Name: 탈세포화된 마우스 폐와 1차 인간 내피 세포를 이용한 생체공학적 폐 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: 학습하세요 탈세포화 및 재세포화 기술을 활용한 마우스 폐 생체공학 방법을. 1차 인간 내피 세포를 이용해 조직 공학 및 장기 이식 연구의 확장 가능한 프로토콜을 최적화하는 과정을 탐색합니다.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>탈세포화</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27G x 1/2인치 BD PrecisionGlide 바늘</td><td>BD</td><td>305109</td><td>또는 동급 27G 주사 바늘</td></tr><tr><td>BD Insyte IV 카테터 20 GA X 1.8 8IN</td><td>BD</td><td>381237</td><td>또는 동급 20G IV 카테터</td></tr><tr><td>블레이드 실크 봉합사 (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>또는 동급 CaCl</td></tr><tr><td>2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>쥐 경정맥용 카테터, PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>체중이 30g 이하인 마우스에게 권장됩니다.</td></tr><tr><td>쥐 경정맥용 카테터, PU 3Fr 10cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td><td>체중이 30g 이상인 쥐에게 권장됩니다.</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>시그마-알드리치</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>시그마-알드리치</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>핀포트 인젝터</td><td>Instech</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>핀포트, 22G</td><td>Instech</td><td>PNP3F22-50</td><td>C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>핀포트, 25G</td><td>Instech</td><td>PNP3F25-50</td>에 적합<td>C20PU-MJV1301에 적합</td></tr><tr><td>데옥시콜레이트 나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기, 5mL</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>CELL CULTURE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 내피 세포 성장 배지-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC &ndash; 인간 제대 정맥 내피 세포</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>관류 기반 생물 반응기 20G</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>바늘</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3방향 마개 일반</td><td></td><td></td><td></td></tr> 코<tr><td>르크 천공기</td><td>일반</td><td></td><td>보링 크기, 6-10mm</td></tr><tr><td>EasyLoad III 펌프 헤드</td><td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>유리 캐니스터</td><td>Hario</td><td>SCN-200T</td><td>내경 : 80mm</td></tr><tr><td>가열 마그네틱 교반기</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>미끼 피팅, PVDF, 소프트 튜브</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-01</td><td>암, ID 1.5mm(L / S 14)의 튜브에 적합</td></tr> 미<tr><td>끼 피팅, PVDF, 소프트 튜브 Nordson</td><td>Medical</td><td>2-9964-01</td><td>남성, ID 1.5 mm (L / S 14)의 튜브에 적합</td></tr> 미<tr><td>끼 피팅, PVDF, 소프트 튜브 용</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-03</td><td>암, ID 3mm(L/S 16)의 튜브에 적합</td></tr> 미<tr><td>끼 피팅, PVDF, 소프트 튜브용</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-03</td><td>남성, ID 3mm(L/S 16)의 튜브에 적합자</td></tr><tr><td>기 교반 바</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S 원격 I/O 및 벤치탑 컨트롤러가 있는 디지털 정밀 모듈식 드라이브</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S 정밀 펌프 튜빙, PharMed BPT, L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Pricision 펌프 튜빙, 백금 경화 실리콘, L/S 14</td><td>Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP 주사기 필터 장치, 0.22 및 마이크로; m, 폴리에테르설폰, 33 mm, 감마선 멸균</td><td>밀리포</td>어 <td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>파이렉스 250 mL 잔디 병, GL-45 스크류 캡</td><td>Corning</td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>GL45 오픈 탑 PBT 스크류 캡용 실리콘 격막</td><td>Corning</td><td>1395-455S</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 라이트 스토퍼</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>상경: 87 mm, 하경: 75 mm</td></tr><tr><td>멸균 주사기, 10 mL, 50 mL</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마우스 수술(심폐 차단의 분리 | 폐 이식)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 나일론 타이</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 실크 타이</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 실크 타이</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>동맥 클램프, 45mm 곡선, 홈이 있는</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte IV 카테터 24GA</td><td>BD</td><td>381512</td><td>또는 동등한 24G i.v. 카테터</td></tr><tr><td>불독 혈관 겸자 45mm 곡선</td><td>나츠메 세이작쇼</td><td>M2</td><td></td></tr><tr><td>부토르파놀 타르타르산염&nbsp;</td><td>메이지 세이카 제약</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>세파졸린 나트륨</td><td>오츠카 제약</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 집게#5/45</td><td>Fine Science Tools</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>Fine vannas style spring scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15403-08</td><td>45&deg; 팁, 0.01 x 0.06 mm</td></tr><tr><td>Gemini 소작 키트</td><td>Harvard Apparatus</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito 클램프 곡선 팁, 125mm</td><td>Bioresearch 센터</td><td>16181670</td><td></td></tr><tr><td>Hegar 바늘 홀더, 150mm</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>헤파린 용액</td><td>Mochida Seiyaku</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Nippon Zenyaku Kogyo</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micro 겸자 스트레이트</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>산도스</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>마우스 인공호흡기</td><td>하버드 장치</td><td>모델 687&trade;</td><td></td></tr><tr><td>생리 식염수, 임상 등급</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시, 60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU 20 게이지 폴리우레탄 카테터</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>사카키 스테인리스 가위 곡선 14 cm</td><td>Bioresearch 센터</td><td>64152034</td><td></td></tr><tr><td>메스 홀더</td><td>Bioresearch center</td><td>16101040</td><td></td></tr><tr><td>소동물 후퇴 시스템</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>예비 칼날 메스 #11</td><td>Muranaka Medical Instruments</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위, 15cm</td><td>Bioresearch center</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>Leica Microsystems</td><td>M525</td><td>유연한 팔 시스템을 갖춘 임상 등급 수술용 현미경이 바람직합니다.</td></tr><tr><td>스기타 티타늄 동맥류 클립 곡선 슬림 No.98</td><td>미즈호 메디컬</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>스기타 티타늄 클립 어플라이어 110mm</td><td>미즈호 메디컬</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>온도 조절 가능한 전기 워머</td><td>제네릭</td><td></td><td></td></tr><tr><td>울트라 파인 면봉</td><td>제네릭</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈관 및 기관지 커프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>파인 사포</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 게이지 테프론 혈관 카테터</td><td>탑</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 게이지 테프론 혈관 카테터</td><td>탑</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 게이지 테프론 혈관 카테터</td><td>탑</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

