Name: 개의 비강 면역 미세환경 샘플링을 위한 식염수 세척 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: 배우세요 개의 비강 면역 미세환경을 식염수 세척으로 샘플링하는 방법을. 방사선 치료 중인 코 종양 개에서 면역 반응을 연속 분석할 수 있는 비침습적 기술입니다.

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<ol><li>Cohn, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+nasal+disease%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin%3A+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Canine nasal disease: An update.</a> Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).</li>
<li>Mortier, J., Blackwood, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+nasal+tumours+in+dogs%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Treatment of nasal tumours in dogs: A review.</a> J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).</li>
<li>Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+canine+nasal+discharge+related+to+intranasal+diseases%3A+A+retrospective+study+of+105+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Characteristics of canine nasal discharge related to intranasal diseases: A retrospective study of 105 cases.</a> J Small Anim Pract. 55 (3), 145-152 (2014).</li>
<li>Windsor, R. C., Johnson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+chronic+inflammatory+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Tech+Small+Anim+Practice%22%5BJournal%5D)">Canine chronic inflammatory rhinitis.</a> Clin Tech Small Anim Practice. 21 (2), 76-81 (2006).</li>
<li>Van Pelt, D. R., Mckiernan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+canine+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin+North+Am+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of canine rhinitis.</a> Vet Clin North Am Small Anim Pract. 24 (5), 789-806 (1994).</li>
<li>Hazuchova, K., Neiger, R., Stengel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+treatment+of+mycotic+rhinitis-rhinosinusitis+in+dogs+with+meticulous+debridement+and+1%25+clotrimazole+cream%3A+64+cases+%282007-2014%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAVMA%22%5BJournal%5D)">Topical treatment of mycotic rhinitis-rhinosinusitis in dogs with meticulous debridement and 1% clotrimazole cream: 64 cases (2007-2014).</a> JAVMA. 250 (3), 309-315 (2017).</li>
<li>Lobetti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+lymphoplasmacytic+rhinitis+in+33+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22JS+Afr+Vet+Assoc%22%5BJournal%5D)">Idiopathic lymphoplasmacytic rhinitis in 33 dogs.</a> JS Afr Vet Assoc. 85 (1), 1-5 (2014).</li>
<li>Ashbaugh, E. A., Mckiernan, B. C., Miller, C. J., Powers, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+hydropulsion%3A+A+novel+tumor+biopsy+technique%5BTitle%5D)+AND+%22JAAHA%22%5BJournal%5D)">Nasal hydropulsion: A novel tumor biopsy technique.</a> JAAHA. 47 (5), 312-316 (2011).</li>
<li>Wheat, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+immune+and+microbiological+responses+to+mucosal+administration+of+a+liposome-tlr+agonist+immunotherapeutic+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Local immune and microbiological responses to mucosal administration of a liposome-tlr agonist immunotherapeutic in dogs.</a> BMC Vet Res. 15 (1), 330(2019).</li>
<li>Darragh, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elective+nodal+irradiation+mitigates+local+and+systemic+immunity+generated+by+combination+radiation+and+immunotherapy+in+head+and+neck+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Elective nodal irradiation mitigates local and systemic immunity generated by combination radiation and immunotherapy in head and neck tumors.</a> Nat Commun. 13 (1), 7015(2022).</li>
<li>Pinard, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+lymphocyte-specific+programmed+cell+death+protein+1+receptor+expression+and+cytokines+in+blood+and+urine+in+canine+urothelial+carcinoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Comp+Oncol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of lymphocyte-specific programmed cell death protein 1 receptor expression and cytokines in blood and urine in canine urothelial carcinoma patients.</a> Vet Comp Oncol. 20 (2), 427-436 (2022).</li>
<li>Choi, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+canine+pd-1%2Fpd-l1+specific+monoclonal+antibodies+and+amplification+of+canine+t+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of canine pd-1/pd-l1 specific monoclonal antibodies and amplification of canine t cell function.</a> PLoS One. 15 (7), e0235518(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL&nbsp; 튜브</td><td>Eppendorf</td><td>05-402</td><td></td></tr><tr><td>1000 & micro; L 피펫</td><td>VWR</td><td>89079-974</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>20 mL 주사기</td><td>VWR</td><td>BD302830</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원뿔형 튜브</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>70 & micro; m 세포 스트레이너</td><td>Fisherbrand</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>8FR 멸균 빨간색 고무 카테터</td><td>Med Vet International</td><td>50-252-2428</td><td></td></tr><tr><td>ACK 용해 완충기</td><td>Gibco</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Beckman Coulter</td><td>366816</td><td></td></tr><tr><td>생리 식염수(0.9%)</td> <td>Vetivex</td><td>17033-492-01</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>10153-838</td><td></td></tr></tbody></table>

