구연산 흡입을 통한 기침 과민증을 가진 Mouse Model 구축

만성 기침은 삶의 질을 크게 손상시켜 압박적인 외모와 상당한 경제적 부담을 유발합니다. 우리는 기침의 지속성, 특히 기침 과민증의 기전에 중점을 둡니다. 우리는 기침 과민증이 있는 마우스 모델을 구축하여 만성 기침의 메커니즘에 대한 추가 연구에 사용될 것입니다. 다른 동물 모델, 특히 기니피그에 비해 유지 관리가 더 쉽고 비용 효율적이며 유전자 조작이 용이합니다. 우리의 프로토콜은 작동이 간단합니다. 모델을 대조하기가 더 쉽습니다. MA가 더 실현 가능합니다. 이 모델은 만성 기침의 메커니즘과 잠재적인 새로운 치료법에 대한 추가 연구에도 유용할 것입니다.

[해설자] 시작하려면 각각 초음파 분무기에 연결된 두 개의 독립적인 챔버에 마우스를 놓습니다. 모델 그룹을 0.1몰 구연산 에어로졸에 노출시키고 대조군을 0.9% 생리 식염수 에어로졸에 노출시킵니다. 분무 속도를 분당 3밀리리터의 최대값으로 설정하고 2주 동안 하루 2시간으로 노출을 조정합니다. 각 세션이 끝나면 마우스를 각자의 케이지로 되돌립니다. 기침 민감도를 측정하기 위해 비침습적 전신 혈량 측정 시스템을 설정합니다. 챔버, 유량 변환기, 바이어스 흐름 및 기타 구성 요소를 연결합니다. 정확한 측정을 보장하기 위해 Calibrate 버튼을 클릭하여 시스템을 교정합니다. 그런 다음 마우스용 시스템 소프트웨어에서 새로운 기침 연구를 만듭니다. 적응에 1분, 응답 시간에 10분, 화학 용액 전달에 10분을 허용하도록 연구 매개변수를 구성합니다. 그런 다음 의식이 있는 각 마우스를 개별 챔버에 배치하여 챔버당 하나의 마우스만 있도록 합니다. 그런 다음 생리 식염수, 구연산 또는 캡사이신과 같은 적절한 화학 용액 1밀리리터를 분무기에 추가하여 절차가 시작되면 기침 횟수를 기록합니다. 기도 과민성 측정을 위한 기기를 준비합니다. 마우스에 대한 시스템 소프트웨어에서 용량 반응 연구를 생성합니다. 측정 매개변수 및 작업 순서를 구성합니다. 적응 1분, 메타콜린 전달 30초, 반응 시간 3분, 회복 1분. 의식이 있는 각 마우스를 개별 챔버에 배치하여 챔버당 마우스 한 마리만 있도록 합니다. 그런 다음 50마이크로리터의 PBS 또는 메타콜린을 분무기에 추가하고 연구를 시작합니다. 메타콜린 농도 증가에 대한 반응으로 기관지 수축을 나타내는 Penh의 값을 기록합니다. 기침 민감도는 모델군에서 1주일 후 유의하게 증가했으며 노출 기간 내내 지속되었습니다. 연구 기간 동안 모델 또는 대조군 모두에서 사망률이 관찰되지 않았습니다. 노출 후 자발적인 기침 사건의 수는 대조군보다 모델군에서 유의하게 더 많았습니다. 생리 식염수, 구연산 및 캡사이신에 의해 유발된 기침 민감도도 노출 후 모델군에서 유의하게 더 높았습니다. 기도 과민성은 모델링 후 유의미한 차이 없이 두 그룹 간에 비슷하게 유지되었습니다. 시작하려면 안락사된 마우스의 안와동에서 혈액을 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브로 수집합니다. 튜브를 얼음 위에 놓고 혈액을 섭씨 4도에서 10분 동안 3000G에서 원심분리합니다. 피펫을 사용하여 상층액을 수집하고 분취합니다. 그런 다음 가슴을 열어 기관을 노출시키고 22게이지 유치 바늘을 기관에 삽입합니다. 0.5밀리리터의 예식된 PBS로 기관을 세 번 세척하고 기관지폐포 세척액을 수집합니다. 그런 다음 수집된 유체를 섭씨 4도에서 10분 동안 500G에서 원심분리합니다. 상청액을 채취하여 분취하여 섭씨 -80도에서 보관합니다. 펠릿을 100마이크로리터의 PBS에 다시 현탁합니다. 가슴을 열어 폐를 노출시키고 폐 조직을 조심스럽게 제거합니다. 수집된 폐 조직을 극저온 바이알에 넣습니다. 기관지폐포 세척액의 총 염증 세포 수와 차등 세포 수에서 그룹 간에 유의미한 차이가 관찰되지 않았습니다.