Name: ATAC-Seq Library Preparation of Murine Bone Marrow-Derived Neutrophils(쥐 골수 유래 호중구의 ATAC-Seq 라이브러리 준비) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: 배우세요 쥐 골수 유래 호중구의 ATAC-Seq 라이브러리 준비 방법을 통해 면역 반응 메커니즘과 염색질 접근성을 연구하세요. 면역자기 분리법으로 높은 순도의 호중구를 확보하고 고품질 라이브러리를 구축하여 질병 치료 표적을 발굴할 수 있습니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>설치류 호중구의 염색질 접근성을 위한 확장 가능한 ATAC-seq 프로토콜

<ol><li>Mortaz, E., Alipoor, S. D., Adcock, I. M., Mumby, S., Koenderman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+neutrophil+function+in+severe+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Update on neutrophil function in severe inflammation.</a> Front Immunol. 9, 2171(2018).</li>
<li>Lehrer, R. I., Ganz, T., Selsted, M., Babior, B. M., Curnutte, J. T. Neutrophils and host defense. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLehrer%2C+RI+%22Ann+Intern+Med%22">Ann Intern Med</a>. 109 (2), 127-142 (1988).</li>
<li>De Oliveira, S., Rosowski, E. E., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+migration+in+infection+and+wound+repair%3A+Going+forward+in+reverse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil migration in infection and wound repair: Going forward in reverse.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 378-391 (2016).</li>
<li>Herrera-Uribe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+profiling+of+gene+expression+and+chromatin+accessibility+elucidates+specific+transcriptional+networks+in+porcine+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Integrative profiling of gene expression and chromatin accessibility elucidates specific transcriptional networks in porcine neutrophils.</a> Front Genet. 14, 1107462(2023).</li>
<li>Kipnis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+in+sepsis%3A+Battle+of+the+bands%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophils in sepsis: Battle of the bands.</a> Crit Care Med. 41 (3), 925-926 (2013).</li>
<li>Kong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis-induced+thymic+atrophy+is+associated+with+defects+in+early+lymphopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Sepsis-induced thymic atrophy is associated with defects in early lymphopoiesis.</a> Stem Cells. 34 (12), 2902-2915 (2016).</li>
<li>Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+proteins%3A+Selling+cytokines+by+the+pound%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived proteins: Selling cytokines by the pound.</a> Adv Immunol. 73, 369-509 (1999).</li>
<li>Tecchio, C., Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+cytokines+involved+in+physiological+and+pathological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Immunol+Allergy%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived cytokines involved in physiological and pathological angiogenesis.</a> Chem Immunol Allergy. 99, 123-137 (2014).</li>
<li>Newburger, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+and+other+acquired+neutropenias%5BTitle%5D)+AND+%22Hematology+Am+Soc+Hematol+Educ+Program%22%5BJournal%5D)">Autoimmune and other acquired neutropenias.</a> Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2016 (1), 38-42 (2016).</li>
<li>Skokowa, J., Dale, D. C., Touw, I. P., Zeidler, C., Welte, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+congenital+neutropenias%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Severe congenital neutropenias.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17032(2017).</li>
<li>Burn, G. L., Foti, A., Marsman, G., Patel, D. F., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neutrophil%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The neutrophil.</a> Immunity. 54 (7), 1377-1391 (2021).</li>
<li>Wang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis+induces+non-classic+innate+immune+memory+in+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Sepsis induces non-classic innate immune memory in neutrophils.</a> Cell Rep. 42 (9), 113044(2023).</li>
