Name: Human BAMBIhighMFGE8high Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells의 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: 배우세요 BAMBI high MFGE8 high UC-MSC 분리 방법을 통한 줄기세포 이질성 분석 기술입니다. 단일세포 전사체 분석으로 특정 하위집단의 표현형과 면역억제 활성을 규명하여 루푸스 신염 등 질환 치료에 최적의 세포치료제 선별 기준을 제시합니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>BAMBI높은MFGE8높은 UC-MSC 하위 모집단의 기능 분석

<ol><li>Liechty, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+engraft+and+demonstrate+site-specific+differentiation+after+in+utero+transplantation+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep.</a> Nat Med. 6 (11), 1282-1286 (2000).</li>
<li>Zhou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+advances+in+clinical+applications+of+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Challenges and advances in clinical applications of mesenchymal stromal cells.</a> J Hematol Oncol. 14 (1), 24(2021).</li>
<li>Xie, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-alpha-mediated+m%286%29a+modification+of+elmo1+triggers+directional+migration+of+mesenchymal+stem+cell+in+ankylosing+spondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Tnf-alpha-mediated m(6)a modification of elmo1 triggers directional migration of mesenchymal stem cell in ankylosing spondylitis.</a> Nat Commun. 12 (1), 5373(2021).</li>
<li>Mcguire, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-derived+interleukin-28+drives+the+selection+of+apoptosis+resistant+bone+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-derived interleukin-28 drives the selection of apoptosis resistant bone metastatic prostate cancer.</a> Nat Commun. 12 (1), 723(2021).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+therapy+induces+flt3l+and+cd1c%28%2B%29+dendritic+cells+in+systemic+lupus+erythematosus+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell therapy induces flt3l and cd1c(+) dendritic cells in systemic lupus erythematosus patients.</a> Nat Commun. 10 (1), 2498(2019).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Umbilical+cord+mesenchymal+stem+cell+transplantation+in+active+and+refractory+systemic+lupus+erythematosus%3A+A+multicenter+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus: A multicenter clinical study.</a> Arthritis Res Ther. 16 (2), R79(2014).</li>
<li>Ortiz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+engraftment+in+lung+is+enhanced+in+response+to+bleomycin+exposure+and+ameliorates+its+fibrotic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (14), 8407-8411 (2003).</li>
<li>Phinney, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells%3A+Implications+for+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy.</a> J Cell Biochem. 113 (9), 2806-2812 (2012).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptome+atlas+of+human+mesenchymal+stem+cells+exploring+cellular+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptome atlas of human mesenchymal stem cells exploring cellular heterogeneity.</a> Clin Transl Med. 11 (12), e650(2021).</li>
<li>Chen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+transcriptomics+decodes+wharton%27s+jelly-derived+mesenchymal+stem+cells+heterogeneity+and+a+subpopulation+with+wound+repair+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial transcriptomics decodes wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells heterogeneity and a subpopulation with wound repair signatures.</a> Adv Sci (Weinh). 10 (4), e2204786(2023).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+heterogeneity+reveals+a+unique+bambi%28high%29+mfge8%28high%29+subpopulation+of+human+uc-mscs%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Dissecting heterogeneity reveals a unique bambi(high) mfge8(high) subpopulation of human uc-mscs.</a> Adv Sci (Weinh). 10 (1), e2202510(2022).</li>
<li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> Cell Transplant. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li>
<li>Lai, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+of+detaching+adherent+cells+and+their+effects+on+the+cell+surface+expression+of+fas+receptor+and+fas+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of fas receptor and fas ligand.</a> Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).</li>
<li>Avinash, K., Malaippan, S., Dooraiswamy, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+isolation+and+characterization+of+stem+cells+from+different+regions+of+oral+cavity+using+markers%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Methods of isolation and characterization of stem cells from different regions of oral cavity using markers: A systematic review.</a> Int J Stem Cells. 10 (1), 12-20 (2017).</li>
