Name: 쥐의 망막하 주사 및 망막 박리에 대한 수술 중 시각화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: 학습하세요 쥐의 망막하 주사 및 망막 박리 수술 기법을 안과 현미경을 이용한 시각화로 정확하게 수행하는 방법을. 이 프로토콜은 재현성과 안전성을 높여 망막 퇴행성 질환 연구의 효율성을 보장합니다.

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<ol><li>Guymer, R. H., Campbell, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Lancet. 401 (10386), 1459-1472 (2023).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li>
<li>Cheung, N., Mitchell, P., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Lancet. 376 (9735), 124-136 (2010).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+death+and+rescue+in+retinal+detachment+and+degenerations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell death and rescue in retinal detachment and degenerations.</a> Prog Retin Eye Res. 37, 114-140 (2013).</li>
<li>Russell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+voretigene+neparvovec+%28AAV2-hRPE65v2%29+in+patients+with+RPE65-mediated+inherited+retinal+dystrophy%3A+A+randomised%2C+controlled%2C+open-label%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of voretigene neparvovec (AAV2-hRPE65v2) in patients with RPE65-mediated inherited retinal dystrophy: A randomised, controlled, open-label, phase 3 trial.</a> Lancet. 390, 849-860 (2017).</li>
<li>Gagliardi, G., Ben M'Barek, K., Goureau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+replacement+in+macular+degeneration+and+retinitis+pigmentosa%3A+A+pluripotent+stem+cell-based+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell replacement in macular degeneration and retinitis pigmentosa: A pluripotent stem cell-based approach.</a> Prog Retin Eye Res. 71, 1-25 (2019).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+experimental+mouse+model+of+retinal+detachment%3A+Complete+functional+and+histologic+recovery+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel experimental mouse model of retinal detachment: Complete functional and histologic recovery of the retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. 79, e50660(2013).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+Effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: Effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol Vis. 7, 131-137 (2001).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. 101, 672-681 (1994).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+findings+in+a+mouse+model+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence findings in a mouse model of retinal detachment.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subretinal+injection+on+retinal+structure+and+function+in+a+rat+oxygen-induced+retinopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model.</a> Mol Vis. 23, 832-843 (2017).</li>
<li>Sene, A., Apte, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+photoreceptor+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced photoreceptor cell death.</a> Adv Exp Med Biol. 1074, 203-208 (2018).</li>
<li>Zhang, Z. Y., Sun, Y. J., Song, J. Y., Fan, B., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+and+examination+methods+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Experimental models and examination methods of retinal detachment.</a> Brain Res Bull. 169, 51-62 (2021).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am J Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Dentel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+flood+illumination+ophthalmoscopy+in+nonhuman+primates%3A+Findings+in+normal+and+short-term+induced+detached+retinae%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics flood illumination ophthalmoscopy in nonhuman primates: Findings in normal and short-term induced detached retinae.</a> Ophthalmol Sci. 3 (4), 100316(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Atipemazole (Antidorm 4.27mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, France</td><td>/</td><td>Awakening</td></tr><tr><td>Chloramphenicol-retinol (Ophtalon 10mg/g)</td><td>TVM, Lempdes, France</td><td>FR/V/3787889 6/1989</td><td>Postoperative care</td></tr><tr><td>Cover slips Mini 8mm</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>/</td><td>https://www.wpiinc.com/var-1040-cover-slips-pkg-100.html?srsltid=AfmBOoraZfMhuUuY_7rQbM5YKfqM2VR1PT0L-UHQ5uQUdjaeZuogbKP1&utm_source=chatgpt.com</td></tr><tr><td>하이드록시프로필 메틸셀룰로오스</td><td>FCI S.A.S., 파리, 프랑스</td><td>/</td><td>점성 망막하 전달</td></tr><tr><td>케타민(케타미도르 100mg/mL)</td><td>Axience SAS, 판탕, 프랑스</td><td>/</td><td>전신 마취</td></tr><tr><td>Lumera 700</td><td>Carl Zeiss, Oberkochen, 독일</td><td>https://www.zeiss.com/meditec/en/products/surgical-microscopes/ophthalmic-microscopes/opmi-lumera-700.html?utm_source=chatgpt.com</td><td>안과 현미경</td></tr><tr><td>메데토미딘(도미토르 0.85mg/mL)</td><td>베토퀴놀 S.A., 파리, 프랑스</td><td>https://www.vetoquinol.com/en</td><td>전신마취</td></tr><tr><td>마이크로인젝터 Micro 4</td><td>World Precision Instruments, 플로리다주 새러소타</td><td>SYS-MICRO4</td><td>주사</td></tr><tr><td>옥시부프로카인 1.6 mg/0.4 mL</td><td>Th&eacute; a, Clermont-Ferrand, France</td><td>https://www.laboratoires-thea.com/en/chlorhydrate-doxybuprocaine-thea?utm_source=chatgpt.com</td><td>국소 마취</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies Europe B.V., Bleiswijk, The Netherlands</td><td>14190-094</td><td>수성 망막하 전달</td></tr><tr><td>주사기 (10 또는 20 &micro; L)</td><td>Hamilton, Reno, NV</td><td>80300</td><td>주입</td></tr><tr><td>눈물 젤(Lubrithal)</td><td>Dechron, Shrewsbury, UK</td><td>https://www.dechra.ca/our-products/ca/companion-animal/dog/non-prescription/lubrithal?utm_source=chatgpt.com</td><td>각막 보호</td></tr><tr><td>트로피카마이드(Mydriaticum 1 mg/mL)</td><td>Th&eacute; a, 클레르몽페랑, 프랑스</td><td>/</td><td>동공 확장</td></tr></tbody></table>

