in+myocytes+isolated+from+the+rat+basilar+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium currents elicited by voltage steps and steady voltages in myocytes isolated from the rat basilar artery.</a> J Physiol. 469 (0), 535-548 (1993).</li>
<li>Kittiwoot, T. -O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+intrapulmonary+artery+and+smooth+muscle+cells+to+investigate+vascular+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of intrapulmonary artery and smooth muscle cells to investigate vascular responses.</a> J Vis Exp. (184), e63686(2022).</li>
<li>Trask, A. J., Lucchesi, P. A., Mccallinhart, P. E., Zhang, X., Husarek, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+coronary+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine coronary vascular smooth muscle cells.</a> J Vis Exp. 111, e53983(2016).</li>
<li>Ribeiro, M. P., Relvas, R., Chiquita, S., Correia, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+umbilical+arterial+smooth+muscle+cells+%28HUASMC%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human umbilical arterial smooth muscle cells (HUASMC).</a> J Vis Exp. (41), e1940(2010).</li>
<li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+inward+rectifier+K%2B+current+of+coronary+artery+smooth+muscle+cells+in+spontaneously+hypertensive+rats%3B+partial+compensation+of+the+attenuated+endothelium-dependent+relaxation+via+Ca2%2B-activated+K%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased inward rectifier K+ current of coronary artery smooth muscle cells in spontaneously hypertensive rats; partial compensation of the attenuated endothelium-dependent relaxation via Ca2+-activated K+ channels.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 47 (1), 38-48 (2019).</li>
<li>Qiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kir2.1+regulates+rat+smooth+muscle+cell+proliferation%2C+migration%2C+and+post-injury+carotid+neointimal+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Kir2.1 regulates rat smooth muscle cell proliferation, migration, and post-injury carotid neointimal formation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 477 (4), 774-780 (2016).</li>
<li>Tykocki, N. R., Bonev, A. D., Longden, T. A., Heppner, T. J., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+vascular+smooth+muscle+inward-rectifier+K%2Bchannels+restores+myogenic+tone+in+mouse+urinary+bladder+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of vascular smooth muscle inward-rectifier K+channels restores myogenic tone in mouse urinary bladder arterioles.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 312 (5), F836-F847 (2017).</li>
<li>Ko, E. A., Han, J., Jung, I. D., Park, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+roles+of+K%2B+channels+in+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Smooth+Muscle+Res%22%5BJournal%5D)">Physiological roles of K+ channels in vascular smooth muscle cells.</a> Smooth Muscle Res. 44 (2), 65-81 (2008).</li>
<li>Standen, N. B., Quayle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((K%2B+channel+modulation+in+arterial+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">K+ channel modulation in arterial smooth muscle.</a> Acta Physiol Scand. 164, 549-557 (1998).</li>
<li>Smith, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kir+channels+function+as+electrical+amplifiers+in+rat+vascular+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Kir channels function as electrical amplifiers in rat vascular smooth muscle.</a> J Physiol. 586 (4), 1147-1160 (2008).</li>
<li>Kanda, H., Tonomura, S., Dai, Y., Gu, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+pressure-clamped+patch-clamp+recording+at+the+node+of+Ranvier+of+rat+myelinated+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol for pressure-clamped patch-clamp recording at the node of Ranvier of rat myelinated nerves.</a> STAR Protocols. 2 (1), 1-12 (2021).</li>
<li>Witchel, H. J., Milnes, J. T., Mitcheson, J. S., Hancox, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Troubleshooting+problems+with+in+vitro+screening+of+drugs+for+qt+interval+prolongation+using+HERG+K%2B+channels+expressed+in+mammalian+cell+lines+and+Xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Troubleshooting problems with in vitro screening of drugs for qt interval prolongation using HERG K+ channels expressed in mammalian cell lines and Xenopus oocytes.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 48 (2), 65-80 (2002).</li>
<li>Kodandaramaiah, S. B., Franzesi, G. T., Chow, B. Y., Boyden, E. S., Forest, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+whole-cell+patch-clamp+electrophysiology+of+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated whole-cell patch-clamp electrophysiology of neurons in vivo.</a> Nat Methods. 9 (6), 585-587 (2012).</li>
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<li>Thomas, C., Svehla, L., Moffett, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+nitroprusside+induced+cyanide+toxicity+in+pediatric+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Saf%22%5BJournal%5D)">Sodium nitroprusside induced cyanide toxicity in pediatric patients.</a> Expert Opin Drug Saf. 8 (5), 599-602 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>시그마, 미국</td><td>B2064</td><td></td></tr><tr><td>염화 바륨</td><td>Macklin Biochemical Co., Ltd., 상하이, 중국</td><td>B861682</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A501330</td><td></td></tr><tr><td>Camera</td><td>Hamamatsu, Japan</td><td>C11440</td><td></td></tr><tr><td>카메라 소프트웨어</td><td>Image J, 미국</td><td>Micro-manager 2.0.0-감말</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 F</td><td>시그마, 미국</td><td>C7926</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 H</td><td>시그마, 미국</td><td>C8051</td><td></td></tr><tr><td>컴퓨터</td><td>레노버, 중국</td><td>~</td><td></td></tr><tr><td>데이터 수집 소프트웨어</td><td>분자 소자, 미국</td><td>Clampex 10.4</td><td></td></tr><tr><td>데이터 분석 소프트웨어</td><td>Axon, 미국</td><td>클램프핏 10.4</td><td></td></tr><tr><td>D-포도당</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A610219</td><td></td></tr><tr><td>디지털-아날로그 컨버터</td><td>Molecular Devices, USA</td><td>Axon digidata 1550B</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma, USA</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>드로잉 소프트웨어</td><td>미국 캘리포니아주 샌디에이고</td><td>GraphPad&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A600077</td><td></td></tr><tr><td>유리관</td><td>DL Naturegene Life Sciences.USA</td><td>B150-86-10</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China</td><td>S3872</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., 상하이, 중국</td><td>A100781</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot; 6H2O</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100288</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>sutter, 미국</td><td>MP285A</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette 풀러</td><td>sutter, 미국</td><td>P1000</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Olympus, 일본</td><td>IX73</td><td></td></tr><tr><td>Na2-ATP</td><td>Sigma, 미국</td><td>A26209</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., 상하이, 중국</td><td>A610404</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., 상하이, 중국</td><td>A100241</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., 상하이, 중국</td><td>A600878</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100865</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A100173</td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Sigma, USA</td><td>P4762</td><td></td></tr><tr><td>Potassium-D-gluconate</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A507810</td><td></td></tr><tr><td>신호 증폭기</td><td>Molecular Devices, 미국</td><td>Axon MutiClamp 700B</td><td></td></tr><tr><td>신호 증폭기 소프트웨어</td><td>Molecular Devices, 미국</td><td>MultiClamp Commander 소프트웨어</td><td></td></tr><tr><td>Sodium nitroprusside</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>A600867</td><td></td></tr><tr><td>통계 분석 소프트웨어</td><td>미국 캘리포니아주 샌디에이고</td><td>GraphPad&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