<li>Dinauer, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+immune+deficiencies+with+defects+in+neutrophil+function%5BTitle%5D)+AND+%22Hematology+Am+Soc+Hematol+Educ+Program%22%5BJournal%5D)">Primary immune deficiencies with defects in neutrophil function.</a> Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2016 (1), 43-50 (2016).</li>
<li>Shaul, M. E., Fridlender, Z. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-associated+neutrophils+in+patients+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumour-associated neutrophils in patients with cancer.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (10), 601-620 (2019).</li>
<li>Hong, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+in+neutrophil+differentiation+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Immune+Netw%22%5BJournal%5D)">Current understanding in neutrophil differentiation and heterogeneity.</a> Immune Netw. 17 (5), 298-306 (2017).</li>
<li>Carvalho, L. O., Aquino, E. N., Neves, A. C., Fontes, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neutrophil+nucleus+and+its+role+in+neutrophilic+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">The neutrophil nucleus and its role in neutrophilic function.</a> J Cell Biochem. 116 (9), 1831-1836 (2015).</li>
<li>Tamassia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+An+inactive+chromatin+configuration+at+the+il-10+locus+in+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: An inactive chromatin configuration at the il-10 locus in human neutrophils.</a> J Immunol. 190 (5), 1921-1925 (2013).</li>
<li>Shiraishi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+forces+mediated+by+respiration+maintain+lung+alveolar+epithelial+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Biophysical forces mediated by respiration maintain lung alveolar epithelial cell fate.</a> Cell. 186 (7), 1478-1492.e15 (2023).</li>
<li>Chang, C. C., Sun, J. T., Chu, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+sepsis%2C+neutrophils+and+intracellular+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22QJM%22%5BJournal%5D)">Bacterial sepsis, neutrophils and intracellular organisms.</a> QJM. 110 (6), 393-394 (2017).</li>
<li>Walling, B. L., Murphy, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protean+regulation+of+leukocyte+function+by+nuclear+lamins%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Protean regulation of leukocyte function by nuclear lamins.</a> Trends Immunol. 42 (4), 323-335 (2021).</li>
<li>Sollberger, G., Tilley, D. O., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+The+biology+of+chromatin+externalization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: The biology of chromatin externalization.</a> Dev Cell. 44 (5), 542-553 (2018).</li>
<li>Klemm, S. L., Shipony, Z., Greenleaf, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+accessibility+and+the+regulatory+epigenome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Chromatin accessibility and the regulatory epigenome.</a> Nat Rev Genet. 20 (4), 207-220 (2019).</li>
<li>Grandi, F. C., Modi, H., Kampman, L., Corces, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+accessibility+profiling+by+ATAC-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Chromatin accessibility profiling by ATAC-seq.</a> Nat Protoc. 17 (6), 1518-1552 (2022).</li>
<li>Khoyratty, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+transcription+factor+networks+control+neutrophil-driven+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distinct transcription factor networks control neutrophil-driven inflammation.</a> Nat Immunol. 22 (9), 1093-1106 (2021).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safeguard+function+of+pu.1+shapes+the+inflammatory+epigenome+of+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Safeguard function of pu.1 shapes the inflammatory epigenome of neutrophils.</a> Nat Immunol. 20 (5), 546-558 (2019).</li>
<li>Ram-Mohan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+chromatin+accessibility+responses+in+human+neutrophils+with+sensitive+pathogen+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Profiling chromatin accessibility responses in human neutrophils with sensitive pathogen detection.</a> Life Sci Alliance. 4 (8), e202000976(2021).</li>
