Name: Modulatic Flux Bioanalyzer를 사용하여 만성 에탄올에 노출된 폐포 대식세포의 연료 공급원으로서의 글루타민 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 배우세요 만성 에탄올 노출된 폐포 대식세포에서 글루타민이 미토콘드리아 호흡의 연료 공급원으로 작용하는 메커니즘을 Modulatic Flux Bioanalyzer로 분석하는 방법입니다. 이 프로토콜은 면역 대사 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>에탄올은 글루타민 의존 호흡으로 전환하여 AM 생체 에너지를 손상시킵니다.

<ol><li>2021 National Survey on Drug Use and Health (NSDUH). Table 5.6A - Alcohol Use Disorder in Past Year: Among People Aged 12 or Older; by Age Group and Demographic Characteristics, Numbers in Thousands, 2021. , Substance Abuse and Mental Health Services Administration (SAMHSA). At
 <a target="_blank" href="https://www.samhsa.gov/data/sites/default/files/reports/rpt39441/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetTabsSect5pe2021.htm">https://www.samhsa.gov/data/sites/default/files/reports/rpt39441/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetailedTabs2021/NSDUHDetTabsSect5pe2021.htm</a> (2021).</li>
<li>Everts, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nosocomial+pneumonia+in+adult+general+medical+and+surgical+patients+at+Christchurch+Hospital%5BTitle%5D)+AND+%22N+Z+Med+J%22%5BJournal%5D)">Nosocomial pneumonia in adult general medical and surgical patients at Christchurch Hospital.</a> N Z Med J. 113 (1111), 221-224 (2000).</li>
<li>de Roux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+alcohol+abuse+in+the+etiology+and+severity+of+community-acquired+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Impact of alcohol abuse in the etiology and severity of community-acquired pneumonia.</a> Chest. 129 (5), 1219-1225 (2006).</li>
<li>Moss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+sepsis%3A+race%2C+sex%2C+and+chronic+alcohol+abuse%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of sepsis: race, sex, and chronic alcohol abuse.</a> Clin Infect Dis. 41 (Suppl 7), S490-S497 (2005).</li>
<li>Fernandez-Sola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+alcohol+intake+as+a+risk+and+prognostic+factor+for+community-acquired+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">High alcohol intake as a risk and prognostic factor for community-acquired pneumonia.</a> Arch Intern Med. 155 (15), 1649-1654 (1995).</li>
<li>Yeligar, S. M., Harris, F. L., Hart, C. M., Brown, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+attenuates+ethanol-induced+alveolar+macrophage+oxidative+stress+and+dysfunction+by+downregulating+NADPH+oxidases%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glutathione attenuates ethanol-induced alveolar macrophage oxidative stress and dysfunction by downregulating NADPH oxidases.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (5), L429-L441 (2014).</li>
<li>Yeligar, S. M., Mehta, A. J., Harris, F. L., Brown, L. A., Hart, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+regulates+chronic+alcohol-induced+alveolar+macrophage+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor gamma regulates chronic alcohol-induced alveolar macrophage dysfunction.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 55 (1), 35-46 (2016).</li>
<li>Liang, Y., Harris, F. L., Brown, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+induced+mitochondrial+oxidative+stress+and+alveolar+macrophage+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Alcohol induced mitochondrial oxidative stress and alveolar macrophage dysfunction.</a> Biomed Res Int. 2014, 371593(2014).</li>
<li>Liang, Y., Harris, F. L., Jones, D. P., Brown, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+induces+mitochondrial+redox+imbalance+in+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Alcohol induces mitochondrial redox imbalance in alveolar macrophages.</a> Free Radic Biol Med. 65, 1427-1434 (2013).</li>