탈세포화된 마우스 폐와 1차 인간 내피 세포를 이용한 생체공학적 폐 이식

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

탈세포화 프로토콜에 따라 생쥐의 폐는 눈에 띄게 흰색이고 반투명합니다(그림 6A). 세포 성분은 완전히 제거되어야 하지만, 조직학적 관찰에서 폐포 구조는 그대로 유지됩니다(그림 6B,C). 2일 관류 기반 생물반응기 배양과 함께 3 × 107 HUVEC를 사용한 재세포화된 마우스 폐는 HUVEC의 균일한 분포를 보여줍니다(그림 7A). HUVEC은 말초 폐포 영역으로 이동하여 모세혈관 네트워크를 형성합니다(그림 7B). 생명공학 폐의 정소성 이식 및 재관류 후, 적혈구를 포함하는 혈류가 생명공학적 폐에서 균일하게 관찰됩니다(그림 8A, B).
<p class="jove_conte...

Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

transplantation-bioengineered-lung-using-decellularized-mouse-lungs

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리는 decellularized의 폐를 세포외 기질 및 기능 폐 조직을 생성하는 데 사용할 수있는 소설 biomimetic 생물 반응기를 개발했습니다. 생물 반응기에서 매트릭스와 culturing에 세포를 시딩함으로써, 우리는 시간의 짧은 기간에 대한 생체내에 이식하면 효과 가스 교환을 보여주는 조직을 생성합니다.