<li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+analysis+of+single-cell+rna-seq+and+atac-seq+data+across+treatment+time+points+in+pediatric+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Integrative analysis of single-cell rna-seq and atac-seq data across treatment time points in pediatric AML.</a> Blood. 136 (1), 29(2020).</li>
<li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 13 (3), 159-175 (2013).</li>
<li>Pillay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+labeling+with+2H20+reveals+a+human+neutrophil+lifespan+of+5.4+days%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In vivo labeling with 2H20 reveals a human neutrophil lifespan of 5.4 days.</a> Blood. 116 (4), 625-627 (2010).</li>
<li>Orchard, P., Kyono, Y., Hensley, J., Kitzman, J. O., Parker, S. C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification%2C+dynamic+visualization%2C+and+validation+of+bias+in+ATAC-seq+data+with+ataqv%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Quantification, dynamic visualization, and validation of bias in ATAC-seq data with ataqv.</a> Cell Syst. 10 (3), 298-306.e4 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.4% Trypan Blue</td><td>Scientific</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>1x 인산염 완충 식염수</td><td>Biosharp</td><td>BL302A</td><td></td></tr><tr><td>20 bp&ndash; 5000 bp 정렬 마커</td><td>바이옵틱</td><td>C109102-100A</td><td>DNA 단편 분석기 지원 제품</td></tr><tr><td>5k 크기 마커(표준 50 bp 사다리)</td><td>바이옵틱</td><td>C109101-100A</td><td>DNA 단편 분석기 지원 제품</td></tr><tr><td>Amplicons Purification Beads</td><td>Beckman</td><td>A63881</td><td>Amplicons Purification Beads는 고품질 DNA 제품을 얻기 위한 핵산 정제 키트입니다.</td></tr><tr><td>Anti-Ly6G MicroBeads Ultrapure, mouse</td><td>miltenyi</td><td>130-120-337</td><td>Anti-Ly-6G MicroBeads UltraPure, 마우스는 마우스 골수의 단세포 현탁액에서 마우스 호중구의 양성 선택 또는 고갈을 위해 개발되었습니다.</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD11b-BV605 (1:200)</td><td>BD</td><td>Cat#563015</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD48-PE-Cy7 (1:400)</td><td>BD</td><td>Cat#560731</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 Ly6G-BV510 (1:200)</td><td>BD</td><td>Cat#740157</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스, 와일드 타입, 8주령, 수컷</td><td>실험실 동물 과학 연구소, 중국 의학 아카데미</td><td>실험실 동물 과학 연구소, 중국 의학원 Sciences</td><td></td></tr><tr><td>DNA Separation Buffer</td><td>Bioptic</td><td>C104406</td><td>DNA 절편 분석기 지원 제품</td></tr><tr><td>E. coli 유래 초순수 LPS(serotype0111: B4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#L-2630</td><td></td></tr><tr><td>DNA 정량 시약</td><td>vazyme</td><td>EQ111</td><td>DNA Quantitative Reagentt는 간단하고 민감하며 정확한 이중 가닥 DNA(dsDNA) 형광 정량 분석 키트입니다.</td></tr><tr><td>Erythrocyte lysis buffer (10x)</td><td>BioLegend</td><td>Cat#420301</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>Cat#10099141C</td><td></td></tr><tr><td>MS 분리 컬럼</td><td>miltenyi</td><td>130-042-201</td><td>MS 컬럼은 세포의 긍정적인 선택을 위해 설계되었습니다.</td></tr><tr><td>RPMI 1640 중간</td><td>Gibco C11875500BT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S2 Gel 전기영동 바늘&nbsp;</td><td>바이옵틱</td><td>C105101</td><td>DNA 조각 분석기 지원 제품</td></tr><tr><td>수술 도구: 메스, 해부 가위, 미세 해부 가위, 미세 집게, 둔기 해부학 집게, 바늘 홀더</td><td>Fisher Scientific</td><td>https://www.fishersci.com/us/en/browse/90184247/surgical-tools</td><td>다른 자격을 갖춘 공급업체로부터 구입할 수 있습니다</td></tr>. 주<tr><td>사기 (1&nbsp; mL)</td><td>피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-syringes-single-use-12/14955464</td><td>다른 적격 공급업체로부터 구입할 수 있습니다</td></tr>. <tr>Illumina <td>vazyme</td><td>TD501-01</td><td>용 TruePrepTM DNA Library Prep Kit V2</td><td>Illumina용 TruePrep DNA Library Prep Kit V2는 Illumina의 고처리량 염기서열분석 플랫폼을 위해 특별히 개발된 특수 제작 키트입니다. 이 키트를 사용하여 DNA를 Illumina의 고처리량 염기서열분석 플랫폼 전용 염기서열분석 라이브러리로 준비할 수 있습니다.</td></tr><tr>Illumina <td>vazyme</td><td>TD202</td><td>용 TruePrepTM Index Kit V2</td><td>Illumina용 TruePrep Index Kit V2는 Illumina용 TruePrep DNA Library Prep Kit V2용 키트입니다. 96개의 서로 다른 양단 인덱스 라이브러리를 준비하는 데 사용할 수 있습니다.</td></tr></tbody></table>