개의 비강 면역 미세환경 샘플링을 위한 식염수 세척

Saline Lavage for Sampling of the Canine Nasal Immune Microenvironment

이 비강 세척 방법을 사용하면 수집된 샘플이 약간 흐린 것처럼 보이며 튜브를 소용돌이칠 때 세포 파편과 점액 조각이 보일 수 있습니다. 세척 절차가 실수로 출혈을 유발하고 샘플이 붉게 물들면 샘플이 말초 혈액에 오염된 것으로 간주됩니다. 주입된 식염수의 일부는 시술 중에 손실되지만, 주입된 식염수가 콧구멍에서 튜브로 역류하지 않으면 음의 세척이 고려됩니다. 잠재적인 원인은 헤드가 효과적인 역류를 허용할 만큼 충분히 아래쪽으로 기울어져 있지 않거나, 샘플이 반대쪽 콧구멍을 통해 꼬리 또는 옆으로 배출되었거나, 빨간색 고무 카테터가 주사기에 단단히 고정되지 않아 식염수가 연결 지점에서 바깥쪽으로 누출된 것 등일 수 있습니다.
비강암에 걸린 개로부터 비강 세척 샘플을 성공적으로 채취하면 1 × 10 6-200 × 106 범위의 핵 세포 수가 예상되며 75-96%의 살아있는 세포가 있습니다. 또는, 건강하고 염증이 없는 비강을 가진 개로부터 비강 세척 샘플을 성공적으로 채취한 경우, 세포 수는 7 ×10 5-2 × 106 범위이며 6-16%의 살아있는 세포가 있습니다. 종양이 있는 개의 비강 세척 샘플링에서 얻은 세포학적 표본의 대표적인 이미지가 그림 2에 나와 있습니다. 또한 건강한 개와 종양이 있는 개의 비강 세척 샘플에서 분석한 세포 집단의 유세포 분석 평가가 그림 3에 나와 있습니다. 세포 수와 생존율이 이 범위보다 낮으면 비강 세척 절차와 샘플 채취가 실패했음을 나타낼 것으로 예상됩니다. 표 1은 수행된 시술 횟수, 개 수, 비강 상태(건강 또는 종양 보유), 핵 세포 수의 수율, 시술을 위해 얻은 세포의 생존력, 세척 샘플이 다운스트림 분석의 성공 또는 실패로 간주되었는지 여부와 관련하여 저자가 수행한 비강 세척 기술의 결과를 요약합니다. 표 1에 포함된 비강 세척 샘플로 수행된 실험의 목적상, 최소 세포 수 수율 150,000이 성공적인 비강 세척 샘플 수집으로 간주되었습니다.
이 비강 세척 기술에서는 멸균 0.9% 식염수를 사용하여 세포를 수집합니다. 대안적으로, Hartmann의 용액 (젖산 Ringer의 용액)을 고려할 수 있습니다. 그러나 식염수 또는 Hartmann 용액으로 수집된 샘플은 관심 세포에 대한 유사한 생존력과 결과를 보장하기 위해 테스트해야 합니다. 또한 종양이 없는 개에서 빨간색 고무 카테터를 사용하는 대신 폴리 카테터로 비강 세척을 수행할 수 있습니다. 여기에 제시된 비강 세척 기술에는 사용되지 않았지만 폴리 카테터를 사용하면 카테터 끝에서 풍선을 팽창시켜 비강을 막고 꼬리 방향의 체액 손실을 방지할 수 있습니다. 또한 여기에 제시된 비강 세척 처리 방법에서 테스트되지는 않았지만 비강 세척 샘플에 히알루로니다아제를 추가하면 비강 세척 샘플에 수집된 점액을 분해하고 분석을 위해 더 많은 세포를 확보하는 것으로 간주될 수 있습니다. 이것은 또한 비강 세척 처리 절차에 히알루로니다아제를 추가하여 결과가 변경되지 않도록 최적화해야 합니다.