<li>Morris, N. L., Harris, F. L., Brown, L. A. S., Yeligar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+induces+mitochondrial+derangements+in+alveolar+macrophages+by+upregulating+NADPH+oxidase+4%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Alcohol induces mitochondrial derangements in alveolar macrophages by upregulating NADPH oxidase 4.</a> Alcohol. 90, 27-38 (2021).</li>
<li>Crotty, K. M., Kabir, S. A., Chang, S. S., Mehta, A. J., Yeligar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pioglitazone+reverses+alcohol-induced+alterations+in+alveolar+macrophage+mitochondrial+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Pioglitazone reverses alcohol-induced alterations in alveolar macrophage mitochondrial phenotype.</a> Alcohol Clin Exp Res (Hoboken). 48 (5), 810-826 (2024).</li>
<li>Demine, S., Renard, P., Arnould, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+uncoupling%3A+A+key+controller+of+biological+processes+in+physiology+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial uncoupling: A key controller of biological processes in physiology and diseases.</a> Cells. 8 (8), 795(2019).</li>
<li>Hill, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+cellular+bioenergetics+with+mitochondrial+quality+control+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Integration of cellular bioenergetics with mitochondrial quality control and autophagy.</a> Biol Chem. 393 (12), 1485-1512 (2012).</li>
<li>Chacko, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bioenergetic+Health+Index%3A+a+new+concept+in+mitochondrial+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">The Bioenergetic Health Index: a new concept in mitochondrial translational research.</a> Clin Sci (Lond). 127 (6), 367-373 (2014).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+mitochondrial+respiration+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+myeloid+progenitors+using+Seahorse+technology%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analyzing mitochondrial respiration of human induced pluripotent stem cell-derived myeloid progenitors using Seahorse technology.</a> STAR Protoc. 4 (1), 102073(2023).</li>
<li>Gu, X., Ma, Y., Liu, Y., Wan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+mitochondrial+respiration+in+adherent+cells+by+Seahorse+XF96+Cell+Mito+Stress+Test%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of mitochondrial respiration in adherent cells by Seahorse XF96 Cell Mito Stress Test.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100245(2021).</li>
<li>Plitzko, B., Loesgen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+oxygen+consumption+rate+%28OCR%29+and+extracellular+acidification+rate+%28ECAR%29+in+culture+cells+for+assessment+of+the+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of oxygen consumption rate (OCR) and extracellular acidification rate (ECAR) in culture cells for assessment of the energy metabolism.</a> Bio Protoc. 8 (10), e2850(2018).</li>
<li>Winnica, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+differences+in+the+airway+epithelium+of+lean+versus+obese+asthmatics+are+driven+by+nitric+oxide+and+reflected+in+circulating+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic differences in the airway epithelium of lean versus obese asthmatics are driven by nitric oxide and reflected in circulating platelets.</a> Antioxid Redox Signal. 31 (10), 673-686 (2019).</li>
<li>Nickens, K. P., Wikstrom, J. D., Shirihai, O. S., Patierno, S. R., Ceryak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioenergetic+profile+of+non-transformed+fibroblasts+uncovers+a+link+between+death-resistance+and+enhanced+spare+respiratory+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">A bioenergetic profile of non-transformed fibroblasts uncovers a link between death-resistance and enhanced spare respiratory capacity.</a> Mitochondrion. 13 (6), 662-667 (2013).</li>