쥐의 망막하 주사 및 망막 박리에 대한 수술 중 시각화

Intraoperative Visualization of Subretinal Injection and Retinal Detachment in Rats

망막하 주사의 성공 여부는 혈액이 광수용체와 RPE 세포에 유독하기 때문에 망막하 출혈을 피하고 망막절개술을 통해 망막하 공간(즉, 광수용체와 RPE 층 사이)으로 정확하고 독점적인 전달에 달려 있습니다. 성공적인 분만은 수술 중 시각화(그림 2L), 수술 직후 안저 사진 촬영 및 광간섭 단층촬영(OCT)을 통해 확인할 수 있습니다. 안저 촬영은 망막하 출혈을 배제하는 반면, OCT B 스캔은 투명한 망막하액으로 망막 박리(RD)를 확인합니다(그림 1 및 그림 3). 또한 안저 사진 촬영은 시술 중에 눈에 띄지 않을 수 있는 렌즈 터치 또는 유도 백내장을 식별할 수 있습니다(그림 3C, D). 사진 및 OCT 스캔은 모두 분리된 영역 또는 블렙의 크기를 추정할 수 있습니다(그림 1B-E).
몇 가지 요인이 블렙의 크기에 영향을 미칩니다. (1) 주입 부위 위치: 주입 부위가 시신경 디스크에서 멀어질수록 분리된 영역이 작아집니다. (2) 주입량: 20-25μL의 주입량은 쥐에서 망막의 약 절반을 분리할 수 있습니다. (3) 박리된 망막의 질: 망막 변성 모델(예: P23H, RCS)에서는 신경교증 및 망막하 물질 축적과 같은 퇴행성 과정으로 인한 광수용체와 RPE 세포 사이의 저항 증가로 인해 박리가 어려울 수 있습니다. 이러한 경우, 유도된 망막 박리는 일반적으로 편평하며, OCT 스캔은 박리된 부위를 명확하게 묘사하는 데 중요합니다.
주사 부위에서 경미한 유리체강내 출혈이 발생할 수 있는데, 이는 망막 미세혈관을 항상 완전히 피할 수 있는 것은 아니기 때문입니다(그림 3E). 그러나, 이러한 출혈은 전형적으로 망막하 공간으로 확장되지 않는다.
박리가 불충분한 경우, 수술 중 문제를 인식해야 하며, 미리 형성된 망막 절제술을 통해 즉시 재주입해야 합니다. 20마리의 쥐를 대상으로 한 실험 세션에서 두 명의 외과의(숙련된 의사 1명과 초보자 1명)가 단계별 방법을 수행했습니다. 경험 많은 외과의는 10번의 수술 중 9번에서 성공을 거두었고, 초보자는 10번 중 6번에서 성공했습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig1.jpg"> 
그림 1: 과정 및 결과 개요. (A) 쥐의 눈에서 망막하 주입 과정의 개략도, 렌즈의 상당한 부피를 보여줍니다. (B,C) 주사 직후(B) 및 주사 후 6일(C) 안저 촬영. 화살촉은 주입 부위를 나타냅니다. 망막 박리 영역은 점선으로 윤곽이 그려져 있습니다. (디,이) 광간섭 단층 촬영: 주사 직후(D) 및 주사 후 6일(E) B-스캔. ON: 시신경. 배율: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig2.jpg"> 
그림 2: 망막하 주사 프로토콜의 단계. 이 프로토콜은 전신 마취 하에 8주 된 Long Evans 쥐에서 입증되었습니다. 각 단계에 대한 자세한 설명은 비디오 또는 텍스트의 "프로토콜" 섹션을 참조하십시오. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig3.jpg"> 
그림 3: 다양한 수술 후 안저 촬영 결과의 예. (A) 주사 부위에 약간의 색소 분산이 있는 정상적인 수술 후 모습(화살표). (B) 주사 부위에 작은 유리체강내 기포가 있는 정상적인 수술 후 모습. 이 작은 기포는 주사기에서 발생하며 망막 아래 공간에서도 무해합니다. (씨,디) 경미한(C) 또는 유의한(D) 렌즈 혼탁(백내장)을 초래하는 렌즈 접촉. (E,F) 경미한(E) 또는 더 광범위한(F) 유리체강내 출혈이 주사 부위 근처에 국한되며 망막하 공간으로 퍼지지 않습니다. (G) 주사 부위 출혈이 주로 망막하 공간으로 퍼짐. 이 경우 망막 절제술은 망막 혈관의 손상을 일으켰습니다. (H) 공막 침투로 인한 광범위한 유리체강 내 출혈. 배율: 1x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Subretinal injection, the delivery of a solution between the photoreceptors and the retinal pigment epithelium (RPE), creates a subretinal space where ...