<li>Galvao, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rock+inhibition+drives+resolution+of+acute+inflammation+by+enhancing+neutrophil+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Rock inhibition drives resolution of acute inflammation by enhancing neutrophil apoptosis.</a> Cells. 8 (9), 964(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.6 mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Corning&nbsp;</td><td>Axygen MCT-060-A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>베이징 Labgic Technology</td><td>MCT-001-150</td><td></td></tr><tr><td>100 mm 세포 배양 접시&nbsp;</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>12311</td><td></td></tr><tr><td>12웰 플레이트</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>11210</td><td></td></tr><tr><td>15mL 원심분리기 튜브</td><td>Nanjing Vazyme Material Technology</td><td>TCF00115</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>11310</td><td></td></tr><tr><td>50mL 원심분리기 튜브</td><td>Nanjing Vazyme Material Technology</td><td>TCF00150</td><td></td></tr><tr><td>5mL 둥근 바닥 튜브</td><td>Corning</td><td>FALCON 352003</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m 세포 여과기</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td>희석: 1:1000</td></tr><tr><td>APC 항인간 CD79a (Ig&alpha;) 항체</td><td>BioLegend</td><td>333505</td><td>581 희석: 1:200</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-human CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) 항체</td><td>BioLegend</td><td>344022</td><td>G46-6 희석: 1:200</td></tr><tr><td>APC-Cy7 마우스 IgG1, &kappa; Isotype Control</td><td>BD Bioscience</td><td>557873</td><td>MOPC-31C (Isotype Control) 희석: 1:200</td></tr><tr><td>BAMBI 항체</td><td>Bioss</td><td>bs-12418R</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 anti-mouse/human CD44 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>103044</td><td>5E10 희석: 1:200</td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 Rat IgG2b, &kappa; Isotype Ctrl 항체</td><td>BioLegend</td><td>400646</td><td>MOPC-21 (Isotype Control) 희석: 1:200</td></tr><tr><td>CD105 (Endoglin) 단클론 항체&nbsp; APC</td><td>eBioscience</td><td>17-1057-42</td><td>HM47 희석: 1:200</td></tr><tr><td>세포 계수 챔버 슬라이드</td><td>Shanghai QIUJING</td><td>XB-K-25</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Beijing BAIYANG</td><td>BY-320C</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>XILONG Scientific</td><td>13700908</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (1:1) 기본 (1x)</td><td>Gibco</td><td>C11330500BT</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5 M), pH 8.0, Rnase free</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td>희석: 1:1000</td></tr><tr><td>에탄올&nbsp; &nbsp;</td><td>XILONG Scientific</td><td>12803405</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 세럼 (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10099-141C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FITC 마우스 Anti-Human CD34</td><td>BD Bioscience</td><td>555821</td><td>IM7 희석: 1:200</td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human CD45</td><td>BD Bioscience</td><td>555482</td><td>AD2 희석: 1:200</td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human HLA-DR</td><td>BD Bioscience</td><td>555811</td><td>SN6 희석: 1:200</td></tr><tr><td>유세포분석기</td><td>BD Bioscience</td><td>FACSAria&trade; III 세포 분류기Aria</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo</td><td>BD Bioscience</td><td>V10</td><td></td></tr><tr><td>부드러운 세포 해리 시약</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0485</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 마우스 IgG H& L (Alexa Fluor 488)</td> <td>abcam</td><td>ab150113</td><td>HI30 희석 : 1:200</td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 IgG H & L (AlexaFluor 594)</td><td>abcam</td><td>ab150080</td><td>희석: 1:1000</td></tr><tr><td>qPCR용 HiScript II Q RT SuperMix(+gDNA 와이퍼)</td><td>Vazyme</td><td>R223-01</td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE Ts2</td><td></td></tr><tr><td>이소프로필 알코올</td><td>XILONG Scientific</td><td>12802505</td><td></td></tr><tr><td>MFGE8 항체</td><td>Biorbyt</td><td>orb388429</td><td>희석: 1:100</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FRESCO 21</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IgG1 카파 아이소타입 제어 APC</td><td>eBioscience</td><td>17-4714-42</td><td>P3.6.2.8.1 (아이소타입 컨트롤) 희석: 1:200</td></tr><tr><td>마우스 IgG1 카파 아이소타입 컨트롤 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-4714-42</td><td>eBMG2b(아이소타입 컨트롤) 희석: 1:200</td></tr><tr><td>마우스 IgG2b 카파 아이소타입 컨트롤 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-4732-42</td><td>RTK4530 (이소타입 컨트롤) 희석: 1:200</td></tr><tr><td>PBS (10x)</td><td>Sangon Biotech (상하이)</td><td>E607016-0500</td><td></td></tr><tr><td>PE-Cy5 마우스 안티-휴먼 CD90&nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>555597</td><td>P3.6.2.8.1 (isotype control) 희석: 1:200</td></tr><tr><td>PE-Cy5 마우스 IgG1 &kappa; Isotype Control</td><td>BD Bioscience</td><td>550618</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin 100x</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td>희석: 1:100</td></tr><tr><td>Real-Time PCR System</td><td>Applied Biosystems byThermo Fisher Scientific</td><td>Q6</td><td></td></tr><tr><td>RNase-free water</td><td>QIAGEN</td><td>129112</td><td></td></tr><tr><td>분광광도계</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NanoDrop One(840-317400)</td><td></td></tr><tr><td>멸균 마이크로피펫 팁</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td></td><td>희석: 1:100</td></tr><tr><td>T75 세포 배양 플라스크</td><td>Beijing Labgic Technology</td><td>13212A</td><td></td></tr><tr><td>Thermal Cycler</td><td>Applied Biosystems byThermo Fisher Scientific</td><td>Veriti</td><td></td></tr><tr><td>Tri 시약</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9424</td><td></td></tr><tr><td>Typsin-EDTA 솔루션</td><td>바이오 채널 생명공학</td><td>BC-CE-005</td><td></td></tr><tr><td>방수 CO2&nbsp; 인큐베이터</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr></tbody></table>