<li>Mdaki, K. S., Larsen, T. D., Weaver, L. J., Baack, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+related+bioenergetics+profiles+in+isolated+rat+cardiomyocytes+using+extracellular+flux+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Age related bioenergetics profiles in isolated rat cardiomyocytes using extracellular flux analyses.</a> PLoS One. 11 (2), e0149002(2016).</li>
<li>Dranka, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+bioenergetic+function+in+response+to+oxidative+stress+by+metabolic+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Assessing bioenergetic function in response to oxidative stress by metabolic profiling.</a> Free Radic Biol Med. 51 (9), 1621-1635 (2011).</li>
<li>Chacko, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+defining+distinct+bioenergetic+profiles+in+platelets%2C+lymphocytes%2C+monocytes%2C+and+neutrophils%2C+and+the+oxidative+burst+from+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Methods for defining distinct bioenergetic profiles in platelets, lymphocytes, monocytes, and neutrophils, and the oxidative burst from human blood.</a> Lab Invest. 93 (6), 690-700 (2013).</li>
<li>Tyrrell, D. J., Bharadwaj, M. S., Jorgensen, M. J., Register, T. C., Molina, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cell+respirometry+is+associated+with+skeletal+and+cardiac+muscle+bioenergetics%3A+Implications+for+a+minimally+invasive+biomarker+of+mitochondrial+health%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Blood cell respirometry is associated with skeletal and cardiac muscle bioenergetics: Implications for a minimally invasive biomarker of mitochondrial health.</a> Redox Biol. 10, 65-77 (2016).</li>
<li>Shah-Simpson, S., Pereira, C. F., Dumoulin, P. C., Caradonna, K. L., Burleigh, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profiling+of+Trypanosoma+cruzi+life+stages+using+Seahorse+extracellular+flux+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biochem+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profiling of Trypanosoma cruzi life stages using Seahorse extracellular flux technology.</a> Mol Biochem Parasitol. 208 (2), 91-95 (2016).</li>
<li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> J Vis Exp. 46, e2511(2010).</li>
<li>Chance, B., Williams, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+enzymes+in+oxidative+phosphorylation.+I.+Kinetics+of+oxygen+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. I. Kinetics of oxygen utilization.</a> J Biol Chem. 217 (1), 383-393 (1955).</li>
<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Anal Chem. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li>
<li>Yeligar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PPARgamma+regulates+mitochondrial+structure+and+function+and+human+pulmonary+artery+smooth+muscle+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">PPARgamma regulates mitochondrial structure and function and human pulmonary artery smooth muscle cell proliferation.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 58 (5), 648-657 (2018).</li>
<li>Yeligar, S., Tsukamoto, H., Kalra, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-induced+expression+of+ET-1+and+ET-BR+in+liver+sinusoidal+endothelial+cells+and+human+endothelial+cells+involves+hypoxia-inducible+factor-1alpha+and+microrNA-199%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ethanol-induced expression of ET-1 and ET-BR in liver sinusoidal endothelial cells and human endothelial cells involves hypoxia-inducible factor-1alpha and microrNA-199.</a> J Immunol. 183 (8), 5232-5243 (2009).</li>