반려견암 임상시험에 등록된 개에서 수행된 성공적인 비강 세척 시술에서 얻은 발표된 결과는 그림 310에 제시되어 있습니다. 그림 3 에 제시된 결과는 종양이 단독으로 또는 국소 경추 림프절 방사선 조사와 병행하여 방사선 조사를 받은 부비강 종양이 있는 개의 국소 면역 미세환경에 대한 선택적 결절 조사의 영향을 조사한 연구에서 나온 것입니다. 비강 세척제를 사용한 임상시험에서 개의 비강을 연속 샘플링한 결과, 수집된 세포의 유세포 분석을 통해 방사선 요법 마지막 날에 종양을 표적으로 하는 방사선 요법을 받은 개와 국소 림프절을 살린 개에 비해 부비동 종양과 동시에 국소 림프절을 방사선 조사한 결과 효과기 T 세포의 개체군이 현저히 감소한 것으로 나타났습니다. 이는 세척제로 비강을 연속적으로 샘플링하여 다른 지점과 다른 치료 조건에서 세포 집단의 변화를 조사하는 것의 유용성을 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig01.jpg"> 
그림 1: 비강 세척 방법의 개략도. 데워진 멸균 식염수를 빨간색 고무 카테터를 사용하여 마취된 개의 비강에 주입합니다. 비강 세척액은 코에서 배출될 때 튜브에 모입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig02.jpg"> 
그림 2: 비강 종양이 있는 개에서 채취한 비강 세척 샘플의 세포 조성. 비강 세척 샘플링에서 얻은 세포학적 표본의 대표 이미지(500x 배율, Modified Wright-Giemsa 염색). 호중구(화살표)가 우세한 세포이며, 몇 개의 편평 상피 세포(화살촉)와 작은 성숙한 림프구(사각형 상자에 강조 표시됨)도 존재합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2.jpg"> 
그림 3. 건강한 개와 종양이 있는 개에서 채취한 비강 세척 샘플의 유세포 분석. 건강한 개(파란색, n = 3)와 부비강 암종(빨간색, n = 4)이 있는 종양 보유 개 간의 살아있는 세포, 면역 세포 및 호중구의 풍부도 비교. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig04.jpg"> 
그림 4: 선택적 결절 조사(ENI)가 국소 면역 미세환경에 미치는 영향을 조사하는 임상시험에 등록된 개의 비강 세척에서 채취한 세포의 유세포 분석 분석. 비강 세척 샘플에서 CD4(CD5+CD4+) 및 CD8(CD5+CD8+) T 세포의 정량화. 종양 방사선 조사와 동시에 ENI를 투여받은 개(n=3)는 종양만을 대상으로 방사선을 투여한 개(n=3)에 비해 방사선 조사 마지막 날(3일차)에 효과기 CD4 및 CD8 T 세포가 유의하게 감소했다. 이 그림은 Darragh et al.10에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>정상 (n = 3)</td>
			<td>종양 보유 (n= 19)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>수행된 시술 횟수</td>
			<td>3</td>
			<td>80</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>세포 수</td>
			<td>0.7 엑스 106 - 2.8 엑스 106</td>
			<td>1.6 x 106 - 210 x 106; 중앙값: 8.7 x 106</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>세포 생존율</td>
			<td>6.3 - 15.9%</td>
			<td>75% - 96%; 중앙값: 87%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>성공률</td>
			<td>100%</td>
			<td>98.80%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 수행된 비강 세척 절차 요약 및 얻은 샘플의 세포 특성.