intraoperative-visualization-subretinal-injection-retinal-detachment

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Park, SW, et al. 생쥐 망막 색소 상피에서 유전자 치료를 위한 바이러스 벡터의 윤부 접근법-망막하 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 마우스 모델에서 망막 색소 상피(RPE)에 바이러스 벡터를 망막하 주입하는 방법을 설명합니다. 마취 및 눈 준비부터 정확한 렌티바이러스 벡터 전달에 이르기까지 RPE에서 유전자 통합 및 발현을 보장하는 절차를 자세히 설명합니다.

마우스 모델에서 망막 색소 상피에 바이러스 벡터의 망막하 주사

, 분리의 재현성 및 유지 높이 실험 망막 박리를 작성하고, 망막 하 출혈없이하는 망막 질환의 광 수용체 세포 손실의 병태 생리를 공부하고 잠재적 인 치료 개입을 평가하는 것이 중요합니다. 여기, 우리는 세부 사항에 이러한 방법을보고한다.

나트륨 히알루 론산의 망막 주사 설치류에있는 망막 박리 모델

여기에서 우리는 쥐와 생쥐에 RPE 세포 덩어리를 망막하 주입하기 위한 멀티미디어 형식의 커뮤니티 승인 프로토콜을 제시합니다. 이 접근 방식은 망막 변성의 동물 모델에 이식할 때 이식된 RPE 세포의 구조 가능성, 안전성 프로필 및 생존 능력을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

쥐의 시신경에 직접 주입하는 것은 재생 연구에 유용합니다. 우리는 두개골을 열지 않는 쥐의 시신경에 직접 주입하는 최소 침습적 기술을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 수술 합병증을 최소화하고 회복 속도가 빨라집니다.

쥐 시신경에 주입을위한 최소 침습 기술

망막하 주사는 단백질 및 바이러스 벡터와 같은 큰 치료제를 광수용체와 망막 색소 상피에 전달하는 가장 일반적인 기술입니다. 최소한의 부수적 손상과 빠른 회복 시간으로 망막하 공간을 성공적으로 표적으로 삼는 마우스의 대체 방법이 여기에 설명되어 있습니다.

망막 하 공간에 액세스하기위한 대안의 검증 사출 방법<i&gt;를 통해</i&gt;를 Transcleral 후방 접근

Subretinal 주입은 나이 관련 황 반 변성에 대 한 줄기 세포 대체 요법의 전 임상 연구에 널리 적용 되었다. 이 시각화 된 문서에서는, 우리 쥐 눈 세포를 제공 하는 트랜스 scleral 접근을 통해 덜 위험 하 고, 재현 고 정확 하 게 수정 subretinal 주입 기술을 설명 합니다.

쥐의 눈으로 인간 망막 안료 상피 세포의 트랜스 scleral Subretinal 이식에 대 한 세련 된 프로토콜의 개발

여기를 사용 하 여 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (HR-SD-10 월) subretinal 공간으로 유전자 치료 대리인의 납품을 지원, 그 영역 범위를 평가 하 고 포토 리셉터 활력을 특성화 새로운 접근 방식을 설명 합니다.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

이 프로토콜은 주사를 위해 쥐의 시신경에 접근하기 위해 경결막 접근법을 사용하는 독특한 기술을 설명합니다.

쥐의 시신경에 주입하기 위한 경결막 접근법

이 연구는 성체 쥐의 망막과 시신경에 치료제를 전달하는 방법론을 제시합니다. 또한, 성체 쥐의 시신경과 망막을 하향식으로 일괄적으로 수집하기 위해 독특한 조직 회수 방법이 도입되었습니다.

성체 쥐의 안구 치료 전달 및 고급 조직 회수(Ocular Therapeutic Delivery and Advanced Tissue Retrieval in adult rats)

학습하세요 쥐의 망막하 주사 및 망막 박리 수술 기법을 안과 현미경을 이용한 시각화로 정확하게 수행하는 방법을. 이 프로토콜은 재현성과 안전성을 높여 망막 퇴행성 질환 연구의 효율성을 보장합니다.

쥐의 망막하 주사 및 망막 박리에 대한 수술 중 시각화

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