<li>Yeligar, S. M., Harris, F. L., Brown, L. A. S., Hart, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+reversal+of+post-transcriptional+alterations+implicated+in+alcohol-induced+alveolar+macrophage+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological reversal of post-transcriptional alterations implicated in alcohol-induced alveolar macrophage dysfunction.</a> Alcohol. 106, 30-43 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15mL 원뿔형 튜브&nbsp;</td><td>VWR 인터내셔널, Inc.</td><td>21008-670</td><td>미토콘드리아 관련 시약의 원료 농도 제조에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>2-메르캅토에탄올&nbsp;</td><td>시그마 알드리치 Co.</td><td>M6250</td><td>MH-S 세포 배양에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>셀 스크레이퍼</td><td>Dot Scientific, Inc.</td><td>70-1180</td><td>T-75 플라스크에서 MH-S 셀을 긁어내는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Countess 3 FL 기기 : 세포 계수</td>기 <td>Fisher Scientific Company</td><td>AMQAF2000</td><td>실험을 위해 플레이트를 만들 MH-S 세포의 수를 계산하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>D-포도당&nbsp;</td><td>시그마 알드리치 Co.</td><td>G8270</td><td>세포외 플럭스 기본 배지에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>피셔 사이언티픽 컴퍼니</td>(Ethanol Fisher Scientific Company)<td>4355720</td><td>MH-S 세포에 대한 실험적 치료.</td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Sciencell Research Laboratories</td><td>500</td><td>MH-S 세포 배양에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>겐타마이신</td><td>시그마 Aldrich Co.</td><td>G1397</td><td>MH-S 세포 배양에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td>세포 <td>외 플럭스 기본 배지에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 10.2.3</td><td>GraphPad 소프트웨어</td><td>N/A</td><td>통계 분석용 소프트웨어. 구매 후 https://www.graphpad.com/features 에서 다운로드 가능합니다.</td></tr><tr><td>MH-S 세포</td><td>미국형 배양 컬렉션</td><td>CRL-2019</td><td>마우스 폐포 대식세포 세포주.</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브&nbsp;</td><td>미국 사이언티픽, Inc.</td><td>4036-3212</td><td>미토콘드리아 관련 시약의 작업 농도를 준비하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Microsoft 365 Excel: 컴퓨터 스프레드시트 프로그램</td> 데이터 구성 및 미토콘드리아 생물 에너지학 계산을 위한 <td>Microsoft</td><td>N/A</td><td>소프트웨어. 구매 후 https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel 에서 다운로드 할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>15140122</td><td>MH-S 세포 배양에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>VWR International, Inc.</td><td>45000-446</td><td>MH-S 세포 세척에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>VWR 인터내셔널, Inc.</td><td>45000-396</td><td>MH-S 세포 배양에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Seahorse Wave Pro Software: 분석 설계 및 분석을 위한 컴퓨터 소프트웨어 프로그램</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>N/A</td><td>컴퓨터가 Seahorse XF Pro 분석기 기기에 연결되어 있습니다. 에서 다운로드 가능&nbsp; https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/software-download-for-seahorse-wave-pro-software?productURL=https%3A%2F%2Fwww.agilent.com%2Fen%2Fproduct%2Fcell-analysis%2Freal-time-cell-metabolic-analysis%2Fxf-software%2Fseahorse-wave-pro-software-2007523.</td></tr><tr><td>Seahorse XF 기본 배지: 세포외 플럭스 기본 배지, pH 7.4</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>103334-100</td><td>미토콘드리아 관련 시약의 재고 및 작업 농도를 준비하고 실험 실행 전에 MH-S 세포를 배양하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Seahorse XF 글루타민 산화 스트레스 테스트 키트</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>103674-100</td><td>원료 BPTES, 올리고마이신, FCCP 및 로테논/항마이신 A를 포함합니다.</td></tr><tr><td>Seahorse XF Pro 분석기: 세포외 플럭스 생물분석기</td><td>Agilent Technologies, Inc.</td><td>N/A</td><td>세포외 플럭스 바이오분석기.</td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak: 96웰 세포외 플럭스 팩 카트리지, 96웰 세포외 플럭스 미세배양 플레이트 및 캘리브런</td>트 <td>솔루션 Agilent Technologies, Inc.</td><td>102416-100</td><td>세포외 플럭스 바이오분석기를 사용하여 분석을 위해 MH-S 세포를 준비하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫&nbsp;</td><td>산타 크루즈 생명 공학, Inc.</td><td>sc-550678</td><td>MH-S 셀에서 매체를 제거하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>Sigma Aldrich Co.</td><td>S6014</td><td>MH-S 세포 배양을 위해 사용됩니다.</td></tr><tr><td>나트륨 피루베이트&nbsp;</td><td>시그마 알드리치 Co.</td><td>P4562</td><td>세포외 플럭스 기본 배지에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>T-75 플라스크</td><td>산타 크루즈 생명 공학, Inc.</td><td>sc-200263</td><td>MH-S 세포 배양에 사용된다.</td></tr></tbody></table>