human bambihighmfge8high umbilical cord derived mesenchymal stromal cells의 분리

Isolation of Human BAMBIhighMFGE8high Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stromal Cells

그림 1은 인간 UC-MSC의 세포 표면 마커 발현 프로파일을 보여줍니다. 배양된 MSC는 CD44, CD73, CD90 및 CD105 발현에 대해 강하게 양성이었고 CD14, CD34, CD45, CD79 및 HLA-DR 발현에 대해 음성이었습니다. BAMBIhighMFGE8high MSCs는 배양된 human UC-MSCs에서 분류하고, BAMBI 및 MFGE8 발현을 3-4 계대 확장 후 유세포 분석으로 재분석했습니다(그림 2). 이 과정에서 BAMBIhighMFGE8high MSCs의 빈도는 donor 및 dissociation 방법에 따라 변동했습니다(그림 3 및 그림 4). <strong class=...

Human BAMBIhighMFGE8high Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells의 분리

Umbilical cord-derived mesenchymal stromal/stem cells (UC-MSCs) present low immunogenicity and potent immunomodulatory effects for treating various ...

isolation-human-bambihighmfge8high-umbilical-cord-derived-mesenchymal

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜은 실험 이식을 위해 autologous 쌍을 생성하는 동물의 혈청을 사용하지 않고 고립과 mesenchymal stromal 세포와 내피 세포의 콜로니 형성 이후의 확장을 설명합니다.

인간 탯줄의 분리 및 동물 혈청 무료 확장 Mesenchymal Stromal 세포 (MSCS)와 내피 콜로니 형성 전구 세포 (ECFCs)을 유래

중간엽 줄기세포(MSC)는 용해성 인자 또는 특정 생체 물질로 자극될 때 조골세포 계통으로 분화 가능성이 있습니다. 이 연구는 소 뼈 기질 Nukbone(NKB)을 골격으로 사용하는 인간 양막(AM-hMSC)에서 MSC를 전달하기 위한 새로운 옵션을 제시합니다.