patch clamp 기술에 의한 갓 분리된 기저 동맥 평활근 세포의 내부 정류 k+ 전류 기록

Recording of Inward Rectifying K+ Currents in Freshly Isolated Basilar Artery Smooth Muscle Cells by Patch Clamp Technique

동맥 평활근 세포의 분리 절차의 첫 번째 섹션은 쥐의 대뇌 기저 동맥에서 평활근 세포를 분리하는 과정을 자세히 설명합니다. 이 프로세스는 그림 1에 설명되어 있습니다. 이 절차에는 동맥에서 평활근 세포를 방출하기 위한 효소 소화 및 세포 분리 단계가 포함됩니다.
분리된 평활근 세포의 대표 이미지 두 번째 섹션은 분리된 평활근 세포의 대표적인 다이어그램을 제시합니다. 그림 2 에는 방추형 평활근 세포의 명시야 이미지가 포함되어 있어 특징적인 모양에 따라 평활근 세포로서의 정체성을 확인할 수 있습니다.
전체 셀 패치 클램프 기술 세 번째 섹션에서는 갓 분리된 평활근 세포에서 Kir 전류를 기록하는 데 사용되는 전체 세포 패...

Patch Clamp 기술에 의한 갓 분리된 기저 동맥 평활근 세포의 내부 정류 K+ 전류 기록

Cerebrovascular disease is a prevalent condition among the elderly, with its incidence steadily rising. The basilar artery is a critical cerebral vessel ...

recording-inward-rectifying-k-currents-freshly-isolated-basilar

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이것은 Xenopus laevis oocytes에서 클​​램프의 녹음 패치에 대한 소개로서 것입니다. 그것은 vitelline 막 제거, gigaohm 인감 (gigaseal)의 형성, 그리고 외부 아웃 토폴로지에 패치의 선택 변환을 다룹니다.

Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음

압축시키는 것 / 확장시키는 반응 (압력 myography를 사용하여)의 측정 병렬 절연 동맥 근세포 (패치가 el​​ectrophysiological 기술 클램프 사용)에서 Kv7 (KCNQ) 칼륨 채널 활동의 측정은 혈관 평활근의 생리학에 Kv7 채널의 역할에 대한 중요한 정보를 공개 할 수 있습니다 약리학.

패치 클램프 전기 생리학 및 압력 Myography를 사용하여 간선 평활근 Kv7 칼륨 채널 기능을 탐색

이 동영상의 목적은 성인 zebrafish의 내부 귀 기관에서 건강 손상 세포를 획득하고 자신의 전압 개폐 채널의 biophysical 속성을 특성화하기위한 패치 클램프 연구를 위해 사용에 대한 절차를 설명하는 것입니다.

귀에 세포의 패치 클램프 녹음 절연 Zebrafish에서

이 비디오는 패치 클램프 기술을 사용하여 유변기저와 막 전위를 측정하고 증분 전류 주입에 대한 뉴런의 반응을 분석하여 등쪽 신경절의 감각 뉴런 흥분성을 검사하는 방법을 보여줍니다.

온전한 쥐 등쪽 뿌리 신경절에 대한 전체 세포 패치 클램프 기록

KV 채널 장애는 심장 arrhythmias과 연결되어 있습니다. 우리가 KV 채널 보조의 subunit의 녹아웃 마우스에서 심방과 심실 cardiomyocytes의 분리에 대한 체계적인 프로토콜을 활용 이러한 arrhythmias로 이어질 분자 메커니즘을 연구하기 위해. 절연 cardiomyocytes는 다음 즉시 세포 electrophysiological 연구, 생화학 또는 immunofluorescence (IF) assays에 사용하실 수 있습니다.

손쥐 심방과 심실 Cardiomyocytes의 절연 및 KV 채널 레코딩

우리는 세포 내 칼슘에 사용할 수있는 인간의 심방 근육 세포의 분리를...

칼슘의 동시 측정을위한 인간의 심방 근육 세포의 분리<sup&gt; 2 +</sup&gt; 과도하고 막 전류

여기에 설명하는 세포 부착 된 패치 클램프 기술로 하나의 이온 채널에서 현재 기록의 장기 복역을 얻기위한 절차입니다. 이 방법은 실시간으로 관찰을 허용, 생물학적 신호를 기초 개폐 채널 입체 형태의 패턴. 이 데이터는 그대로 생체막의 채널 특성에 대해 알려 드리겠습니다.

1 채널의 세포 부착 된 패치 클램프 녹음

이 원고는 패치 클램프 기록을 위해 온전한 등쪽 뿌리 신경절을 준비하는 방법을 설명합니다. 이 제제는 뉴런과 위성 신경교세포의 미세환경을 유지하여 해리된 DRG 뉴런에서 볼 수 있는 표현형 및 기능적 변화를 방지합니다.

성인 쥐에서 본래 등쪽 뿌리 신경절에 패치 클램프 녹음

이 프로토콜은 평면 장착 준비에서 망막 신경 세포에 전체 셀 패치 클램프 녹음을 수행하는 방법을 보여줍니다.

Deafferentated 마우스 망막의 플랫 마운트 준비에 별 모양 무 축삭 세포의 패치 클램프 녹음

이 프로토콜의 목적은 전단 응력에 의한 메카노민성 이온 채널의 실시간 활성화를 조사하는 데 사용하기 위해 변형된 병렬 플레이트 플로우 챔버를 설명하는 것이다.

잘 정의된 전단 응력 하에서 단세포 이온 전류의 전기 생리학적 기록

본 프로토콜은 전체 세포 패치 클램프 기술을 사용하여 H9c2 심근 세포에서 전압 게이트 칼륨 (Kv) 채널 전류의 실시간 및 동적 획득을위한 효율적인 방법을 설명합니다.

전체 세포 패치 클램프 기술을 통한 H9C2 심근 세포에 전압 의존적 칼륨 전류 기록

배우세요 쥐 기저 동맥 평활근 세포 분리 및 전체 세 패치 클램프 기술을 이용한 내부 정류 K+ 전류 기록 방법. 이 기술은 심혈관 전기생리학 연구에 필수적인 이온 채널 활성 분석에 활용됩니다.

Patch Clamp 기술에 의한 갓 분리된 기저 동맥 평활근 세포의 내부 정류 K⁺ 전류 기록

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