룽 공학을위한 절차

전체 장기 탈세포화는 재생 의학에 사용될 수 있는 자연적인 생물학적 골격을 생성합니다. 폐 재생의 비인간 영장류 모델에 대한 설명이 제시되는데, 이는 전체 폐가 탈세포화되고 성체 줄기 세포와 내피 세포를 파종하여 혈관 순환과 액체 매체 환기를 촉진하는 생물 반응기에 파종되는 것입니다.

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor(특수 대형 장기 생물반응기를 이용한 비인간 영장류 폐 탈세포화 및 재세포화)

조직 공학 심장 판막에 neotissue 형성 및 협착증 개발을 기초 세포 및 분자 메커니즘을 이해하기 위해, 이소성 심장 판막 이식 뮤린 모델이 개발되었다. 폐동맥 판막은 이소성 심장 이식 기술을 사용하여 수신자에게 이식 하였다.

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

국소 혈관 신생을 자극하는 장기 특이적 미세환경의 재현은 손상된 조직의 성공적인 재생을 위해 필수적입니다. 이 보고서는 폐 특이적 미세환경이 성체 쥐의 혈관 신생과 폐포 재생을 조절하는 방법을 탐구하기 위해 살아있는 쥐의 폐 표면에 피브린 젤을 이식하는 새로운 방법을 보여줍니다.

마우스 폐에 섬유소 젤의 주입은 폐 관련 신생 혈관 연구에

여기, 우리는 두 번 시드를 부분적으로 유도 만능 줄기 세포로 쥐에 이식을위한 기능적인 조직 설계 혈관 이식을 생성하는 프로토콜을 제시 (PiPSC은) - 탈세 포화 선박 발판 생물 반응기에서 유래 내피 세포 - 평활근 세포 및 PiPSC 산출했다.

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

이 프로토콜은 효율적으로기도에게 상피 세포를 성숙 마우스 배아 줄기 세포 유래 최종 내배엽 지시합니다. 분화 기술은 정의 된 무 혈청 배양 환경에서, 폐 계통 사양을 직접 3 차원 decellularized 폐 지지체를 사용한다.

Decellularized 폐 공사장 공중 발판을 사용하여 ESC 파생 마우스기도 상피 세포의 생성

이 프로토콜은 탈세포화된 정밀 절단된 폐 조각을 폐포 상피 유형 2 세포, 섬유아세포 및 내피 세포로 재채움으로써 재현 가능한 소규모 조작된 폐 조직을 생성하는 방법을 설명합니다.

탈세포화된 폐 조각으로 제조된 조작된 폐 조직

이 기사에서는 신생아 마우스에서 일차 폐 내피 세포를 분리하고 배양했습니다.

일차 마우스 폐 내피 세포의 분리

여기에 제시된 것은 국소 탈세포화된 폐 조직의 분리를 위한 프로토콜입니다. 이 프로토콜은 세포외 기질 및 세포-기질 상호 작용의 복잡성을 연구하기 위한 강력한 도구를 제공합니다.

지역별 탈세포화된 폐 조직의 해부 및 분리

여기에서는 이광자 현미경을 사용하여 이식된 쥐의 왼쪽 폐를 생체 내 이미징하는 프로토콜을 제시합니다. 이는 쥐 폐 이식 후 실시간으로 세포 역학 및 상호 작용을 연구하는 데 유용한 도구입니다.

이식된 마우스 폐의 생체 내 2광자 현미경

학습하세요 탈세포화 및 재세포화 기술을 활용한 마우스 폐 생체공학 방법을. 1차 인간 내피 세포를 이용해 조직 공학 및 장기 이식 연구의 확장 가능한 프로토콜을 최적화하는 과정을 탐색합니다.

탈세포화된 마우스 폐와 1차 인간 내피 세포를 이용한 생체공학적 폐 이식

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