modulatic flux bioanalyzer를 사용하여 만성 에탄올에 노출된 폐포 대식세포의 연료 공급원으로서의 글루타민 평가

Assessment of Glutamine as a Fuel Source for Alveolar Macrophages Exposed to Chronic Ethanol Using an Extracellular Flux Bioanalyzer

만성 EtOH 노출은 MH-S 세포의 글루타민 의존성을 감소시킵니다. 글루타민 용해는 미토콘드리아 호흡을 위한 중요한 경로로, 세포 생체 에너지학의 중요한 연료 공급원으로서 글루타민을 지원합니다. EtOH에 대한 만성 노출이 미토콘드리아 호흡을 위한 연료 공급원인 글루타민에 대한 MH-S 세포의 의존성을 변화시키는지 확인하기 위해 MH-S 세포를 EtOH 대조군(Con) 또는 EtOH 없이 처리하고, 미토콘드리아 호흡과 관련된 시약의 연속 주입에 대한 반응으로 시간 경과에 따라 OCR을 측정했습니다. 올리고마이신(ATP 합성효소 억제제), FCCP(프로톤 언커플러) 및 R/A(각각 미토콘드리아 복합체 I 및 복합체 III 억제제)의 연속 주입에 대한 OCR 생체 에너지 프로파일은 ATP 결합 호흡, 최대 호흡 및 예비 호흡 용량과 같은 미토콘드리아 생체 에너지학의 다른 매개변수를 계산하는 데 사용됩니다. 표시된 모든 데이터는 Crotty et al.11에 발표된 Con + 매체, Con + BPTES 및 EtOH + 매체, EtOH + BPTES MH-S 세포 실험군의 추가 생물학적 복제입니다. 그림 2A에서 볼 수 있듯이 올리고마이신은 복합체 V의 억제로 인해 OCR을 감소시켰고, FCCP는 막 전위와 미토콘드리아 의존성 ATP12세대의 미토콘드리아 분리로 인해 OCR을 증가시켰으며, R/A는 미토콘드리아 의존성 OCR을 효과적으로 차단했습니다. 연속 주입에 대한 OCR 생체 에너지 반응의 이러한 프로필은 세포외 플럭스 생물분석기13,14를 사용하여 미토콘드리아 스트레스를 평가하기 위한 사용자 가이드와 일치합니다.
Con- 및 EtOH 처리된 MH-S 세포에서 기저 OCR을 측정한 후, 글루타미나제 1의 억제제인 배지 제어 또는 BPTES를 주입했습니다. Con + 매체 대 Con + BPTES MH-S 세포 및 EtOH + 매체 대 EtOH + BPTES MH-S 세포는 OCR 생체 에너지 프로파일에서 차이를 나타내지 않았습니다(그림 2A). EtOH + BPTES MH-S 세포는 Con + BPTES에 비해 글루타민 의존성 기저 호흡의 감소를 보였으며( 그림 2A 및 그림 2B의 측정 #3과 비교하여 측정 #4), 이는 EtOH가 MH-S 세포의 기저 글루타민 산화를 감소시켜 미토콘드리아 호흡에 기여한다는 것을 시사합니다. EtOH + BPTES MH-S 세포는 Con + BPTES에 비해 글루타민 의존성 ATP 결합 미토콘드리아 호흡의 손실을 나타냈습니다(그림 2C). EtOH + BPTES MH-S 세포는 Con + BPTES에 비해 글루타민 의존성 최대 호흡에서 둔화된 손실을 보였지만(그림 2D), EtOH + BPTES MH-S 세포는 Con + BPTES에 비해 글루타민 의존성 예비 호흡량이 감소한 것으로 나타났습니다(그림 2E). 이러한 결과는 EtOH MH-S 세포가 FCCP로 스트레스를 받을 때와 같이 호흡을 위해 글루타민에 더 의존할 수 있는 능력을 가지고 있지만, 글루타민 생체이용률의 감소보다 글루타민 요구량의 증가가 더 중요하기 때문에 그렇게 할 수 없을 수 있음을 시사합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67579/67579fig01.jpg"> 