atac-seq library preparation of murine bone marrow-derived neutrophils(쥐 골수 유래 호중구의 atac-seq 라이브러리 준비)

ATAC-Seq Library Preparation of Murine Bone Marrow-Derived Neutrophils

요약된 프로토콜은 C57BL/6 마우스의 골수에서 호중구를 분리하고 ATAC-seq를 통한 리포다당류(LPS) 자극 전후 염색질 접근성의 각각의 차이를 비교하기 위해 사용되었습니다. 일반적으로 6-8주 된 C57BL/6 마우스의 양쪽 대퇴골에서 2 x 107 BMC를 채취할 수 있으며, 그 후 2-5 x 106 호중구를 분리할 수 있습니다. 그 중 1 x 105 세포는 ATAC-seq에 사용되며, 잉여 세포는 종합적인 호중구 분석을 위해 할당될 수 있습니다.
면역자기 분류 후 호중구 순도와 생존력을 결정하기 위해 FACS 면역표현형분석이 채택되었습니다(그림 2). 전방 산란 영역(FSC-A) 및 측면 산란 영역(SSC-A)의 분포만으로도 추정치를 제공할 수 있지만, 여기서는 분류 효과를 입증하기 위해 특정 호중구 마커 염색을 사용했습니다. FSC-A 및 SSC-A 게이...

ATAC-Seq Library Preparation of Murine Bone Marrow-Derived Neutrophils(쥐 골수 유래 호중구의 ATAC-Seq 라이브러리 준비)

Assay for Transposase-Accessible Chromatin with sequencing (ATAC-seq) is a powerful, high-throughput technique for assessing chromatin accessibility and ...

atac-seq-library-preparation-of-murine-bone-marrow-derived-neutrophils

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는 밀도 기울기 원심 분리하여 및 CellTracker 염료를 사용하여 호중구 라벨링 마우스 골수에서 호중구의 분리 및 정제를위한 프로토콜을 설명합니다. 이 스트림 기능 연구 또는 입양 전송 및 추적 실험 호중구의 큰 숫자를 얻기위한 간단하고 빠른 재생하고 경제적 인 방법을 나타냅니다.

분리, 정제 및 기능 연구 및 입양 전송 실험 쥐의 골수 호중구의 라벨링

이 논문은 시험 관내 및 주사 후 마우스에서 유도 된 급성 백혈병 C1498 세포 배양을 특성화하는데 사용될 수있는 기술적 인 방법을 제공한다. 표현형 및 기능 분석은 유동 세포 계측법, 면역 형광 현미경, cytochemistry 월 - 그룬 왈드 김사 염색을 사용하여 수행됩니다.

쥐 C1498 세포주와 관련 백혈병 마우스 모델을 특성화에 대한 자세한 프로토콜

높은 처리량 시퀀싱 (ATAC-seq)와 결합 하 여 염색 하는 Transposase 액세스할 수 질에 대 한 분석 결과 액세스할 수 chromatin를 폭로 하는 게놈 넓은 방법입니다. 이 인간의 세포 (Th1/Th2)에 최적화 된 최종 계산 분석, 분자에서 단계별 ATAC seq 프로토콜입니다. 이 프로토콜 차세대 시퀀싱 방법 사전 경험 없이 연구자에 의해 채택 될 수 있다.

ATAC Seq에 의해 기본 인간 T 림프 톨에 게놈 넓은 접근 Chromatin 매핑

여기, 선물이 murine NK 세포 유전자 침묵 시키기 기계 연구 생체 외 및 생체 내에서피더 무료 차별화 시스템을 사용 하 여 대량 생산 하는 프로토콜.

