iChip 기술을 사용한 토양 미생물 분리

우리는 농업 병원균과 싸우기 위해 새로운 유형의 화학을 발견하려고 시도하고 있습니다. iChip 기술을 사용하여 새로운 유기체를 분리했으며, 이를 통해 새로운 화학을 개발할 수 있기를 바랍니다. 이러한 유기체 및/또는 천연 제품을 농업 병원균에 대해 테스트하면 잠재적으로 새로운 생물 살충제 후보 유기체 및/또는 화합물을 찾을 수 있습니다.

iChip 방법을 사용하면 가축화 기간 및 자연 환경과의 접촉을 제공하여 기존 조건에서는 배양할 수 없는 미생물을 격리할 수 있습니다. 당사의 수정된 iChip 빌드는 간단하고 저렴하며 미생물 오염 위험을 줄여 다양한 연구 목표에 쉽게 접근할 수 있습니다. 우리의 iChip 결과는 어떤 메커니즘이 새로운 미생물에 의한 병원체 억제를 주도하는지와 같은 질문을 열어줍니다.

이러한 생체 활성 화합물이 실제 실험에서 신뢰할 수 있는 성능을 발휘할 수 있습니까? 환경적 요인이 효능에 어떤 영향을 미칩니까? 이러한 질문에 답하는 것은 지속 가능한 생물 살충제 개발, 식물 질병 관리 혁신, 합성 살균제에 대한 의존도 감소로 이어질 것입니다.

이 연구소는 iChip 기술을 적용하여 덮개 작물을 통해 생성된 질병 억제 토양에서 새로운 박테리아를 분리하고 새로운 미생물과 생체 활성 화합물을 식별할 것입니다. 이는 농업 질병 관리를 위한 합성 살균제에 대한 혁신적이고 지속 가능한 대안을 개발하기 위해 통제된 식물 질병 연구에서 테스트될 것입니다. 5mm 한천 펀치 도구를 사용하여 수정된 iChip을 구성하려면 96웰 플레이트에서 웰 바닥을 제거합니다.

0.05마이크로미터 폴리카보네이트 멤브레인을 직사각형으로 절단하여 치수가 96웰 플레이트의 바닥 영역과 일치하도록 합니다. 폴리카보네이트 멤브레인을 96웰 플레이트의 바닥에 부착하기 위해 실리콘 실런트를 도포합니다. 접착제가 우물을 밀봉하지만 우물의 개구부를 완전히 덮지 않는지 확인하십시오.

접시를 24시간 동안 건조시킵니다. A에서 D로 표시된 15밀리리터 원심분리기 튜브 각각에 4.5밀리리터의 멸균수를 추가하고 E에서 H로 표시된 50밀리리터 튜브 각각에 50밀리리터 원심분리기 튜브에 1g의 흙을 추가합니다. 그런 다음 튜브에 물 10ml를 넣고 혼합물을 10분 동안 소용돌이칩니다.

토양 현탁액이 10분 동안 가라앉도록 합니다. 다음으로, 토양 상층액 0.5ml를 튜브 A에 피펫팅하고 완전히 혼합합니다. 이제 0.5ml의 세포 현탁액을 튜브 A에서 튜브 B로 옮기고 완전히 혼합합니다.

나머지 모든 원심분리기 튜브에 대해 반복하여 8개의 튜브에 걸쳐 일련의 10배 희석을 완료합니다. 시작하려면 iChip을 95% 에탄올에 완전히 담그십시오. 15분 후 에탄올에서 플레이트를 제거하고 층류 후드의 멸균 종이 타월에 놓습니다.

층류 후드의 자외선 살균기를 15분 동안 켜는 동안 에탄올이 증발하도록 합니다. 360마이크로리터의 멸균 숙시네이트 최소 염 또는 SMS 매체를 피펫으로 플레이트의 첫 번째 컬럼에 주입하여 대조군 역할을 합니다. 튜브 E.Mix의 세포 현탁액에 SMS 45ml를 철저히 첨가하여 세포 현탁액과 한천을 결합합니다.

360 마이크로리터의 한천 세포 혼합물을 96-웰 플레이트의 나머지 모든 웰에 피펫팅합니다. 미디어가 설정되면 PCR 플레이트 덮개로 플레이트 상단을 밀봉합니다. 튜브 F, G 및 H를 사용하여 플레이트를 채우고 농도가 10배 다른 총 4개의 플레이트를 준비합니다.

멤브레인 면이 아래를 향하도록 하여 약 1인치의 흙이 들어 있는 용기에 플레이트를 놓습니다. 섭씨 25도의 어둠 속에서 뚜껑이 덮인 용기 안의 플레이트를 배양합니다. 6주 후, iChips의 미생물 증식을 검사합니다.

개조된 iChip을 멸균수로 세 번 헹구어 모든 토양 미립자를 제거합니다. 반투막이 있는 면을 피하고 플레이트의 상단과 측면을 95% 에탄올로 닦습니다. 멸균 칼날을 사용하여 군체가 들어있는 우물 주위의 플레이트 덮개를 자르고 멸균 핀셋으로 사각형을 제거합니다.

멸균 줄무늬 도구를 사용하여 4 사분면 방법으로 군체와 줄무늬를 SMS 한천 플레이트에 뚫습니다. 섭씨 25도에서 일주일 동안 또는 군체 성장이 관찰될 때까지 플레이트를 배양합니다. 배양 후 군체를 검사하여 배양물의 격리를 확인하십시오.