그림 1: 마우스 폐포 대식세포 세포주인 MH-S 세포에서 글루타민 의존성 미토콘드리아 호흡 및 생체 에너지를 측정하기 위한 워크플로우의 일반적인 개요. 세포외 플럭스 미세배양 플레이트 웰(단계 3.1)에서 배양한 MH-S 세포의 단층을 보충제가 첨가된 세포외 플럭스 베이스 배지(단계 3.2)로 37°C에서 비-CO2 가습 인큐베이터에서 30분-1시간 동안 배양했습니다(단계 3.4). 보충제가 첨가된 세포외 플럭스 염기 배지(단계 3.2)를 배지 제어로 사용하고, 글루타민 산화 억제제 BPTES의 작업 농도를 3μM 최종 농도로, 미토콘드리아 복합체 V 억제제 올리고마이신(Oligo)을 0.5μM 최종 농도로, 미토콘드리아 언커플러 카르보닐 시안화물-p-트리플루오로메톡시페닐히드라존(FCCP)을 최종 농도 0.5μM로, 미토콘드리아 복합체 I 및 복합체 III 억제제인 로테논/안티마이신 A(R/A)를 0.5μM로 희석하기 위해 사용하였다 상부 세포외 플럭스 팩 카트리지의 로딩 포트 A-D에 대한 최종 농도(단계 3.7). 세포외 플럭스 바이오분석기를 사용한 실험 실행의 혼합, 대기 및 측정 시간에 대한 주입 전략은 3분 혼합 시간, 0분 대기 시간 및 포트 A(매체 제어 또는 BPTES)에 대한 3분 측정 시간 6회였습니다. 포트 B(올리고)에 대한 3분 혼합 시간, 0분 대기 시간 및 3분 측정 시간 3회; 포트 C(FCCP)에 대한 3분 혼합 시간, 6분 대기 시간 및 3분 측정 시간 3회; 및 3분 혼합 시간, 0분 대기 시간 및 포트 D(R/A)에 대한 3분 측정 시간을 3회 측정합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67579/67579fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67579/67579fig02.jpg"> 
그림 2: 만성 에탄올(EtOH)은 쥐의 폐포 대식세포 세포주인 MH-S 세포에서 글루타민 의존성 미토콘드리아 호흡을 감소시킵니다. MH-S 세포를 미처리(Con) 또는 EtOH(0.08%, 72h)로 처리하고, 시간 경과에 따른 산소 소비율(OCR)을 배지 대조군 또는 글루타민(GLN) 산화 억제제(BPTES 3μM)와 함께 주입 전후에 세포외 플럭스 바이오분석기를 사용하여 측정한 후, 미토콘드리아 복합체 V 억제제(0.5μM의 올리고마이신, 올리고), 미토콘드리아 언커플러(0.5μM의 카르보닐 시안화물-p-트리플루오로메톡시페닐히드라존, FCCP), 미토콘드리아 복합체 I 및 복합체 III 억제제(0.5μM의 로테논/0.5μM의 안티마이신 A, R/A). (A) OCR 생체 에너지 프로파일을 사용하여 글루타민 의존성 (B) 기초 호흡, (C) ATP 관련 호흡, (D) 최대 호흡 및 (E) 예비 호흡량을 계산했습니다. 선형 포인트는 SEM± 평균을 나타냅니다(n = 4, #p &lt; 0.05 대 Con + media 및 *p &lt; 0.05 대 Con + BPTES, Tukey의 사후 분석을 사용한 일원 분산 분석). 막대는 SEM± 평균을 나타냅니다(n = 4, *p &lt; 0.05 대 Con + BPTES, 스튜던트 t-검정). 제시된 데이터는 치료되지 않은 대조군 및 만성 EtOH 노출 MH-S 세포의 배지 대조군 및 BPTES 처리된 실험군에 대한 추가적인 생물학적 복제이며, 이는 Crotty et al.11에 발표되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67579/67579fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Modulatic Flux Bioanalyzer를 사용하여 만성 에탄올에 노출된 폐포 대식세포의 연료 공급원으로서의 글루타민 평가