인간 중간 엽 줄기 세포의 분리 및 다공성 뼈 매트릭스에 자신의 재배

여기서, 우리는 인간 탯줄 (UC)와 코드에 태아 태반 샘플 분리 용 (CL), 왓슨의 젤리 (WJ), 코드 - 태반 접합부 (CPJ) 태아 태반 (FP) 라이닝 박리를위한 프로토콜을 제시 상기 이식편 배양 기술을 이용하여 중간 엽 간질 세포 (MSC들)의 특성화.

인간 제대혈 및 태아 태반에서 중간 엽 기질 세포의 분리 및 특성

인간의 탯 (UC) preterm, 용어, 결과로 perinatal 기간 동안 얻을 수 있습니다 하 고 postterm 배달. 이 프로토콜에서 우리 기술 분리와 UC 유래 중간 엽 줄기 세포 (UC-MSCs)의 태아/유아에서 임신 19-40 주.

절연 및 인간의 탯 유래 중간 엽 줄기 세포 Preterm와 기간 유아에서의 특성화

이 연구는 Wharton's jelly(WJ)의 무결성을 보존하기 위한 고유한 둔부 해부 절차를 제시하여 WJ가 덜 손상되고 수확된 중간엽 줄기 세포(MSC)의 양과 생존력을 높입니다. 이 방법은 기존의 날카로운 해부 방법에 비해 우수한 수율과 증식 능력을 보여줍니다.

Exclusion Derived Mesenchymal Stem Cells with High Yields and Low Damage(높은 수율과 낮은 손상의 탯줄 유래 중간클립 줄기세포의 분리)

이 보고서에서, 우리는 분리 시스템 및 마우스 유선에서 문화 기증자 세포를 증명하고, orthotopically stromal 분석받는 마우스에서 이러한 세포를 이식 : 내유 종양 개발하는 동안 상피 상호 작용합니다.

C57BL/6J 마우스의 Stromal 셀 및 암종 세포 이식 내유

암종 - 관련 섬유아 세포 (CAFs) 종양의 기질 내에 존재 myofibroblasts 풍부한은 종양의 진행을 운전에 중요한 역할을한다. 우리는 실험적으로 인간의 섬유아 세포에서 mammary CAFs 창출을위한 coimplantation 종양의 xengraft 모델을 개발했습니다. 프로토콜 tumourigenesis을 추진하는 능력을 습득 카페인 myofibroblasts을 수립하는 방법에 대해 설명합니다.

인간 Mammary 섬유아 세포에서 암종 - 관련 섬유아 세포의 실험 세대 (CAFs)

방법 중 하나를 사용하여 인간의 치과 펄프의 줄기 세포 (hDPSCs)의 분리 및 특성...

인간 치과 펄프의 줄기 세포의 분리, 특성화 및 비교 차별화 두 가지 방법을 사용하여 영구 치아에서 파생

직접 인체 조직에서 암 줄기 세포 (암줄 기세포)의 분리는 생물학적 특성 분석을위한 필수입니다. 또한 어려운 단계를 문제 해결에 대한 팁을 제공하면서이 원고는, 인간의 조직에서 전립선 암줄 기세포의 분리를위한 방법을 설명합니다.

인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리

자궁 적출술 검체에서 기본 자궁 내막 기질 세포 배양 시스템을 구축하는 것은 이전의 연구 목표의 광대 한 배열을 추구하는 귀중한 생물 기술과 중요한 단계입니다. 여기서 우리는 인간의 환자의 수술 적 절제술 자궁 내막 조직에서 기질 문화를 설정하는 데 사용되는 두 가지 방법을 설명합니다.

자궁 적출술 검체에서 차 인간의 자궁 내막 기질 세포를 구축하는 두 가지 방법

배우세요 BAMBI high MFGE8 high UC-MSC 분리 방법을 통한 줄기세포 이질성 분석 기술입니다. 단일세포 전사체 분석으로 특정 하위집단의 표현형과 면역억제 활성을 규명하여 루푸스 신염 등 질환 치료에 최적의 세포치료제 선별 기준을 제시합니다.

Human BAMBI^highMFGE8^high Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells의 분리

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