소설 급지대 무료 시스템 대량 생산을 위한 생체 외에서 Murine 자연 킬러 세포의

여기 우리는 식별 하 고 격리 GM-CSF 골수성 세포 고속 셀 정렬 사용 하 여 구동의 다 수에 대 한 메서드를 제공 합니다. Ly6C 및 CD115 식에 따라 5 가지 인구 (일반적인 골수성 창시자, granulocyte/macrophage 창시자, monocytes, monocyte 파생 된 대 식 세포 및 monocyte 파생 된 DCs)를 확인할 수 있습니다.

골수성 창시자 및 정렬 전략 소설 셀을 사용 하 여 Murine 골에서 수지상 세포 선구자의 큰 숫자의 생성

여기, 우리는 transposase 액세스할 수 chromatin (ATAC-seq) 활성화 된 CD4 + 인간 림프 톨에 시퀀싱에 대 한 분석 결과 수행 하는 프로토콜을 제시. 프로토콜은 새로운 세포의 용 해 버퍼의 도입을 통해 3%로 50%에서 미토 콘 드리 아 DNA 읽기 오염 최소화 하기 위해 수정 되었습니다.

ATAC seq 분석 결과 주 인간의 CD4 + T 세포에서 낮은 미토 콘 드리 아 DNA 오염

여기서, 우리는 호중구 계보 세포의 고차원 질량 세포측정 (비행 시간, CyTOF에 의한 세포 측정) 분석을 위해 마우스 또는 인간으로부터 분리 된 신선한 골수 (BM)를 처리하는 프로토콜을 제시한다.

호중구 계보 세포의 질량 세포 분석 분석을위한 전체 골수의 준비

이 연구는 쥐의 골수에서 풍부한 호중구 세포외 트랩(NET)을 분리하는 두 가지 기술을 간략하게 설명합니다. 한 가지 방법은 상용 호중구 분리 키트와 밀도 구배 원심분리를 결합하는 반면, 다른 방법은 밀도 구배 원심분리만 사용합니다. 두 접근법 모두 말초 혈액 호중구의 NET을 능가하는 기능적 NET을 산출합니다.

비슷한 용량의 쥐 골수 호중구를 분리하기 위한 독특한 접근법

single-cell/single-nuclei transcriptomics 및 multi-omics의 성공은 세포/핵의 품질에 크게 좌우됩니다. 따라서 조직에서 세포/핵을 분리하고 정제하는 것은 고도로 표준화되어야 합니다. 이 프로토콜은 다운스트림 단일 핵 다중체 분석을 위해 뇌와 골수에서 핵을 준비하는 방법을 설명합니다.

단일 핵 멀티옴 분석을 위한 고품질 뇌 및 골수 핵 준비

여기에서는 골수이형성 증후군 및 급성 골수성 백혈병의 쥐 모델에서 골수 미세환경 집단을 분리하고 특성화하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 이 기술은 질병 진행에 따라 내피 및 중간엽 기질 세포를 포함한 비조혈 골수 틈새의 변화를 식별합니다.

골수이형성 증후군 및 급성 골수성 백혈병의 골수 미세환경 집단 식별

이 프로토콜은 7-9일 된 신생아 마우스 골수 세포를 분리하고 L929 세포의 상층액을 과립구 집락 자극 인자(M-CSF)의 공급원으로 사용하여 분화된 대식세포를 생성하는 비효소적이고 간단한 방법을 설명합니다. 골수 유래 대식세포는 표면 항원 F4/80, CD206, CD11b 및 기능적 역량에 대해 추가로 분석되었습니다.

신생아 마우스 골수 분리 및 골수 유래 대식세포의 준비

배우세요 쥐 골수 유래 호중구의 ATAC-Seq 라이브러리 준비 방법을 통해 면역 반응 메커니즘과 염색질 접근성을 연구하세요. 면역자기 분리법으로 높은 순도의 호중구를 확보하고 고품질 라이브러리를 구축하여 질병 치료 표적을 발굴할 수 있습니다.

ATAC-Seq Library Preparation of Murine Bone Marrow-Derived Neutrophils(쥐 골수 유래 호중구의 ATAC-Seq 라이브러리 준비)

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