Evaluating the local immune microenvironment of the canine nasal cavity can be important for investigating normal tissue health and disease conditions, ...

saline-lavage-for-sampling-of-the-canine-nasal-immune-microenvironment

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 낮은 압력 흡입을 이용하여 광섬유 기관지 내시경과 기관지 폐포 세척액에 대한 연구 방법을 설명합니다. 기법은 폐 기관지 표면에서 면역 세포를 수확하기 위해 사용된다. 국소 마취제와 가벼운 수면 마취 (미다 졸람)이 사용된다. 주제는 프로 시저 잘 경험 최소한의 부작용을 견딜.

연구를위한 기관지 폐포 세척액 (BAL), 적절한 샘플 수익률을 얻기

intranasally 뇌를 타겟팅의 목적을 위해 깨어 마우스로 약물을 투여하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 긴 마취없이 약물의 비강 관리를 사용하는 기간, 그리고 최소한의 전신 노출과 코 - 투 - 뇌 전달을 통해 주입 반복 할 수 있습니다.

깨어 마우스로 CNS의 치료학의 비강 관리

이 비디오는 유세포 분석을 사용하여 기관지폐포 세척액에서 다양한 면역 세포를 식별하고 계수하는 방법을 보여줍니다. 초기에는 생존 염료를 사용하여 단일 면역 세포를 식별한 다음 표면 마커 단백질을 차등 염색하여 각 세포 유형을 정확하게 계수할 수 있습니다.

유세포 분석에 의한 Bronchoalveolar Lavage Fluid에서 면역 세포의 식별 및 계수

연쇄상 구균 폐렴을 이용한 뮤린 비소하린의 식민지화및 신봉또는 모집된 세포의 후속 추출이 설명된다. 이 기술은 나아레를 통해 유체의 비소하린과 수집을 플러시하는 것을 포함하며, 시투에서mRNA 발현의 차동 세포 정량화 및 분석을 포함한 다양한 판독에 적응할 수 있다.

연쇄상 구균 폐렴으로 비강 내 식민지 화 중 염증 반응의 특성화

이 문서는 실험 조건에서 소 폐 기관지 내시경 기술, 즉 bronchoscopically 안내 접종, 기관지 세척액, 기관지 솔질하고, 기관지 폐 생검을 설명합니다.

생물 의학 연구에 소 폐 : 시각적으로 유도 기관지, Intrabronchial 접종 및<em&gt; 생체</em&gt; 샘플링 기법

본 연구는 폐의 선천성 면역 반응을 촉진하고 마우스의 급성 폐렴구균성 폐렴을 예방하기 위해 설하 면역요법을 사용하는 것의 편리함을 보여줍니다.

대안으로 설하 면역 요법은 급성 호흡기 감염에 대한 보호를 유도하기 위해

폐의 건강 상태는 폐의 세기관지에있는 면역 세포의 유형과 수에 의해 반영됩니다. 우리는 비 흡착성 세포와 쥐의 하부 호흡기에서 용해되는 요소를 분리하고 연구 할 수있는 기관지 폐포 세척 기술에 대해 설명합니다.

쥐 폐의 기관지 폐포 세척은 염증성 세포의 침윤을 분석하는

이 프로토콜에서는 위 항공에서 그대로 점 막 안 대기의 샘플링에 대 한 비 침 투 적인 기법을 설명합니다. 그것은 모든 연령대의 주제에 vivo에서 단백질 중재자, cytokines, 발산, 등의 레벨의 정량화를 수행 하기 위해 사용할 수 있습니다.

상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

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혈액 오염이 없는 Murine Nasal Lavage Fluid Collection

배우세요 개의 비강 면역 미세환경을 식염수 세척으로 샘플링하는 방법을. 방사선 치료 중인 코 종양 개에서 면역 반응을 연속 분석할 수 있는 비침습적 기술입니다.

개의 비강 면역 미세환경 샘플링을 위한 식염수 세척

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