Alveolar macrophages (AMs) are the first line of cellular defense in the lower airway against pathogens. However, chronic and excessive alcohol use ...

assessment-glutamine-as-fuel-source-for-alveolar-macrophages-exposed

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

중간 신진 대사 유량의 가스 크로마 토그래피 질량 spectrometric 분석하여 안정 원소 프로파일은 선충류에 설명되어...

개발하고 성인 단계에서 중개 신진 대사 플럭스 안정 원소 프로파일 Caenorhabditis 엘레간스</em

이 프로토콜은 세포외 플럭스 분석을 통해 1차 백혈병 세포의 세포외 산성화율(ECAR) 및 산소 소비율(OCR)을 측정하기 위한 생화학적 접근 방식을 제공합니다. 이러한 세포의 대사 프로파일에 대한 평가는 세포의 요구를 특성화하는 데 도움이 되어 맞춤형 치료로 이어집니다.

Extracellular Flux Assay: 세포의 대사 프로파일을 측정하는 방법

현장 신진 대사 프로파일 링을위한 포스터 공명 에너지 전달을 통합 생물 센서 (FIBS)를 보정하는 방법에 대한 설명이 표시됩니다. FIBS는 비 침습적 메타 모델과 생물 공정 조건의 높은 처리량 검사의 발달을 돕는 대사 산물의 세포 내 수준을 측정하는데 사용될 수있다.

비 침습 대사 프로파일 링에게 FIBS 지원

대사 재프로그래밍은 M1 및 M2 대식세포 분극의 특성이자 전제 조건입니다. 이 원고는 마우스 골수 유래 대식세포에서 해당작용 및 미토콘드리아 기능의 기본 매개변수를 측정하기 위한 분석을 설명합니다. 이 도구는 특정 요인이 대식세포의 대사와 표현형에 어떤 영향을 미치는지 조사하는 데 적용할 수 있습니다.

실시간 세포 외 유출 분석을 사용하여 편광 M1과 M2 골수 유래 대 식세포의 대사 특성

해당작용은 여러 생물학적 시스템에서 정의하는 대사 마커입니다. H+의 세포외 플럭스를 측정하여 해당과정을 모니터링하는 것은 일반적이지만, 정량적이고 명확한 보정이 필요합니다. 여기에서는 세포 외 산성화의 호흡기 및 해당작용 원인을 구별하기 위해 세포 외 플럭스 데이터를 수집하고 수정하는 방법을 보여줍니다.

세포 외 산 생산의 측정 및 분석은 당분 속도를 확인하는

여기, 선물이 미토 콘 드리 아 호흡 및 Candida Albicans 에 glycolytic 기능 조사 stepwise 프로토콜 추가 유출 분석기를 사용 하 여.

칸디 다 albicans 를 사용 하 여 실시간 세포 외 유출 분석의 바이오에 너 지론 조사

프로토콜은 복잡한 lysate 기반 세포 없는 시스템에서 대사 반응을 연구하기 위한 굴절 지수 또는 질량 분광 검출에 결합된 고성능 액체 크로마토그래피 방법을 설명합니다.

리자테 기반 세포 없는 시스템에서 대사산물 프로파일링을 위한 굴절률 또는 질량 분광 검출에 결합된 액체 크로마토그래피

실시간 세포 대사 플럭스 분석은 pH 및 산소 센서를 사용하여 미토콘드리아 및 글리콜 아데노신 삼인산염 생산에 해당하는 산소 소모율 및 세포외 산성화 속도를 측정합니다. 원고는 조골 세포의 에너지 상태와 세포 생물 에너지 상태의 특성화 및 해석을 이해하는 방법을 설명합니다.

실시간 세포 대사 플럭스 분석기를 사용하여 조골세포 생물에너지 모니터링

여기에서는 골수, 비장 및 경색된 심장에서 대식세포를 추출하고 이후에 살아있는 세포의 대사 플럭스를 평가하는 방법을 자세히 설명합니다.

비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석

이 프로토콜은 1차 마우스 미세아교세포에서 대사 재프로그래밍을 정량화하기 위해 해당분해 스트레스 검사를 비용 효율적으로 수행하는 방법을 설명합니다. 분리 및 염증 자극 후, 신선하게 준비된 pH 조정 시약을 사용해 세포외산성화 속도(ECAR)를 측정한 후, 단백질 정규화를 통해 당해질 변화를 정확하고 재현 가능하게 평가합니다.

세포외 플럭스 분석법을 이용한 1차 미세아교세포의 당화 연구

배우세요 만성 에탄올 노출된 폐포 대식세포에서 글루타민이 미토콘드리아 호흡의 연료 공급원으로 작용하는 메커니즘을 Modulatic Flux Bioanalyzer로 분석하는 방법입니다. 이 프로토콜은 면역 대사 연구에 활용됩니다.

Modulatic Flux Bioanalyzer를 사용하여 만성 에탄올에 노출된 폐포 대식세포의 연료 공급원으로서의 글루타민 평가

더 많은 동영상 탐색